新型多孔HA/PDLLA支架体外细胞相容性的实验研究

目的:研究新型多孔羟基磷灰石/聚乳酸(HA/PDLLA)支架材料的体外细胞相容性。方法:贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),经体外矿化诱导培养、扩增后,与实验组 A(含2%HA 的 HA/PDLLA)、实验组 B(含4%HA 的 HA/PDLLA)及对照组(PDLLA)分别进行体外复合培养;并通过定性及定量检测细胞在材料表面的粘附能力、增殖活力,验证细胞材料复合体的成骨活性,比较分析各组支架材料之间的差异。结果:兔 BMSCs在三组支架材料的表面均能生长,经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节,实验组 A 与 B 细胞的粘附及增殖能力均强于对照组(P<0.05)。结论:兔 BMSCs 与新型多孔 HA/PDLLA 支架材料有良好的细胞相容性。     

PLA-PEG复合支架材料体外细胞相容性的实验研究

目的:探索新型PLA-PEG(polylactic acid-polyethylene glycol block copolymers)复合支架材料体外细胞相容性。方法:支架材料分为实验组A(PEG/PLA为16∶0)、实验组B(PEG/PLA为13∶0)、对照组C,单纯聚乳酸(polylacticacid,PLA)。贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),诱导生成成骨细胞,接种于支架材料上。通过观察种子细胞在支架材料上的吸附迁移、生长增殖情况,验证各组细胞材料复合体的成骨活性,比较分析不同支架材料之间的差异。结果:兔成骨细胞在新型PLA-PEG三维支架材料表面分布较为均匀,生物学行为活跃。实验组A与B的细胞粘附及增殖能力均强于对照组(P<0.05)。结论:三种支架均具有较好的细胞相容性,但实验组A与B的细胞相容性更好,更适宜作为支架材料与成骨细胞共同培养,以获得具有成骨能力的三维立体结构组织工程骨。     

新型多孔磷酸钙复合骨髓基质干细胞组织工程实验研究

目的观察新型生物材料多孔磷酸钙的生物相容性及复合骨髓基质干细胞（BMSCs）异位成骨情况。方法体外培养第2代Beagle犬BMSCs,转染绿色荧光蛋白（GFP）后与多孔磷酸钙（CPC）复合培养,获得最佳复合浓度,倒置和荧光显微镜、扫描电镜下观察BMSCs黏附和生长情况,复合体植入裸鼠皮下8周观察异位成骨。结果BMSCs转染GFP与多孔CPC复合培养1 d,细胞从材料中爬出,形态正常,7 d可见细胞伸出伪足,分泌基质;复合体可异位成骨。结论多孔CPC生物相容性好,是一种较理想的骨组织工程支架材料。     

组织工程化骨髓基质细胞与新型多孔支架材料复合体的体外研究

目的 探讨新型多孔支架材料3-羟基丁酸-co-3-羟基戊酸共聚物/溶胶-凝胶生物活性玻璃(PHBV/SGBG)对狗骨髓基质细胞(BMSCs)生物学功能的影响.方法 采用体外培养技术,将狗BMSCs与PHBV/SGBG支架材料在体外复合培养,通过扫描电镜观察狗BMSCs在PHBV/SGBG材料中的生长情况,用MTT法、碱性磷酸酶活性检测法检测PHBV/SGBG对狗BMSCs增殖、分化的影响.结果 狗BMSCs可紧密附着于材料表面,黏附生长、增殖,并有突起向材料的连通微孔内伸展.复合培养3、6 d,PHBV/SGBG对狗BMSCs的增殖、分化表现出一定的促进作用.结论 BMSCs与PHBV/SGBG支架材料复合体具有良好的生物学功能,有望应用于牙周组织工程学.     

两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性研究

目的 对比研究采用同样原料但以不同方法制备的两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性。方法 溶胶－凝胶法制备A/W生物活性微晶玻璃（4006材料）,熔融法制备多孔生物活性玻璃（45S5材料）。体外诱导分离培养及鉴定兔骨髓基质细胞（BMSCs）,通过材料浸提液细胞毒性实验（MTT法）、细胞黏附实验、倒置相差显微镜、扫描电镜和环境扫描电镜比较4006材料和45S5材料对BMSCs细胞黏附和生长的影响,并探索与材料复合的最佳BMSCs细胞悬液浓度。结果 4006材料浸提液培养1 d时,其细胞活力与纯培养液间无统计学差异（P>0.05）;但培养3 d后,其细胞活力低于纯培养液（P<0.01）。45S5材料浸提液培养的细胞活力明显低于纯培养液（P<0.01）。细胞与材料复合培养后,镜下见BMSCs在4006材料孔隙内贴壁生长良好,分泌基质活跃;而在45S5材料上细胞黏附生长较差。BMSCs与4006材料的黏附量随接种细胞浓度升高而升高,细胞悬液浓度为2×10⁷个•mL^-1时的细胞黏附量最高。结论 溶胶－凝胶法制备的A/W生物活性微晶玻璃具有良好的生物活性和细胞相容性,具有作为骨组织工程支架材料的潜能。与其复合的细胞悬液浓度需要2×107 个•mL-1或以上。     

