2007年上海市部分嗜肺军团菌血清1型菌株PFGE分型研究

[目的]研究2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的嗜肺军团菌1型（L01）的基因特征。[方法]从空调冷却塔水中检测到26株Lp1嗜肺军团菌后,使用脉冲场凝胶电泳（pulsed－field gel electrophorefiifl,PFGE）技术对酶切后的L01军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,并用BioNumerics软件对其进行聚类分析。[结果]26株LO1军团菌可分为15个PFGE型。菌株间相似性系数在30．00％～100．00％之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。大部分PFGE型别的菌株来源场所单一;而大部分同一场所来源的军团菌菌株为相同的PFGE型。[结论]2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的Lp1军团菌呈现基因多样性。     

石家庄市水环境中嗜肺军团菌AFLP分型研究

目的 对石家庄市水环境中分离到的嗜肺军团菌进行分子分型,研究嗜肺军团菌AFLP分型特征,为建立嗜肺军团菌分子型别库提供资料.方法 运用欧洲军团菌感染工作组(European Working Group on Legionella Infection,EWGLI)组织制定的扩增片断长度多态性分型(amplified fr...     

非嗜肺军团菌的分离培养与血清分型研究

目的对吉林省某集中空调冷却塔出水口的水进行军团菌分离培养及血清学分型。方法用分离培养法检测军团菌,再用乳胶凝集对其进行血清学分型。结果在某集中空调冷却塔出水口的水中成功检测出非嗜肺军团菌(博杰曼军团菌),在吉林省属首次报道。结论利用本方法可以较好地分离培养出冷却塔出水口的水中军团菌及进行血清血分型。     

嗜肺军团菌分子分型研究进展

军团菌病主要由嗜肺军团菌引起,尤其以血清1型为多见。在军团菌病暴发流行时,为了了解环境标本与病人标本来源的分离株的亲缘关系,需要对其进行分型。目前主要有表型分型和分子分型。表型分型只能了解最基本的分型信息,而新近发展起来的基于DNA水平的分子分型在疫情的溯源及细菌群体进化研究中发挥着越来越重要的作用。该文对嗜肺军团菌分子分型方法进行综述。     

嗜肺军团菌不同分子分型方法检测

目的采用2种分子分型方法对冷却塔水中嗜肺军团菌进行检测分析。方法分别应用扩增军团菌巨噬细胞感染力增强因子基因(Macrophage Infectivity Potentiator,MIP)后测序的分型方法以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)对48株嗜肺军团菌进行分型。结果MIP分型方法将48株嗜肺军团菌分为5类,分别为,i>L.pnuemophile-phil-1、L.pnuemophile-phil-sg3、L.pnuemophile-phil-D-15、L.pnuemophile-phil-sg10、L.pnuemophile-phil-97-2898,其中L.pnuemophile-phil-1为优势菌群,占60.4%。PFGE分型方法将48株嗜肺军团菌分为23类,无优势菌群。结论PFGE分型方法具有更高的分型能力,更有利于流行病学溯源、调查。     

我国九省（市、区）82株嗜肺军团菌血清1型菌株的序列分型

目的 了解我国环境水中嗜肺军团菌血清1型（Lp1）菌株的序列分型特征,并初步建立我国军团菌序列分型数据库。方法 采用序列分型(SBT)方法,对我国9个省（市、自治区）2005-2008年间环境水中分离的82株Lp1菌株进行分型,同时采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对这些菌株进行分型,并采用BioNumerics 5.1软件对2种方法的分型结果进行聚类分析和比较。结果 82株Lp1菌株分为22种序列(ST)型,其中17种ST型是新序列型,新发现1个等位基因;ST-1型为主要的序列型,在8个省（市、自治区）均有发现,该型菌株占所有菌株的46.3％ (38/82);ST-1、ST-150、ST-154、ST-159、ST-160和ST-630出现于2个以上的分离地点,5个分离位点(B4、B5、B6、S3和S8)发现2种以上ST型;通过聚类分析,15种ST型被分为3个序列群（ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149序列群）,其余7种ST型没有序列群归类。采用PFGE分型方法,这些菌株可被分为46种带型。SBT和PFGE两种方法结合可将82株菌株分为54种分子型别。两种方法的聚类分析结果具有良好的一致性。结论 我国环境水中Lp1菌株具有独特的SBT分布;通过研究,初步建立了我国军团菌序列分型数据库。     

