丁酸钠对胃癌细胞株MGC-803的增殖抑制和凋亡诱导作用机制

目的研究丁酸钠对人胃癌细胞系MGC-803的生长抑制和诱导凋亡作用，并探讨其作用机制。方法以不同浓度的丁酸钠对体外培养的人胃癌细胞系MGC-803进行处理，应用MTE法检测其对细胞生长的抑制情况；应用免疫细胞化学染色法观察其对凋亡相关基因p53表达的影响。结果不同浓度的丁酸钠均可抑制MGC-803细胞的增殖，且抑制率具有剂量和时间依赖性；突变型p53在丁酸钠作用的细胞中的表达明显低于未进行处理的细胞（P〈0．05）。结论丁酸钠可抑制体外培养的人胃癌细胞的生长，诱导癌细胞发生凋亡。     

重组人p53腺病毒感染对携带不同p53状态胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究重组人p53腺病毒感染不同p53状态胃癌细胞对其p53蛋白表达、生长抑制率、细胞周期与凋亡率的影响。方法不同浓度重组人p53腺病毒感染3种不同p53状态胃癌细胞,即含野生型p53基因的细胞(wild-type)、含突变型p53基因的细胞(mutant-type)、含空载质粒即p53基因缺失的细胞(vector-cell)。48 h后,用Western blotting法检测p53蛋白在3种胃癌细胞中的表达;用MTT法测定重组人p53腺病毒感染3种胃癌细胞的生长抑制率,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率。结果rAd-p53感染3种胃癌细胞48 h后p53蛋白表达阳性,对照组p53基因缺失的胃癌细胞无表达,对照组含野生型p53基因的细胞和含突变型p53基因的细胞弱表达。rAd-p53对3种胃癌细胞的生长抑制效应在一定的浓度范围内呈剂量依赖性,而与细胞内在的p53状态无关。含野生型p53基因的细胞、含突变型p53基因的细胞和p53基因缺失的细胞感染rAd-p53后诱导G2/M期阻滞与细胞凋亡率分别增加2.5、3.6、3.2倍。结论腺病毒介导p53基因感染3种不同p53状态胃癌细胞改变细胞内在的p53状态,p53蛋白表达、生长抑制率、细胞周期分布、凋亡率均与细胞内在的p53状态无关。     

p27kip1基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响

背景：p27kipl是一种抑癌基因，早期研究显示p27kipl基因转染能明显抑制胃癌、食管癌细胞生长．表明该基因疗法可能是治疗胃癌、食管癌的新途径，深入阐明p27kipl的抑癌机制，可为p27kipl基因治疗胃癌、食管癌提供可靠的理论基础。目的：研究p27kipl基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响。方法：将p27kipl重组腺病毒（Ad-p27kipl）转染胃癌细胞SGC-7901，免疫细胞化学法检测p27kipl的表达。加入5-氟尿嘧啶（5-FU）和顺铂（DDP）后．甲基噻唑基四唑（MrIT）法测定细胞生长抑制率,^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）掺入试验测定DNA的合成。结果：Ad-p27kipl转染胃癌细胞后，p27kipl表达明显增强。加入5-FU和DDP后，细胞生长抑制率显著增高．^3H-TdR掺人量显著降低（P〈0．01）。结论：p27kipl基因转染联合化疗能明显抑制胃癌细胞的生长。     

曲古霉素A对人胃癌细胞的抑制作用及其机制探讨

背景：组蛋白去乙酰基酶抑制剂（HDACi）是一类新型抗肿瘤药物。曲古霉素A（TSA）是目前研究最为广泛的HDACi之一,已发现其对多种肿瘤细胞具有明显抑制作用,但关于TSA对胃癌作用的研究尚少。目的：观察TSA对人胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及相关基因表达的影响,探讨其抑制人胃癌细胞的可能作用机制。方法：以不同浓度TSA（0—1μmol／L）处理人胃癌细胞株AGS和HGC-27。CCK-8实验检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,realtimeRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡、细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平的表达。结果：TSA能剂量依赖性地抑制AGS、HGC-27细胞增殖（P=0．000）,对两者的半数致死浓度分别约为0．25μmol／L和0．5μmol／L。TSA能诱导AGS、HGC-27细胞发生G0／G1期和G2／M期阻滞,以G0／G11期阻滞更为明显。TSA对AGS细胞的诱导凋亡作用强于HGC-27细胞（P〈0．05）。TSA尚能上调p21、p53、BaxmRNA和蛋白表达,下调Bel-2、CDK2、cyelinD1mRNA和蛋白表达,作用均呈时间依赖性（P〈0．05）。结论：TSA抑制人胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用可能是通过调节细胞凋亡、细胞周期相关分子、激活多种肿瘤相关信号通路实现的。     

