太白楤木对肝纤维化模型大鼠的干预作用

[目的]探讨太白楤木对肝纤维化模型大鼠Ⅰ型胶原纤维(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原纤维(Col-Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的干预作用.[方法]雄性SD大鼠60只,随机分为阴性对照组、模型组、太白楤木大、中、小剂量组和秋水仙碱组,采用40％ CCl4橄榄油腹腔注射诱导肝纤维化模型,2次/周,连续8周.采用苏木精-伊红及Masson染色观察肝组织病理学改变;RT-PCR检测Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA表达水平;Western-blot检测α-SMA的表达水平.[结果]与模型组相比,太白楤木大、中、小剂量组及秋水仙碱组肝细胞变性坏死减轻,纤维条索减少,且秋水仙碱组、太白楤木小、中、大剂量组呈逐渐减轻趋势.与模型组相比,太白楤木大、中、小剂量组及秋水仙碱组Col-Ⅰ、Ⅲ mRNA表达水平均减低(均P＜0.05);与秋水仙碱组比较,太白楤木大剂量组Col-Ⅰ、Ⅲ mRNA表达减低(均P＜0.05).太白楤木大、中、小剂量组和秋水仙碱与模型组相比,a-SMA表达不同程度减低(均P＜0.05),与秋水仙碱组相比,太白楤木大、中剂量组a-SMA表达均减低(均P＜0.05).[结论]太白楤木可通过抑制肝组织中胶原纤维的增生和肝星状细胞的活化,从而减轻肝纤维化.     

TIMP-1表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的作用

目的　探讨TIMP 1表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的意义及外源性IL 10抗肝纤维化作用的可能机制。方法　 60只SD雄性大鼠随机分为生理盐水对照组 (N组 ,8只 )、CCl4组 (C组 ,2 8只 )和IL 10干预组 (Ⅰ组 ,2 4只 ) ,建立下常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及IL 10干预模型。造模第 7周和第 11周 ,采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉原位灌流消化 ,11%Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞 (HSC)。半定量RT PCR法检测各组HSC的TIMP 1mRNA表达水平 ;免疫细胞化学法检测培养贴壁后HSC的TIMP 1蛋白表达情况。结果　各组均检出TIMP 1的mRNA表达 ;造模第 7周 ,C组与I组的TIMP 1mRNA表达均高于N组 (P <0 .0 1) ,I组低于C组 (P <0 .0 1) ;造模第 11周 ,I组明显低于C组 (P <0 .0 1) ,C组TIMP 1的表达水平较第 7周进一步增加 (P <0 .0 1) ,而I组有所下降 (P <0 .0 5 )。免疫细胞化学法检测各组TIMP 1的蛋白表达变化与mRNA表达变化一致。结论　TIMP 1随着大鼠肝纤维化进展表达逐渐升高 ,IL 10通过抑制TIMP 1的表达 ,起抗纤维化作用     

纤维化大鼠肝星状细胞IL-10/IL-10R的表达及IL-10干预的影响

目的研究实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞白介素10(IL-10)/白介素10受体(IL-10R)表达及IL-10干预对其表达的影响。方法60只清洁级SD大鼠,随机分为正常对照(A组)、肝纤维化(B组)和IL-10干预组(C组)。B组和C组以CCl4腹腔内注射构建肝纤维化模型,C组并予IL-10腹腔内注射干预造模。于第7周和第11周分别随机选取一批大鼠,分离肝星状细胞,抽提总RNA,以半定量RT-PCR法检测各组HSC中IL-10和IL-10R mRNA表达情况。结果病理组织学证实肝纤维化模型构建成功,原代HSC分离培养成功,IL-10干预可以减轻其肝纤维化程度。肝纤维化时IL-10和IL-10R的mRNA表达均较正常组有所增强,但随着肝纤维化进展,IL-10的表达逐渐减弱。IL-10干预可以使二者的表达上调,以第11周时变化最为显著。结论大鼠肝HSC可表达IL-10及IL-10R,IL-10可作用于HSC而发挥抗肝纤维化作用。     

白细胞介素-10对肝纤维化大鼠细胞外基质及其代谢酶表达的影响

目的探讨白细胞介素（IL）-10对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及其抗纤维化作用的可能机制.方法47只SD大鼠随机分为正常组（N组）和CCl4组（C组）.C组通过CCl4腹腔注射造模.至造模第9周,C组随机分为模型组（M组）、IL-10治疗组（T组）和自然恢复组（R组）.S-P免疫组化法检测肝脏MMP-2、MMP-9、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,H-E染色判断肝纤维化程度.结果成功建立肝纤维化模型,肝病理组织学显示,与M组比较,T组肝纤维化程度有明显改善（P=0.001）,而R组未见明显好转.与N组比较,MMP-2、MMP-9、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原在M组表达明显升高（P＜0.01）,T组显著降低（P＜0.01）,R组表达较M组有所降低（P＜0.05）,但仍明显高于T组（P＜0.01）.结论IL-10可抑制纤维化大鼠肝组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,减弱细胞外基质合成,加速其降解进而发挥抗纤维化作用.     