340例发热病人感染嗜肺军团菌型别分析

采用微量凝集试验（ＭＡＴ）对３４０例发热病人进行嗜肺军团菌感染的型别进行分析。结果发现：发热病人以感染ＬＰ５、ＬＰ４；夏季肺炎病人中嗜肺军团菌的感染率高达５０％左右。     

石家庄市集中空调冷却塔水中嗜肺军团菌的基因序列分型研究

目的采用基因序列分型方法(sequence-based typing,SBT)研究石家庄市集中空调冷却塔水中军团菌基因特征。方法将石家庄市集中空调冷却塔水中分离出的35株Lp1血清型嗜肺军团菌提取基因组DNA,选取嗜肺军团菌7个管家基因flaA、pilE、asd、mip、mompS、proA、neuA进行PCR扩增,将扩增产物纯化后测序。测序结果上传欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)数据库进行比对,得到基因型别(sequence type,ST),对结果进行基因序列分型和系统进化分析。结果 35株Lp1血清型嗜肺军团菌共分为4个ST型,其中1株由于neuA基因不能被扩增而未分型;1株为新的ST型,已获EWGLI分配序号(ST1021);其余为ST1型32株,ST345型1株。结论石家庄市集中空调冷却塔水中嗜肺军团菌分离株的流行以ST1型为主,ST345型和ST1021型为特有型别。SBT分型可以作为研究嗜肺军团菌进化关系的重要手段之一。     

公共场所集中空调卫生管理现状及其冷却水嗜肺军团菌污染状况调查

目的了解公共场所集中空调系统卫生管理现状及冷却水嗜肺军团菌污染状况;研究公共场所集中空调系统卫生管理措施对冷却水嗜肺军团菌污染的影响。方法于2008年9月在我国南方城市中随机选取有集中空调的148家公共场所进行集中空调卫生管理状况问卷调查并采集冷却水样进行军团菌检测。结果定期对集中空调冷却水进行消毒,定期向冷却水中投放防腐剂、除垢剂,定期对冷却水水质进行检测其嗜肺军团菌阳性率分别为68.1%(64/94),65.1%(56/86),66.7%(48/72),未进行上述三项处理的冷却水嗜肺军团菌阳性率分别为92.0%(46/50),87.7%(50/57),84.7%(61/72),处理前、后冷却水嗜肺军团菌阳性率差异有统计学意义。结论对冷却水定期消毒,定期向冷却水中投放防腐剂、除垢剂,对冷却水水质进行定期检测能降低冷却水嗜肺军团菌污染的风险。应完善公共场所集中空调系统卫生管理规范,加强监管,以控制集中空调系统冷却水嗜肺军团菌的污染。     

常州市公共浴池水中嗜肺军团菌的调查

目的了解常州市公共浴池水中嗜肺军团菌的污染状况。方法于2016年,选择常州市2家温泉场所和12家热水浴室进行浴池水样采集,采用实时荧光PCR方法检测水样中的嗜肺军团菌,并对分离菌株进行血清学鉴定。结果共采集公共浴池水样72件,嗜肺军团菌的阳性率为20.8%(15/72),其中,温泉浴池水中嗜肺军团菌的阳性率为30.0%(12/40),高于热水浴池水[9.4%(3/32)],差异有统计学意义(P=0.032)。共分离出11株嗜肺军团菌,血清型以LP1型为主,占比54.5%(6/11)。水样中嗜肺军团菌浓度范围为3.19×10^5-2.18×10^7,copies/ml。结论常州市公共浴池水中存在不同程度的嗜肺军团菌污染,尤其温泉浴池可能是公共场所军团菌污染的一个重要来源。     

