拉莫三嗪及丙戊酸钠对锂-匹罗卡品致痫大鼠的神经保护作用及其对癫痫的治疗作用

目的：观察拉莫三嗪（LTG）及丙戊酸钠（VPA）对锂-匹罗卡品癫痫持续状态（SE）大鼠海马锥体细胞、齿状回门区神经元的保护作用及对癫痫的治疗作用。方法：用大鼠制作锂-匹罗卡品SE动物模型,分三组：SE对照组,LTG治疗组和VPA治疗组。此三组在SE后2h给予安定阻断痫性发作,再分别给予适量生理盐水（NS）、LTG、VPA治疗15d,比较各组海马锥体细胞、门区神经元计数、继发癫痫的发生率及苔藓纤维出芽的评分。另设有正常对照组（NS组）,不制模只给予NS“治疗”。结果：SE对照组、LTG组及VPA组齿状回门区均出现神经元丢失,VPA组及SE对照组均存在海马CA1神经元丢失,但LTG组海马CA1锥体神经元无丢失;三个模型组继发癫痫的发生率及苔藓纤维出芽的评分比较差异无统计学意义。结论：锂-匹罗卡品SE模型中,SE2h后给药,LTG能够对大鼠海马锥体细胞起到神经保护作用,VPA无明显保护作用,但两种抗癫痫药物均不能够阻断癫痫的发生及齿状回苔藓出芽。     

外源性硫化氢保护实验性癫痫持续状态大鼠海马神经元作用的研究

目的:为研究外源性硫化氢(H_2S)对实验性癫痫持续状态(status of epilepticus,SE)大鼠海马神经元的保护作用,我们用供体Na HS对氯化锂-匹罗卡品所致幼鼠SE海马神经元的影响,并对SE引起的脑损伤进行靶点干预。方法:用氯化锂-匹罗卡品建立大鼠SE模型,并分为正常+Na HS组,癫痫组,癫痫+Na HS组和癫痫+羟胺组,另设正常组(对照组),每组6只。用比色法测定血浆和海马H_2S浓度,用Real-Time PCR检测海马胱硫醚-β合酶(CBS)基因mRNA表达,用HE染色和Nissl染色观察海马神经元形态。结果:癫痫组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达明显低于正常组(P0.01),癫痫+Na HS组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达明显高于癫痫组(P0.01),癫痫+羟胺组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达显著低于癫痫组(P0.05)。HE染色显示,癫痫组海马CA3区锥体细胞明显减少,细胞层次紊乱,形态不规则;尼氏染色显示,癫痫组海马CA3区尼氏体明显减少,锥体细胞排列紊乱;与癫痫组比较,癫痫+Na HS组海马尼氏体缺失和锥体细胞排列紊乱明显改善。结论:外源性H_2S对实验性癫痫持续状态大鼠海马组织CBS mRNA表达具有上调作用,并提高血浆和海马组织H_2S含量。同时,外源性H_2S对实验性癫痫大鼠海马组织神经元具有保护作用。     

抗癫痫药耐药性鼠模型的建立及其P-gp的表达

目的：建立抗癫痫药（AED）耐药性大鼠模型,并观察其P-糖蛋白（P—gp）的表达。方法：首先应用氯化锂一匹罗卡品诱导癫痫鼠模型,然后在此基础上进一步用苯妥英钠药物筛选的方法获得AED的耐药性大鼠模型。通过RT-PCR、蛋白印迹法（Western Blot）和免疫组化等方法研究P—gP在该动物模型脑内不同部位的表达。结果：应用氯化锂一匹罗卡品诱导的癫痫鼠模型进行药物筛选的方法成功获得了AED耐药性癫痫动物模型,并经临床评分和脑电图证实。耐药性癫痫模型大鼠海马、小脑及大脑皮层的P—gP表达水平均显著高于非耐药性癫痫大鼠及正常对照大鼠。结论：对氯化锂一匹罗卡品诱导的鼠模型进行药物筛选的方法可建立AED耐药性癫痫动物模型;P—gP在AED耐药性癫痫大鼠脑内表达水平显著升高。     