IL-10对大鼠肝纤维化的治疗作用及对TNF-α、IGF-1及IGF-1R表达的影响

目的外源性白介素-10(IL-10)对大鼠肝纤维化的治疗作用及对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)表达的影响.方法40只SD大鼠随机分为正常对照组和CCl4诱发肝纤维化模型组.至造模第9周,模型组随机分为3组,S组造模结束即处死,Ⅰ组IL-10治疗2周后处死,R组为自然恢复2周后处死.通过HE染色评价各组肝纤维化的程度,SP免疫组化检测各组大鼠肝脏TNF-α、IGF-1、IGF-1R表达情况.结果肝病理组织学显示:I组纤维化程度有明显改善,R组纤维化程度没有明显改善.TNF-α、IGF-1、IGF-1R在S组表达显著升高(P＜0.05),在R组及Ⅰ组表达下降,但Ⅰ组下降较R组明显,与R组比较差别有显著意义(P＜0.05).结论外源性IL-10能明显抑制炎性细胞因子TNF-α的表达和IGF-1及IGF-1R的表达,这可能是IL-10对大鼠肝纤维化治疗作用的机制之一.     

白细胞介素-17促进人肝星状细胞活化和胶原蛋白表达

背景:肝星状细胞(HSC)活化是肝纤维化发生、发展的中心环节。白细胞介素-17(IL-17)是辅助性T细胞17(Th17细胞)最重要的效应因子,可引起炎性细胞浸润和组织损伤。前期研究发现慢性乙型肝炎和自身免疫性肝炎患者肝组织中IL-17阳性表达细胞数与肝纤维化程度呈正相关,然而IL-17引起肝纤维化的机制尚未明确。目的:探讨IL-17对人HSC细胞株LX2活化和胶原蛋白表达的影响。方法:以不同浓度IL-17处理人HSC细胞株LX2,采用CCK-8实验检测细胞活力;采用实时荧光定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Col-ⅢmRNA表达;采用免疫荧光法检测α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达。结果:LX2细胞活力随IL-17浓度增加呈升高趋势,但各浓度组间差异无统计学意义(P0.05)。IL-17处理组(100 ng/mL)α-SMA、Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA表达水平均显著高于空白对照组(P0.05)。随着IL-17浓度的增加,α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达逐渐增高。结论:IL-17可促进HSC活化以及Col-Ⅰ、Col-Ⅲ表达,从而促进肝纤维化的发生、发展。     

螺内酯对大鼠肝纤维化α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达的影响

目的 探讨醛固酮受体拮抗剂螺内酯对大鼠α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达的影响,评价螺内酯的抗纤维化作用.方法 雄性SD大鼠50只,随机分为(1)肝硬化模型组(A、B组各10只)体积分数40%的四氯化碳(CCl4,用精制橄榄油配制),皮下注射,3 ml/kg,每周2次,其中A组注射10周,B组注射13周;(2)螺内酯组(C、D组各10只)CCl4注射的同时给予螺内酯20 mg/(kg·d)灌胃,其中C组灌胃10周,D组灌胃13周;正常对照组(10只)正常饮食、饮水.分别于第10周末处死A、C组大鼠,13周末处死B、D组及对照组大鼠.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠肝脏组织中α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA的表达.结果 第10周末时,螺内酯组d1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达显著低于肝纤维化模型组(P＜0.05).第13周末时,螺内酯组与肝纤维化模型组相比差异无显著性意义.结论 螺内酯对肝纤维化有一定的抑制作用.     

