二倍体型与三倍体型卫氏并殖吸虫同工酶等电点聚焦电泳研究

采用等电点聚焦电泳对我国东北地区二倍体型和三倍体型卫氏并殖吸虫9种同工酶分析结果表明两者酶蛋白分子存在明显的同源性。G-6-PDH、DIA、PO、TO 和 ACP 5种酶在两型所有受检个体中均表现一致。PGM 和 MDH 呈现多态性,分别可见3种表现型。HK 和 ME 在二倍体型中出现个别酶变异体。依据上述各酶谱均不能对两型加以区分。结果提示它们的亲缘关系十分相近,目前尚未出现很明显的分化。     

肝片吸虫疫苗研究进展

反刍动物的片吸虫感染不断引起全球性的巨大经济损失。近期的一些实验研究表明,特定的片吸虫抗原对动物感染有明显的保护作用。部分疫苗在降低虫荷的同时可减少寄生虫产卵量。尽管依然存在很大的困难,发展具有商业价值的疫苗仍是现实可行的。本文综述了近期肝片吸虫疫苗的研究情况,并对其发展前景进行了探讨。     

肝片吸虫疫苗研究进展

反刍动物的片吸虫感染不断引起全球性的巨大经济损失。近斯的一些实验研究表明,特定的片吸虫抗原对动物感染有明显的保护作用。部分疫苗在降低虫荷的同时可减少寄生虫产卵量。尽管依然存在很大的困难,发展具有商业价值的疫苗仍是现实可行的。本综述了近期肝片吸虫疫苗的研究情况,并对其发展前景进行了探讨。     

实验感染肝片吸虫的水牛体液免疫反应的研究

为研究水牛抗肝片吸虫感染的免疫反应机制,选择8头雄性去势水牛经粪便检查和Dot-ELISA检测确认无肝片吸虫感染。经2周适应性饲养后,随机分成感染组（n=5）和对照组（n=3）。感染组水牛每天每头经口感染60个囊蚴,连续20天,共感染1200个囊蚴。每周颈静脉采血,测定T、B淋巴细胞比例、血清总蛋白含量和组分比例以及抗体（IgG）水平。结果表明感染组水牛从感染肝片吸虫后第2周开始,T淋巴细胞比例显著下降而B淋巴细胞比例显著上升,16周后,T、B淋巴细胞比例恢复到与对照水牛相当水平。感染组水牛血清总蛋白（TP）、α一球蛋白、β-球蛋白与以对照组相比均无显著性变化,而白蛋白（％）从感染第2周开始下降,以后一直在低于对照组的水平波动;感染组水牛的γ一球蛋白（％）高于或显著高于对照组。血清抗肝片吸虫体从感染后第4周开始显著升高,19周达到峰值,22周时回落到与对照组相近的水平。结果提示血清IgG水平升高是水牛抗肝片吸虫感染的重要机制。     

肝片吸虫分泌抗原基因的克隆

本文报道从肝片吸虫成虫基因文库中筛选出 3个表达肝片吸虫分泌抗原的重组子,以及对 3个重组抗原基因初步表达的研究。平均长度 2.0 kb的肝片吸虫 DNA 的 San 3AI 部分酶切片段与 BamHI 酶切、脱磷的 pUC18载体连接并转化大肠杆菌 E.coli DH5α,构建肝片吸虫基因文库大小为 1.5×10~5 重组子。采用免疫印迹方法,用肝片吸虫分泌抗原制备的兔抗血清(1:50)和酶联 A蛋白(HRP-Protein A 1:40),经过初筛、复筛获得 3个反应较强的阳性克隆:pFH16,pFH23,pFH48。对这3个抗原基因表达产物的检测表明,重组子 pFH16 中抗原基因表达最强,pFH48 次之,pFH23 最弱。上述3个肝片吸虫分泌抗原基因的克隆为进一步研究抗原基因表达、重组抗原的免疫原性和动物保护试验打下了良好的基础。     

