塞来昔布非环氧化酶-2依赖性抗肿瘤作用靶点的研究进展

本文综述了塞来昔布非环氧化酶-2依赖性抗肿瘤作用靶点.塞来昔布可能直接作用于PDK-1、内质网钙泵、碳酸酐酶等环氧化酶-2非依赖性靶点,下调这些靶点相关蛋白的表达,通过诱导凋亡、抑制细胞周期进程、血管生成及转移等机制发挥抗肿瘤作用.     

塞来昔布对胶质瘤细胞线粒体膜电位的影响

目的观察塞来昔布（Celecoxib）降低U251脑胶质瘤细胞线粒体膜电位（MMP）并诱导其凋亡的相关规律。方法采用100μmol／L塞米昔布处理培养的U251细胞，并用流式细胞仪检测其MMP和细胞凋亡的变化。结果经塞来昔布处理后胶质瘤细胞MMP明显降低，并随时间延长而变化。单染实验中12h和24h处理组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；12h组与24h组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。双染实验中Rhl23-PI-细胞为细胞膜完整，MMP降低，即将发生凋亡的细胞，12h处理组MMP明显降低，Rhl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01）；24h处理组与对照组比较，MMP降低，Pthl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01），但与12h组比较，MMP降低，Pthl23-PI-细胞明显增多（P〈0．01）。结论塞米昔布能有效降低胶质瘤细胞线MMP并能诱导U251细胞发生凋亡，从而降低细胞氧化供能，使胶质瘤细胞处于缺氧状态。塞米昔布对胶质瘤细胞MMP的影响可能参与胶质瘤细胞凋亡。     

动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)在动脉粥样硬化组织中的表达以及选择性COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的人血管平滑肌细胞(VSMCs)在细胞增殖和凋亡中的作用.方法 对22例动脉粥样硬化组织切片进行COX-2免疫组织化学染色;对体外培养的原代人VSMCs以不同浓度的塞来昔布处理24 h,以噻唑蓝(MTT)细胞增殖及细胞毒性检测法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞早期凋亡.结果 免疫组织化学染色阳性表达率为95％,且在血管内膜、中膜和外膜均有阳性细胞存在;体外培养的人VSMCs中加入塞来昔布可明显抑制COX-2的表达;浓度为0、10、20、40、80 μmol/L的塞来昔布作用于VSMCs 24 h后,以MTF法检测细胞存活率分别为100.00％、90.06％、81.38％、75.41％、68.90％;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率分别为0.02％、0.62％、0.92％、1.17％、1.63％.结论 COX-2大量表达于动脉粥样硬化组织中,特别表达于炎性巨细胞以及中层VSMCs中,塞来昔布可抑制体外培养的人VSMCs中COX-2的表达,从而抑制其增殖并诱导其凋亡,两者均呈剂量依赖性.     

塞来昔布对大鼠大肠癌生长的抑制作用

目的 观察选择性环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布对二甲肼(DMH)诱导的SD大鼠大肠癌生长的抑制作用.方法 健康雄性SD大鼠100只,随机分为4组:空白对照组(20只),造模组(30只),干预组(30只)及干预对照组(20只).空白对照组:皮下注射与造模组DMH等体积的生理盐水,每周1次;造模组:利用大鼠大腿内侧(双后肢交替使用)皮下注射DMH(每周20 mg/kg);干预组:DMH皮下注射量同造模组,同时给予塞来昔布(20 mg/kg)灌胃,隔天1次;干预对照组:给予与干预组等体积的塞来昔布灌胃,隔天1次,持续25周.各组于第15、20、25周分别处死大鼠2只,行苏木素-伊红(H F)染色,光镜下观察病理变化,剩余大鼠第30周全部处死.结果 实验30周后,空白对照组和干预对照组大鼠大肠末见肿瘤形成,造模组大鼠成瘤率为89.47％,干预组大鼠成瘤率为56.52％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);造模组大鼠成癌率为68.42％,干预组大鼠成癌率为34.78％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);造模组单个大鼠大肠产生的肿瘤数和单个肿瘤直径分别为(2.64±0.86)个和(4.06±1.14) mm;干预组单个大鼠大肠产生的肿瘤数和单个肿瘤直径分别为( 1.85 ±0.80)个和(3.08±0.86) mm,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 选择性COX-2抑制剂塞来昔布对DMH诱导的SD大鼠大肠癌生长有抑制作用.     

