CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究

①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.     

CD3 AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的：探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA（植物血凝素）共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2 t PHA共刺激法诱生LAK细胞。观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测量CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果：微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞（P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞（P<0.05)。结论：CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强,是更为有效的杀瘤效应细胞。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞全外增殖和杀瘤活性比较

目的：比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞（MtbAK）、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性。方法：分别和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞（PBMC）,在含rIL-2的RPMI1640培养液中诱导扩增MtbAK、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδT细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性。结果：与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性。结论：MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

目的:比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞(Mtb AK)、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性.方法:分别用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),在含rIL-2的RPMI 1640培养液中诱导扩增MtbAk、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδ T细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性.结果:与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性.结论:MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗.     

原发性卵巢癌患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了3例原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）和人早幼粒细胞白血病细胞系（HL60）的杀伤活性。结果表明：LAK细胞在培养第1～3周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性略高于对3AO的杀伤活性，但差异无显著性（P＞0．05）；CD3AK细胞在培养第1周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性均显著高于对3AO的杀伤活性（P＜0．05），而培养第2、3、4周时，对HL60和3AO的杀伤活性无显著区别（P＞0．05）。提示：LAK细胞和CD3AK细胞均缺乏杀瘤特异性，而CD3AK细胞具有一定的靶细胞选择性。     

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较CD3AK细胞和LAK细胞的杀瘤特性，观察了妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性。结果表明：良性肿瘤组LAK细胞杀瘤活性高峰在培养第1、2周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05，P＜0．01），第3周则较低，而CD3AK细胞的杀瘤活性高峰在培养第3、4周，显著高于LAK细胞（P＜0．05）；恶性肿瘤组，LAK细胞杀瘤高峰在培养第1周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05），而CD3AK细胞杀瘤高峰在培养第2、3周，显著高于同期培养的LAK细胞（P＜0．05）。提示：妇科恶性肿瘤组LAK细胞和CD3AK细胞杀瘤活性高峰均较妇科良性肿瘤早1周左右；CD3AK细胞杀瘤活性高峰较LAK细胞延迟1～2周。说明CD3AK和LAK细胞的杀瘤活性在不同培养阶段表现不同，LAK细胞宜短期培养，CD3AK细胞宜长期培养。     

鼻咽癌患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞体外增殖及杀瘤活性

目的 研究鼻咽癌患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的增殖能力、对鼻咽癌细胞株HONE1的细胞毒作用,寻求鼻咽癌过继免疫治疗的新途径。方法 提取24例鼻咽患者外周血单个核细胞,用IFN-γ、抗CD3mAb、IL-2和IL-1β共同培养诱导CIK细胞,计数不同时间点的细胞数,用MTT法检测细胞对鼻咽癌细胞株HONE1的杀伤活性,用ELISA法测定CIK细胞分泌种细胞因子的水平,同时培养CD3AK细胞和LAK细胞,与CIK细胞在增殖和杀瘤活性上进行比较。资料用SPSS13.0软件进行分析,P＜0.05为统计有差异性。结果 鼻咽癌患者CIK细胞表现出很强的体外增值活性及杀瘤活性,与CD3AK细胞和LAK细胞相比,其增殖活性和对鼻咽癌细胞株HONE1的杀伤活性均明显提高（P＜0.05）,且与正常人自体CIK细胞相比无明显差别（P＞0.1）。结论 鼻咽癌患者CIK细胞体外增殖能力和杀瘤活性明显优于CD3AK和LAK细胞,为鼻咽癌患者的临床过继免疫治疗提供了一种新的有效地治疗手段。     

抗CD3单克隆抗体、rIL-2协同活化PBMC抗人脑胶质瘤的体外实验研究

目的探讨抗CD3单克隆抗体活化杀伤细胞(aCD3AK)体外抗脑胶质瘤的机制.方法采用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和重组白细胞介素2(rIL-2)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)而获aCD3AK.对比aCD3AK与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在增殖动力学、抗脑胶质瘤活性等方面的差别,并测定aCD3AK抗脑胶质瘤的适宜效靶比和最佳培养时段.结果aACD3AK的增殖倍数明显高于LAK及TIL(均P<0.05),抗脑胶质瘤细胞活性优于LAK,但与TIL比较,差异无统计学意义(P>0.05),抗脑胶质瘤适宜效靶比为201,培养至第7～10天活性最强.结论aCD3AK作为一种新型抗人脑胶质瘤免疫细胞,具有抗脑胶质瘤活性强,前体来源广泛、诱导简易等优势,值得深入研究.     

CD_3AK细胞加IL-2治疗恶性肿瘤体外与临床应用研究

CD3AK细胞在体外对体外癌细胞系细胞杀伤活性最强，对自体癌细胞杀伤活性与TIL细胞接近，且均显著大于LAK细胞．CD3AK细胞IL－2治疗癌症患者30例中，CR＋PR14例，有效率为46％．Kernofsky的生活质量标准评分治疗后有显著提高（P＜0．01）．血浆IL－2活性治疗后有明显提高（P＜0．05）．T4／T6治疗后有所提高．     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

目的：比较四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备LAK细胞，并与临床常用的外周血、胎脾及胸腺LAK细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果：脐带血的扩增能力显著高于其余3种LAK细胞（P＜0．01），每份脐带血LAK细胞总数可增殖至2．5×1010；抗肿瘤活性以脐带血LAK对SMMC-7221肝癌细胞出现最早（第3d）、活性最强（85％±3％），明显强于其余三者（P＜o．01）；对K562的杀伤作用仍属脐带血LAK最强；而胸腺LAK的活性最弱。结论：脐带血LAK细胞体外增殖快，杀伤活性强，可用于肿瘤的过继性免疫治疗。     

