锌影响镉对人未成熟树突状细胞毒性作用

目的探讨锌对镉诱导的人未成熟树突状细胞(iDC)毒性的影响。方法分离人周围血单核细胞(PBMC)并诱导为iDC后,分组给予生理氯化钠溶液(对照组)、氯化镉(CdCl2组)、硫酸锌(ZnSO4组)、锌预处理后加氯化镉(Zn+Cd组)、锌离子特异性螯合剂(TPEN)预处理后加氯化镉(TPEN+Cd组)处理。噻唑蓝(MTT)颜色反应法检测细胞活力;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA链断裂损伤;吖啶橙(AO)与碘化丙啶(PI)核双染观察细胞凋亡并通过流式细胞仪检测凋亡细胞中染色体断裂的亚二倍体(SubG1)。结果 CdCl2组iDC活力抑制率随CdCl2呈剂量依赖性显著增高(P<0.05);与ZnSO4组或CdCl2组相比,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞活力抑制率明显升高(P<0.05);相同CdCl2剂量(20μmol/L)时,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞的彗星尾长和尾矩明显增大(P<0.05);各处理组出现凋亡细胞核染色和SubG1阳性细胞比例明显增加。结论镉化合物暴露导致iDC活力降低,其诱导的细胞毒性明显高于锌;细胞内锌稳态干预可增加镉介导的iDC内DNA损伤相关的毒作用敏感性。     

三氯乙烯对未成熟人树突状细胞的毒性作用

目的探讨三氯乙烯(TCE)对体外诱导人未成熟树突状细胞(iDC)的细胞毒性作用。方法免疫磁珠分离人外周血单核细胞,应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素-4(rhIL-4)诱导获得iDC,细胞形态学观察和流式细胞仪(FACS)检测细胞表面标记鉴定。给予TCE处理进行剂量-效应和时间-效应分析,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞存活率。结果诱导获得的iDC呈悬浮状态,部分细胞聚集成簇,大部分细胞呈圆形,部分细胞的胞浆存在少量不明显的毛刺样树突伸出。细胞表面标志分子表达阳性率CD14为0.35%,CD1a为85.82%,HLA-DR为50.34%,CD40为23.20%,CD80为9.65%,CD83为25.73%,CD86为33.67%,获得的细胞具有iDC的特征性表型。TCE不同剂量(0.5、1.0、5.0、10.0 mmol/L)处理组随作用剂量增加,细胞数呈不同程度减少,细胞皱缩现象逐渐增多,原本成簇的iDC随TCE作用剂量的增加而逐渐变松散以至散开;TCE不同剂量(1.0、5.0、10.0 mmol/L)处理组作用不同时间(24、48 h),细胞存活率随染毒时间的延长而降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TCE具有人未成熟DC细胞的毒性效应。     

锰铅镉复合暴露对人神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的探索重金属复合暴露对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞的毒性效应。方法将SK-N-SH细胞分别暴露于空白培养基(对照)和氯化锰(125、250、500、750、1 000、1 500、2 000、4 000、6 000μmol/L),乙酸铅(500、750、1 000、1 500、2 000、2 500、3 000μmol/L),氯化镉(5、10、15、20、30、40、60、80μmol/L)单一及二元、三元复合溶液24、48、96 h后,检测细胞存活率,计算锰、铅、镉的药物抑制浓度(IC)。其中,二元、三元复合溶液的浓度均为相应金属IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)的等毒效应比混合,分别用毒性单位法、混合毒性指数法对毒性效应进行评价。结果与对照组相比,不同浓度锰、铅、镉单独染毒不同时间SK-N-SH细胞的存活率均较低,除500μmol/L铅染毒24、96 h组和5μmol/L镉染毒24、48 h组外,差异均有统计学意义(P0.05);随着锰、铅、镉单独染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SK-N-SH细胞的存活率均呈下降趋势。三种金属对SK-N-SH的细胞急性毒性依次为镉(IC_(50):38.728μmol/L)锰(IC_(50):442.739μmol/L)铅(IC_(50):1 624.850μmol/L)。同一金属不同染毒时间的IC_(50)排序均为96 h48 h24 h。锰和镉复合暴露对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h均表现为拮抗作用,在48 h均表现为协同作用;96 h在毒效应为IC_(10)、IC_(20)时均表现为部分相加作用,在IC_(30)、IC_(50)时均表现为协同作用。镉和铅对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h毒效应为IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)时均表现为拮抗作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用;在48 h毒效应为IC_(10)时表现为拮抗作用,在IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)时均表现为部分相加作用;在96 h时均表现为部分相加作用。铅和锰对SK-N-SH细胞的联合毒性在24、96 h毒效应为IC_(50)时分别表现为简单相加、协同作用,其余均表现为部分相加作用。锰、铅、镉对SK-N-SH细胞的联合作用在24、96 h时均表现为部分相加作用;48 h时在IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)均表现为协同作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用。结论三种金属对SK-N-SH细胞的毒性均表现为随暴露时间的延长而增强的趋势。金属复合暴露呈现复杂的毒性效应,毒性效应与特定的金属组合、暴露时间、暴露浓度密切相关。     