依达拉奉通过JNK通路抑制蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬

目的:通过研究应用依达拉奉前后JNK通路及自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的变化,探讨依达拉奉对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区c-Jun氨基端激酶(JNK)-自噬通路的影响。方法:选取雄性清洁级健康SD大鼠(350~450 g),随机分为假手术组(Sham组)、SAH模型组(SAH组)、SAH应用JNK抑制剂组(SP600125组)、SAH联合应用依达拉奉干预组(Edaravone组)。利用颅内动脉穿刺法制成大鼠SAH模型,SP600125组于造模前30 min,利用立体定向仪行侧脑室注射SP600125溶液;Edaravone组在建模成功后予以依达拉奉干预治疗。利用H-E染色观察每组大鼠海马区神经元形态及数量变化;应用免疫组织化学显色检测p-JNK以及自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ在大鼠海马区的表达情况。结果:与Sham组比较,SAH组在各时间点海马区神经元存活数量减少,与SAH组比较,SP600125组和Edaravone组正常形态细胞数量明显增多;SAH组大鼠海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性细胞数量多于Sham组,且均在24 h达到高峰,与SAH组比较,SP600125组和Edaravone组海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性细胞数均显著减少;与Sham组比较,SAH组大鼠海马区p-JNK阳性细胞数量明显增加,与SAH组比较,SP600125组和Edaravone组海马区p-JNK阳性细胞数均显著减少。结论:依达拉奉可抑制SAH后海马区JNK信号过度激活,降低自噬激活的程度,从而对SAH后海马区神经元细胞起到保护作用。     

mGluR7在氯化锂-匹罗卡品反复致癎大鼠海马的表达及作用

目的:通过氯化锂-匹罗卡品反复致癎大鼠模型,探讨代谢型谷氨酸受体7(mGluR7)在癫癎发作过程中的作用。方法:大鼠分为正常对照组和模型组,用氯化锂-匹罗卡品制作癫癎模型,将模型组中致癎成功鼠分为反复刺激组和静止期组,致癎不成功作为不成功组。制作冰冻切片用免疫组化法检测4组大鼠海马CA1、CA3区及齿状回mGluR7光密度值。结果:与正常对照组相比,静止期组大鼠海马各区表达均减弱,以齿状回差别最明显,反复刺激组各区表达均明显增强,不成功组无明显改变。结论:mGluR7表达上调提示癫癎多次发作可能增强了其对谷氨酸释放的负反馈调节和摄取作用; mGluR7在静止期表达下调提示其可能有助于慢性期癫癎环路的形成。     

人参皂甙Rd对慢性颞叶癫痫大鼠空间学习记忆能力的影响

[ 目的：研究人参皂甙Rd（GsRd）对氯化锂一匹罗卡品点燃慢性白发性颞叶癫痫（TLE）大鼠空间学习记忆能力及海马苔藓纤维发芽（MFS）的干预作用。方法：建立氯化锂一匹罗卡品点燃TLE大鼠模型,将24只造模成功的TLE大鼠随机分为单纯TLE组（生理盐水10ml／kg腹腔注射）12只及加用GSRd干预组12只（GsRd2mg／kg腹腔注射）,另选6只正常大鼠作为正常对照组。采用Morris水迷宫进行行为观察以了解各组大鼠空间学习记忆能力,取脑进行Timms染色作病理学观察以了解海马MFS情况。结果：与正常对照组相比,TLE组大鼠空间学习记忆功能下降,海马齿状回MFS明显增多（P〈0．05）;与TLE组相比,GSRd干预组可显著提高大鼠空间学习记忆能力及减少MFS（P〈0．05）。结论：GSRd可能通过抑制MFS减轻TLE大鼠的认知功能损害,有助于阻断慢性自发性TLE的形成和发展。     

JNK通路促进大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡

目的:探讨c-JunN端激酶(JNK)通路在大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡中的作用。方法:雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组、全脑缺血再灌注组、全脑缺血再灌注+JNK抑制剂(SP600125)组、全脑缺血再灌注+JNK激动剂(茴香霉素)组和全脑缺血再灌注+溶剂对照组,每组再灌注后24h取材。分别采用免疫组化、Westernblotting和实时荧光定量PCR检测海马神经元caspase-3蛋白和mRNA的表达;采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况。结果:全脑缺血再灌注组caspase-3蛋白和mRNA表达较假手术组增加(P<0.05);与全脑缺血再灌注组相比,全脑缺血再灌注+JNK抑制剂组caspase-3蛋白和mRNA表达均降低(P<0.05),而全脑缺血再灌注+JNK激动剂组caspase-3蛋白和mRNA表达均增加(P<0.05),全脑缺血再灌注+溶剂对照组则无明显变化(P>0.05)。各组海马神经元凋亡趋势与caspase-3蛋白和mRNA变化趋势一致。结论:JNK通路的激活可增加大鼠脑缺血再灌注后海马神经元caspase-3的表达,促进海马神经元凋亡。     

