钝顶螺旋藻藻蓝蛋白抗百草枯诱导大鼠肺纤维化的研究

目的 探讨钝顶螺旋藻(spirulina platensis)藻蓝蛋白(C-phycoeyanin,C-PC)对百草枯(paraquat,PQ)染毒诱导大鼠肺纤维化的治疗作用.方法 选取健康Wistar大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组(PQ组)和藻蓝蛋白治疗组(C-PC组),每组30只.PQ组、C-PC组以PQ(50 mg/kg)一次灌胃染毒造模.造模后,正常对照组、PQ组大鼠每天给予生理盐水(1 ml/100 g)灌胃,C-PC组每天给予C-PC (50 mg/kg)灌胃,并在第1、3、7、14、28天各组随机取6只大鼠右肺下叶肺组织匀浆测羟脯氨酸(HYP)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力;取左肺部分组织行HE染色、Masson染色进行病理观察,并用免疫组化方法观察肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达.结果 各观察时点C-PC组大鼠肺组织中HYP和14、28 d MDA含量明显低于PQ组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).1、7、14、28 d时C-PC组大鼠肺组织中SOD活力明显高于PQ组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).PQ组和C-PC组肺组织中TGF-β1的表达及NF-κB p65和TNF-α表达明显高于正常对照组,C-PC组肺组织的TGF-β1表达及NF-κB p65和TNF-α表达明显低于PQ组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).病理学观察显示C-PC能减轻PQ染毒大鼠肺泡炎和肺纤维化程度.结论 C-PC对PQ诱导的大鼠肺泡炎及肺纤维化有抑制作用.     

肿瘤坏死因子-α单克隆抗体干预矽肺纤维化的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体(英夫利西)对矽尘诱导的大鼠肺纤维化的抑制作用,探讨英夫利西治疗肺纤维化的可能机制。方法将48只雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组16只。染尘组和干预组大鼠气管内一次性注入50 mg SiO_2粉尘,次日起干预组给予15 mg/kg英夫利西皮下注射,共5 d,染尘组仅注射等量生理盐水;对照组气管内和皮下均注射生理盐水。各组分别于建模后7 d、14 d处死大鼠各8只,以HE、Masson染色对肺组织炎症和纤维化程度进行评价。ELISA法检测血、支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α含量,Western blot检测肺组织NF-κB蛋白表达量。结果英夫利西干预后,肺泡炎评分(7 d)和纤维化评分(14 d)优化;血清TNF-α含量降低,BALF中TNF-α含量仅7 d降低,7 d时NF-κB p65蛋白表达下调,以上结果差异均具有统计学意义(P0.05)。结论TNF-α单克隆抗体可降低TNF-α水平,进而抑制NF-κB信号通路的活化,缓解矽尘诱导的大鼠肺纤维化进程。     

博来霉素致大鼠肺纤维化模型肺组织动态病理变化研究

目的:研究博来霉素(Bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化模型中肺组织动态病理变化,探讨其发生机制。方法:将40只清洁级大鼠随机分为对照组(N组)、博来霉素组(B组),B组大鼠气管内给予4 mg/kg博来霉素制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照。各组分别于造模后第1、7、14、28天处死大鼠,HE染色观察大鼠肺组织病理形态学变化,碱水解法测定各组大鼠肺组织不同时间点羟脯氨酸(HYP)含量。结果:B组大鼠肺组织形态学1～7天以肺泡炎为主,14天以后进入慢性纤维化阶段;B组肺组织匀浆中HYP于第7天明显升高,28天达高峰(P0.05)。结论:博来霉素诱发大鼠肺纤维化早期以肺泡炎症为主,7天后开始出现纤维化,28天肺纤维化为主要病变。     

槲皮素干预二氧化硅粉尘致肺纤维化大鼠的实验研究

目的观察槲皮素对二氧化硅粉尘所致肺纤维化的影响。方法选取48只雄性健康成年SPF级SD大鼠为研究对象,随机分为6组(对照组,槲皮素干预组,染尘7天、14天、21天和28天组)。对照组大鼠经气管注入无菌生理盐水1 ml,染尘组和槲皮素干预组大鼠注入50 mg/ml二氧化硅混悬液1 ml,预防组以50 mg/kg的槲皮素每天灌胃干预治疗,取肺组织进行HE染色,确定肺泡炎和肺纤维化程度,并检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量以及过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果对照组大鼠肺组织结构基本正常;染尘组大鼠第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润;14天时肺泡间隔内成纤维细胞显著增多,肺泡结构破坏;21天时大量巨噬细胞聚集形成细胞性结节且结节内有少量的胶原纤维;28天时肺纤维化程度进一步加重,形成广泛纤维化。随染毒时间的增加,肺组织中HYP的表达量逐渐升高,CAT及GSH-Px的活性逐渐降低;加入槲皮素后肺组织中HYP的表达量降低,CAT及GSH-Px的活性升高,差异具有显著性(P0.05)。结论槲皮素对矽尘所致的肺纤维化有一定的预防作用。     

