不同正畸力对大鼠牙周组织压力侧核因子κB受体活化因子配基表达影响研究

目的探讨大鼠实验性牙齿移动中不同正畸力对牙槽骨核因子KB受体活化因子配基（RANKL）表达的影响。方法本研究于2010年9-12月在山西医科大学寄生虫实验室完成。选用健康雄性Wistar大鼠36只,随机分为对照组、轻力组、中力组、大力组（各9只）,分别施加0、0．29、0．49、0．98N正畸力,建立大鼠牙齿移动模型。免疫组化法检测大鼠牙周组织压力侧RANKL的表达。结果对照组RANKL有少量表达,主要分布于破骨细胞的胞核,正畸加力各组RANKL表达主要分布于压力侧牙周膜及骨改建区的破骨细胞,在基质细胞和牙周膜成纤维细胞也有表达,且其黄染程度强于对照组。各实验组牙周组织压力侧不同程度地出现血管被挤压、玻璃样变区和骨吸收陷窝。正畸力与RANKL的表达呈正相关（r=O．834,P〈0．01）。结论正畸力与大鼠牙槽骨压力侧RANKL的表达呈正相关,且0．49N为促进RANKL表达的最佳力值。     

核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧牙周组织中的表达

目的：探讨正畸牙移动中，压力侧牙周组织中核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的作用。方法：建立大鼠正畸牙移动模型，对压力侧牙周组织中RANKL蛋白的表达及破骨细胞的生成进行检测。结果：TRAP( )破骨细胞在牙移动第3、5和7天时数量明显增多；免疫组化检测显示牙周成骨细胞、骨衬里细胞、牙周纤维细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞，是表达RANKL的主要细胞。与对照组RANKL持续弱阳性表达比较，实验组RANKL在正畸牙移动第3、5和7天时出现强阳性表达，其表达变化与破骨细胞的数量变化较为一致。结论：在大鼠正畸牙移动中，RANKL可能在压力侧牙周组织破骨细胞的形成和骨改建中发挥了重要作用。     

增龄因素对鼠正畸牙齿移动中牙周组织骨保护素(OPG)表达的影响

目的 :比较在正畸牙齿移动中幼年鼠和成年鼠牙周组织骨保护素 (Osteoprotegerin ,OPG)信使RNA(mRNA)表达的不同 ,以探讨增龄因素影响正畸骨改建的分子机制。材料与方法 :以 4周 (幼年鼠 )和 2 4周 (成年鼠 )雄性大鼠为实验动物 ,牵引左上第一磨牙中移动为正畸牙齿移动模型 ,右上第一磨牙为对照 ,利用OPG多相寡核苷酸探针原位杂交检测实验侧和对照侧牙周膜组织OPGmRNA的表达。结果 :1.幼年鼠对照侧近牙周膜的牙槽骨面可见破骨细胞和相应的骨陷窝 ;成年鼠牙周膜内细胞的OPGmRNA表达高于幼年鼠 ;2 .幼年鼠正畸牙齿移动中 ,加力后 6小时牵张侧近牙槽骨表面可见OPG表达阳性细胞排列 ,加力 2 4小时可见骨吸收陷窝内多核破骨细胞亦有明显OPGmRNA表达 ;压力侧加力 3小时开始即可观察到破骨细胞的数目明显增多 ,OPGmRNA在牙周膜细胞中的表达未见明显改变 ;3.与幼年鼠相比 ,成年鼠正畸牙齿移动中 ,牵张侧牙周膜细胞的OPGmRNA表达没有明显改变 ,压力侧加力 3小时仍未见典型的破骨细胞和骨吸收陷窝 ,加力 2 4小时见破骨细胞。结论 :增龄因素使牙周组织内OPG表达明显增强 ,加力后幼年牙周膜细胞较早表现出张力侧OPG表达增强和压力侧破骨细胞活动增强 ,幼年较成年的牙周组织有较强的骨改建能力。     

核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧骨改建中的作用

目的：初步探讨在正畸牙移动压力侧核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand，RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的调节作用。方法：建立大鼠正畸牙移动模型，利用免疫组化的方法对压力侧RANKL的表达及其变化进行检测；并进一步观察了RANKL对大鼠骨髓破骨细胞形成的影响。结果：正畸牙移动压力侧组化结果显示，RANKL阳性表达位于牙周膜细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞中，在正畸牙移动第3、5和7天时呈强阳性表达。体外破骨细胞诱导实验结果显示，在巨噬细胞集落刺激因子(macrophage clone stimulating factor，M-CSF)协同作用下，RANKL呈剂量依赖型诱导TRAP阳性细胞生成。结论：大鼠正畸牙移动中，RANKL在压力侧的表达上调有诱导破骨细胞形成的作用，并导致牙槽骨吸收。     