SP600125对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景:SP600125作为JNK激酶抑制剂,可特异性阻断JNK细胞转导通路,对肝脏缺血再灌注又起到怎样的作用,目前尚无相关研究。目的:应用SP600125对肝脏缺血再灌注进行干预,分析JNK信号转导通路在该病理生理过程中的作用。方法:将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组,假手术组、缺血再灌注组及SP600125组各10只。假手术组仅行进腹手术;缺血再灌注组行进腹手术,阻断肝左中叶的血供;SP600125组于术前半小时腹腔注射SP600125 15mg/kg,其他操作同缺血再灌注组。于复灌后2h取材,分别测定各组血清肝功能酶活性,通过苏木精-伊红切片染色观察肝组织结构的病理变化,运用免疫组织化学法检测肝组织中p-JNK表达并进行半定量分析,以比色法检测肝脏丙二醛含量及髓过氧化物酶活性。结果与结论:相对于缺血再灌注组,SP600125组血清肝功能酶活性明显下降,肝脏p-JNK表达较低,肝脏髓过氧化物酶活性以及丙二醛含量下降,病理损伤有所缓解。提示JNK细胞信号转导通路在肝缺血再灌注损伤过程中被广泛激活,应用JNK抑制剂SP600125对缺血再灌注损伤有保护作用。     

转化生长因子β1降低大鼠自发性癫痫发作并抑制胶质细胞活化

 目的：观察经鼻给予转化生长因子β₁（TGF-β₁）是否能减少匹罗卡品致痫大鼠慢性自发性癫痫的发作并探讨其可能机制。方法：经鼻给予大鼠重组人TGF-β₁或等量PBS溶液,以匹罗卡品建立癫痫持续状态模型,癫痫持续状态后7 d经动态视频记录其活动,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合接头分子1（Iba1）免疫组化观察癫痫大鼠海马组织胶质细胞的活化,采用尼氏染色观察海马区神经元的死亡。结果：TGF-β₁有效降低自发性癫痫的平均频率、发作程度和持续时间。癫痫持续状态后14 d TGF-β₁治疗组海马区活化的胶质细胞明显少于匹罗卡品模型组（P<0.05）;TGF-β₁显著降低海马CA3区神经元的死亡(P<0.01)。结论：经鼻给予TGF-β₁可降低大鼠自发重复性癫痫发作,抑制胶质细胞活化,从而减少神经元的死亡。     

N-乙酰半胱氨酸对慢性间歇缺氧大鼠海马神经元凋亡及氧化应激的影响

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对慢性间歇缺氧(CIH)模型大鼠海马组织氧化应激及海马神经元凋亡的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为慢性缺氧组、NAC治疗组及正常对照组3组，每组10只。采用化学比色法测定海马组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平，同时应用免疫组化方法检测海马CA1 区磷酸化JNK(p-JNK)表达水平，应用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡率。结果:NAC治疗组 MDA水平低于CIH组（1.71±0.43 vs 1.37±0.26，P＜0.05）、SOD活性高于CIH组（44.94±14.01 vs 57.66±14.07，P＜0.05），p-JNK表达水平低于CIH组 （0.53±0.10 vs 0.39±0.16，P＜0.05），海马神经元凋亡率显著低于CIH组（0.32±0.18 vs 0.20±0.11，P＜0.05）。结论:NAC能抑制慢性间歇缺氧导致的氧化应激，从而影响JNK信号转导通路，减少海马神经元凋亡。     