槲皮素对矽肺纤维化大鼠巨噬细胞和核因子-κB的影响

目的观察槲皮素对矽肺纤维化大鼠巨噬细胞(AM)和核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 90只SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为对照组(NS组)、模型组(M组)、槲皮素组(Que组),每组30只。M组与Que组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250mg/kg)复制动物矽肺纤维化模型;NS组以同样方法注入生理盐水0.2~0.3ml。3组分别在注射SiO2后第1、3、7、14、21、28天处死动物。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清后,应用血细胞计数板计数AM总数,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,免疫组织化学法检测肺组织中NF-κB表达。结果 M组自第1天开始BALF中AM总数均不同程度增高,于第3天达高峰,第28天降至正常NS组水平。Que组AM总数各时间点与M组对应时间点比较均降低,第1、3、7、14、21天差异有统计学意义(P0.05)。与NS组比较,M组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P0.05);Que组TNF-α含量各时间点均升高,与同时期M组、NS组比较,差异有统计学意义(P0.05)。M组大鼠肺组织中NF-κB蛋白表达高峰在第7天,各时间点均高于NS组及Que组,两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。Que组大鼠肺组织中NF-KB的表达较模型组减少,但高于NS组,各时间点两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论槲皮素通过抑制NF-κB通路减少大鼠炎症细胞、炎症介质TNF-α等释放,减轻炎症反应过程,缓解肺纤维化过程。     

天狼猩红-偏振光法观察染石英小鼠肺组织胶原纤维的动态变化

目的 探讨天狼猩红-偏振光法结合定量图像分析观察石英引起肺纤维化过程中胶原纤维动态变化的应用价值。方法采用暴露式气管内注入法,对小鼠一次性染石英(0.2 g/kg)。染石英后第1、3、5、7、14、28天各处死8只小鼠.以苦味酸天狼猩红-偏振光结合定量图像分析观察其肺组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的分布及变化,用氯胺T法测定肺组织羟脯氨酸含量。结果 随染石英后时间的延长,小鼠肺两种胶原含量均呈增多趋势,早期Ⅲ型胶原增多较Ⅰ型胶原明显,而到后期,则以Ⅰ型胶原增加为主;Ⅰ/Ⅲ型胶原比值随着染石英时间延长呈现升高趋势,到第28天(1.49±0.39)与对照组(0.59±0.24)的差异出现统计学意义(P<0.05);胶原总面积与肺组织羟脯氨酸含量间呈现正相关(r2:0.928 5.P<0.01)。结论 天狼猩红-偏振光法结合定量图像分析是反映矽肺肺纤维化过程中胶原动态变化的一种准确、可行的方法。     

负反馈因子IL-37在肺纤维化大鼠中的作用及意义

目的:探讨博来霉素致肺纤维化大鼠中IL-37的表达水平,探究地塞米松对治疗肺纤维化的作用机制。方法:将30只清洁级Wistar大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N)、博来霉素组(B)、地塞米松治疗组(D),每组大鼠10只,博来霉素组及地塞米松组大鼠气管内给予4 mg/kg博来霉素制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照,D组大鼠于肺纤维化造模基础上第2天每日腹腔注射地塞米松0.03 mg/kg,N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠于造模后28天处死,HE染色评价肺组织病理形态学变化,酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆中羟脯氨酸及IL-37水平。结果:肺组织匀浆中,羟脯氨酸含量博来霉素组明显高于N组、D组,且D组指标高于N组,差异有统计学意义(P0.01);)IL-37在B组、D组表达水平均高于N组,B组IL-37指标高于D组(P0.05)。结论:肺纤维化是由炎症损伤及不断修复逐渐发展形成的,IL-37在博来霉素组大鼠肺组织匀浆中表达升高,可能参与肺部炎症及肺纤维化形成,地塞米松可能通过下调IL-37水平抗肺纤维化。     