小鼠酒精性肝纤维化复合模型的建立及肝组织骨桥蛋白和转化生长因子β1的表达

目的 快速建立小鼠酒精陛肝纤维化模型,为酒精性肝纤维化发病机制及防治策略的研究奠定基础.方法 64只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、四氯化碳组、乙醇组、溶剂对照组及乙醇+四氯化碳组.乙醇+四氯化碳组小鼠,造模前4周以含4％乙醇Lieber-DeCarli液体饲料喂养,第5周起联合5％四氯化碳腹腔注射,于造模第0、4、5、6、7、8周各处死6只.其余各组小鼠于造模第8周处死.采用酶法检测小鼠血清ALT及AST水平;HE及Masson染色观察肝组织病理学变化,并对肝脂肪变、炎症活动及纤维化程度评分.免疫组织化学染色观察肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化;实时定量RT-PCR及Western blot方法检测肝组织骨桥蛋白(OPN)及转化生长因子β 1 (TGFβ1)mRNA及蛋白表达动态变化.结果 乙醇+四氯化碳组小鼠于造模第4周出现轻～中度肝脂肪变,第5周出现炎细胞浸润,窦周出现纤维组织沉积,第6～7周肝小叶内可见点、灶状肝细胞坏死,炎细胞浸润、窦周纤维组织沉积呈进行性加重,第8周肝细胞片状坏死,桥接纤维化形成.免疫组织化学染色显示:α-SMA主要表达于活化肝星状细胞及纤维组织沉积区域,随造模时间延长表达逐渐增强.乙醇+四氯化碳组小鼠肝组织OPN表达随造模时间延长逐渐增强,第0、4、5、6、7、8周mRNA相对表达量依次为1.01±0.13、0.80±0.20、1.83±0.25、2.94±0.19、3.45±0.31及5.99±0.17,各组比较,F=476.270,P＜ 0.01;蛋白相对表达量依次为0.19±0.06、0.48±0.05、0.52±0.06、1.02±0.10、1.52±0.11及1.50±0.08,各组比较,F=298.027,P＜0.01.TGF β 1表达自第5周明显上调,并呈持续高表达,mRNA相对表达量依次为1.03±0.18、1.07±0.23、3.19±0.40、3.31±0.28、1.58±0.18及2.08±0.26,各组比较,F=85.546,P＜0.01;蛋白相对表达量依次为0.24±0.08、0.28±0.12、1.26±0.16、0.96±0.12、1.09±0.25、1.10±0.20,各组比较,F=43.639,P＜0.01.结论 Lieber-DeCarli乙醇液体饲料喂养联合微量四氯化碳腹腔注射可成功建立小鼠酒精性肝纤维化模型,符合酒精性肝纤维化病理特点及病变过程.肝组织OPN及TGFβl表达在酒精性肝纤维化发生及进展中发挥重要作用.     

硫化氢对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响.方法:选择硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,将32只♀SD大鼠分为3组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(hepatic fibrosis,HF组)13只、NaHS干预组(S组)11只,采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,S组自造模第6周始给予NaHS56μmol/(kg·d)腹腔注射12d,N组和HF组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,应用RT-PCR法检测肝脏中COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达,采用SP免疫组织化学法检测肝脏COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达.结果:HF组与N组相比,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及其mRNA表达升高(均P=0.000),与肝纤维化分期结果一致(P=0.000);S组与HF组相比,COL-Ⅰ和COL-Ⅲ表达降低(均P=0.000);COL-ⅠmRNA表达降低(P=0.009),同时COL-ⅢmRNA表达亦降低(P=0.003),肝纤维化分期下降(P=0.047).结论:H2S具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.     

复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝脏低氧诱导因子1α及其下游分子mRNA表达的影响

[目的]观察复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)及其下游分子血管内皮生长因子(VEGF)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响,探讨复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的作用机制.[方法]采用40％ CCL4 诱导大鼠肝纤维化模型,同时以1 g/(kg·d)的复方鳖甲软肝片灌胃干预6周,常规苏木精-伊红和Masson染色观察大鼠肝组织炎症和纤维化程度,RT-PCR法检测肝组织HIF-lα、VEGF、CTGF基因mRNA表达.[结果]模型组大鼠肝组织炎症和纤维化程度计分较正常组明显增高(P＜0.01),肝组织HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA的表达较正常组明显增强(P＜0.01,＜0.05),肝组织纤维化程度与HIF-1αmRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA表达均呈明显正相关(均＜0.01),肝组织HIF-1α mRNA与VEGF mRNA、CTGF mRNA表达也呈明显的正相关(均P＜0.01);应用复方鳖甲软肝片干预后,大鼠肝组织炎症和纤维化程度显著减轻(P＜0.01,＜0.05),肝组织HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA表达明显下降(P＜0.05).[结论]复方鳖甲软肝片下调肝纤维化大鼠肝组织HIF-1α及其下游分子 mRNA 表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一.     