roTOR信号在KA诱导幼鼠癎性发作后的表达变化研究

目的：研究哺乳动物雷帕霉索靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号在幼鼠癎性发作后的表达变化。方法：海人藻酸（KA）诱导幼鼠癎性发作,根据疝性发作后不同的时间点（1h、3h、16h、24h、3d、5d、1w、2w、6w）进行取材,从大脑中分离KA注射侧海马组织,提取全蛋白进行westernblot检测观察癎性发作后mTOR信号通路活化的标志物核糖体蛋白56（p-S6）蛋白的表达变化。免疫组织化学检测海马区P-S6免疫阳性细胞的表达。结果：KA海马内注射1h、3h、16h、24h,3d,5d,1w,2w,6w大鼠海马组织进行westernblot检测,发现在急性期P-S6的表达量呈现持续升高的表达变化。KA致癎1w后,海马区p-S6阳性细胞表达相对于手术对照组明显增高（76±12VS25±5）。在大鼠大脑皮层神经元亦可见到致癎后大量表达的p-S6阳性神经元（88±13 VS 15±3）。结论：mTOR信号活化标志物p-S6蛋白在KA诱导幼鼠癎性发作后表达明显增加,抑制mTOR信号的异常活化或许成为预防癫癎形成的新靶点。     

2-脱氧葡萄糖诱导的内质网应激预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究2-脱氧葡萄糖(2-DG)诱导内质网应激(ERS)预处理对大鼠脑缺血再灌注的保护作用。方法 64只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(SH组)、缺血/再灌注组(I/R组)、2-DG诱导的ERS预处理组(IP组)、IP+I/R组。采用TUNEL法检测CA1区凋亡细胞,免疫组化法、Western-Blot法检测p-JNK蛋白在海马CA1区的表达变化。结果与对照组比较,I/R组海马CA1区锥体神经元排列紊乱及变性坏死,形态正常椎体细胞百分数减少,凋亡细胞数目明显增加,脑组织p-JNK表达水平增加;与I/R组相比,IP+I/R组形态正常锥体细胞明显增加,凋亡细胞数目明显减少,脑组织表达较I/R组明显减少。结论 2-DG诱导的ERS对脑缺血再灌注损伤有保护作用,可能与其抑制细胞凋亡和p-JNK表达相关。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马突触体素的表达及当归调控作用

目的探讨脑缺氧缺血对新生大鼠海马齿状回突触体素表达的影响及当归注射对其表达的调控作用。方法取7日龄健康SD新生大鼠33只,随机分为对照组、缺氧组和当归组各11只。缺氧组和当归组新生大鼠在无菌环境下结扎左侧颈总动脉,术后护理2 h后置于三气培养箱持续缺氧2 h,制作新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,对照组仅行假手术,不结扎左侧颈总动脉、不缺氧。术后第8 d开始,缺氧组和对照组大鼠经腹腔注射生理盐水（8ml/kg）,连续7 d;当归组用等量当归注射液（250 g/L）代替生理盐水。于生后第22 d取大鼠脑组织,常规石蜡包埋、经海马切片,行突触体素（SY）免疫组化染色,图像分析海马齿状回SY阳性细胞的积分光密度（IOD）值。结果缺氧组大鼠海马齿状回SY阳性细胞的IOD值较对照组降低,而当归组SY阳性细胞的IOD值较缺氧组增高。结论脑缺氧缺血可降低新生大鼠海马齿状回SY的表达,而当归注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠可能具有保护作用。     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3表达的影响

 目的：观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元c-jun氨基末端激酶(c-jun N terminal kinase,JNK3)表达的影响。方法：取原代培养8d的大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组(模型组)、黄芪注射液组和溶媒对照组。模型组缺氧缺糖0.5h再复氧复糖,各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120h用免疫组化法和免疫印迹法检测海马神经元JNK3的表达。结果：除120h之外,模型组JNK3阳性神经元数目和蛋白平均吸光度值在各个时间点均比对照组明显增多(P<0.05);黄芪注射液组JNK3阳性神经元数目和蛋白平均吸光度值均比模型组明显减少(P<0.05)。结论：黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3表达,并因此抑制神经元的凋亡。     

β-蜕皮甾酮对匹罗卡品致痫小鼠海马神经元凋亡相关基因表达的影响

目的观察β-蜕皮甾酮(20-hydroxyecdysone)对小鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响。方法将30只CD-1小鼠随机分成正常组、造模组、β-蜕皮甾酮治疗组。用锂-匹罗卡品腹腔注射法诱导小鼠癫痫持续状态,造模成功后72h,采用尼氏染色观察各组小鼠海马区神经元数目和形态的变化,免疫组化法和Westernblot法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax的表达。结果模型组小鼠CA1区部分细胞肿胀,锥体细胞排列紊乱,细胞形态不规则,药物治疗组较模型组细胞数目增多,细胞排列有所改善。免疫组化和Westernblot结果可见细胞凋亡因子Bax表达模型组高于正常对照组,药物治疗组低于模型组;抑制细胞凋亡因子Bcl-2表达模型组高于正常对照组,药物治疗组高于模型组。结论β-蜕皮甾酮(20-HE)可能通过降低Bax,提高Bcl-2蛋白的表达,减轻癫痫发生后对大脑的损害。     