人脐血间充质干细胞预防博来霉素致大鼠肺纤维化效果

目的 探讨人脐血间充质干细胞(HUCBMSC)对博来霉素所致大鼠肺纤维化的预防性干预效果及可能机制.方法 取第2代HUCBMSC培养至第4代;取无特定病原体级5周龄雄性SD大鼠120只随机分为博来霉素组、干细胞干预组、地塞米松干预组和阴性对照组,每组30只.前3组分别经气管注入博来霉素建立肺纤维化模型,干细胞干预组造模后经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记的HUCBMSC,地塞米松干预组造模后第1天开始连续腹腔注射地塞米松7d,阴性对照组经气管注入等体积生理氯化钠溶液,在第7、14、28天分别处死各组中的10只动物,肺组织行苏木精-伊红、马松三色染色,碱水解法测定肺羟脯氨酸的水平.结果 干细胞干预组第7、14、28天肺组织均可见Brdu标记的干细胞.3个时间点的博来霉素组肺羟脯氨酸水平呈逐渐升高的趋势,第28天达最高水平(P＜0.01).3个时间点干细胞干预组和地塞米松干预组的肺泡炎症及肺纤维化程度均分别较博来霉素组轻,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HUCBMSC可以定植于受损的肺组织中,并可能在肺纤维化早期有效减轻肺泡炎及肺纤维化.     

黑芝麻联合蜂蜜对博莱霉素致大鼠肺纤维化的防治作用及机制

目的:探讨黑芝麻联合蜂蜜对博莱霉素致大鼠肺纤维化防治作用及可能作用机制。方法:采用气管内注入博莱霉素5 mg/kg致大鼠肺间质纤维化的造模方法,建立肺纤维化动物模型,分别于造模前1wk开始予生理盐水、地塞米松、黑芝麻联合蜂蜜进行灌胃,以未进行任何处理的大鼠为阴性对照。经过治疗后取肺组织进行HE染色,评价纤维化程度;Masson染色,观察胶原纤维在肺组织中的表达;并应用试剂盒检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)含量,应用Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、上皮细胞转谷氨酰胺酶2(TG2)、胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)、Ⅰ型解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)含量,以观察黑芝麻联合蜂蜜对肺纤维化形成的影响以及可能机制。结果:(1)生理盐水、地塞米松、黑芝麻联合蜂蜜三种处理方式下,黑芝麻联合蜂蜜能提高肺纤维化大鼠肺组织中SOD活性及ADAMTS-1含量、降低肺纤维化大鼠肺组织HYP、MDA、TGF-β1、TG2、IGFBP-5含量及胶原的沉积;(2)黑芝麻联合蜂蜜组明显改善实验性大鼠肺纤维化程度。结论:黑芝麻联合蜂蜜能够减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化的发生和发展程度,其机制可能与抗脂质过氧化、抑制炎症因子、纤维化因子表达、减少肺泡间质胶原沉积有关。     

阿霉素肾病大鼠肾皮质糖皮质激素受体与核因子-κB 活性的变化

目的探讨阿霉素(ADM)肾病综合征(NS)大鼠肾组织转录因子核因子-кB(NF-κB)和糖皮质激素受体(GR)DNA结合活性的变化及地塞米松(Dex)、环孢霉素(CsA)对其活性的影响。方法应用凝胶电泳迁移率法(EMSA)和同位素放射自显影等方法检测:⑴阿霉素肾病大鼠模型形成过程的不同时间点NF-κB、GR的DNA结合活性、血液生化指标和尿蛋白的排泄量;⑵Dex和CsA治疗对上述指标的影响。结果大鼠经尾静脉注射阿霉素后7 d,24 h尿蛋白排泄量(UpV)(mg/24h)开始升高,21 d出现大量蛋白尿,低蛋白血症,高胆固醇血症。注射阿霉素后第7天,大鼠肾皮质组织NF-κB活性开始升高,28 d达高峰,明显高于正常对照组(P<0.01);正常对照组及肾病7 d组GR活性最高,14 d、21 d、28 d组GR活性明显降低(P<0.01)。Dex不能抑制ADM大鼠的肾皮质细胞中已经升高的NF-κB结合活性(P>0.05),同时,也不能使GR DNA结合活性升高(P<0.01);而CsA能抑制NF-κB结合活性(P<0.01)。Dex不能减少ADM大鼠UpV(P>0.05);而CsA可减少(P<0.05)。结论ADM肾病大鼠肾皮质中NF-κB DNA结合活性异常升高,GR活性降低。CsA可抑制NF-κB活性,减少尿蛋白排泄量。