线粒体Omi/HtrA2信号通路参与人脑挫裂伤后神经细胞凋亡的研究

目的揭示人脑急性创伤性脑损伤后Omi/HtrA2介导的神经细胞凋亡线粒体途径的激活。方法选择100例脑外伤开颅手术中获得的脑挫裂伤脑组织作为外伤组,另外选择100例脑出血患者手术径路中获得的正常脑组织作为对照组,采用流式细胞仪检测神经细胞凋亡,采用Western-blot检测Omi/HtrA2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、pro-caspase3、pro-caspase9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶（PARP）表达,采用四肽荧光底物法检测caspase3和caspase9活性。结果外伤组脑组织凋亡神经细胞比例、Omi/HtrA2、pro-caspase3、pro-caspase9和剪切PARP表达及caspase3和caspase9活性较对照组显著升高（均P＜0.01）,外伤组脑组织XIAP表达较对照组显著下降（P＜0.01）。外伤组脑组织Omi/HtrA2表达与凋亡神经细胞比率、pro-caspase3、pro-caspase9和剪切PARP表达及caspase3和caspase9活性呈显著正相关（均P＜0.01）,与XIAP表达呈显著负相关（P＜0.01）;外伤组脑组织XIAP表达与凋亡神经细胞比率、pro-caspase3、pro-caspase9和剪切PARP表达及caspase3和caspase9活性呈显著负相关（均P＜0.01）。结论Omi/HtrA2介导的线粒体途径可能参与人急性创伤性脑损伤后神经细胞凋亡过程。     

Omi/HtrA2与细胞凋亡相关性的研究

凋亡是细胞的一种自杀行为,是机体清除自身无用的、危险的、病理的细胞的重要方式[1]. Omi/HtrA2是一种存在于线粒体膜间隙的丝氨酸蛋白酶,在其受到某些信号的刺激时可穿出线粒体并通过改变分子结构而发展成为成熟的 Omi/HtrA2,成熟形式的 Omi/HtrA2与IAPs相结合后抑制了IAPs对caspases的作用,使得caspase 的活性得以释放,从而引起 caspases依赖性凋亡通路的发生[2].     

丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2表达增加促进心肌衰老的作用

目的 观察线粒体促凋亡蛋白Omi/HtrA2表达增加对心肌衰老的影响。方法 构建心肌特异性过表达Omi/HtrA2小鼠模型,通过Western blotting法检测衰老标志物p53、p21、p16表达水平;分析Omi/HtrA2与衰老标志物表达的相关性;构建Omi/HtrA2稳转H9c2细胞系,通过Western blotting法检测Omi/HtrA2表达增加后衰老指标p53、p21、p16的改变;通过β-半乳糖苷酶(β-gal)染色比较β-半乳糖苷酶染色阳性衰老细胞的改变;通过Omi/HtrA2特异性抑制剂UCF101抑制Omi/HtrA2功能,检测抑制Omi/HtrA2活性后衰老标志物的表达水平及阳性衰老细胞变化。结果 (1)与对照组相比,心肌特异性过表达Omi/HtrA2小鼠心肌组织中,Omi/HtrA2表达量显著增加(P<0.01);过表达Omi/HtrA2心肌组织衰老标志物p53、p21、p16增加(P<0.01);(2)在心肌组织中Omi/HtrA2表达量与衰老标志物p53、p21、p16呈正相关(P<0.05);(3)与H9c2细胞(control组)相比,Omi/HtrA2稳转H9c2细胞(Omi组)衰老标志物p53、p21、p16表达增加(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色结果显示,Omi组衰老细胞增加;与Omi组相比,Omi/HtrA2特异性抑制剂UCF101处理组(Omi+UCF101组)衰老标志物p53、p21、p16表达降低(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色阳性细胞减少。结论 Omi/HtrA2的表达与衰老标志物呈正相关,表达增加的Omi/HtrA2促进心肌衰老。     

凋亡蛋白Omi/HtrA2和Survivin与肿瘤的研究进展

细胞凋亡是一种由基因调控的高度保守的细胞主动死亡过程，在多细胞有机体的生长发育，维持组织同源性等过程起重要作用。肿瘤的发生与凋亡过程的紊乱有着密切的关系。细胞凋亡是细胞由于降解酶的作用，降解酶主要是水解酶，如蛋白酶与核酸酶作用，在近乎正常的细胞质膜内趋向死亡，这与坏死时细胞质膜早期破坏不同。     