runt相关转录因子3及其甲基化在人胃癌细胞中的表达及调节因素的初步研究

目的检测不同分化程度胃癌细胞株runt相关转录因子3（RUNX3）基因及其甲基化表达，观察RUNX3 mRNA再表达对胃癌细胞株生物学特性的影响。方法5-氮杂脱氧胞苷（5-AZA-dC）化学处理法和甲基化敏感性聚合酶链反应（MSP法）检测胃癌细胞RUNx3基因的甲基化状态；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验检测5-氟尿嘧啶（5-FU）对5-AZA-dC处理前、后细胞株的生长抑制率，流式细胞术检测转化生长因子p1（TGF-p1）诱导凋亡的作用。结果①RUNX3在人胃癌细胞SGC7901、MKN45、BGC823中表达，而在MKN28中表达沉默，DNA异常甲基化仅存在于MKN28细胞；②5-AZA-dC处理后，MKN28细胞生长速度显著慢于未处理组，不同浓度5-FU对5-AZA-dC处理后MKN28的生长抑制率显著高于未处理组（P〈0．05）；③TGF-β1诱导5-AZA-dC处理前后MKN28细胞的早期凋亡具有时效性（P〈0．05），两者联用具有协同凋亡作用（P〈0．05）。结论DNA异常甲基化是MKN28细胞RUNX3表达沉默的重要机制；RUNX3甲基化可被去甲基化剂5-AZA-dC有效逆转；RUNx3mRNA的再表达可增强MKN28细胞对5-FU的敏感性和对TGF-β1诱导细胞凋亡的能力。     

胃癌组织中PTEN、p53的表达变化及意义

目的观察胃癌组织中p53、FTEN的表达变化,探讨其意义。方法采用免疫组化法检测60例胃癌组织中的p53、PIEN。结果胃癌组织中PTEN、p53的阳性率分别为46．7％、75．0％,PTEN、p53表达均与胃癌患者肿瘤的大小、Borrmman分型、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关（P均〈0．05）,PTEN、p53表达呈明显负相关（r=-0．513,P〈O．05）;PTEN、p53表达分别与胃癌患者术后生存率呈正相关（r=0．556,P〈0．05）和负相关（r=-0．493,P〈0．05）。结论p53、PTEN表达在胃癌发生发展中有重要作用。     

胃癌组织芯片p53、p16及环氧合酶-2表达的研究

目的利用高通量的组织芯片技术,对胃癌组织及癌旁组织的p53、p16和环氧合酶-2（COX-2）蛋白异常表达进行分析,探讨其相关性及临床意义。方法利用组织芯片技术结合免疫组化法检测50例胃癌组织和78例癌旁组织中p53、p16及COX-2蛋白的表达。结果p53、p16和COX-2的阳性表达率在癌旁组织中分别是19％、15％及74％;在癌组织中分别是50％、54％及94％。胃癌组织中p53、p16和COX-2蛋白表达均显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义（P〈0．05）。p53与COX-2、p16与COX-2蛋白表达均存在相关性（P〈0．05）。当p53、COX-2表达阳性,p16阴性时;或p16、COX-2表达阳性,p53阴性时;或p53、p16和COX-2同时表达阳性时,组织芯片病理类型为癌性的概率均增加,OR值分别为11．667、30．000及18．889,p53、p16和COX-2三者存在交互作用。结论联合分析p53、p16及COX-2的表达对预测胃癌的发生和发展具有重要意义。     