CD3AK细胞和LAK细胞的表型测定

用抗ＣＤ＿３抗体和低剂量ＩＬ－２以及单独用高剂量ＩＬ－２分别诱生正常鼠、免疫鼠脾细胞为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞。用间接免疫荧光法和微云细胞毒实验两种方法测定培养４ｄ和９ｄ的细胞表型。结果：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率均高于诱生前正常鼠脾细胞（Ｐ＜０．０１）。正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞中，ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ与正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ的表型相似，而免疫鼠ＬＡＫ细胞的ＣＤ＿８阳性细胞率显著增加，明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

人参皂甙与LAK细胞联合治疗恶性脑胶质瘤的实验研究

目的：探索提高恶性脑胶质瘤治疗效果的新途径。方法：用人参皂甙（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ,ＧＳ）与白细胞介素２（ＩＬ－２）协同诱导人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）制成ＧＣ－ＬＡＫ细胞,用ＭＴＴ法测定其对恶性脑胶质瘤细胞（ＢＴ３２５）的杀伤活性,并与ＬＡＫ细胞相比较;结果：效应细胞ＧＳ－ＬＡＫ在增殖数量和杀伤恶性脑胶质瘤细胞活性等方面均优于ＬＡＫ细胞,且ＩＬ－２用量减少;     

CD_3AK的制备及杀瘤作用观察

目的：观察CD_3AK抗CD3单克隆抗体）的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和／或IL-2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果：CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论：由于CD3AK较LAK对IL-2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。     

小鼠CD_3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能在小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对照组比较有显著差异。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的体内外抗肿瘤作用     

CD3AK细胞治疗头颈部恶性肿瘤的近期疗效观察*

目的:观察CD3AK在头颈部恶性肿瘤的综合治疗中的效果.方法:81例头颈部恶性肿瘤分成CD3AK治疗组(n＝42)和对照组(n＝39),治疗组有术前、术后单用CD3AK细胞治疗,亦有术前化疗加用CD3AK细胞治疗;对照组有术前、术后单用LAK细胞治疗,有术前单用化疗.治疗前后检查肿瘤缩小情况,并检测外周血T细胞亚群和血清可溶性白细胞介素2受体水平.结果:CD3AK对舌癌的治疗效果最好,治疗组与对照组比较有显著性差异(P＜0.01);其次为喉癌与甲状腺癌,与对照组相比,有显著性差异(P＜0.05);再次为腮腺腺癌.各项免疫指标:CD3、CD4、CD8及CD4/CD8均有不同程度的提高;sIL-2R水平有所下降.结论:CD3AK细胞治疗作为新的肿瘤过继免疫治疗,在头颈部恶性肿瘤的综合治疗中,毒副反应较少,疗效满意,有很好的推广前景.     

Experimental studies on the antitumor activity of glioma-infiltrating lymphocytes against autologous glioma]

In the present study, antitumor activity of glioma-infiltrating lymphocytes (GILs) was compared to that of lymphokine-activated killer (LAK) cells. Results suggested that killing activity of GILs against autologous glioma cells was significantly higher than that of LAK cells (P less than 0.05), but their activity against allogeneic glioma cells was not different from that of LAK cells (P greater than 0.05). Analysis of cell surface phenotypes showed that CD4+ cells were a main portion of LAK cells, and CD8+ were predominant in the GILs. In the beginning, growth of GILs was slower than that of LAK cells. As time went on, generation of GILs was faster than that of LAK cells. The results suggested that GILs were superior to LAK cells for adoptive immunotherapy in patients with brain glioma.     

CD3AK细胞联合BCG对膀胱癌细胞的体外杀伤活性研究

目的探讨CD3AK细胞对膀胱癌细胞的体外杀伤活性,以及CD3AK细胞与BCG联合作用于膀胱癌细胞的效应.方法采用抗CD3单抗和IL-2共同刺激健康人外周血单个核细胞诱导出CD,AK细胞;以流式细胞仪测定细胞表型;用MTT法测定CD,AK以及CDaAK联合BCG对膀胱癌细胞系(T24)的杀伤活性.结果CD3AK细胞为异质细质细胞群,其细胞类型主要是CD8 细胞;在效靶比为10:1及20:1时,培养4 d的CD:,AK细胞BCG联合作用于T24细胞的杀伤率高于二者分别对T24细胞的杀伤率.结论CD3AK细胞是一种高效的抗肿瘤效应细胞,对膀胱癌细胞具有较强的杀伤作用;CD3AK细胞与BCG对膀胱细胞呈协同杀伤作用.CD3AK细胞在膀胱癌过继免疫治疗中具有重要的临床应用前景.     

静注CD_3AK细胞治疗晚期肝癌的初步观察

用培养７ｄ以上的ＣＤ３单抗激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）加ｒＩＬ－２静注治疗晚期肝癌２１例，其中ＣＲ１例，ＰＲ５例，临床有效率以ＣＲ＋ＰＲ计为２８．９％，明显高于ＬＡＫ细胞抗肝癌疗效。治疗后大多数病人临床症状改善，生活质量提高，外周血ＣＤ３＋、ＣＤ４＋升高，ＣＤ８＋下降，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋升高，统计学检验均有显著差异。患者血清ＳＩＬ－２Ｒ水平明显降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：静脉注射ＣＤ３ＡＫ细胞可以降低肝癌患者机体瘤负荷，增强机体免疫力，从而对晚期肝癌产生较好的治疗效果。