Legionellosis from Legionella pneumophila serogroup 13

We describe 4 cases of Legionella pneumophila serogroup 13-associated pneumonia. These cases originate from a broad geographic range that includes Scotland, Australia, and New Zealand. L. pneumophila serogroup 13 pneumonia has a clinically diverse spectrum that ranges from relatively mild, community-acquired pneumonia to potentially fatal severe pneumonia with multisystem organ failure. All cases were confirmed by culture and direct fluorescent antibody staining or indirect immunofluorescent antibody tests. Proven or putative sources of L. pneumophila serogroup 13 infections in 2 patients included a contaminated whirlpool spa filter and river water. An environmental source was not found in the remaining 2 cases; environmental cultures yielded only other L. pneumophila serogroups or nonpneumophila Legionella species. We describe the clinical and laboratory features of L. pneumophila serogroup 13 infections. L. pneumophila serogroup 13 pneumonia is rarely reported, but it may be an underrecognized pathogenic serogroup of L. pneumophila.     

1型嗜肺军团菌的光纤倏逝波生物传感器快速测定法

目的 利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台.方法 优化最佳检测条件,并在此条件下确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工模拟样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性.结果 该方法40 min之内自动完成检测.捕获抗体与目标物最佳反应时间、反应体系与检测抗体的最佳反应时间均为10 min,捕获抗体最佳使用浓度是100 μg/ml,检测抗体最佳使用浓度为20μg/ml.在此条件下得到该方法检测Lp1的灵敏度为1.8×103cfu/ml,检测的特异性强.结论 光纤倏逝波生物传感器快速检测方法为大样本量Lp1污染严重水样的现场快速筛查提供一种新途径.     

New Endemic Legionella pneumophila Serogroup I Clones,Ontario, Canada

The water-borne pathogen Legionella pneumophila serogroup 1 (Lp1) is the most commonly reported etiologic agent of legionellosis. To examine the genetic diversity, the long-term epidemiology, and the molecular evolution of Lp1 clinical isolates, we conducted sequence-based typing on a collection of clinical isolates representing 3 decades of culture-confirmed legionellosis in Ontario, Canada. Analysis showed that the population of Lp1 in Ontario is highly diverse and combines lineages identified worldwide with local strains. Identical types were identified in sporadic and outbreak-associated strains. In the past 15 years, the incidence of some lineages distributed worldwide has tended to decrease, and local endemic clones and lineages have emerged. Comparative geographic distribution analysis suggests that some lineages are specific to eastern North America. These findings have general clinical implications for the study of Lp1 molecular evolution and for the identification of Lp1 circulating strains in North America.     

Genetic diversity of Legionella pneumophila in hospital water systems

It has been shown that different patients who had acquired legionellosis in a hospital setting were infected with the same strain even years apart. However, there are no longitudinal data describing the molecular epidemiology of Legionella pneumophila strains that contaminate a water system. This raised the question if there are any shifts of L. pneumophila strains over time, or after carrying out control measures. Using genotyping on a large collection of isolates, we investigated in a retrospective study the distribution of L. pneumophila serogroups and PFGE types in six different hospitals of the University of Heidelberg between 1991 and 2001. A total of 2012 water samples were drawn for routine testing and for evaluation of control measures, 747 samples were positive for L. pneumophila. Serogroups were determined by latex agglutination or by direct fluorescence assay; and 515 L. pneumophila isolates from water systems and six from patients underwent PFGE typing after SfiI-restriction. We identified seven serogroups and 19 genotypes among the water isolates. Each hospital had one to four predominating PFGE types that were stable over the investigation period. The oldest buildings in hospitals 4 and 5 (built 1876 and 1907) had more types than the newest one (built 1986). In all hospitals PFGE types were identified that could be found only sporadically. Although each hospital had its own warm water supply, we identified types that could be found in more than one hospital. However, there was no overlap of types in buildings that were fed from different wells. Infrequently occurring nosocomial legionellosis (n=3) were only caused by predominant strains. Contamination of water supplies seemed to be dominated by stable genotypes, even after various control measures. Additional genotypes could be isolated sporadically, however, their pathogenetic relevance seemed to be questionable.     

