瘢痕疙瘩Fas基因外显子8突变序列分析

目的 探讨Fas基因缺失在瘢痕疙瘩形成中的意义。方法 采用PCR—SSCP银染技术及基因序列分析，检测15个瘢痕疙瘩标本Fas基因外显子8的基因结构。结果 所检测的15个瘢痕疙瘩标本100％有Fas基因外显子8的杂合丢失，基因测序发现11个标本共4个位点存在基因突变。结论 瘢痕疙瘩Fas基因外显子8的基因结构异常与其编码的蛋白无功能关系密切。     

瘢痕疙瘩家系Fas基因死亡域突变的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩家系标本中Fas基因（外显子7～9）有无突变以及Fas基因突变在瘢痕疙瘩形成中的意义。方法 实验标本来自南方医科大学南方医院整形外科2005年收集的A、B两个瘢痕疙瘩家系。采用PCR及基因测序技术，分别以A家系2例男性患者的瘢痕疙瘩组织为研究对象，以其周围正常皮肤及外周静脉血作为自身对照，其配偶的外周静脉血作为正常对照，并以B家系2例患者（母亲与儿子）的外周静脉血作为不同家系之间的对照，共检测10份标本中Fas基因外显子7～9基因序列。结果 10份瘢痕疙瘩家系标本Fas基因的7、8外显子均未发生突变，2例瘢痕疙瘩组织标本均在外显子9编码区的11bp和53bp两个位点上存在单个碱基基因突变或多态性改变。结论 瘢痕疙瘩Fas基因死亡域外显子9区段的基因结构异常，极有可能与Fas蛋白的功能改变有关，从而导致局部瘢痕疙瘩形成。     

瘢痕疙瘩Fas基因外显子6,8,9的突变分析

目的：研究瘢痕疙瘩Fas基因中外显子6，8，9的突变情况，了解该基因突变与瘢痕疙瘩形成之间的关系。方法：实验分正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织三组，采用PCR-SSCP(聚合酶链反应-单链构象多态性)方法筛选突变，然后进行序列分析以确定突变。结果：经银染SSCP分析，在23例瘢痕疙瘩标本中，出现异常电泳带的有18例，经测序，外显子6，8，9突变分别有8例、12例和7例，6和8同时存在突变的有2例，6和9同时存在突变的有3例，8和9同时存在突变的有2例，三个外显子同时有突变的有l例，而且发现了新的突变，在正常皮肤组织和增生性瘢痕组织中均未检出突变。结论：瘢痕疙瘩组织中Fas基因的突变可能与该病的发生有密切关系；PCR-SSCP是检测基因点突变的一种快速、敏感、有效的方法。     

瘢痕疙瘩家系外周血Smad2基因的突变检测

目的 对一瘢痕疙瘩家系进行Smad2基因的突变检测,以明确Smad2基因突变是否与这一家系发病有关.方法 以瘢痕疙瘩家系中4个患者的瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤、外周血为研究对象,以其配偶的外周血为正常对照,采用PCR及基因序列分析,对所有标本的Smad2基因的所有外显子进行突变检测.结果 基因测序在所有标本中Smad2基因的1～11外显子及其邻近内含子均未发现突变.结论 此瘢痕疙瘩家系的致病基因,可能不是Smad2基因.     

Fas介导瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞凋亡及其基因检测研究

目的　探讨瘢痕疙瘩周围皮肤中是否有生物学活性异常成纤维细胞 ,以期进一步了解瘢痕疙瘩的发展机制。方法　所取新鲜组织标本进行细胞培养 ,通过碘化丙啶 (PI)染色、激光流式细胞仪比较不同浓度Fas单克隆抗体 (FasMcAb ,0～ 10 0 0 μg/L)作用后各组成纤维细胞凋亡率。采用聚合酶链反应 (PCR)技术对Fas基因外显子 8进行DNA扩增并测序。结果　FasMcAb作用2 4h后 ,瘢痕疙瘩成纤维细胞在各浓度段均不能凋亡 ,瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞随FasMcAb作用浓度的增加凋亡率虽有所增加 ,但总体比较与瘢痕疙瘩差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而与正常皮肤差异有显著性 (P <0 .0 1)。瘢痕疙瘩周围皮肤 6例标本中有 4例 (4 /6)Fas基因外显子 8及其下游序列存在点突变及移码突变 ,均与同患者瘢痕疙瘩细胞基因序列分析结果一致 ,而两组正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论　瘢痕疙瘩周围 0 .5cm皮肤内存在生物学活性异常细胞 ,这可能为瘢痕疙瘩浸润性生长的结果及其治疗后易复发的原因之一。     

瘢痕疙瘩p53基因突变高发区基因结构的研究

目的 探讨p53抑癌基因在病理性瘢痕组织中的结构异常与临床病理的关系。方法 采用PCR-SSCP及基因测序技术，以增生性瘢痕及正常皮肤为对照，检测瘢痕疙瘩组织标本p53基因突变高发区外显子4～6的基因结构。结果 瘢痕疙瘩p53基因外显子4、5、6均存在突变，对照组未发现突变。结论 提示瘢痕疙瘩p53基因抑制细胞进程及介导细胞凋亡等功能丧失。     