镉对巨噬细胞毒性作用

镉作为大气污染物,近年来逐渐为人们所重视。它不仅可以从污染的食物摄入,还可以从污染的大气及烟草中吸入,在体内与它本身诱导产生的低分子量金属硫蛋白(metallothionein,MT)结合而分布于肝、肾、肺、胃肠道、睾丸、骨骼、甲状腺等处,引起毒性损害。吸入所致的损害主要在脑组织,对肺泡巨噬细胞(AM)有多     

6种中药多糖对诱导树突状细胞成熟及刺激T细胞增殖作用的比较

[目的]比较6种中药多糖对树突状细胞诱导成熟及刺激T细胞增殖的能力。[方法]通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养7d后,分别加入6种中药多糖,观察细胞的形态变化及用免疫细胞化学法检测其表面标志的表达。通过混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力。[结果]经6种中药多糖诱导的DC分子表达有明显变化:MHCII+、CD86+、CD83+(P﹤0.05,P﹤0.01),而经RPMI1640培养的DC分子表达与培养前无明显变化。经6种中药多糖诱导的DC均能促进效应T细胞的增殖能力(P﹤0.01)。其中枸杞多糖对上述功能的作用最为明显(P﹤0.05)。[结论]上述6种中药多糖均可诱导DC分化、成熟和刺激T细胞增殖,枸杞多糖与其余5种多糖比较,对上述功能的作用最为明显。     

二十碳五烯酸对人树突状细胞成熟过程中基因表达谱影响的研究

目的研究二十碳五烯酸(EPA)对人树突状细胞成熟过程中基因表达谱的影响。方法采用GM-CSF及IL-4诱导人外周单核细胞获得非成熟树突状细胞,然后将细胞分为三组处理,A组,维持树突状细胞的未成熟状态;B组,LPS(100ng/ml)作用48h诱导树突状细胞的成熟;C组,经EPA(50μmol/L)预处理24h后再予以LPS(100ng/ml)诱导树突状细胞的成熟。用低通量的cDNA表达谱芯片检测三组细胞基因表达谱的情况。RT-PCR法验证相关差异表达基因的结果。结果在LPS诱导树突状细胞成熟的过程中共有29条基因表达增加,9条基因表达下降。但是经EPA孵育24h后再予以LPS诱导"成熟"的人树突状细胞其基因表达水平发生明显变化,与未经EPA处理的成熟树突状细胞比较,共有15条基因出现差异表达,其中在29条本该上调的基因中有11条基因表达出现下降,1条基因出现上调。在9条本该表达下调的基因中有1条基因出现上调,2条明显下调。RT-PCR验证了其中6条基因的芯片结果。结论 EPA对树突状细胞的成熟过程中多种基因的表达具有明显的抑制作用,其范围涉及细胞因子及抗原提呈分子等不同基因。     