大鼠正畸压力侧牙槽骨改建中RANKL和OPG mRNA的表达

目的研究破骨细胞核因子kB受体活化因子配基（receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL）及其伪受体骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的mRNA在大鼠正畸牙移动压力侧牙槽骨改建中的表达变化及时问分布特点。方法选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2d、5d、7d、10d和14d各处死16只大鼠。HE染色观察大鼠牙周组织的形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙槽骨组织中的破骨细胞数量;实时定量PCR方法检测RANKL和OPGmRNA的表达变化及时问分布特点。结果骨改建的最活跃期为正畸加力后的第7d,压力侧牙槽骨组织中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,而后逐渐降低。压力侧牙槽骨组织中的RANKL和OPGmRNA表达水平均随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,而后均逐渐降低。结论RANKL和OPG mRNA表达的变化规律不仅与骨改建过程一致,而且也与TRAP染色阳性破骨细胞数量的变化规律一致。RANKL和OPG与正畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关。     

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目的    探讨大鼠实验性牙齿移动中不同正畸力对牙槽骨核因子κB受体活化因子配基（RANKL）表达的影响。方法    本研究于2010年9—12月在山西医科大学寄生虫实验室完成。选用健康雄性Wistar大鼠36只,随机分为对照组、轻力组、中力组、大力组（各9只）,分别施加0、0.29、0.49、0.98 N正畸力,建立大鼠牙齿移动模型。免疫组化法检测大鼠牙周组织压力侧RANKL的表达。结果    对照组RANKL有少量表达,主要分布于破骨细胞的胞核,正畸加力各组RANKL表达主要分布于压力侧牙周膜及骨改建区的破骨细胞,在基质细胞和牙周膜成纤维细胞也有表达,且其黄染程度强于对照组。各实验组牙周组织压力侧不同程度地出现血管被挤压、玻璃样变区和骨吸收陷窝。正畸力与RANKL的表达呈正相关（r = 0.834,P < 0.01）。结论    正畸力与大鼠牙槽骨压力侧RANKL的表达呈正相关,且0.49 N为促进RANKL表达的最佳力值。     

基于RANKL/OPG通路探讨GsMTx4对大鼠正畸牙齿移动过程中压力侧牙周组织改建的影响

目的：从核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/骨保护素（OPG）通路探讨Piezo1蛋白通道的抑制剂GsMTx4对大鼠正畸牙齿移动过程中压力侧牙周组织改建的影响。方法：75只健康SD雄性大鼠构建正畸模型,随机分为对照、加力、加力+GsMTx4组。测量第一磨牙近中移动距离,HE染色观察上颌第一磨牙近中根压力侧牙周组织病理变化,免疫组化染色观察RANKL、OPG在压力侧牙周组织的表达量及定位,并观察RANKL/OPG比值的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察压力侧牙周组织中破骨细胞数量变化。结果：随着加力时间的延长,牙齿移动距离逐渐增加,加力组牙齿移动距离高于加力+GsMTx4组（P<0.05）;加力组与加力+GsMTx4组RANKL、RANKL/OPG比值以及破骨细胞数量均呈现先升高后降低的趋势,OPG呈现逐渐上升的趋势,且加力+GsMTx4组的值低于加力组（P<0.05）。结论：GsMTx4能够降低大鼠正畸牙齿移动过程中压力侧牙周组织中RANKL、OPG蛋白的表达,并且能够抑制破骨细胞的分化,从而降低骨吸收活动,进而抑制牙齿移动。     

增龄因素对鼠正畸牙齿移动中牙周组织骨保护素（OPG）表达的影响

目的 比较在正畸牙齿移动中幼年鼠和成年鼠牙周组织骨保护素(osteoprotegerin,OPG)信使RNA(mRNA)表达的不同,以探讨增龄因素影响正畸骨改建的分子机制。方法以4周(幼年鼠)和24周(成年鼠)雄性大鼠为实验动物,牵引左上第一磨牙近中移动为正畸牙齿移动模型,原位杂交检测牙周膜组织OPG mRNA的表达。结果 1.幼年鼠正畸牙齿移动中加力后3小时张力侧近牙槽骨表面可见OPG表达阳性细胞排列;与幼年鼠相比,成年鼠加力后牵张侧牙周膜细胞的OPG mRNA表达没有明显改变。2.幼年鼠加力后6小时开始压力侧即可观察到破骨细胞的数目明显增多,成年鼠加力后,压力侧加力24小时可见破骨细胞;无论幼年和成年鼠压力侧牙周膜细胞的OPG mRNA表达在加力前后均未见明显改变。结论 增龄因素使牙周组织内OPG表达明显增强;成年牙周组织中较强的OPG表达可能与成人正畸出现的牙槽骨吸收、牙齿移动迟缓相关。     