塞来昔布对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用

目的观察塞来昔布对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用。方法以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,进行40次腹部异位心脏移植。采用HE染色和原位末端标记(TUN EL)技术检测移植心切片,进行排斥反应的病理分级并计算移植心肌细胞的凋亡指数(AI)。结果移植心的细胞凋亡主要发生于心肌细胞;移植后第3、5d,塞来昔布治疗组心肌细胞凋亡指数分别为:1.03±0.42和3.28±2.42;对照组分别为2.35±1.51和11.35±3.46;两组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论细胞凋亡是心脏移植急性排斥中组织损伤的重要机制;塞来昔布能明显抑制心肌细胞凋亡。     

塞来昔布致全身红肿瘙痒伴高热严重不良反应1例

塞来昔布的不良反应较少,如本例报道的塞来昔布致全身红肿痛痒伴高热严重不良反应1例在国内文献中罕见,应引起医务人员的注意,在应用时应严格掌握其适应证与禁忌证并关注其不良反应,为塞来昔布的临床安全应用提供参考。     

塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响

目的：研究选择性环氧化酶2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响。方法：常规培养的贴壁生长的T24细胞,分别与不同浓度塞来昔布、POE2等共培养,MTT法测定塞来昔布及PGE。对T24细胞增殖活性的影响,流式细胞仪测定塞来昔布及PGEz处理后T24细胞的凋亡率;建立细胞悬浮培养体系,将悬浮生长的T24细胞,分别与塞来昔布、PGE。等共培养,流式细胞仪测定塞来昔布及PGE2处理后T24细胞的凋亡率（失巢凋亡率）。结果：塞来昔布呈剂量依赖性地显著抑制贴壁生长的T24细胞的增殖、增加其凋亡,而PGE2和对贴壁生长的T24细胞增殖和凋亡无明显影响;塞来昔布显著增加而PGE2显著抑制T24的失巢凋亡。结论：选择性Cox-2抑制剂塞来昔布可显著抑制T24细胞的生长,诱导贴壁及悬浮生长状态的T24细胞产生凋亡,其可能机制之一是逆转了Cox-2产物PGE2对T24细胞的抗凋亡保护作用,包括对抗肿瘤药物及脱壁诱导的细胞凋亡的抑制作用。     

随机双盲平行对照临床试验评价塞来昔布对手外科术后急性疼痛的疗效

目的评价塞来昔布（西乐葆）对手外科手术后急性疼痛的疗效。方法将120名手外科手术患者按照随机双盲方法分为A、B、C组，每组40名。3组分别为安慰剂组、塞来昔布术后镇痛组、塞来昔布先发镇痛组。记录并评估塞来昔布的手术后镇痛效果。结果A组与B组、C组相比，疼痛的可视模拟测量仪（visual analog scale，VAS）值的差异有统计学意义（P〈0．01）。B组与C组相比VAS值的差异无统计学意义（P〉0.05），但在术后第1天B、C组相比VAS值的差异有统计学意义（P〈0．01）。盲底：A组为安慰剂组，B组为塞来昔布术后镇痛组，C组为塞来昔布先发镇痛组。结论塞来昔布对手外科手术后轻中度疼痛有明显的镇痛作用，术前服用一定剂量的塞来昔布可以得到先发镇痛的效果。短期服用正常剂量的塞来昔布是安全的、耐受性良好。     