镉诱导小鼠脾淋巴细胞超氧化物歧化酶活性和细胞毒性比较

目的 研究不同形态镉化合物诱导脾淋巴细胞（sLC)抗氧化水平和细胞毒性的差异。方法 纯化的镉金属硫蛋白（CdMT)和CdCl2作为有机镉和无机镉受试物，给予小鼠灌胃染毒2周和4周，检测sLC中镉含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、DNA链损伤和细胞免疫功能。结果 染镉后可诱导SOD活性，但细胞内镉含量增高、诱导DNA单链断裂（DNA－SSB)和免疫抑制在CdCl2和CdMT染毒组间存在明显差异。结论 有机镉经口染毒可诱导脾细胞毒性，但明显轻于无机镉；提示镉的不同存在形式是影响其细胞分布并导致免疫毒性差异的原因之一。     

镉诱导小鼠胸腺细胞凋亡的研究

目的 探索镉的免疫毒性机制,系统性地研究镉体外诱导小鼠胸腺细胞凋亡的发生,解释其细胞毒性机制。方法 通过以下方法检测凋亡;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）,DNA含量/细胞周期分析,DNA琼脂糖凝胶电泳。结果 镉能引起原代培养的胸腺细胞发生凋亡,并呈时间-反应和剂量-效应关系。结论 本研究为阐述镉免疫毒性机制提供了依据,尤其对解释镉引起的胸腺萎缩和导致的T细胞介导的免疫力损伤有重要意义。     

乙型肝炎病毒感染者体内树突细胞及树突细胞疫苗研究现状

树突细胞(DC)是目前已知功能最强的专职抗原提呈细胞(APC),为当前抗肿瘤、抗病毒等疾病免疫治疗研究的热点.近年来,对DC疫苗的探索和研究为多种疾病的免疫治疗提供了新的治疗前景.此文就DC在慢性乙型肝炎中的研究现状进行综述.     

树突状细胞激活效应细胞作用的初步研究

目的探讨树突状细胞（DC）对肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和小鼠脾淋巴细胞（小鼠脾LC）的最佳激活作用比例.方法联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏从荷瘤小鼠四肢长骨提取的DC,依据不同的激活比例用致敏DC体外激活TIL和小鼠脾LC,采用乳酸脱氢酶（LDH）4小时释放法测定、观察被不同程度激活的TIL和小鼠脾LC对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果当E/T为1：400和1：200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱,线性关系不明显,P＞0.05;当E/T为1：100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,P＜0.05;当E/T=1：50时,杀伤活性徒增,与前三者比较均有显著性差异;而当E/T=1：25,1：12.5和1：6.25时,杀伤活性与E/T=1：50时基本没变化,P＞0.05.结论当E/T=1：50时,DC能使小鼠脾LC和TIL充分激活,显著提高其对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性.     

实验性镉中毒致小鼠血液学指标改变及硫酸锌的保护作用

目的 探讨亚慢性镉中毒对小鼠血液系统的影响及加锌对镉中毒的拮抗作用.方法选体重16～18 g的小鼠60只随机分成6组,镉染毒的低、中、高和最高4个剂量组分别皮下注射氯化镉溶液(按镉计0.4、0.8、1.6、3.2 mg/kg),每天1次,每周连续4 d,共7周;锌保护组在注射1.6 mg/kg氯化镉的同时饮用ZnSO4(350 μg/L)溶液;阴性对照组注射等量的蒸馏水;染毒结束后测定小鼠的主要血液学指标.结果随着镉染毒剂量的增加,红细胞、血红蛋白、血细胞比容(HCT)、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量等红细胞指标亦逐步下降,其中高、最高剂量组均显著低于对照组和低剂量组(P<0.01或P<0.05);锌保护组以上指标与对照组比较中除HCT指标差异有显著性(P<0.05)外,其余各项指标均接近对照组; 各组白细胞总数随剂量加大逐步升高,最高剂量组升高明显(P<0.01),各组粒细胞比例、单核细胞比例逐步下降,淋巴细胞比例升高;但对血小板影响不明显.结论亚慢性镉中毒能致小鼠贫血(小细胞低色素性贫血),锌能改善镉所致贫血的作用.     