白藜芦醇对戊四氮慢性点燃大鼠行为及脑电图的影响

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,RV）对戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）慢性点燃大鼠行为及脑电图（EEG）的影响。方法：将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组（A组）、PTZ致癎组（B组）、RV干预组（C组）,每组20只。B组和C组通过腹腔注射PTZ建立慢性癫癎动物模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学变化情况。结果：腹腔注射RV可明显抑制大鼠的癎样放电,延长发作潜伏期、缩短发作时间,与PTZ致痂组相比重型发作率降低（P〈0．05）;同时在病理学上还能减轻海马神经元的损伤程度。结论：RV可明显抑制PTZ诱导的大鼠癫癎发作,对致癎海马神经元有一定的保护作用。     

氟桂利嗪对青霉素致癎大鼠海马细胞单位放电特征的影响

目的：探讨青霉素癫癎模型大鼠海马神经元单位放电的特征。方法：36只Wistar雄性健康大鼠,随机分为正常对照组、癫癎模型组、癫癎预处理组,各12只。①正常对照组记录单位放电后处死;②癫癎模型组用青霉素钠按600万U／kg体重腹腔注射制作成癫癎模型,记录单位放电后处死;③癫癎预处理组制作模型前用盐酸氟桂利嗪按20mg／kg体重每隔12h灌胃共两次,第二次给药后2h制作成癫癎模型,然后作单位放电记录后处死。结果：①正常对照组大鼠共记录到24个单位海马神经元放电;②癫癎模型组共记录到78个单位海马神经元放电;③癫癎预处理组共记录到47个单位海马神经元放电。与正常对照组比较,癫癎模型组海马神经元单位放电频率增加,放电形式多为混合型,差异有极显著意义（P〈0．01）;与癫癎模型组比较,癫癎预处理组海马神经元单位放电频率降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：①癫癎大鼠是以暴发放电为主的混合型放电,抽搐时多表现为束簇状;②盐酸氟桂利嗪对癫癎大鼠放电有显著的抑制作用。     

Neuroprotective activity of antazoline against neuronal damage induced by limbic status epilepticus

Imidazoline drugs exert neuroprotective effects in cerebral ischaemia models. They also have effects against mouse cerebellar and striatal neuronal death induced by N-methyl-D-aspartate (NMDA) through the blockade of NMDA currents. Here, we investigated the effects of antazoline on NMDA toxicity and current in rat hippocampal neuronal cultures, and on an in vivo model of status epilepticus. In hippocampal cultures, antazoline (30 microM) decreased NMDA-mediated neurotoxicity and also blocked the NMDA current with voltage-dependent and fast-reversible action (inhibition by 85+/-3% at -60 mV). Status epilepticus was induced by injecting pilocarpine (200 nmol) directly into the right pyriform cortex of male adult rats. The rats then received immediately three consecutive i.p. injections at 30-min intervals of either PBS (control group) or antazoline at 10 mg/kg (low-dose group) or at 45 mg/kg (high-dose group). During the 6-h recording, status epilepticus lasted more than 200 min in all groups. In the high-dose group only, seizures completely ceased 1 h after the third injection of antazoline, then started again 1 h later. Rats were killed 1 week later, and Cresyl Violet-stained sections of their brain were analysed for damage quantification. On the ipsilateral side to the pilocarpine injection, pyriform cortex and hippocampal CA1 and CA3 areas were significantly protected in both antazoline-treated groups, whilst prepyriform and entorhinal cortices were only in the high-dose group. On the contralateral side to the pilocarpine injection, only the hippocampal CA3 area was significantly protected in the low-dose group, but all investigated structures were in the high-dose group.In conclusion, antazoline is a potent neuroprotective drug in different models of neuronal primary culture, as previously shown in striatal and cerebellar granule neurons [Neuropharmacology 39 (2000) 2244], and here in hippocampal neurons. Antazoline is also neuroprotective in vivo in the intra-pyriform pilocarpine-induced status epilepticus model.