抗纤二号抗大鼠肝纤维化的实验性研究

目的探讨复方抗纤二号抗肝纤维化的治疗机制.方法雄性Wistar大鼠分成5组,除正常对照外,余4组均腹腔注射猪血清（0.5 ml/次,2次/周,共12周）用作肝纤维化造模.抗纤二号早期治疗组B在第3周给予中药灌胃,1 ml/100g体重,每天一次.抗纤二号晚期治疗组C在第9周给予中药灌胃,1 ml/100 g体重,每天一次.γ-干扰素治疗组D在第9周每天皮下注射10万单位的干扰素.模型组A和正常对照组N给等量的生理盐水灌胃.12周末杀大鼠,苏木精-伊红染色和Masson染色观察肝纤维化的形成,免疫组织化学观察平滑肌肌动蛋白（SMA）的表达.同时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织中SMA、Ⅰ、Ⅲ胶原和转化生长因子β1（TGF-β1）下游信号Smad3 mRNA的表达.结果抗纤二号治疗组B和C与模型组比较,体重较重,肝脏、脾脏变小,肝重/体重和脾重/体重降低（P＜0.05）.病理学观察,抗纤二号治疗组B显著逆转了免疫性大鼠的肝纤维化.苏木精-伊红染色和Masson染色显示抗纤二号治疗组B胶原明显减少（P＜0.05）.逆转录聚合酶链反应分析SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原和Smad3 mRNA的表达在抗纤二号治疗组均明显减少（P＜0.05）.免疫组织化学观察SMA的表达在抗纤二号治疗组均明显降低,同时分析表明Smad3 mRNA与Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA存在正相关（r=0.890）.结论抗纤二号能逆转免疫性肝纤维化,这是由于能部分抑制肝星状细胞的增殖和抑制肝纤维化有关的细胞因子TGF-β1下游信号Smad3的表达.     

安体舒通抗肝纤维化作用实验性研究

目的　研究和评估安体舒通对实验性大鼠肝纤维化的防治作用 ,探讨其抗肝纤维化作用的可能机制。结果　将雄性Wistar大鼠 80只随机分为正常对照组 (A组 ,16只 ) ,肝纤维化模型组Ⅰ (B组 ,5 4只 ) ,安体舒通治疗组Ⅰ (C组 ,10只 ) ,采用CCl4 复合因素造模 ,治疗组于造模同时予安体舒通每日 10 0mg·kg-1·mL-1灌胃 ,6周末造模成功处死C组大鼠 ,同时随机处死A组及B组大鼠各 8只 ;对B组剩下大鼠行二次随机分组 ,分为模型对照组Ⅱ (D组 ,12只 ) ,安体舒通治疗组Ⅱ (E组 ,10只 ) ,E组于第 7周开始给予安体舒通治疗 ,10周末处死大鼠。检测大鼠肝功能 ,血清透明质酸 (HA) ,层粘蛋白 (LN) ,Ⅲ型前胶原 (PCⅢ ) ,Ⅳ型胶原 (CIV) ;免疫组化法检测肝组织基质金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP -1)的表达。结果　C组与B组比较 ,血清ALT、AST、HA、LN、CIV、PCⅢ均显著降低 (P <0 .0 1) ,TIMP -1活性明显降低 (0 .34± 0 .0 5vs 0 .45± 0 .0 5 ,P <0 .0 1) .E组与D组相较 ,TIMP -1活性亦有明显降低(0 .31± 0 .0 7vs 0 .42± 0 .0 6,P <0 .0 1)。结论　安体舒通对肝纤维化有一定预防作用 ,并可能通过抑制TIMP -1活性表达而促进肝细胞外基质降解     