泰州市116份公共场所集中空调冷却水嗜肺军团菌监测结果

目的 为了解泰州市公共场所集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况,为军团病的防控提供数据。方法 于2013-2015年采集了泰州市公共场所集中空调冷却水116份,进行了嗜肺军团菌分离培养,同时进行嗜肺军团菌核酸检测。结果 116份冷却水样本中26份分离培养出嗜肺军团菌,检出率为22.4%,荧光PCR法嗜肺军团菌核酸检测结果31份核酸阳性,检出率为26.7%。宾馆(饭店)、商场(超市)冷却水样中分离培养检出率分别为19.7%、27.5%,荧光PCR法嗜肺军团菌核酸阳性检出率分别为22.3%、35.0%。结论 泰州公共场所的集中空调冷却水嗜肺军团菌污染情况严重,已对长期在此环境下工作人群健康构成潜在威胁。     

工业循环冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子生学特性研究

目的 了解钢铁企业工业循环冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况及菌株分子生物学特性.方法 于2011年3月-2012年9月对邯郸某钢铁厂相对固定的车间冷却塔水进行连续监测,进行嗜肺军团菌的定量分离培养,对分离到的菌株进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因序列分型、毒力基因(lvh、rtxA)检测.结果 共检测117份水样,其中20份水样检出嗜肺军团菌,检出率为17.1％;菌落总数为100～50000 CFU/L,中位数为12000 CFU/L;共分离到嗜肺军团菌23株,血清型包括Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp8,并以Lp1为主(占36.1％,9/23).23株嗜肺军团菌PFGE分型得到19种不同带型,其中15种带型为国内首次发现.23株嗜肺军团菌分成20个SBT型别,有12个型别为本研究新发现.23株菌中,lvh、rtxA基因阳性的分别有20、22株,两种毒力基因全部阳性的有19株.结论 钢铁企业的冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,菌型呈现基因多态性,同时具有独特的基因组成,并普遍具有毒力.     

三种分子分型技术在嗜肺军团菌分型中的应用与评价

目的对脉冲场凝胶电泳方法 （PFGE）、基因序列分型（SBT）和mip基因分型方法在嗜肺军团菌分型研究中的分辨力和潜在价值进行比较和论述。方法采用PFGE、SBT和mip基因分型方法对29株嗜肺军团菌和1株标准菌株ATCC33153进行分型比较。结果 PFGE可将30株嗜肺军团菌分为5大类群,19个PFGE型,分辨力为0.9586;SBT可分为22个ST型,分辨力为0.9609;mip基因分型可分为9个型别,分辨力为0.8344。血清型LP1和LP14菌株具有相同的PFGE和mip基因型别,相同或相近的SBT型别。结论 SBT较PFGE具有稍高的分辨力,适用于全球数据库比对和进化亲缘关系的研究,结合PFGE和SBT分型方法有利于流行病学溯源分析。     

空调循环水系统军团菌微生态与其存活力研究

[目的]探讨冬季军团菌在空调循环水系统中的微生态环境与其存活力的关系。寻找军团菌在空调循环水系统中的越冬场所及其赖以生存的相关因素,为阻断军团菌在空调冷却塔中繁殖、传播提供依据。[方法]选择8月份军团菌数高的空调冷却塔作现场调查,同时模拟空调冷却塔条件,构建藻类减少和藻类增加两种不同的军团菌生态模型。定期分别采集水样和沉积在容器表面的地衣一藻类混合体作军团菌检测和扫描电镜观察,并对水样中的藻体数、总有机碳和硝酸盐氮等进行检测。[结果]10月下旬,空调机关机后,冷却塔水样中无军团菌检出,但在地衣一藻类混合体中检测到高达10^4CFU／4cm^2的军团菌,扫描电镜观察发现藻类混合体的外膜上附着有较多的杆菌和军团菌。12月底,藻类减少模型无军团菌检出,但冷却塔和藻类增加模型均有检出。次年2月下旬,冷却塔和藻类减少模型中均无检出,只有藻类增加模型有检出。扫描电镜观察发现,12月底可观察到有节的丝状藻类,个别的军团菌附着于藻壁上。次年2月下旬,则绝大多数为地衣的纤维状组织、霉菌及其菌丝体。[结论]空调冷却塔底部地衣一藻类混合体是军团菌越冬的场所。四棘藻和地中尖头藻这类丝状藻类的细胞壁可能是军团菌越冬赖以生存的营养物。空调器关机时地衣和藻类数越少,循环水不流动的时间越长,军团菌在循环水管道系统中度过冬季的可能性越少。