4种肝脏吸虫蛋白质圆盘电泳和等电聚焦的比较分析

应用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳和薄层等电聚焦分析比较4种肝脏吸虫成虫可溶性蛋白质,结果显示肝片形吸虫、华枝睾吸虫、东方次睾吸虫和台湾次睾吸虫圆盘电泳的区带数分别为20、18、18和15条,主带数分别为5.4、8和5条;等电聚焦的区带数分别为28、22、24和24条,主带数分别为10、3、7和7条。蛋白电泳结果表明东方次睾吸虫和台湾次睾吸虫为两个独立虫种。用数量分类学的相似率表示4种吸虫蛋白电泳谱的相似程度,结果显示东方次睾吸虫和台湾次睾吸虫最为相似,亲缘关系最近。     

实验感染肝片吸虫的水牛体液免疫反应的研究

为研究水牛抗肝片吸虫感染的免疫反应机制,选择８头雄性去势水牛经粪便检查和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测确认无肝片吸虫感染。经２周适应性饲养后,随机分成感染组（ｎ＝５）和对照组（ｎ＝３）。感染组水牛每天每头经口感染６０个囊蚴,连续２０天,共感染１２００个囊蚴。每周颈静脉采血,测定Ｔ、Ｂ淋巴细胞比例、血清总蛋白含量和组分比例以及抗体（ＩｇＧ）水平。结果表明：感染组水牛从感染肝片吸虫后第２周开始,Ｔ淋巴细胞比例显著下降而Ｂ淋巴细胞比例显著上升,１６周后,Ｔ、Ｂ淋巴细胞比例恢复到与对照水牛相当水平。感染组水牛血清总蛋白（ＴＰ）、α一球蛋白、β－球蛋白与以对照组相比均无显著性变化,而白蛋白（％）从感染第２周开始下降,以后一直在低于对照组的水平波动;感染组水牛的γ一球蛋白（％）高于或显著高于对照组。血清抗肝片吸虫体从感染后第４周开始显著升高,１９周达到峰值,２２周时回落到与对照组相近的水平。结果提示：血清ＩｇＧ水平升高是水牛抗肝片吸虫感染的重要机制。     

斯氏狸殖和丰宫并殖吸虫成虫乳酸脱氢酶同工酶等电聚焦电泳的比较研究

目的通过对云南省斯氏狸殖吸虫(Pagomogonimus skrjabini Chen.1959)和丰宫并殖吸虫(Paragonimus proliferus.1964)成虫乳酸脱氢酶(LDH)的比较研究,为吸虫的分类及定种提供科学依据方法采用丙烯酰胺凝胶圆盘等电聚焦电泳,对乳酸脱氨酶同工酶进行分离,并采用底物特一性染色法进行确定电泳结果。结果两虫种成虫乳酸脱氢酶同工酶谱分析,结果发现二者均显示5条酶带,其中斯氏狸殖吸虫的LDH有3条优势酶带(LDD_1、LDH_2、LDH_3)而丰宫并殖吸虫的LDH仅有2条优势酶带(LDH_1、LDH_2);对各成分的等电点及相对迂移率进行计算,发现丰宫并殖吸虫与斯氏狸殖吸虫间存在生化指标的差异,同时也发现两虫种间具有一共同性质的LDH_4。结论通过对两虫种同工酶谱的分析可知,它们之间具有一定的亲源性,但二者间又有同工酶谱的差异性,因此乳酸脱氢酶同工酶谱的分析可为并殖吸虫的分类提供生化依据和指标。     

人肝片形吸虫感染1例

患者,女,66岁,农民,2022年2月15日因“上腹部胀痛伴恶心不适7天”至当地县医院就诊,行腹部CT,示胆总管扩张,肝左叶肝内胆管结石并左叶胆管扩张,肝左叶萎缩;次日转至中国人民解放军联勤保障部队第九二四医院。患者生活于广西桂林山区,长期直接饮用山泉水及食生鱼腥草。入院后查体,剑突下压痛,无反跳痛;血常规无明显异常。MRI检查提示：肝左叶萎缩,肝左叶肝内胆管扩张,其近端内多发颗粒状T2低信号影,胆总管扩张,其内见条状T2低信号影。排除相关手术禁忌征后行内镜逆行胰胆管造影术,术中用取石网篮取出1条灰褐色活体成虫,予留置鼻胆管引流。虫体转送桂林医学院基础医学院人体寄生虫学教研室,鉴定为肝片形吸虫。术后予每12小时口服阿苯达唑0.6 g、吡喹酮0.6 g,治疗2 d。术后2个月复诊,患者无不适;复查腹部CT提示肝左叶萎缩,肝左叶肝内胆管及胆总管扩张。     