外源Smad7基因对四氯化碳诱导大鼠实验性肝纤维化的影响

目的研究外源Smad7基因对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠实验性肝纤维化的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组。第一组为正常对照组,其余3组采用CCl4皮下注射法建立大鼠肝纤维化模型,并在实验第2周和第4周分别经尾静脉导入生理盐水、重组复制缺陷型腺病毒AdSmad7或对照病毒AdGFP。标准酶法测定各组大鼠肝功能情况;放射免疫法测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)水平;RT-PCR法检测大鼠肝组织Smad7 mRNA表达。免疫组织化学法测定α-肌动蛋白(α-SMA)、Smad7表达;肝组织切片采用HE和VG染色进行肝纤维化程度分级。结果与模型对照组相比,AdSmad7导入组大鼠血清谷丙转氨酶(GPT)和碱性磷酸酶(AKP)水平有不同程度的降低,GPT降低更明显;血清PCⅢ和LN水平也显著下降(P0.05)。RT-PCR和免疫组织化学染色证实,AdSmad7导入组大鼠肝组织Smad7表达显著上调,而α-SMA表达则明显下降(P0.05)。病理学检查显示:AdSmad7导入组大鼠肝组织结缔组织增生程度减轻,纤维间隔变细,假小叶形成不明显,与模型对照组比较有显著性差异(P0.05)。结论重组复制缺陷型腺病毒AdSmad7经尾静脉注射后可在大鼠肝组织中表达;外源Smad7基因可改善纤维化大鼠肝功能,降低血清PCⅢ水平,下调α-SMA表达,减轻大鼠肝纤维化程度。     

化浊解毒益气方对肝纤维化大鼠细胞因子的影响

目的 观察化浊解毒益气方对肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)和组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1) mRNA表达的影响.方法 采用腹腔注射猪血清的方法建立免疫性肝纤维化大鼠动物模型,以化浊解毒益气方分别于造模的开始和第8周进行干预,以秋水仙碱作为阳性对照.分别于造模的8和12 w处死5只大鼠,提取肝组织行RT-PCR法检测TGF-β1和TIMP-1 mRNA的表达.结果 腹腔注射猪血清成功复制了免疫性肝纤维化大鼠模型,与正常对照组相比,模型对照组TGF-β1和TIMP-1 mRNA的表达明显增高(P＜0.05);中药干预可降低TGF-β1和TIMP-1 mRNA的表达,其作用优于秋水仙碱(P＜0.05).但中药预防组与中药治疗组之间,秋水仙碱预防组与秋水仙碱治疗组之间,差异无显著性(P＞0.05).结论 化浊解毒益气方可以减轻猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化,其作用可能与降低肝组织TGF-β1和TIMP-1 mRNA的表达有关.     

ROCK阻断剂Y27632干预大鼠实验性肝纤维化的分子机制研究

目的观察ROCK阻断剂Y27632对实验性大鼠肝纤维化形成过程中组织病理学、细胞外基质成分及肝星状细胞中RhoA、Vinculin mRNA和RhoA、MLC蛋白质表达的影响,探讨Y27632治疗实验性肝纤维化的分子机制。方法雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组动物给予60%四氯化碳0.1 mL/100 g皮下注射,2次/周,对照组给予等量的生理盐水皮下注射。治疗组从第4周起给予Y27632口服灌胃(30 mg/Kg),其余两组动物予以等量的生理盐水。于造模后第8周采集静脉血行放免法检测血清中PⅢP和Ⅳ型胶原的含量,取肝组织行组织病理学检查。另取雄性SD大鼠30只分为对照组(n=10)和模型组(n=20),模型组造模方法同前。分离培养肝星状细胞,采用模型组星状细胞充分伸展贴壁时(培养8~10 d)为干预时间,并将模型组进一步分为非干预组和干预组,干预组采用终浓度为50μmol/L的Y27632干预,非干预组加入等量的生理盐水,1 h后观察细胞形态,收集各组细胞以RT-PCR检测RhoA和Vinculin mRNA表达,Western blotting检测RhoA和MLC蛋白的表达。结果与模型组相比,给予Y27632后组织病理学显示治疗组肝纤维化程度明显减轻,血清中PⅢP和Ⅳ型胶原的含量显著下降。细胞学试验显示,非干预组RhoA、Vinculin mRNA和RhoA蛋白的表达较对照组明显增强,给予Y27632干预后表达强度减弱。而对照组大鼠肝组织中MLC蛋白质呈阳性表达,非干预组其表达强度明显下调,给予Y27632后表达强度有所增加。结论 Y27632能有效干预实验性大鼠肝纤维化的形成,其分子机制可能与其调控星状细胞中RhoA和MLC有关。     

软肝冲剂对CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1 mRNA表达的影响

研究软肝冲剂对CCl4肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA表达的影响,从分子水平探讨软肝冲剂促进肝细胞再生、阻止肝纤维化、肝硬化形成的作用机制.方法:采用Northern-blot方法检测CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1mRNA表达.结果:Northern-blot杂交显示,实验第45、90天,模型组、中药各组和西药秋水仙碱组大鼠肝脏TGFβ1 mRNA表达均较正常组增强(P＜0.01).但中药各组和西药秋水仙碱组TGFβ1 mRNA表达水平均低于模型组(P＜0.01).其中中药高剂量组TGFβ1 mRNA表达水平均低于中药低剂量组和西药秋水仙碱组(P＜0.01).结论:软肝冲剂能调节CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1mRNA表达,促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成.     