塞来昔布对压力性尿失禁模型大鼠的效果及作用机制

目的研究塞来昔布对压力性尿失禁模型大鼠的干预效果及作用机制。方法建立压力性尿失禁大鼠模型后分为模型组和塞来昔布组各18只,正常组10只。塞来昔布组大鼠采用塞来昔布进行干预,模型组和正常组大鼠采用等体积的无菌蒸馏水干预,设置喷嚏试验、检测尿流动力学指标,然后测定漏尿点压力(LPP)、腹部漏尿点压力(ALPP),观察3组大鼠病理形态学特征,Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)通路蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测环氧化酶2(COX-2)、脂肪氧化酶(LOX)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白水平。结果喷嚏实验阳性率模型组66.67%,显著大于塞来昔布组的27.78%,差异具有显著性统计学意义(P<0.05);LPP、ALPP、TGF-β1、CTGF水平及LOX蛋白水平均为模型组<塞来昔布组<正常组(P均<0.05),COX-2、MMP-2蛋白水平均为模型组>塞来昔布组>正常组(P均<0.05)。结论塞来昔布对压力性尿失禁模型大鼠的治疗效果显著,通过调控TGF-β1/CTGF通路蛋白,可以改善大鼠COX-2、LOX、MMP-2水平,对于治疗和预防压力性尿失禁的研究提供了方向。     

塞来昔布对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响.方法6周龄BALB/c裸鼠8只,建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,分为2组,实验组每kg食物添加1 g塞来昔布,观察塞来昔布对裸鼠健康状况、体重变化及移植瘤变化的影响,并用TUNEL方法检测其对移植瘤细胞凋亡的影响.结果塞来昔布对裸鼠健康状况及体重变化无明显影响(P＞0.05),对移植瘤的生长有抑制作用,肿瘤抑制率为83.7%(P＜0.05),对移植瘤细胞的凋亡有促进作用(P＜0.05).结论塞来昔布可能通过促进肿瘤细胞凋亡等途径对膀胱肿瘤产生抑制作用,可能成为膀胱肿瘤化学预防及治疗的辅助手段.     

Cytokine Gene Modification of Bladder Cancer Cells for the Establishment of Bladder Cancer Vaccine

A bladder tumor vaccine in mouse models was established by introducing interleukin–2 (IL–2) gene into mouse bladder cancer cells (MBT–2). Mice injected with non–modified MBT–2 cells did not reject subsequent challenge of MBT–2 cells. Mice injected with IL–2–gene–modified MBT–2 cells (MBT–2/IL–2) rejected subsequent challenge of unmodified MBT–2 cells but not 38C13 cells, which have the same genetic background but different antigenicity. According to these results, an injection of MBT–2/II.–2 can establish specific immunity against parental MBT–2 cells in mice, which is also demonstrated by cytotoxic T lymphocytes assay. Vaccinations with MBT–2/IL–2 cured 60% of bladder cancer which had been pre–established in mice. These results suggest that tumor cells genetically modified with IL–2 gene can act as a tumor vaccine which is expected to be a new method for immunotherapy of cancers.     

转人GM—CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性

经逆转录病毒载体将人GM-CSF基因导入人膀胱癌细胞株BIU-87细胞中,建立了转基因细胞株BIU/GM。经流式细胞仪行细胞DNA周期分析表明GM-CSF基因的导人及表达对BIU-87细胞的增长无影响。免疫荧光测定发现转GM-CSF基因及表达不能促进BIU-87细胞表面HLA-ABC、DR、DQ抗原的表达。转基因瘤细胞株经6000rad X射线照射灭活后,丧失增殖能力,逐步死亡,但能维持一定水平的GM-CSF分泌活性达两周以上。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。     