寄生于黄牛与水牛的肉孢子虫同工酶研究

目的 比较几种肉孢子虫过氧化物酶、磷酸葡萄糖异构酶同工酶酶谱。 方法 将肉孢子虫包囊从黄牛和水牛肉中剖离，经超声粉碎、高速离心后取上清，聚丙烯酰胺垂直平板梯度凝胶电泳染色进行同工酶酶谱分析。 结果 黄牛和水牛的枯氏肉孢子虫两种酶酶带相似，其中过氧化物酶都出现7条带，位于pH6.98~4.41之间，磷酸葡萄糖异构酶出现6条带，pH位于6.53~4.66之间；黄牛和水牛的毛状肉孢子虫的两种酶酶带相似，其中过氧化物酶都出现5条带，pH位于7.15~4.97之间，磷酸葡萄糖异构酶出现4条带，pH位于6.51~4.70之间。枯氏肉孢子虫、毛状肉孢子虫、梭状肉孢子虫在同工酶酶谱上存在明显的差异，酶带数目、酶带的pH值分布均不同。 结论 同工酶谱分析证明黄牛和水牛都是枯氏肉孢子虫、毛状肉孢子虫自然中间宿主。枯氏肉孢子虫、毛状肉孢子、梭状肉孢子虫为不同的虫种。     

A study of the antigens produced by adult Fasciola hepatica maintained in vitro

Summary Metabolic antigen of adult Fasciola hepatica was prepared by concentrating the culture medium in which 100 adult flukes had been maintained in vitro for 7 days. Serological reactions between this antigen and sera from fluke-infected rabbits, rats and sheep were studied using immunodiffusion in agar and enzyme linked immunosorbent assay. The used medium contained a number of antigenic components and their various reactions with the sera from these different hosts were investigated.     

肝片形吸虫囊蚴抵抗力观察

目的观察肝片形吸虫囊蚴经加热、干燥、食用调料等处理后的存活情况。方法将肝片形吸虫囊蚴经1)加热:微波高火30s、60s;沸水10、30s和1、2、3min。2)干燥:室温下自然干燥24、40h。3)食源调料:蒜汁、酱油、醋以及3种等量混合液浸泡10、20、30min;38°白酒及饱和盐水各浸泡10、20、30min。4)4℃下保存10个月。结果 2种加热方式处理后囊蚴全部死亡;放置于玻片上的囊蚴干燥24h,死亡4只,附着于叶片上的囊蚴干燥40h,死亡2只;在蒜汁、酱油、醋中浸泡10、20、30min,囊蚴全部存活;在3种调料的等量混合液、饱和盐水及38°白酒中浸泡10、20、30min后,均有部分存活,另有一部分囊蚴结构清晰但虫体不动,但也无明显死囊蚴的特征;在4℃下保存10个月,仍有存活的囊蚴。结论常用的调料对囊蚴不起作用,自然干燥1~2d不能完全杀灭囊蚴,在低温潮湿环境中可较长时间保持活力。沸水加热10s或微波高火30s即可杀死囊蚴。     

肝片形吸虫感染宿主细胞免疫的研究进展

肝片形吸虫病是一种危害严重的人兽共患病,肝片形吸虫主要感染反刍动物及包括人类在内的哺乳动物,是一个严重威胁健康、影响经济发展的公共卫生问题。目前治疗肝片形吸虫病的药物少、疗效有限。大量研究表明,肝片形吸虫受宿主免疫应答的调控,本文对肝片形吸虫病的发病机制、肝片形吸虫主要参与诱导的几种机体细胞免疫反应及相关的研究进展进行综述.以期为肝片形吸虫病的临床治疗提供资料。     