二十二碳六烯酸对人树突状细胞基因表达谱的影响

目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)对人树突状细胞(DCs)成熟过程中基因表达谱的影响. 方法:采用GM-CSF及IL-4诱导人外周血单核细胞获得非成熟DCs,经DHA( 50 μmol/L)孵育24 h后,再予以LPS (100 ng/ml)作用48 h,用cDNA芯片检测人DCs基因表达谱.用RT-PCR法验证相关差异表达基因的结果.分别将未经脂肪酸处理的DCs和硬脂酸(SA)处理的DCs作为对照. 结果:经DHA预处理后,成熟的DCs与未经脂肪酸处理的成熟DCs相比,共有20条基因差异表达 ,约占芯片中基因总数的29.4%.其中18条基因表达下降,2条基因表达增加.在差异表达的基因中,涉及细胞因子、趋化因子(受体)及其抗原呈递相关分子基因等.而采用饱和脂肪酸(SA)处理的DCs的表达谱未见明显变化. 结论:50 μmol/L DHA对DCs成熟过程中的基因表达具有显著的影响 ,涉及到细胞因子、趋化因子(受体)及其抗原呈递相关分子基因的调节.     

三叶青提取物对人树突状细胞功能的影响

目的探讨三叶青提取物TH-b对树突状细胞(dendritic cells,DC)功能的影响。 方法分离健康人外周血中单个核细胞,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白介素-4 (interleukin-4,IL-4)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导培养DC。用念珠菌孢子法检测经TH-b作用后的DC吞噬能力;将经TH-b作用后的DC与同种外周血淋巴细胞进行混合培养,以检测淋巴细胞增殖率;采用流式细胞术检测DC表面标记CD195和TH-b作用后DC的表面标记CD80、CD83、CD86、HLA-DR;用酶免疫法检测TH-b作用后DC的培养上清液中的IL-12含量。 结果培养7 d后DC CD195表达水平(85.3%)明显高于培养前(2.4%)。三叶青提取物TH-b部分对DC吞噬能力有作用明显,TH-b浓度为0.62 μg/ml时吞噬能力最强。各种TH-b浓度作用后DC的细胞表面CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达均明显升高,以0.62 μg/ml最明显,分别为88.56%±8.16%、86.75%±7.59%、99.34%±8.24%、96.15%±8.27%,显著高于对照组的71.38%±7.31%、43.61%±4.29%、93.41%±8.34%、79.26%±5.12%,差异有统计学意义(P<0.05)。TH-b作用后的DC与淋巴细胞在1:1、1:10、1:100的比例下,对同种外周血淋巴细胞具有强烈的激发和促增殖作用,以1:1最明显。TH-b作用DC 48 h后,DC分泌的IL-12均明显升高,在0.62 μg/ml时IL-12分泌达最高值(526.3 pg/ml),显著高于对照组(260.1 pg/ml)(P<0.05),并有浓度窗现象。 结论低浓度三叶青提取物TH-b部分能够显著促进人DC吞噬功能,促进DC表面标志物CD80和CD86的表达,提高DC成熟标记和IL-12分泌能力。     

镉对人胚肾细胞中经典瞬时受体电位通道mRNA表达影响

目的观察不同质量浓度的氯化镉(CdCl2)染毒后人胚肾细胞(HEK 293T细胞)经典瞬时受体电位通道(TRPC)6个亚型mRNA表达水平的改变,在mRNA水平上探讨镉对肾细胞钙通道的影响。方法 HEK 293T细胞分别暴露于7.5、15.0、30.0、45.0和60.0μmol/L的CdCl28 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力;实时荧光定量聚合酶链反应法检测0、15.0和30.0μmol/L CdCl2作用8 h和30.0μmol/L CdCl2染毒4 h后TRPC 6个亚型mRNA表达水平。结果以对照组(CdCl20μmol/L)HEK 293T细胞存活率为100%,各不同质量浓度的染毒组细胞存活率分别为79.40%、77.29%、72.26%、70.25%、60.80%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。经CdCl2染毒后,各染毒组HEK 293T细胞的TRPC 6个亚型mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 CdCl2可能引起HEK 293T细胞的TRPC基因mRNA的表达水平发生改变。     