大鼠正畸牙移动压力侧牙槽骨中cathK、RANKL和OPG的表达

目的检测大鼠正畸牙移动压力侧cathK、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点。方法选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2d、5d、7d、10d和14d各处死16只大鼠。HE染色观察大鼠牙周组织的形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙槽骨组织中的破骨细胞数量;免疫组化方法定位及相对定量检测压力侧牙槽骨中cathK、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点。结果压力侧牙槽骨组织中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,此后逐渐降低;压力侧牙槽骨组织中的cathK、RANKL和OPG蛋白的表达水平均随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,以后均逐渐降低。结论cathK、RANKL和OPG蛋白表达的变化规律与骨改建过程一致,与正畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关。     

大鼠正畸牙槽骨改建初期转化生长因子β1的表达及意义

目的观察大鼠正畸牙齿移动过程中转化生长因子(TGF-β1)在牙槽骨的表达,探讨其在牙槽骨改建中的调控作用.方法选用25只雄性SD大鼠采用别针簧推上颌切牙向两侧移动的方法,建立牙齿移动及牙槽骨改建模型,并于加力后1d、3d、5d、7d、处死动物取材.用HE染色方法观察牙槽骨的组织学变化,用免疫组织化学方法系列观察牙槽骨中TGF-β1的表达,并检测牙槽骨中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果正常牙槽骨组织中,TGF-β1在骨细胞和骨髓组织呈弱阳性表达.牙齿移动3d,压力测牙周膜中前体破骨细胞数量增多,TGF-β1呈阳性表达;张力侧骨髓组织中的TGF-β1免疫反应增强.牙齿移动5d,压力侧的骨吸收陷窝内可见多核破骨细胞,张力侧的牙槽边缘也出现成骨细胞,TGF-β1均呈阳性表达.牙齿移动7d时,张力侧出现少量PCNA呈阳性表达.结论正畸牙齿移动初期,压力侧破骨细胞功能活跃,张力侧面骨细胞的增殖活性随时间逐渐增强.TGF-β1参与了正畸牙槽骨改建初期破骨细胞和成骨细胞的分化形成过程,它是正畸牙槽骨改建中一种重要的局部调控因子.     

正畸力作用下大鼠白细胞介素-6的表达及牙槽骨改建的研究

目的:观察正畸力作用下IL-6在大鼠牙周组织内的表达分布及牙槽骨高度的改变,研究正畸力对牙周组织改建的作用.方法:将30 只SD大鼠随机分为空白对照组和加力组,施加0.49 N近中向正畸力于加力组25 只大鼠的左侧上颌第一磨牙.运用免疫组织化学及组织形态分析法观测各组大鼠上颌第一磨牙加力后0、1、3、5、7、10 d的IL-6表达量及牙槽骨吸收量.结果:加力组大鼠牙周组织内IL-6的表达在受力后第3天达到高峰,之后开始下降;其近中牙槽骨未见明显丧失.结论:正畸力虽可引发局部牙周组织的炎症反应及IL-6等促炎性细胞因子的释放,但具有一定的自限性,不会导致牙周组织的严重破坏和牙槽骨的明显吸收.     

坏死性凋亡在大鼠牙移动过程中对牙周组织改建的影响

[摘要]　目的　观察在大鼠牙齿移动过程中坏死性凋亡对牙齿移动及牙周组织中核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法　建立大鼠上颌牙齿移动正畸模型,根据坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1（Nec-1）的使用情况,将大鼠随机分为对照组（A组）、抑制剂组（B组）、加力组（C组）、加力+抑制剂组（D组）。游标卡尺测量上颌第一磨牙前移距离,HE染色观察压力侧玻璃样变情况,免疫组化检测第1、3、7、10、14天压力侧牙周组织中RANKL、OPG的表达变化。结果　A组和B组中大鼠牙齿无移动,压力侧未出现玻璃样变区域,同时RANKL与OPG表达较少。C组与D组牙齿出现移动,在第3、7、10、14天时两组移动距离具有统计学差异（P<0.05）;C组第7天时RANKL表达达到顶峰,出现大面积玻璃样变区域,OPG在加力后第10天表达达到顶峰;D组中RANKL与OPG表达趋势变化与C组一致,在第7、10天时表达量均小于C组,大量玻璃样变区域在第10天中出现。结论　坏死性凋亡在正畸牙齿移动某一过程中可以促进牙齿移动,Nec-1减少牙周组织中RANKL与OPG表达,抑制破骨细胞分化成熟,阻碍牙齿移动。     