The serum antibody response of infected rats, rabbits, lambs and calves to Fasciola hepatica adult antigen fractions separated by preparative flatbed iso-electrofocussing

Electrofocusing of F. hepatica adult antigen in granulated gels separated the material into 22 arbitrary fractions. Polyacrylamide gel analysis demonstrated groups of proteins with similar iso-electric points in 19 of the fractions. A microplate ELISA detected antigens in all 22 fractions and was used to test the serum antibody response in infected rats, rabbits, lambs and calves to these antigen fractions. The results indicated that rat and calf sera gave a much stronger response than rabbit and lamb sera to the antigens which separated above pH 7.0. It is possible that the greater efficiency of the rat and bovine immune systems in combating re-infection with F. hepatica may be related to this response.     

Neutralization of the activity of a Fasciola hepatica cathepsin L proteinase by anti-cathepsin L antibodies

Fasciola hepatica secretes a cathepsin L proteinase that is suggested to play an in vivo role in immunoprotection since the enzyme can cleave host immunoglobulin. In the present report, rabbit anti-cathepsin L IgG was shown to bind to the cathepsin L enzyme and inhibit its ability to cleave IgG molecules. Cathepsin L can prevent the antibody-mediated attachment of eosinophils to newly excysted juveniles in in vitro assays; however, if anti-cathepsin L IgG are mixed with the cathepsin L prior to the addition of the enzyme to the assay, eosinophils attach to the newly excysted juveniles. Thus it is possible to prepare antibodies that can bind and disrupt the biological activity of the F. hepatica cathepsin L.     

Does Fasciola hepatica infection modify the response of acute hepatitis C virus infection to IFN-α treatment?

Immunologic response to acute hepatitis C is mainly a Th1 response, whereas fasciolopsiasis is associated with a diverse T-cell response. Interferon-alpha has immunomodulatory effects and enhances Th1 immune response. Fasciola infection could theoretically interfere with the Th1 immune response, even when acquired after an initial response to interferon-alpha treatment for acute hepatitis C virus (HCV) infection. We report here the case of a male patient who acquired Fasciola hepatica infection after an initial response to IFN-alpha therapy with a favorable outcome     

肝片吸虫GST真核表达载体构建及重组蛋白活性分析

目的构建肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶（GST）的真核表达载体,研究重组蛋白的免疫原性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhGST为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因（GST）,连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-GST,转染Hela细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,Western blotting检测重组蛋白表达情况。结果重组质粒pEGFP-GST在Hela细胞中获得了表达,Western blotting结果表明真核表达质粒表达的重组蛋白能与自然感染肝片吸虫的山羊阳性血清发生特异性反应。结论肝片吸虫GST真核表达载体构建成功,真核表达产物可与自然感染的山羊阳性血清发生特异性反应,具有生物学活性,可做为分子疫苗的候选进行进一步的研究。     

Cell mediated immunity to liver fluke antigens during experimental Fasciola hepatica infection of cattle

Summary Cell mediated immunity (CMI) to Fasciola hepatica antigens was detected by lymphocyte proliferation and interleukin-2 (IL-2) production tests in cattle during the first 4 weeks following liver fluke infection. From the fifth week of infection onwards peripheral blood lymphocytes were unresponsive to fluke antigens by these in vitro tests. Investigations into the cause of this unresponsiveness found no evidence to suggest a selective loss of the IL-2 producing lymphocyte sub-population or that macrophages were responsible for the suppression or that antigen responsive cells were being sequestered in the spleen and mesenteric lymph nodes. Tests carried out on culture supernatants demonstrated the production during this unresponsive period of factors capable of suppressing in vitro responses to PHA. Although further tests failed to show antigen specific suppressor factors the presence of MHC restricted suppressor factors could not be ruled out. The early and transient appearance of CMI during F. hepatica infection of cattle indicates that delayed type hypersensitivity is unlikely to be important in protective immunity in cattle.