多重PCR-SSCP检测人瘢痕疙瘩Fas基因突变

目的建立多重PCR-SSCP反应体系,以筛选瘢痕疙瘩Fas基因突变.方法按照多重PCR引物设计原则设计相应引物,经分析、实验得到理想的多重PCR扩增条件,以此条件扩增目的基因;将所得PCR反应产物在单基因对照下进行银染多重SSCP分析,进而筛选基因突变.结果外显子6,8,9的单一PCR反应产物及多重PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳,各条带清晰,无非特异性扩增,且产量较高,产物的长度与理论值相符;经银染多重SSCP分析,正常皮肤组织和增生性瘢痕中均未检出突变,在23例瘢痕疙瘩标本中,18例出现异常电泳带.结论本实验建立了用以分析瘢痕疙瘩Fas基因突变的多重PCR-SSCP方法,分析结果提示瘢痕疙瘩组织中Fas基因的突变可能与该病的发生有密切关系;多重PCR-SSCP是检测基因点突变的一种快速、敏感、有效的方法.     

瘢痕疙瘩组织p53基因突变的实验研究

目的：分析瘢痕疙瘩中p53基因第4—8外显子的突变及其意义。方法：取手术切除的瘢痕疙瘩和正常瘢痕各12例，并分别取同一患者正常皮肤对照，采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法(PCR-SSCP)和基因测序，检测各组织p53基因的突变情况。结果：12例瘢痕疙瘩标本中有9例p53基因外显子4、5、6、7出现点突变和移码突变，正常瘢痕标本、正常皮肤标本均未检出突变。结论：p53基因突变是瘢痕疙瘩形成和发展的重要因素之一。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞p53基因突变的研究

目的　探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞中 p5 3基因第 4～ 8外显子的突变规律及其意义。　方法　取瘢痕患者手术切除的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕标本各 12例 ,并设患者自身正常皮肤标本及血标本为对照。体外分离、培养上述组织标本的成纤维细胞。采用聚合酶链式反应 单链构象多态性(PCR SSCP)分析方法和基因测序法 ,检测各种组织成纤维细胞中p5 3基因的突变情况。　 结果　 12例瘢痕疙瘩标本中有 9例p5 3基因外显子 4、5、6、7出现点突变和移码突变 ,增生性瘢痕标本、正常皮肤标本及血标本中均未检出突变。　结论　p5 3基因突变是瘢痕疙瘩形成和发展的重要因素之一。     

多重PCR-SSCP检测人瘢痕疙瘩Fas基因突变

目的 建立多重PCR-SSCP反应体系，以筛选瘢痕疙瘩Fas基因突变。方法 按照多重PCR引物设计原则设计相应引物，经分析、实验得到理想的多重PCR扩增条件，以此条件扩增目的基因；将所得PCR反应产物在单基因对照下进行银染多重SSCP分析，进而筛选基因突变。结果外显子6，8，9的单一PCR反应产物及多重PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳，各条带清晰，无非特异性扩增，且产量较高，产物的长度与理论值相符；经银染多重SSCP分析．正常皮肤组织和增生性瘢痕中均未检出突变，在23例瘢痕疙瘩标本中，18例出现异常电泳带。结论 本实验建立了用以分析瘢痕疙瘩Fas基因突变的多重PCR-SSCP方法。分析结果提示：瘢痕疙瘩组织中Fas基因的突变可能与该病的发生有密切关系；多重PCR-SSCP是检测基因点交变的一种快速、敏感、有效的方法．     

基因敲除技术在精子发生相关基因功能研究中的应用

从基因水平研究男性不育症发病机理将有助于发现男性不育治疗的新途径。基因敲除技术是目前研究基因功能的主流方法。筛选鉴定精子发生过程中相关基因,探索其特性和功能,对了解睾丸功能、探索男科疾病新的治疗靶点具有重要意义。本文概述基因敲除技术在精子发生相关基因功能研究中的应用。     

基因芯片在膀胱癌基因研究中的应用

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,以空间上的多中心与时间上的反复发作为其生物学特点,其发生由多个基因控制、多步骤进行.基因芯片技术是一种高通量的基因分析平台,现已广泛用于疾病机制的研究、疾病的分类和诊断、疾病的预测和治疗,并用于膀胱癌发生、发展相关基因的筛选、分子治疗靶点的筛选、寻找膀胱癌亚型的分子标记以及肿瘤预后分类的研究.     

Successful in utero gene transfer using a gene gun in midgestational mouse fetuses

Background/Purpose

In utero gene therapy offers a number of potential advantages over postnatal gene therapy. A latest method of gene transfer to fetuses in utero uses a new tool called a gene gun. The gene gun is less invasive and simpler than other in utero methods. The current study was designed to determine whether the gene gun is an effective tool for transferring genes to mouse fetuses in utero.