Omi/HtrA2和Caspase-9在食管癌中的表达及与凋亡的关系

目的探讨在食管鳞癌中Omi/HtrA2、Caspase-9蛋白的表达及其与癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法对80例经病理确诊为食管鳞癌病例的正常组织、癌旁组织及癌组织进行Omi/HtrA2和Caspase-9蛋白免疫组化分析。采用TUNEL法检测细胞凋亡水平,并分析食管癌中Omi/HtrA2和Caspase-9的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。结果 1 Omi/HtrA2、Caspase-9在食管鳞癌组织阳性表达率分别为76.25%、58.75%,在癌旁组织中的阳性表达率分别为27.50%、72.50%,在正常组织中的阳性表达率分别为22.50%、85.00%;Omi/HtrA2、Caspase-9在食管鳞癌组织中的阳性表达率与其在癌旁组织、正常组织中蛋白的阳性表达率分别进行比较,差异均有统计学意义(P0.05);癌旁组织与正常组织的Omi/HtrA2和Caspase-9蛋白阳性表达率进行比较,差异均无统计学意义(P0.05)。2 Omi/HtrA2蛋白表达阳性组癌细胞凋亡指数(18.186±1.331)‰,明显高于阴性组凋亡指数(5.108±1.783)‰(P0.01);Caspase-9蛋白表达阳性组细胞凋亡指数为(17.763±0.675)‰,明显高于阴性组细胞凋亡指数(11.619±0.712)‰(P0.05)。结论 Omi/HtrA2在食管癌中高表达,而Caspase-9在食管癌中低表达,两者在促进食管癌细胞凋亡中有相反的调节作用。     

HtrA2/Omi与Survivin在胰腺癌中的表达及临床意义

目的：探讨凋亡相关蛋白丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi和Survivin在胰腺癌中的表达及其临床意义。方法：用免疫组化SP法对40例胰腺癌组织和20例癌旁正常胰腺组织中HtrA2/Omi和Survivin的表达情况进行检测。结果：胰腺癌组与对照组比较,HtrA2/Omi、Survivin表达率均明显升高,组间比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,HtrA2/O-mi的阳性表达率与Survivin的阳性表达率无显著相关（r=0.105,P〉0.05）;HtrA2/Omi在胰腺癌组织中的表达与肿瘤TNM分期、分化程度相关,Survivin表达与肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤转移相关。结论：HtrA2/Omi、Survivin可能通过调节胰腺癌组织细胞的凋亡而参与胰腺癌的发病。     

Omi/HtrA2基因与神经变性疾病的研究进展

人HtrA2(也称作Omi)是HtrA丝氨酸蛋白酶家族的新成员,可以通过破坏X染色体连锁的凋亡蛋白抑制物和caspase的相互作用,和(或)直接利用其蛋白酶活性诱导凋亡,也可以校正、降解错误折叠的蛋白质,抵抗应激,具有细胞保护的作用。研究已经发现它参与了许多疾病的发生、发展。作者就其生物学功能、单核苷酸多态性与神经变性疾病的相关性做一综述。     

Omi/HtrA2和caspase-7在喉癌组织中的表达及相关性

目的探讨Omi/HtrA2和caspase-7在喉鳞状细胞癌中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学方法检测40例喉鳞癌组织(喉癌组)和10例正常喉黏膜组织(对照组)中Omi/HtrA2和caspase-7表达,采用图像分析系统对表达结果进行定量分析,并分析其与临床病理特征相关性。结果喉鳞状细胞癌组织Omi/HtrA2表达阳性率显著高于正常喉黏膜组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),其阳性单位分别为26.952±7.145和10.395±6.978,差异有统计学意义(P<0.05);喉鳞状细胞癌组织caspase-7表达的阳性率高于正常喉黏膜组织,其阳性单位分别为29.365±8.152和9.362±4.234,差异有统计学意义(P<0.05)。喉鳞状细胞癌组织Omi/HtrA2和caspase-7表达的阳性单位与年龄、性别、临床分型(肿瘤部位)、临床TNM分期和淋巴结转移无关,与病理分级(G1→G2+G3)有关(P<0.05)。喉鳞状细胞癌组织中Omi/HtrA2与caspase-7表达有相关性(r=0.332,P<0.05)。结论 Omi/HtrA2和caspase-7可通过调节细胞凋亡,对喉癌的发生和发展起重要作用。     

HtrA2 mRNA在大鼠脑出血模型中表达的实验性研究

目的探讨HtrA2（也称作0mi）在大鼠脑出血急性期的作用及其机制。方法雌雄各半SD大鼠150只,随机分为正常组、假手术组及脑出血后3h、6h、12h、1d、3d、5d组和7d组,每组10只。在脑立体定向仪下采用自体血注入尾状核法制备脑出血模型。于相应时间点处死动物,用干湿重法测量脑含水量（BWC）;进行ICH组神经功能缺失评分;RT-PCR法检测HtrA2 mRNA表达水平。结果各组均有HtrA2 mRNA表达,但脑出血后各组手术侧表达明显增加（P〈0.05）,尤其是3d组,与脑含水量呈正相关;而脑含水量与神经功能缺失评分呈负相关。结论大鼠脑出血后HtrA2 mRNA表达增加,并与脑水肿程度呈正相关,推测HtrA2参与ICH后灶周围组织神经元凋亡的过程及ICH后灶周脑组织水肿的过程,诱导或加重了神经元的凋亡及脑水肿。     

