金丝桃素、叶下珠、茵陈体外抗巨细胞病毒效应的比较

目的:探讨金丝桃素单体、苦味叶下珠水溶液浸出物、茵陈水溶性提取物体外抗人巨细胞病毒(HCMV AD169)的作用.方法:采用细胞病变(CPE)抑制法观察金丝桃素单体、苦味叶下珠水溶液浸出物、茵陈水溶性提取物对HCMV AD169毒株的抑制作用,使用MTT比色法检测细胞的损伤程度,并利用吸光度(A)值评价这三种中药抗HC...     

更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究

目的:探讨更昔洛韦体外抑制人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的作用方式.方法:根据病毒复制周期设计3种作用模式来观察更昔洛韦对HCMV的抑制作用:模式Ⅰ将病毒与细胞混合后,再加入药物;模式Ⅱ将药物与细胞混合后,再加入病毒;模式Ⅲ将药物与病毒混合后再加入细胞.通过观察细胞病变效应,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以确定该药物治疗指数.结果:更昔洛韦对人胚成纤维细胞半数中毒浓度(TC50)为1 685.23 mg/L.在模式Ⅰ中,更昔洛韦对HCMV半数抑制浓度(IC50)为35.255 mg/L,治疗指数为47.8;在模式Ⅱ和Ⅲ中,更昔洛韦对HCMV无明显抑制作用.结论:更昔洛韦对HCMV感染细胞后显示出显著的抑制作用,且随药物浓度的增加其作用逐渐增强,存在明显的量效关系.同时,体外实验显示,更昔洛韦对人胚成纤维细胞感染HCMV无预防作用.     

人巨细胞病毒对巨核细胞生长的影响及其反义寡核苷酸的抗病毒活性

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞的抑制作用及其机制,初步研究HCMV反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒感染作用。方法采用体外悬浮培养巨核系细胞,观察HCMV AD169株对巨核系祖细胞生长的影响。用流式细胞术检测HCMV感染巨核系细胞上HCMV pp65抗原的表达。用HCMV感染经ASON预处理的巨核细胞,计数存活巨核细胞数,用FACS检测巨核细胞上HCMV pp65蛋白表达,并用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果HCMV AD169株在体外能明显抑制巨核系祖细胞的增殖,悬浮培养第12天,与对照组相比,HCMV感染组的巨核细胞数减少了67.86%(P<0.05)。HCMV感染的巨核系细胞有HCMV pp65抗原的表达,其表达率为(24.5±3.1)%。0.08μmol/L的UL36反义寡核苷酸(UL36Anti)能对抗HCMV的作用,使巨核细胞数保持在未被感染时的水平,与HCMV感染组巨核细胞数比较有显著差异(P<0.05)。UL36Anti组巨核细胞上几乎无HCMV pp65蛋白的表达。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为90μmol/L。结论HCMV感染引起的血小板减少与其抑制巨核系祖细胞增殖有关。特异的ASON有一定的抗HCMV活性,有可能作为一种新的手段用于HCMV感染引起的血小板减少症的防治。     

复方黄芪颗粒抗人巨细胞病毒作用的临床及实验研究

目的:探讨复方黄芪颗粒抗人巨细胞病毒(HCMV)的临床疗效及体外抗病毒作用。方法:临床检测HCMV抗原,对其中诊断为HCMV阳性感染13例孕期患者采用复方黄芪颗粒口服治疗,疗程120~180 d;同时应用免疫酶组化染色法(EIA)和贝利婴幼儿发育量表等方法评价其临床疗效。体外实验研究采用MTT法在人胚肺(HEL)细胞培养中测定复方黄芪颗粒对HCMVAD169毒株的抑制作用。结果:13例孕期阳性感染者,服药120~180 d后,8例有效,有效率62%(8/13),其中4例完全转阴,转阴率为31%(4/13);7例孕妇治疗后分娩足月正常新生儿。体外实验研究结果表明复方黄芪颗粒半数有效浓度(IC50)为1.58μg/ml,半数中毒浓度(TD50)为13μg/ml,治疗指数(TI)为8,复方黄芪颗粒抗HCMV作用随药物浓度增高而增强。结论:中药复方黄芪颗粒是抗HCMV安全、有效的药物,此结果可为临床治疗HCMV活动性感染、尤其是孕期感染提供参考。     

荔枝核黄酮类化合物体外抗呼吸道合胞病毒的作用

目的: 探讨荔枝核黄酮类化合物体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用. 方法: 采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照,观察比较荔枝核黄酮类化合物对RSV引起的细胞病变(CPE)的抑制作用. 结果: 荔枝核黄酮类化合物半数中毒浓度(TC50)为152.9 mg/L,其抗RSV的半数有效浓度(IC50)为58.6 mg/L,治疗指数(TI)为2.6,体外抗RSV作用与病毒唑相当,且对RSV抑制作用存在明显的量效关系. 结论: 荔枝核黄酮类化合物在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用.     

HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究

目的 观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMV AD169株能跨种属感染MEF提供依据.方法 将100 TCID50 HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d 的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达.结果 观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMV AD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势.结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖.     

人巨细胞病毒感染新生乳鼠心肌细胞的实验研究

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)AD169株在体外感染SD大鼠新生乳鼠心肌细胞。方法以人巨细胞病毒感染SD大鼠新生乳鼠的心肌细胞,通过相差显微镜、间接免疫荧光观察感染后细胞病变、搏动情况,检测培养液中心肌酶的改变,及鉴定HCMV在心肌细胞内感染的状况。结果培养的SD大鼠新生乳鼠搏动心肌细胞感染HCMV后,细胞逐步出现病变,细胞停止搏动,HCMVpp65蛋白免疫荧光等检测亦为阳性。结论HCMV AD169株可能具有感染SD大鼠乳鼠心肌细胞的能力。     

盐酸阿比朵尔抗呼吸道合胞病毒机制初探

目的:明确盐酸阿比朵尔抗吸道合胞病毒(RSV)Long株的活性并探讨其抗病毒机制。方法:通过细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,观察盐酸阿比朵尔抗RSV的作用。结果:盐酸阿比朵尔的半数毒性浓度(TD50)为85.39 mg/L,当该药浓度为25 mg/L时,药物抗病毒生物合成组、药物直接作用组、药物抗吸附4 h组、药物抗病毒吸附8 h组的病毒抑制率分别能达到81.61%,79.57%,40.39%和78.60%。4组相应的药物半数有效浓度(ED50)为11.52,8.74,25.36和10.40 mg/L。结论:盐酸阿比朵尔在体外能明显抑制RSV引起的CPE效应,病毒抑制率随药物浓度的增加而增高,盐酸阿比朵尔能通过多种途径发挥抗RSV的作用。     

荔枝核黄酮体外抗单纯疱疹病毒的作用

目的:探讨荔枝核黄酮类提取物(FLC)体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用。方法:以阿昔洛韦为阳性药物对照,以不同剂量的荔枝核黄酮类提取物分别作用于HSV-1病毒复制周期的各个环节分成3个实验组,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变效应(CPE)、MTT染色细胞存活率(MTT法)作为评价指标,判断的FLC抗病毒效果。结果:FLC对HEp-2细胞的半数细胞毒浓度(TC50)为239.25 mg/L,FLC对HSV-1病毒有直接杀伤作用和抗HSV-1生物合成作用,其直接杀伤HSV-1的半数有效浓度(IC50)为32.76 mg/L,治疗指数(TI)为7.30,抗HSV-1生物合成作用的半数有效浓度(IC50)为12.72 mg/L,治疗指数(TI)为18.81。结论:荔枝核黄酮类化合物在HEp-2细胞中对单纯疱疹病毒1型有明显抑制作用。     

黄芩主要成分体外抗甲型流感病毒作用的研究

目的比较黄芩的主要成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素体外抗甲型流感病毒FM1感染的作用,明确黄芩抗流感病毒的主要有效成分。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对狗肾细胞株(MDCK)的最大无毒浓度(TC0)及半数中毒浓度(TC50),通过细胞病变效应(CPE)法观察药物对病毒致细胞病变作用的影响。MTT法检测药物不同浓度的抗病毒有效率,Probit回归法计算黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对病毒感染的半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),荧光法检测黄芩苷对病毒神经氨酸酶活力的影响。结果黄芩苷对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,当黄芩苷浓度在0.0156～0.1250g/L时,细胞存活率明显高于病毒感染组,其中以0.1250g/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达94.6%,其IC50为0.0162g/L,TI为21.34;黄芩素对流感病毒所致的细胞病变有一定的抑制作用,当黄芩素浓度在0.0860g/L时,抗病毒有效率达48.72%,其IC50为0.0778g/L,TI为8.89;汉黄芩素对流感病毒所致的细胞病变无抑制作用,其IC50为0.0236g/L,TI为0.051。当黄芩苷浓度?0.0313g/L时,能明显降低病毒神经氨酸酶的活力。结论黄芩主要成分中抗流感病毒的作用为黄芩苷黄芩素汉黄芩素,说明黄芩抗流感病毒的主要有效成分是黄芩苷。     