Methods

Using a gene gun, we transferred plasmids that included enhanced green fluorescent protein (EGFP) genes and cytomegalo virus promoters to the abdominal skin of 40 A/J fetal mice at each of 3 gestational ages (13, 14, or 15 days). Four or 5 days after gene transfer, the number of surviving fetuses was counted, and a color image of EGFP in the skin was analyzed for gene transfer rates by fluorescence microscopy. Survival rates were analyzed using Fisher’s Exact test.

Results

The mean survival rate was 89.2% (107 of 120) in gene transfer fetuses and 91.7% (55 of 60) in controls. There is no difference in survival rate between gene transfer fetus and control. The highest gene transfer rate was 100% (37 of 37) at the gestational age of 14 days. The rate was 97.1% (34 of 35) at gestational ages of 13 and 15 days.

Conclusions

The results of this study show that in utero gene transfer by gene gun is a less-invasive technique, and the gene gun is an effective tool transferring genes to mouse fetuses in utero.     

一个与小鼠精子发生相关的基因——ris基因

应用改良的mRNA差异显示技术,对不同发育期小鼠(分别为1周龄至4周龄)睾丸曲细精管进行了差异表达的研究,并对其中一个在3周龄小鼠中具有高表达的差异表达片段进行了克隆和测序分析,其序列与Genebank中ris基因具有高度同源性,表明ris基因可能与小鼠精子发生相关。     

一个与小鼠精子发生相关的基因—rjs 基因

应用改良的mRNA差异显示技术,对不同发育期小鼠（分别为1周龄至4周龄）睾丸曲细精管进行了差异表达的研究,并对其中一个在3周龄小鼠中具有高表达的差异表达片段进行了克隆和测序分析,其序列与Genebank中rjs基因具有高度同源性,表明rjs基因可能与小鼠精子发生相关。     

逆转录病毒载体介导的外源性主要组织相容性抗原复合体基因转移及其在T细胞的表达

目的 建立一个在胸腺内表达外源性主要组织相容性抗原复合体(MHC)抗原的实验模型,为下一步研究作准备。方法 应用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,首次将外源性MHC基因转移到T淋巴表达并应用聚合酶链反应(PCR)及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染T细胞DNA及mRNA。结果 外源性MHC基因已整合到靶细胞染色体DNA并有效地转录;单克隆抗体免疫荧光染色流式细胞仪检测显示在转染T细胞膜有外源性MHC分子表达;转染效率为46.2％。结论 外源性MHC基因可以转移到T细胞稳定表达,为今后的研究提供了经验。     

骨质疏松症相关基因的研究进展

骨质疏松症已成为一个世界性的健康问题。它是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征,并使骨的脆性增加,易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。骨质疏松症的发生是遗传和环境因素共同作用的结果,是一个复杂的多因子疾病。近年来,国内外学者对骨质疏松症的相关基因开展了大量的研究,试图通过研究确定其直接病因;找到敏感的遗传标记,预测发生骨质疏松的危险性;开发药物防止骨量丢失和逆转骨质疏松。但是,其相关基因和致病基因尚未明确,复杂的遗传学体系也未完全清楚,还有待于更加深入和广泛的探索。本文回顾国内外文献,就骨质骨疏松症几种相关基因的研究进展进行综述。探讨这些基因与骨质疏松的关系,思考骨质疏松症的遗传学研究方向。     

Immune gene therapy in urology

Effective treatments are needed urgently for metastatic disease in bladder, prostate, and renal cell cancer. In the past few years, several new approaches for treating these conditions have been proposed, including gene therapy. A number of different strategies have been developed to accomplish urologic cancer gene therapy. Genetic immunomodulation strategies attempt to activate immune defense mechanisms against tumor cells by transfer of tumor antigens, cytokine genes, or strongly immunogenic cell surface molecules. In this review, we illustrate the recent developments in immune gene therapy.     

Glomerular-specific gene excision in vivo

Podocytes (glomerular visceral epithelial cells) are highly specialized cells that are found in the renal glomerulus and make up a major portion of the filtration barrier between the blood and urinary spaces. Recently, the identification of a number of genes responsible for both autosomal dominant and recessive forms of human nephrotic syndrome has provided insight into a number of molecules responsible for unique features of the podocyte such as the slit diaphragms. Despite these major advances in our understanding of podocyte biology, the function of many genes expressed in the podocyte remains unknown. Targeted gene disruption using homologous recombination in murine embryonic stem cells (ES cells) is a powerful tool to determine the biologic function of genes in vivo. However, resulting embryonic lethal or pleiotropic phenotypes often preclude the analysis of genes in specific renal cell types. To overcome this problem, a glomerular-specific Cre-recombinase transgenic murine line under the control of the Nphs1 (nephrin) promoter (Neph-Cre) was generated. This article reports successful Cre-mediated excision of a 'floxed' transgene specifically in podocytes in vivo. This murine founder line represents a powerful new tool for the manipulation of the expression of genes in podocytes and will provide valuable insight into podocyte biology in the whole animal.