促红细胞生成素对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及其机制

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧复氧(H/R)心肌细胞是否具有保护作用及其机制。方法以乳鼠心肌细胞株(H9C2细胞)为研究对象,将其分为对照组、H/R组及EPO干预组。其中对照组常规培养;H/R组缺氧2 h后复氧24 h;EPO干预组在缺氧2 h后加入不同浓度的EPO(5、10、20 IU/ml)处理,然后复氧24 h。培养结束后分别检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,使用MTS法检测细胞存活率,使用Western blot检测细胞内Cleaved Caspase-3表达变化,使用线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒分离线粒体和胞浆蛋白,使用Western blot分别检测线粒体和胞浆内Omi/HtrA2蛋白表达变化。结果与对照组比较,H/R组细胞存活率明显下降,细胞上清液LDH释放明显增加,细胞内Cleaved Caspase-3表达增强,胞浆内Omi/HtrA2蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P0.05);而与H/R组相比,EPO干预组细胞存活率上升,细胞上清液LDH释放降低,Cleaved Caspase-3表达减弱,胞浆内Omi/HtrA2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P0.05),但各指标均未恢复至对照组水平。结论 H/R可诱发心肌细胞凋亡,EPO可减轻H/R诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能为抑制线粒体内Omi/HtrA2蛋白的转位,从而抑制Caspases通路激活有关。     

Omi/HtrA2 shRNA重组真核表达质粒的构建及其在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型中的作用

目的 构建在哺乳动物细胞中表达的Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,观察其对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2表达的影响.方法 根据Genbank中Omi/HtrA2 mRNA分别设计2对多聚核苷酸序列,退火形成互补双链DNA,分别克隆至经双酶切后的载体Pgenesil-1上,构建Omi/HtrA2特异性的shRNA表达载体PGP1和PGP2,进行酶切和测序鉴定.制作NRK-52E缺氧/复氧模型,将表达质粒通过脂质体介导转染NRK-52E,Westernblot检测Orni/HtrA2蛋白质表达.结果 将合成的DNA片段退火后克隆至Pgenesil-1载体上,构建Omi/HtrA2特异shRNA表达载体PGP1和PGP2;经酶切和测序证实构建成功,无碱基突变发生.将表达质粒介导转染NRK-52E缺氧/复氧模型后,细胞Chai/HtrA2蛋白质表达显著降低.结论 成功构建针对大鼠Omi/HtrA2基因的shRNA表达载体PGP1和PGP2,它们能有效抑制NRK-52E缺氧/复氧模型中Ckni/HtrA2表达.     

Immunohistochemical Analysis of Omi/HtrA2 Expression in Prostate Cancer and Benign Prostatic Hyperplasia

Itisnowbelievedthatclonalexpansionandtumorgrowthistheresultofthederegulationofintrinsicproliferation(celldivision)andcelldeath(apoptosis).Advancedprostatecancerisresistanttomanyproapoptosisfactorsandshowsdistinctapoptosisresistance,sothekeytothetreatmentofadvancedprostatecanceristoreverseitsapoptosisresistance.Omi/HtrA2isaserineprotease[1]whichisreleasedduringapoptosisfrommitochon driatocytosolalongwithcytochromeCandSmac/DIABLO[2].Omi/HtrA2candisplaceIAPsfromcaspasesandreleasethesuppress…     

线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在膀胱癌组织、癌旁组织、膀胱正常粘膜组织中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术方法检测44例膀胱癌组织,44例癌旁组织及12例膀胱正常粘膜组织Omi/HtrA2的表达。结果:1Omi/HtrA2的阳性表达率为膀胱癌组织81.9%(36/44),癌旁组织31.9%(14/44),正常膀胱粘膜25.0%(3/12);2Omi/HtrA2在膀胱移行细胞癌的阳性表达率情况为G1级83.3%(10/12),G2级65.2%(15/23),G3级22.2%(2/9);3Omi/HtrA2的表达与性别、年龄和临床分期无明显的关系。结论:1Omi/HtrA2在膀胱移行细胞癌组织中的阳性表达率明显高于正常粘膜组织和癌旁组织。2Omi/HtrA2蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达水平与患者的年龄、性别以及肿瘤的分期无关,与膀胱癌病理分级有关。     

垂体后叶素在大鼠脊髓水平对动脉血压的影响及其可能机制

大鼠脊髓蛛网膜下腔注射垂体后叶素引起中枢性升压效应,此效应可被α肾上腺素能受体阴断剂酚妥拉明所阻断,但不受β受体阻断剂心得安的影响。颈部第一节段横断脊髓后,这种升压效应依然存在,摘除双侧肾上腺后,这种升压效应明显减弱。以上结果提示,垂体后叶素在大鼠脊髓水平具有调制血压的作用,这种中枢性的调制作用可能有脊髓内α受体的介导。肾上腺髓质激素也参与了这一调制过程.