强力霉素对胃癌细胞SGC-7901基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2表达的影响

背景：强力霉素对结肠癌细胞的分化和抑制作用已有报道，但其对胃癌细胞的作用尚未见报道。目的：观察强力霉素对人胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用及其对基质金属蛋白酶（MMP）-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-2表达的影响，探索胃癌治疗的新方法。方法：采用不同浓度的强力霉素作用于胃癌细胞SGC-7901，以噻唑蓝（MIT）法测定其细胞毒作用；逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法半定量测定MMP．2和TIMP-2mRNA的表达；免疫组化法观察MMP-2蛋白的表达。结果：强力霉素可抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，具有浓度和时间依赖性（P〈0．01）。强力霉素可下调MMP-2mRNA和MMP-2蛋白的表达，上调TIMP-2mRNA的表达，具有浓度依赖性（P〈0．05）。结论：强力霉素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，其作用机制可能与下调MMP-2表达、上调TIMP-2表达有关。     

Survivin在非小细胞肺癌中的表达及其与p53、细胞凋亡的关系

目的探讨Survivin基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与p53、细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化方法检测60例NSCLC和16例肺良性组织中Survivin和p53的表达，用TUNEL技术检测NSCLC的凋亡情况。结果肺癌组织中Survivin蛋白表达的阳性率为63.3％（38／60），而在良性肺疾病肺组织均无表达；Survivin蛋白的表达与肺癌TNM分期、淋巴结转移和细胞分化程度有密切关系，但与肿瘤组织学类型、患者年龄及性别无关。p53蛋白表达阳性的NSCLC中，Survivin蛋白表达阳性率（80．5%）明显高于p53蛋白表达阴性者（26．3％）．P〈0．01。Survivin蛋白在NSCLC中的表达水平与癌细胞的凋亡指数（AI）星负相关（r=-0．231，P〈0．05）。结论Survivin基因异常表达引起的细胞凋亡抑制在NSCLC的发生中起一定作用，抑癌基因p53失活和Survivin基因过度表达可能在NSCLC癌变中起协同作用。     

微米中药胰腺康对H22肿瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的探讨微米中药胰腺康对H22小鼠的抑瘤作用及其对p53和caspase-3表达的影响。方法将H22肿瘤细胞接种到小鼠皮下,建立小鼠H22实体瘤模型,并对小鼠H22实体瘤模型进行微米中药及其提取液的处理,采用免疫组化方法检测实体瘤组织中p53和caspase-3蛋白的表达。结果小鼠体内实验显示微米中药可明显抑制肿瘤生长。p53蛋白表达率为31.73%,caspase-3蛋白表达率为41.16%,肿瘤抑制率为50.00%。结论胰腺康对H22肿瘤具有明显抑制作用,微米中药胰腺康与其提取液相比,能更有效地抑制肿瘤增殖,其抗瘤作用与诱导细胞凋亡有关。     

rAd-p53 enhances the sensitivity of human gastric cancer cells to chemotherapy

AIM:To investigate potential antitumor effects of rAd-p53 by determining if it enhanced sensitivity of gastric cancer cells to chemotherapy.METHODS:Three gastric cancer cell lines with distinct levels of differentiation were treated with various doses of rAd-p53 alone,oxaliplatin(OXA) alone,or a combination of both.Cell growth was assessed with an 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-diphenytetrazoliumromide assay and the expression levels of p53,Bax and Bcl-2 were determined by immunohistochemistry.The pre...     

重组腺病毒p53联用阿霉素对肺鳞癌移植瘤耐药性的影响

目的 探讨野生型p53基因联合阿霉素对肺癌化疗药物敏感性的影响及导入外源性野生型p53基因对肺癌原发性耐药的影响。方法 以携带野生型P53基因的复制缺陷型腺病毒（pAd-P53）感染荷瘤肺鳞癌裸鼠动物模型。分层随机法将鼠分为4组（每组6只）：单纯Ad-p53、单纯阿霉素（ADM）、Ad-p53加阿霉素组（联合组）及对照组，对照组注射同等剂量生理盐水。绘制肿瘤体积增长曲线，计算抑瘤率，观察肿瘤病理组织学变化。结果 联合组对裸鼠肿瘤重量增长抑制率为82．32％，对肿瘤体积增长抑制率为99．5％；而单独p53组对肿瘤重量增长抑制率／肿瘤体积增长抑制率分别为60．11％和85．4％；单独阿霉素组对肿瘤重量增长抑制率／肿瘤体积增长抑制率为35．4％和73．9％；对照组的肿瘤体积呈持续增长趋势。结论 野生型p53基因结合化疗药物对于提高抗肺癌药物的敏感性、克服原发耐药可能有一定的临床应用前景。     

