鼻咽癌血清蛋白质双向电泳图谱分析

目的:探讨和分析鼻咽癌(NPC)差异表达的血清蛋白质。方法:以NPC和正常血清标本为研究对象,利用双向电泳(2-DE)分离NPC和正常血清蛋白质,银染显色,Umax扫描仪获取图像,Melanie4软件分析图像,寻找鼻咽癌相关差异蛋白质。结果:建立了较稳定的NPC和正常血清蛋白质2-DE图谱,平均蛋白质点数约400个。软件分析显示2组共有11个差异蛋白质点,10个仅在NPC血清中出现,1个仅在正常血清中出现。结论:差异蛋白质的分离为NPC的相关血清蛋白质的鉴定和其他肿瘤血清蛋白质组学研究奠定了基础。     

结肠癌肝转移患者血清双向电泳图谱的建立及优化

目的建立并优化结肠癌肝转移患者血清蛋白质组双向电泳分离技术。方法对2-DE的各种条件进行调整、优化,通过双向电泳图谱比较各种方法对血清蛋白的分离效果。结果采用pH4~7胶条,含尿素9M、硫脲2M的上样缓冲液,12.5%的SDS-PAGE胶提高了血清蛋白的分离效果。结论血液中高丰度蛋白质的去除能提高了2-DE图谱的斑点数和分辨率。成功建立了血清蛋白质的纯化技术,为寻找疾病的血清学标志物的研究奠定基础。     

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳（2-DE）检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。     

应用蛋白质质谱技术检测肺癌血清生物标志物的实验研究

目的探讨蛋白质质谱分析方法筛选肺癌血清蛋白特异性生物标志物的可行性。方法采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI)和弱阳离子交换(WCX2)蛋白质芯片检测17只健康兔和23只荷瘤兔的血清蛋白质谱,后者取血时影像学检查15只肺内已有肿瘤形成(荷瘤组),8只未见肿瘤形成的实验动物在随访过程中均见肿瘤形成(癌前组)。使用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用Bio-marker wizard和Proteinchip 3.1软件进行分析。结果荷瘤组、癌前组和健康对照组比较,筛选出来的32个蛋白质峰中有5个峰(标志分子)表达差异有统计学意义(P<0.05),其中3个蛋白质表达上调,2个下调。结论蛋白质质谱分析方法可以从血清中检测出与肿瘤病程进展相关的特异性标志分子,有望成为肺癌早期诊断或预警的有效工具。     

Ⅰ期非小细胞肺癌相关血清差异表达蛋白的研究

目的:寻找Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)与健康人血清的差异表达蛋白.方法:收集天津市胸科医院经手术、病理证实的6例Ⅰ期NSCLC患者血清,等量混合后设为肺癌组;同期15例健康体检血清,等量混合后设为健康对照组.利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分离、筛选和鉴定2组间的差异表达蛋白.结果:成功获得了2组的双向凝胶电泳图谱,PDquest软件分析显示,2组间差异大于2倍的蛋白质点共有128个,质谱鉴定后确定了10种蛋白质,其中7种表达量上调,分别为α1-酸性糖蛋白、C1酯酶抑制物、血管紧张素原、转铁蛋白、转甲状腺素蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H2及无花果酶-3;3种表达量下调,分别为纤连蛋白、补体C4-A及补体C3.结论:应用2-DE及MALDI-TOF-MS在Ⅰ期NSCLC血清中鉴定出4种与肿瘤关系密切的差异表达蛋白,可作为开发NSCLC早期诊断标志物的候选蛋白.     

先天性甲状腺功能减退症大脑蛋白质双向电泳分析

目的:比较新生正常大鼠和先天性甲状腺功能减退症(CH)大鼠大脑蛋白质表达的差异,为探讨CH致脑发育障碍发病机制提供线索.方法:制作CH仔鼠动物模型,于出生时称体质量后处死仔鼠,取大脑皮质,应用双向电泳(2-DE)技术分析正常仔鼠与CH仔鼠大脑蛋内质表达的差异情况.放射免疫分析法检测2组大鼠血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4),水平.结果:CH组仔鼠体质量、FT3、FT4水平均低于正常组仔鼠.建立了稳定的正常仔鼠与CH仔鼠大脑皮质2-DE图谱,发现2组共有8个蛋白质点存在差异.与正常仔鼠相比,CH仔鼠大脑有3个蛋白质点量上调,2个蛋白质点量下调,有3个蛋白质点仅出现于CH仔鼠组.结论:CH仔鼠大脑差异蛋白表达可能与CH致脑发育障碍的发生、发展密切相关.     