Conference Report

Abstract

The influence of the anticonvulsive drug phenytoin on the periodontal tissues during orthodontic tooth movement in the rat was studied. The experimental and the control group each consisted of 10 Sprague-Dawley rats. The test group was injected daily with phenytoin during the experimental period of 6 weeks. A fixed appliance for expansion was applied on the first molars in both groups after 2 weeks (day 15). At the end of the experiment (day 42), radiographic measurements revealed less tooth movement in the phenytoin-treated rats. Compared to the control group, significant histologic changes in the periodontal tissues such as increased density of fibroblasts, decreased number of osteoclasts in contact with alveolar bone wall of the pressure side and deeper layer of non-mineralized osteoid on the tension side were observed in the phenytoin group.     

低能量微波照射对大鼠正畸牙移动及牙周组织改建的影响

目的： 探讨低能量微波照射对大鼠正畸牙移动及牙周组织改建的影响。方法： 将SD大鼠随机分为对照组和实验组。采用螺旋弹簧加力法,通过镍钛拉簧装置构建大鼠正畸模型。实验组每天1次,用微波治疗仪照射被移动的第一磨牙,每次30 min;对照组不施加任何干预措施。分别在造模当天、第7、14、21天处死大鼠,测量大鼠第一磨牙的移动距离。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测大鼠牙周组织中破骨细胞计数;免疫组织化学检测破骨细胞分化因子（ODF）的表达;实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA的表达。采用SPSS 20.0软件包对实验数据进行统计学分析。结果： 第7、14、21天时,与对照组相比,实验组大鼠第一磨牙移动距离、牙周组织中破骨细胞计数、ODF表达显著升高（P<0.05）,牙周组织中IL-6和TNF-α的mRNA表达显著下降（P<0.05）。结论： 低能量微波照射能明显加快正畸牙移动速度,抑制炎性基因表达,促进牙周组织改建。     

TRAF6/c-fos在PTH加速兔下颌骨截骨术后正畸牙移动机制的初步研究

目的　研究外源性甲状旁腺激素（PTH）对下颌升支截骨术后正畸牙移动过程中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）和c-fos mRNA表达变化,探讨PTH加速截骨术后正畸牙移动的调控机制。方法：48只兔建立下颌升支截骨和下颌第一磨牙正畸移动模型,随机分成实验组和对照组。实验组术后间断性注射PTH 40 μg/kg,对照组皮下注射生理盐水,术后测量下颌第一磨牙近中移动速度。HE染色观察正畸牙压力侧组织形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙周组织破骨细胞的数目;Real-time PCR检测下颌第一磨牙牙周组织中TRAF6和c-fos mRNA表达变化。结果：实验组下颌第一磨牙近中移动速度快于对照组,且实验组正畸牙压力侧破骨细胞数目较对照组多。实验组正畸牙压力侧牙周组织TRAF6和c-fos mRNA表达均高于对照组（P<0.05）。结论：外源性PTH可通过促进正畸牙压力侧牙周组织中TRAF6和c-fos mRNA表达,促进破骨细胞的成熟和分化,从而加速下颌升支截骨术后正畸牙的移动。     

p-JAK2和p-STAT3在实验性牙移动牙周组织中的表达及意义

目的：观察实验性牙齿移动过程中,大鼠牙周组织中磷酸化Janus激酶（JAK2）与信号转导因子和转录活化因子（STAT3）的表达和分布。方法：选用24只7周龄雌性Wistar大鼠,每只大鼠上颌左右两侧分别为实验侧和对照侧,建立大鼠实验性牙移动的模型。将大鼠随机分成3组,分别在加力后3、7、14d处死动物。制备标本,用免疫组化染色法检测p-Jak2和p-Stat3在大鼠牙周组织中的表达,并采用计算机图像分析软件Image J对各组p-Jak2和p-Stat3在牙周组织中的表达强度进行定量分析。结果：p-Jak2和p-Stat3在正常牙周膜中均有表达,且在受力3、7、14d后,p-Jak2实验组受压力侧和受牵张力侧均较对照组表达升高;p-Stat3在受力3、7d后,实验组受压力侧和受牵张力侧较对照组表达升高,但受力14d后,实验组受压力侧和受牵张力侧与对照组的表达并无明显统计学差异。结论：正常牙周组织中存在p-Jak2和p-Stat3,且p-Jak2和p-Stat3参与了牙周组织改建的过程,这说明Jak2/Stat3信号转导通路参与了牙周组织改建中细胞内的信号传递。