BRMS1mRNA在膀胱移行细胞癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨膀胱移行细胞癌组织中乳腺癌转移抑制基因（breast cancer metastasis suppressor1,BRMSl）mRNA表达水平与膀胱移行细胞癌的发生和转移的关系。方法：以β-actin为内参照,用荧光RT—PCR方法分别检测正常膀胱、未转移膀胱癌、转移膀胱癌三组标本组织中BRMSlmRNA的表达。结果：未转移膀胱癌和转移性膀胱癌BRMslmRNA表达水平显著低于正常膀胱组织（P〈0．01）,转移膀胱细胞癌BRMSlmRNA水表达平显著低于未转移膀胱细胞癌（P〈0．01）。结论：BRMSlmRNA在膀胱癌组织中的表达水平与膀胱癌的发生和淋巴结转移呈负相关;BRMSlmRNA表达的下降可能促进了膀胱癌的转移。     

siRNA端粒酶催化亚单位诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

目的：研究siRNA（small interference RNA）对人膀胱癌BIU-87细胞凋亡和端粒酶催化亚单位（hTERT）基因表达的影响。方法：设计并体外转录合成针对hTERT基因的3个特异性siRNA,通过脂质体将siRNA转入BIU-87细胞,分别采用MTT和DNA原位末端标记（TUNEL）法检测siRNA对BIU-87细胞生长抑制率（IR％）和凋亡指数（A100）的影响,半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western Blotting检测siRNA对hTERT mRNA及其蛋白表达的影响。结果：转染后的siRNA 1～3组的B1U-87细胞的IR（34．62％、62．19％、57．43％）和AI（30．62％、54．26％、51．50％）均分别显著高于正常对照组（3．46％和5．03％）（均P〈0．05）,hTERT mRNA及其蛋白表达水平均显著低于对照组;其中siRNA2～3对BIU-87细胞的IR、AI和hTERT表达的抑制作用均显著高于siRNA1。结论：体外转录合成的siRNA可抑制BIU-87细胞hTERT的表达,诱导BIU-87细胞凋亡,从而抑制BIU-87细胞生长,为siRNA介导的膀胱肿瘤基因沉默提供实验依据。     

去甲斑蝥素抑制人膀胱肿瘤T24细胞增殖的作用

目的:研究去甲斑蝥素对人膀胱肿瘤T24细胞生长抑制作用,并探讨其作用机理。方法:将含不同浓度去甲斑蝥素的RMPI-1640与T24细胞一起培养,分别在12h、24h、36h、48h、60h收集细胞进行MTT实验,计算细胞生长抑制率并筛选最佳药物浓度;用最佳浓度的药物与细胞共同培养,免疫印迹法检测作用不同时间后bcl-2和Bax表达变化,分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化。结果:去甲斑蝥素在体外对T24细胞增殖有明显抑制作用,其最佳浓度为60μmol/L;去甲斑蝥素(60μmol/L)与T24共同培养,随着作用时间延长Bax表达逐渐增强,bcl-2表达逐渐减弱;并且Caspase-3、-8、-9的活性均增加。结论:去甲斑蝥素在体外对T24细胞有良好的抑制作用,其作用机理可能与其激活Caspase-3、-8、-9活性,增强Bax和减弱bcl-2表达而诱导凋亡有关。     

Preliminary Results of Bladder Preservation by Concurrent lntraarterial Chemotherapy and Radiotherapy for Muscle-Invasive Bladder Cancer