The Autographa californica nuclear polyhedrosis virus AcNPV induces functional maturation of human monocyte-derived dendritic cells

The initiation of an adaptive immune response is critically dependent on the activation of dendritic cells (DCs). Therefore, vaccination strategies targeting DCs have to ensure a proper presentation of the immunogen as well as an activation of DCs to accomplish their full maturation. Viral vectors can achieve gene delivery and a subsequent presentation of the expressed immunogen, however, the immunization efficiency may be hampered by an inhibition of DC activation. Here we report that the insect born Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV), which is already used for genetic immunization, is able to activate human monocyte-derived DCs. This activation induces the production of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), an up-regulation of the surface molecules CD83, CD80, CD86, HLA-DR and HLA-I and increases the T cell stimulatory capacity of DCs. Thus, AcNPV represents a promising vector for vaccine trials.     

Evaluation of murine bone marrow-derived dendritic cells loaded with inactivated virus as a vaccine against Japanese encephalitis virus

Japanese encephalitis (JE) is a serious infectious disease in southern and eastern Asia. Design and development of safer and more efficacious vaccines against Japanese encephalitis virus (JEV) is a high-priority target in the world. Dendritic cells (DCs) are the most potent professional antigen-presenting cells (APCs) playing a central and unique role in the generation of primary T-cell responses, and are considered attractive “live adjuvants” for vaccination and immunotherapy against cancer and infectious diseases. In this study, mouse bone marrow-derived dendritic cells (bmDCs were generated and stimulated with inactivated JEV in vitro. BALB/c mice were immunized with stimulated bmDCs and then challenged with JEV wild-type strain. The neutralization antibody, interferon gamma (IFN-γ), tumor necrosis factors alpha (TNF-α) or interleukin-6 (IL-6), and virus-specific CD8+ cytotoxic T-lymphocyte (CTL) levels, as well as survival rates, were analyzed and compared with inactivated vaccine and DCs control groups. The results demonstrated that intravenous (i.v.) injection of 2 × 10⁵ JEV-pulsed bmDCs into each mouse produced notable levels of JEV-specific neutralizing antibodies and higher levels of CD8+ CTL, IFN-γ and TNF-α compared with JEV-inactivated vaccine. Furthermore, stimulated bmDCs could elicit a highly protective efficacy (90%) against JEV challenge. It suggests that stimulated bmDCs can be considered as an attractive “live adjuvant” for vaccination against JEV infection.     

Infection of mouse bone marrow-derived dendritic cells by live attenuated Japanese encephalitis virus induces cells maturation and triggers T cells activation

An attenuated Japanese encephalitis virus (JEV) strain SA14-14-2, generated from the wild strain SA14, is an effective live vaccine against JEV infection. It has led to a significant decrease in JEV infection around the world. Although it is highly effective, the mechanism for its robust immunity was not well investigated. In this study, the interaction of SA14-14-2 with bone marrow-derived dendritic cells (bmDCs) was investigated. Our results showed that the infection of bmDCs with SA14-14-2 resulted in viral replication and upregulation of bmDC maturation marker molecules (CD40, CD80, CD83 and MHC I). SA14-14-2 infection also stimulated the production of interferon-α (IFN-α), monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1/CCL2), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) of bmDC. Both MLR and ELISPOT assay showed an enhanced allostimulatory capacity of SA14-14-2-infected bmDCs. Furthermore, the SA14-14-2-infected bmDCs impaired the expansion of Foxp3+ regulatory T (Treg) cells with immunosuppressive potential, suggesting that SA14-14-2 infection induced antiviral immunity rather than immunosuppression. Taken together, our results indicated that SA14-14-2 infection caused bmDC maturation, changed the expression profiles of several cytokines, and triggered T cell activation. This offered an insight in the immunologic mechanisms associated with the high efficiency of the SA14-14-2 vaccine.