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的 探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法 随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型，Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化，免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达，SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果 与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比，造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD (0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD (0.23±0.01、0.2...     

飞天蜈蚣七对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1蛋白表达的影响

目的探讨飞天蜈蚣七防治肝纤维化的作用机制.方法CCl4法复制肝纤维化模型,48只SD大鼠随机分为飞天蜈蚣七组(A组)、秋水仙碱组(B组)、模型组(C组)和正常对照组(D组),每组12只.各组分别在第22、43天时,检测血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)含量;行肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)免疫组化染色,检测其蛋白表达.结果第22天时,与D组、A组比较,C组血清HA、PC-Ⅲ升高,TGF-β1阳性表达较强(P＜0.05),LN升高(P＞0.05);第43天时,与D组比较,C组血清HA、LN、PC-Ⅲ明显降低,肝组织TGF-β1阳性表达明显减轻(P＜0.05).结论飞天蜈蚣七可以减轻肝纤维化程度、抑制肝组织TGF-β1蛋白的表达,飞天蜈蚣七可作为抗肝纤维化的一种有效药物.     

灯盏花素干预大鼠肝星状细胞TGFβ1、α-SMA的表达

目的 研究灯盏花素对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠TGFβ1、α-SMA表达的研究.方法 本实验用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,喂服灯盏花素.60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、灯盏花素高剂量组、灯盏花素中剂量组、灯盏花素低剂量组、秋水仙碱组.用药4w后,测定肝纤维化模型大鼠的谷草转氨酶、谷丙转氨酶,检测平滑肌肌动蛋白mRNA和蛋白的表达,转化生长因子mRNA与蛋白的表达.结果 模型组大鼠血清ALT、AST明显高于正常对照组(P＜0.05).与模型组相比较,灯盏花素高、中、低剂量组ALT、AST均明显降低(P＜0.05).模型组与正常对照组α-SMA mRNA及蛋白有显著性差异(P＜0.01);灯盏花素不同剂量组均能使α-SMA mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.01).模型组与正常对照组TGFβ1 mRNA及蛋白有显著性差异(P＜0.01),灯盏花素不同剂量组均能使TGFβ1 mRNA及蛋白的表达显著降低(P＜0.01或P＜0.05).光镜显示:灯盏花素各剂量组的肝脏病理学改变较模型组减轻.结论 ①灯盏花素能保护肝细胞活性,促进肝细胞修复再生;降低转氨酶,具有抗肝纤维化作用.②灯盏花素可以降低α-SMA、TGFβ1表达,抑制星状细胞激活.     

kielin/chordin样蛋白在肝纤维化模型中的动态表达及骨形成蛋白-7干预后的表达变化

目的 观察kielin/chordin样蛋白(kcp)在肝纤维化小鼠模型中的动态表达及骨形成蛋白-7(BMP-7)干预对其表达的影响,探讨治疗肝纤维化的新靶点.方法 健康雄性ICR小鼠50只,分为正常对照组(10只)、模型组(30只)和BMP-7干预组(10只),模型组再按造模不同时间点分4、8、12周3个亚组,每组10只.模型组小鼠皮下注射四氯化碳制备肝纤维化小鼠模型,BMP-7干预组在造模后第8周开始腹腔注射人重组BMP-7,持续4周.造模后各组小鼠下腔静脉采血测定血清ALT、AST和Alb;肝组织经HE和Masson染色后光学显微镜下观察各组病理变化;采用RT-PCR、免疫组织化学和Western印迹法分别检测各组kcp mRNA及蛋白表达情况.各组间均数比较采用单因素方差分析.结果 模型组血清ALT、AST升高,A1b降低,12周时达峰值,BMP-7干预组有所缓解,各组间比较,差异有统计学意义(F值=23.501、34.600、16.244,均P＜0.05).正常对照组kcp mRNA和蛋白表达很低,模型组则逐渐升高,BMP-7干预组有所缓解,差异有统计学意义(F值=30.362、10.727,P＜0.01或0.05).kcp mRNA表达水平与转化生长因子β1( TGF-β1)、BMP-7 mRNA表达水平均呈正相关(r=0.760、0.769,均P＜0.05).结论 BMP-7能改善小鼠肝纤维化;kcp可能参与肝纤维化发生发展过程,有望成为肝纤维化治疗的新靶点.