重组人p53腺病毒联合顺铂治疗NSCLC合并胸腔积液临床研究

目的本研究评价重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）联合顺铂治疗肺癌所致胸腔积液的临床疗效和毒副反应。方法将38例非小细胞肺癌（NSCLC）合并胸腔积液患者随机分为治疗组和对照组两组。所有患者均在第1、8 d应用吉西他滨1.0 g/m2静脉点滴,每3周重复1次。在上述治疗基础上,治疗组胸腔内注入rAd-p53 1×10^12 VP和顺铂30 mg/m2每次;对照组仅胸腔内注入顺铂30 mg/m2每次,两组均每周重复1次,连用4次后观察疗效。结果治疗组和对照组的有效率分别为80.95%和47.06%（P〈0.05）;治疗组和对照组的一般状况改善率分别为66.67%和29.41%（P〈0.05）;两组患者主要不良反应均为发热、胸痛、消化道反应及白细胞减少,治疗组发热的发生率高于对照组（P〈0.05）,主要为自限性,36 h后一般都能自行恢复。结论重组人p53腺病毒注射液联合顺铂治疗肺癌所致胸腔积液疗效确切,安全,值得临床推广使用。     

Five-lipoxygenase-activating protein inhibitor MK-886 induces apoptosis in gastric cancer through upregulation of p27kip1 and bax

BACKGROUND AND AIM: Products of the arachidonic acid metabolizing enzyme, 5-lipoxygenase (5-LOX), stimulate the growth of several cancer types. Inhibitors of 5-LOX and 5-LOX-activating protein (FLAP) induce apoptosis in some cancer cells. Here, the authors investigated the effect of a FLAP inhibitor, MK-886, on the inhibition of proliferation and induction of apoptosis in gastric cancer. METHODS: Cell proliferation in gastric cancer cells was measured using an 3-(4,5-dimethyl-2 thiazoyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay. Apoptosis was measured using acridine orange staining and flow cytometry. Protein expression of apoptosis-related genes p53, p21waf1, p27kip1, bcl-2 families, cytochrome c, and the caspases were examined using Western blotting. Caspase-3 activity was measured using colorimetric assay of substrate cleavage. RESULTS: MK-886 inhibited cell growth in a dose- and time-dependent manner. Apoptosis was induced in gastric cancer cells and was characterized by upregulation of p27kip1 and bax, with release of cytochrome c from mitochondria into cytosol, which initiated caspase-3 activation. Specific caspase-3 inhibitors partially blocked MK-886-induced apoptosis. CONCLUSION: The present results suggest that MK-886 induces apoptosis in gastric cancer cells through upregulation of p27kip1 and bax, and that MK-886 is a potentially useful drug in gastric cancer prevention and therapy.     

紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制

目的 探讨紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制。方法胃癌BGC823细胞传代堵养后,取对数生长期细胞用于实验。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测Akt、p-Akt蛋白表达。结果在胃癌BGC823细胞中,100ng／ml的TRAIL可致少量的细胞凋亡,同时检测到Akt的磷酸化。紫杉醇作用胃癌BGC823细胞24h,IC50剂量为8．97μg／ml。与单药TRAIL和紫杉醇相比,TRAIL（100ng／m1）联合紫杉醇（8．97μg／ml,24h的IC50剂量）对细胞的诱导凋亡作用明显增强（P〈0．05）。免疫印迹结果显示,TRAIL（100ng／ml）作用BGC823细胞24h,活化了Akt蛋白,而8．97μg／ml的紫杉醇抑制了Akt的磷酸化。TRAII（100ng／ml）联合紫杉醇（8．97μg/ml）作用后,TRAIL引起的Akt磷酸化被抑制。结论紫杉醇通过抑制TRAIL引起的Akt磷酸化,从而增强了TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡。     

Hypermethylation and aberrant expression of Wnt antagonist secreted frizzled-related protein 1 in gastric cancer