Background: We previously reported favorable results of intraarterial doxorubicin chemotherapy in combination with low-dose radiotherapy for locally-advanced bladder cancer. We have now designed a new intraarterial chemotherapy regimen to achieve a higher tumor response rate while preserving a functional bladder.
Methods: Twenty-one patients with muscle-invasive bladder cancer (T2, lO; T3,7; T4,4) were treated with concurrent intraarterial chemotherapy and radiotherapy after an initial complete transurethral resection. Induction therapy consisted of concomitant pirarubicin (THP; 15 mg/m²/day on days 1 to 3), cisplatin (CDDP; 25 mg/m²/day on days 8 to 10) and irradiation (2 Gy/session on days 1 to 3 and 8 to 10). Maintenance treatment consisted of THP administered at 20 or 30 mg with or without 50 mg CDDP every month for 2 years.
Results: Nineteen of the 21 patients (90.5|X%) achieved a complete response (CR). One of these 19 relapsed with lung metastases 24 months after treatment and was treated surgically. The 2 patients who did not achieve a CR died of cancer, while the remaining 19 patients are alive with preservation of a functional bladder.
Conclusion: These findings suggest that a higher tumor response rate with bladder preservation for patients with muscle-invasive bladder cancer is achieved by intraarterial THP/CDDP chemotherapy plus radiotherapy.     

二次电切对T1G3期膀胱肿瘤疗效影响的回顾性分析

目的：探讨T1G3期膀胱肿瘤患者行第二次经尿道膀胱肿瘤电切术（TURBT）治疗的临床意义。方法：收集2005年1月～2010年4月,初次TURBT治疗后病理诊断为T1G3期膀胱肿瘤患者4周内行第二次TURBT治疗共23例（观察组）。以同期行TURBT后诊断为T1G3期膀胱肿瘤,但未行二次电切的37例患者为对照。两组患者术后均予以羟喜树碱行膀胱灌注治疗,观察两组间肿瘤复发率差异,残余肿瘤存在与否及位置,肿瘤病理分期、分级的变化,根据第二次TURBT的结果采取的不同治疗方案．结果：二次电切后发现7例（30％）有残余肿瘤,5例（23％）有肿瘤分期的升高,其中3例改行根治性膀胱切除术。随访10n18个月（平均13个月）,有4例（17％）肿瘤复发。对照组19例（52％）肿瘤复发。结论：第二次TURBT治疗检测残存肿瘤,揭示肿瘤分期情况,提前确定患者是否应行根治性膀胱切除的重要依据及可明显降低肿瘤的复发与进展。     

Telomere Length and Telomerase Activity in Bladder and Prostate Cancer Cell Lines

Background: Specific repeats of oligonucleotides at the ends of chromosomes (telomeres) are shortened by cell division in somatic cells and are thought to be related to aging. Immortal cells such as germ-line cells or cancer cells have demonstrated increased activity of the telomere-elongating enzyme (telomerase). The length of the telomeres of these cells is stable regardless of cell division. We examined the telomere length and telomerase activity in 3 bladder (JTC30, JTC32, and T24) and 2 prostate cancer (LNCaP and DU145) cell lines.
Methods: Telomere lengths were evaluated by Southern blot analysis with a oligonucleotide probe, (TTAGGG)_S and telomerase activities were detected with a polymerase chain reaction-based assay method.
Results: Telomerase activity was detected in all of the cell lines. Each cell line had a specific telomere length. In 2 bladder cancer cell lines (JTC30 and JTC32), the telomere length decreased with increased passage of the cells.
Conclusion: The presence of telomerase may be a biological character of bladder and prostate cancers as well as other malignancies, although it does not always compensate telomere shortening.     

茶多酚对人膀胱癌细胞光动力学杀伤效应的影响

目的 :探讨茶多酚对人膀胱癌细胞叶绿素衍生物光动力学杀伤效应的影响。 方法 :采用MTT比色分析法 ,判断茶多酚影响体外人膀胱癌T -2 4和SCaBER细胞光动力学的杀伤效应。 结果:与单纯光动力学作用组比较 ,茶多酚能显著减弱叶绿素衍生物光动力学对两种人膀胱癌细胞的损伤 (P <0 0 5,0 0 1) ,茶多酚的作用时间与光动力学对T -2 4细胞杀伤效应呈负相关 ,而与SCaBER细胞却无相关性。 结论 :茶多酚具有较强的缓解膀胱肿瘤细胞光动力学杀伤效应的作用