心肾综合征阳虚水泛证与气虚血瘀证患者血清蛋白质组学研究

目的 建立心肾综合征(CRS)阳虚水泛证、CRS气虚血瘀证及健康对照的血清蛋白质组表达图谱,初步鉴定其差异表达的蛋白质.方法 选择CRS患者35例,其中阳虚水泛证组20例;气虚血瘀证组15例.另选健康者12例作为对照.各组血清去除白蛋白,测定血清蛋白浓度.以双向凝胶电泳分离各组血清蛋白质,考马斯亮蓝染色,扫描凝胶成像后,用PDQuest软件对各组血清蛋白质组表达图谱进行差异分析,选定差异点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisteD Laser DesorptioN/ioNizatioN-Time of Flight-Mass SpeCtrometry,MALDI-TOF-MS)分析,MasCot软件搜索MSDB和SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质.结果 初步建立CRS阳虚水泛证、CRS气虚血瘀证及健康对照组3组血清蛋白质表达图谱,分别获得蛋白质点95、87 和79 个;13 个蛋白质点在3 组血清中呈现差异表达;初步鉴定其中的11 个蛋白质分别为:生长分化因子15 前体、N 末端B 型钠尿肽、高敏C 反应蛋白、半乳凝素3、肾损伤分子-1、白细胞介素-18、促肾上腺髓质素、髓过氧化物酶、胱抑素C、脂联素、骨保护素.结论 得到鉴定的11 个蛋白质可能与心肾综合征阳虚水泛证、CRS 气虚血瘀证发生发展密切相关,但其具体机制有待进一步研 究.     

人体β-胡萝卜素水平与肺癌的关系

目的 :测定肺癌患者血清及胸腔积液中β 胡萝卜素的含量 ,分析和探讨β 胡萝卜素与肺癌的关系。方法 :采用分光光度法 ,对 5 5例肺癌患者及 2 3例肺良性疾病患者 ,以 5 4名健康人为对照 ,39例恶性胸腔积液患者以 18例良性胸腔积液为对照测定β 胡萝卜素含量。结果 :肺癌患者、肺良性疾病患者及健康人血清β 胡萝卜素含量均值分别为4 2 6 .1μg/L、4 6 3.5 μg/L、4 96 .5 μg/L ,肺癌组显著低于健康组 (P <0 .0 5 ) ,肺良性疾病组与健康组没有差异。恶性胸腔积液与良性胸腔积液β 胡萝卜素含量分别为 2 4 2 .5mg/L和 32 9.8mg/L ,恶性胸腔积液显著低于良性胸腔积液 (P <0 .0 5 )。肺癌不同组织类型之间及治疗前后血清胡萝卜素含量没有差异。结论 :肺癌患者体内 β 胡萝卜素低下可能是肺癌发病的因素之一 ,这对肺癌预防及临床营养治疗具有一定的指导意义。     

顺铂处理肝癌细胞SMMC-7721的蛋白质组学分析

目的:用蛋白质组技术分析顺铂(cisplatin,DDP)作用于肝癌SMMC-7721细胞后细胞内蛋白质组的变化.方法:采用四氮唑蓝还原反应法(MTT)测定细胞生长抑制率.顺铂(10 mg·L-1)作用肝癌SMMC-7721细胞24 h,分别收集顺铂处理组与对照组细胞,提取细胞内总蛋白并采用双向电泳(2-DE)分离,Image Master 2D Platinum软件分析顺铂处理前后差异表达蛋白质,切取明显差异点,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白.结果:顺铂可抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长,其抑制作用具有剂量及时间依赖性.质谱鉴定出4个已知序列的差异蛋白点.结论:顺铂处理后肝癌SMMC-7721细胞内差异表达的蛋白可能与顺铂的抗肿瘤作用机制有关.     

双向电泳分析叶酸对神经干细胞蛋白表达的影响

目的:探讨叶酸缺乏对胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)蛋白质表达的影响。方法:采用无血清体外细胞培养方法,培养胚胎大鼠NSCs并进行鉴定,采用叶酸缺乏培养基培养NSCs,根据叶酸添加终浓度将细胞分为对照(Con?trol)组、叶酸缺乏(Folate-D)组、叶酸补充(Folate-L)组,各组叶酸终浓度分别为4、0.6、8mg/L。应用双向电泳(2-DE)技术分析各组蛋白质表达的差异。结果:建立了稳定可重复的NSCs2-DE图谱,与Control组相比,Folate-D组2个蛋白点表达量降低,4个蛋白点表达量升高;Folate-L组2个蛋白点表达量降低,1个蛋白点表达量升高。结论:叶酸缺乏或补充叶酸影响NSCs蛋白表达,差异蛋白分离为进一步研究叶酸对NSCs增殖分化调控机制奠定了基础。