两种不同属源巨细胞病毒对树鼩肝细胞易感性的研究

目的研究不同属源巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）株对树鼩原代肝细胞的易感性。方法分离培养树鼩原代肝细胞,利用感染剂量MOI为1的小鼠CMV（MCMV）Smith和人源性CMV（HCMV）AD169病毒株感染肝细胞,同时设立非病毒感染组（即空白对照组）,间接免疫荧光法检测肝细胞内及周边PP65蛋白表达。RT-PCR法检测培养肝细胞内MCMVSmithM152和HCMVAD169UL49mRNA。结果间接免疫荧光法可以观察到HCMVAD169组肝细胞内外均有PP65蛋白表达,提示病毒复制旺盛,而MCMVSmith组和非病毒感染组则显示PP65抗原不表达,RT-PCR结果确证树鼩肝细胞内有HCMVAD169UL49mRNA表达,未显示MCMVSmithM152mRNA表达,而非病毒感染组UL49和M152mRNA均不表达。结论HCMVAD169能感染体外培养的树鼩原代肝细胞,而MCMVSmith则不能。     

益气解毒祛瘀法对巨细胞病毒感染大鼠血液流变学的影响

为了探讨动脉硬化性闭塞症与人巨细胞病毒感染的关系 ,应用益气解毒祛瘀法 (四妙汤加味 )对感染人巨细胞病毒的大鼠模型进行中药治疗 ,并对血液流变学指标进行检测 ,结果表明人巨细胞病毒感染可引起易栓倾向及血液流变学改变 ,属血瘀证表现。用益气解毒祛瘀法可改善血液循环 ,降低血液黏度 ,防止人巨细胞病毒感染导致血管内皮损伤 ,抑制动脉粥样硬化形成。益气解毒祛瘀法也适于治疗动脉硬化性闭塞症     

人巨细胞病毒体外感染对外周血单个核细胞的趋化功能

目的: 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)体外感染对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的趋化功能,及地塞米松对病毒趋化作用的影响。方法: 将HCMV AD169株稀释成梯度半数组织培养感染量(tissue culture infective dose,TCID50),即5、10、20、40、60、80、100、1 000 TCID50,分别感染人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF),培养24,48,72,96 h后提取上清液,趋化PBMC,于倒置显微镜高倍镜下观察并计数被趋化的PBMC,比较趋化作用的强弱;同时用不同质量浓度的地塞米松(0.125,1.25,12.5,25,50,100 μg/mL)感染HELF,观察其对HCMV感染上清介导的PBMC趋化作用的影响,0 μg/mL作为对照。结果： 5 TCID50与10 TCID50 之间,80TCID50与1 00 TCID50之间,1 00 TCID50与1 000 TCID50之间,培养24,48,72,96 h时趋化作用差异均无统计学意义(P均>0.05)。10 TCID50与20 TCID50之间,20 TCID50与40 TCID50之间,培养24,48,72 h时趋化作用差异均无统计学意义(P均>0.05)。同一浓度病毒,培养24 h与48 h之间趋化作用差异均无统计学意义(P均>0.05),培养48 h与96 h之间,72 h与96 h之间趋化作用差异均有统计学意义(P均<0.05)。与对照组(0μg/mL)比较,1.25 μg/mL和12.5 μg/mL地塞米松对HCMV感染上清介导的PBMC趋化作用无明显影响(P均>0.05),其余质量浓度差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论： HCMV感染HELF后的培养上清具有趋化PBMC的功能,在一定质量浓度范围内,随着时间的延长趋化作用增强。地塞米松体外能够抑制病毒的趋化作用,且对PBMC的趋化抑制作用随着质量浓度的增加而增强。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的：探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染昆明小鼠的敏感性，建立HCMV致畸的动物模型。方法：昆明系小鼠40只，随机分为两组：对照组(8只)和接种病毒组(32只)，病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒7，15，30，60d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点，以免疫组织化学方法检查病毒抗原，PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果：接种HCMV AD169株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形，用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论：HCMV ADl69株可引起小鼠脑部发育畸形，这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据。     

Effect of Human Cytomegalovirus Infection on Nerve Growth Factor Expression in Human Glioma U251 Cells

Objective To explore the change of endogenic nerve growth factor （NGF） expression in human glioma cells infected with human cytomegalovirus （HCMV）. Methods U251 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium and infected with HCMV AD 169 strain in vitro to establish a cell model of viral infection. Morphologic changes of U251 cells were observed under inverted microscope before and after infection with HCMV. Expression of NGF gene and protein of cells was detected by RT-PCR and Western blotting before and after infection with HCMV. Results The cytopathic effects of HCMV-infected cells appeared on day 5 after infection. However, differential NGF expression was evident on day 7. NGF expression was decreased significantly in U251 cells on day 7 after infection in comparison with control group （P〈0.05）. Conclusion HCMV can down-regulate endogenous NGF levels in human glioma cell line U251.     

地塞米松、二甲亚砜及低速离心对人巨细胞病毒复制的影响

本文报道低速离心、地塞米松和二甲亚砜对人类巨细胞病毒AD_(169)株在人胚肺细胞上增殖的影响。结果表明本法能使人类巨细胞病毒的细胞病变分别提前2～3天。地塞米松能增加人类巨细胞病毒AD_(169)株在人胚肺细胞上空斑形成能力约3倍。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 ,这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据