AIM： To identify the methylation of secreted frizzled-related protein 1 （SFRP1） in gastric cancer and to investigate the aberrant expression of SFRP1 and its correlation with the clinical pathological features of patients.
METHODS： We determined SFRP1 methylation and SFRP1 mRNA expression in 3 gastric cancer cell lines SGC-7901, BGC-823, HGC-27, from 52 primary gastric cancer specimens and matched tumor adjacent tissue specimens by methylation-specific （MSP） PCR and RT-PCR respectively. Fisher＇s exact test was used to analyze the statistical association between clinical pathological data and aberrant expression of SFRP1.
RESULTS： In 3 cancer cell lines, BGC-823 and HGC-27 had methylated SFRP1 and lost SFRP1 mRNA expression. After treatment of BGC-823 and HGC-27 with the demethylating agent, 5-aza-2′-deoxycytidine, SFRP1 was re-expressed. In 52 primary gastric cancer specimens and matched tumor adjacent tissue specimens, hypermethylation of SFRP1 was detected in 23 （44%） and 8 （15%） specimens respectively （x^2= 10.34, P 〈 0.01）. Loss of SFRP1 expression was detected in 17（33%） and 6 （12%） specimens respectively （x^2= 6.75, P 〈 0.01）. There was a significant correlation between SFRP1 hypermethylation and SFRP1 expression loss. SFRP1 expression was also correlated significantly with tumor stage and lymph node status, but not with patient sex, age and histological type.
CONCLUSION： SFRP1 inactivation is a common and early event caused mainly by hypermethylation in gastric cancer. SFRP1 expression loss may be correlated with tumor metastasis in primary gastric cancer.     

达沙替尼联合奥沙利铂协同抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的:评价Src酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼联合奥沙利铂抑制胃癌细胞体外增殖、迁移等恶性生物学行为的效应。方法:实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测Src及其活性形式p-Src在胃癌细胞株中的基础表达;蛋白质印迹技术观察不同剂量奥沙利铂作用于胃癌细胞或作用不同时间后,细胞内Src及p-Src的变化规律;细胞计数试剂盒(CCK-8)方法评价胃癌细胞暴露于不同浓度奥沙利铂和达沙替尼后的生长抑制率,分别计算2种药物的半数抑制浓度(IC50),并使用Calcusyn 2.0软件计算联合作用指数(CI);细胞集落形成实验、流式细胞术和划痕实验观察上述药物对胃癌细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和迁移能力的影响。结果:胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、MKN-28的p-Src/Src基础表达比值较高;奥沙利铂可明显上调胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-28的p-Src,并呈时间依赖性(r2=0.96、0.85、0.94);达沙替尼和奥沙利铂在胃癌细胞中的CI均     

Adenovirus mediated p53 tumour suppressor gene therapy for human gastric cancer cells in vitro and in vivo

BACKGROUND/AIMS: Gastric cancer is one of the most prevalent forms of cancer in East Asia. Point mutation of the p53 gene has been reported in more than 60% of cases of gastric cancer and can lead to genetic instability and uncontrolled cell proliferation. The purpose of this investigation was to evaluate the potential of p53 gene therapy for gastric cancer. METHODS: The responses of human gastric cancer cell lines, MKN1, MKN7, MKN28, MKN45, and TMK-1, to recombinant adenoviruses encoding wild type p53 (AdCAp53) were analysed in vitro. The efficacy of the AdCAp53 treatment for MKN1 and MKN45 subcutaneous tumours in nude mice was assessed in vivo. RESULTS: p53-specific growth inhibition was observed in vitro in two of four gastric cancer cell lines with mutated p53, but not in the wild type p53 cell line. The mechanism of the killing of gastric cancer cells by AdCAp53 was found, by flow cytometric analysis and detection of DNA fragmentation, to be apoptosis. In vivo studies showed that the growth of subcutaneous tumours of p53 mutant MKN1 cells was significantly inhibited by direct injection of AdCAp53, but no significant growth inhibition was detected in the growth of p53 wild type MKN45 tumours. CONCLUSIONS: Adenovirus mediated reintroduction of wild type p53 is a potential clinical utility in gene therapy for gastric cancers.