多孔支架材料PLGA/HA生物相容性的实验研究

目的:探讨多孔支架材料聚乳酸羟基乙酸/羟基磷灰石(poly lactic-glycolic acid/hydroxyapatite,PLGA/HA)的生物相容性。方法:贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),经体外诱导、扩增,采用实验组A:PLGA/HA(5%HA)、实验组B:PLGA/HA(10%HA)的梯度浸提液进行体外培养,应用MTT法评估材料的细胞毒性;BMSCs与实验组A、实验组B、对照组C(polylactic-glycolicacid,PLGA)进行体外复合培养,通过定性及定量检测细胞在材料表面的粘附、增殖能力及成骨活性,比较分析各组支架材料之间的差异。结果:两实验组材料的细胞毒性均为0或1级;BMSCs能在实验组和对照组支架材料上粘附、增殖,且两实验组与对照组在各时间点有显著性差异(P<0.01)。碱性磷酸酶活性各时间点在两实验组间无明显差异。结论:多孔支架材料PLGA/HA(5%HA)、PLGA/HA(10%HA)具有良好的生物相容性,有可能应用于骨组织工程。     

多孔纳米钙磷陶瓷支架材料生物相容性评价

目的评价多孔纳米钙磷陶瓷支架材料的生物相容性。方法将多孔纳米磷酸钙陶瓷材料制成浸提液、混悬液、5 mm×5 mm×1 mm块状等体系,选择健康新西兰兔、昆明小鼠、SD大鼠为宿主,采用溶血试验、凝血试验、急性毒性试验、热原试验、肌内降解来对其生物相容性进行评价。结果材料对新鲜兔血的溶血度为1.1%,小于5%,在允许范围内;血浆中凝血酶原时间、部分凝血活酶凝固时间、凝血酶凝固时间、纤维蛋白原4项指标结果无异常;热原试验显示实验组体温升高分别为0.35、0.40、0.28 ℃,均小于0.60 ℃,符合生物医学材料无热原的评价标准;急性毒性试验后小鼠无死亡,未观察到步态不稳、惊厥、瘫痪、呼吸困难等不良反应;肌内埋植后观察见新生纤维组织形成。结论该陶瓷材料是一种安全无毒、无溶血性、对皮肤和肌肉无刺激作用、不含热原物质的组织工程支架材料,其生物相容性良好,具有比普通钙磷陶瓷支架材料更好的降解性能。     

磷酸钙钠/β-磷酸三钙陶瓷支架接种骨髓基质细胞成骨性能的研究

目的：观察磷酸钙钠／β-磷酸三钙(NaCaPO2/β-TCP)支架接种骨髓基质细胞后植入裸鼠皮下的成骨性能。方法：通过理化方法,将煅烧牛松质骨转化为NaCaPO2/β-TCP双相钙磷陶瓷。获取兔髂骨松质骨骨髓基质细胞,体外分离、扩增、诱导后,接种于NaCaPO2/β-TCP支架。将支架／细胞复合物植入裸鼠背部皮下,NaCaPO2/β-TCP陶瓷单纯植入作为对照。植入后4、8周取材,通过大体、组织学观察,评价成骨活性。结果：支架／细胞复合物植入后4周,材料表面见相对较成熟的骨组织,内部主要为软骨;植入后8周,大量骨小梁形成。可见骨髓腔、骨髓细胞及脂肪细胞,在支架材料和骨组织的邻接区域见成骨细胞及破骨细胞。可见软骨内成骨方式。结论：NaCaPO2/β-TCP支架接种骨髓基质细胞后显示良好的成骨活性,能够促进未成熟骨矿化,可以作为骨组织工程支架材料。     

新型聚乳酸复合支架材料在组织工程骨构建中的实验研究

目的:探索新型聚乳酸复合支架材料对兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)生物学行为的影响及组织工程骨的构建方法。方法:实验组选择兔骨 MSC 诱导生成成骨细胞,接种于改良型聚乳酸复合新材料,包括新型聚乳酸(polylactic acid,PLA)、聚乳酸-乙醇酸共聚物(polylactide-co-glycolide,PLGA)、聚乳酸-乙二醇共聚物(polylactic acid-polyethylene glycol block copolymers,PLA-PEG)复合制作的三维支架中培养,用无机材料磷酸三钙(tricalcium phosphate,TCP)作为对照组,观察种子细胞在支架材料上的吸附迁移、生长增殖情况。结果:成骨细胞在新型三维支架材料表面分布较为均匀,生物学行为活跃。结论:可以通过 MSC 诱导获得成骨细胞。PLA、PLGA、PLA-PEG、TCP 具有良好的生物相容性,可作为支架材料与成骨细胞共同培养,获得具有成骨能力的三维立体结构组织工程骨。     

鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷支架负载骨髓基质细胞异位成骨性能研究

目的：观察鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷复合骨髓基质细胞后植入裸鼠皮下的成骨性能。方法：获取兔髂骨松质骨骨髓基质细胞，体外分离、扩增、诱导后接种于多相钙磷陶瓷支架。支架／细胞复合物植入裸鼠背部皮下，单纯支架材料植入作为对照。植入后4周、8周取材，通过大体、组织学观察评价成骨活性。结果：支架／细胞复合物植入后4周，新骨主要以软骨为主，部分区域见少量成熟骨，可见软骨内成骨方式。植入后8周，材料表面和孔隙内有更多的成熟骨形成，部分区域有血管和多核巨细胞分布。结论：支架／细胞复合物显示良好的成骨活性，鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷可以用于骨组织工程支架材料。     

磷酸三钙与珊瑚羟磷灰石细胞相容性的实验研究

目的　探讨磷酸三钙 (TCP)、珊瑚羟磷灰石 (CHA)与骨髓基质细胞的生物相容性 ,为用组织工程方法修复牙周组织缺损提供依据。方法　将骨髓基质细胞分别与TCP、CHA复合体外培养 ,进行形态学观察、细胞增殖、矿化能力测定。结果　骨髓基质细胞能在TCP、CHA上贴附、生长 ,其增殖功能不受影响 ,矿化能力亦无明显变化。结论　TCP、CHA具有良好的生物相容性 ,可作为骨髓基质细胞的载体应用于牙周组织工程研究。     

犬自体血清培养骨髓基质细胞的实验研究

目的:探讨犬自体血清培养骨髓基质细胞的可行性方法:获取犬自体血清,配制成含10%和20%自体血清的培养液,与含10%胎牛血清的培养液在相同条件下培养犬骨髓基质细胞(BMSCs)。通过倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数以及MTT法对细胞增殖情况进行检测。并且对第2代细胞用3种不同血清成分培养液(均加入β-甘油磷酸钠、抗坏血酸及地塞米松)进行成骨诱导分化,采用免疫组化检测碱性磷酸酶及钙结节形成。对检测到的量化数据做统计学分析,比较各组间的差异,以评价不同血清成分培养液对细胞增殖分化的影响。结果:3组细胞的生长及形态无明显差别,经过诱导培养均能形成钙结节。对3组间量化检测做统计学分析,各组间差异无统计学意义。结论:制备的犬自体血清能完全替代胎牛血清对骨髓基质细胞进行诱导培养。     

新型骨替代材料硫酸钙／磷酸钙的生物相容性研究

目的：通过两种不同比例骨替代材料硫酸钙，磷酸钙的生物相容性实验，为寻找一种更为合理的新型骨替代材料提供依据。方法：对两种不同比例复合的材料进行体外溶血实验、急性毒性实验和热原实验。结果：硫酸钙含量为20％和40％的复合材料硫酸钙，磷酸钙浸提液对健康兔血红细胞溶血率分别为2．66％和4．73％，均小于溶血标准的5％，可认为无溶血现象。两种材料浸提液注入小鼠未引起急性毒性反应及热原反应。结论：两种不同比例的硫酸钙，磷酸钙新型骨替代材料的生物相容性，均符合国际及国内相关规定的体内植入生物材料标准。     

成骨细胞超低温冻存前后生物学功能变化的研究

目的 观察超低温（液氮,-196 ℃）冻存对幼兔骨髓来源的成骨细胞体外培养的生长特性和生物学功能的影响。方法 自幼兔骨髓获取基质干细胞,体外诱导分化并培养 扩增,部分细胞进行液氮冻存,对冻存前后细胞的形态变化、增殖情况、克隆形成率、碱性磷酸酶（ALP）的合成能力、蛋白质合成能力及体外矿化能力进行对比观察,综合比较低温冻存对细胞功能的影响。结果 冻存复苏细胞的增殖有一定的时间延后性,其大体形态与冻存前基本一致,超微结构略有变化;复苏细胞仍保持典型的成熟成骨细胞的特征,具有较强的合成ALP及蛋白质的能力,两组细胞无统计学差异（P>0.05）;复苏细胞的体外矿化能力无明显变化。结论 超低温保存成骨细胞对其
生物学功能影响甚微,利用复苏细胞进行骨组织工程方面的研究是可行的。     

可注射壳聚糖水凝胶复合犬骨髓基质细胞在裸鼠体内的组织学观察

目的：研究壳聚糖水凝胶（Chitosan,CS）-犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）复合物体内异位成骨能力,探讨其作为可注射组织工程骨的可能性。方法：利用密度梯度离心法获得犬BMSCs,含10%胎牛血清的L-DMEM培养液进行原代培养并进行成骨诱导培养。合成壳聚糖温敏水凝胶,以5×106/mL的终细胞密度悬浮BMSCs,将注射于裸鼠背部皮下,8周后取材,行大体观察、组织学检查、免疫组化染色观测骨组织的形成情况。结果：BMSCs/CS复合物于裸鼠皮下形成质地较硬的结节,组织学及免疫组化结果证实有骨样结构形成,单纯CS凝胶无骨样结构形成。结论：BMSCs与CS水凝胶可以分别作为种子细胞和支架载体构建可注射的骨组织。