经自体颗粒细胞线粒体移植46岁妇女获临床妊娠1例报告

一名患不孕症的46岁妇女经自体颗粒细胞线粒体移植获临床妊娠。具体方法为:经用达菲林1.875 mg脱敏抑制,果纳芬和尿促性腺素超促排卵,有4个卵泡生长,取得2个成熟卵子。用Percol梯度离心收集卵泡液中的颗粒细胞与卵丘颗粒细胞合并,调整细胞密度为1×106/ml。取1ml的颗粒细胞,用制冷后的玻璃匀浆器匀浆6次。匀浆液经4 ℃冷冻离心机2 000 g×20 min离心。之后取上清液9 800 g×20 min离心,线粒体沉淀用1 ml的人类输卵管液稀释。所有操作尽量保持样品在4 ℃。用显微注射针吸取线粒体溶液,长度约1个卵子的直径,和制动后的精子一并注入卵子内,注射针的直径约7 mm。采用这种方法每个卵子约移植3 000个线粒体。两个卵子都成熟;一个正常受精,一个为3原核。正常受精的卵子,第3天移植时发育成8细胞胚胎。移植后15 d查尿阳性。移植后30 d 于B超下可见胎芽和胎心搏动。妊娠9周时患者发生自然流产。     

首例经自体颗粒细胞线粒体移植的双胞胎儿出生

1名37岁妇女，婚后有2次自然流产史，并发不孕症。来我院2次行体外受精和胚胎移植，由于胚胎质量差，均未妊娠。第3周期对患者的5个成熟卵子进行自体颗粒细胞线粒体移植。4个卵子做胞浆内单精子注射。经线粒体移植后的胚胎质量优于胞浆内单精子注射组。移植3个经线粒体移植后的胚胎，获3胎临床妊娠。妊娠5周时l例胚胎停育，其余2胎发育正常。患者在妊娠前后进行了5次丈夫淋巴细胞免疫治疗。妊娠30周患者因重度妊高征住院治疗，疗效不明显。遂于2003年8月6日妊娠32周时行剖宫产，娩出发育正常的男女2个新生儿。在新生儿病房治疗后健康出院。此为我国大陆地区首例经线粒体移植妊娠出生的胎儿。     

女性卵巢颗粒细胞移植抗早衰可行性研究

目的探讨女性生殖细胞的丢失和卵巢颗粒细胞(graincell)的衰减是衰老的根本原因。利用卵巢颗粒细胞移植修复本源,是抗早衰的关键。方法采用生物学高新技术将卵巢颗粒细胞为30名志愿者进行了移植。结果及时给女性机体补充可以产生激素的颗粒细胞,可为生殖细胞补充营养,并可替代衰老的颗粒细胞,从而改善机体的亚健康状态。结论移植后不但安全,没有发生排异反应和过敏反应,而且血脂下降,疲劳状态明显好转,体质增强,收到了满意的效果。     

西宁地区经冠状动脉自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的临床研究

目的:探讨西宁地区经冠状动脉移植自体骨髓干细胞(BMSCs)治疗急性心肌梗死的可行性、临床疗效及特点。方法:入选33例急性心肌梗死(AMI)患者,随机分为BMSCs移植组(n=14)和对照组(n=19),所有患者均于AMI后14d行冠状动脉介入治疗术(PCI),其中BMSCs移植组在术中将分离的BMSCs悬液经微导管中心腔内注入梗死动脉远端。于术前,术后6月、12月分别行彩色多普勒超声心动图及SPECT心肌灌注显像以评价左室收缩、舒张功能及心肌梗死面积的变化。结果:术后6个月、12个月随访,移植组与对照组两组组内比较术前与术后6月左室射血分数(LVEF)值有统计学显著差异(P<0.05),术后12月则与术前、术后6月比较均无统计学显著性差异(P>0.05)。术前、术后静息心肌灌注显像的F值,在移植组,由术前5.56±1.38,分别降至3.02±2.10、4.34±1.89;对照组,由术前5.33±1.97,分别降至4.25±1.73、4.49±2.07,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高海拔地区,经冠状动脉自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死可行,术后能改善心肌灌注。     

白藜芦醇改善多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能和抑制凋亡的作用

目的：观察白藜芦醇对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型大鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响以及线粒体的形态和功能的改变,并探讨其可能的保护机制。方法：32只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,PCOS模型组（n=24）和模型对照组（n=8）。成功提取PCOS组颗粒细胞并体外培养,然后用不同浓度的白藜芦醇处理颗粒细胞,CCK-8法检测细胞活力的变化;Mito Tracker Deep Red染色观察细胞线粒体的形态变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化;ATP检测试剂盒检测ATP的变化;分光光度计检测与凋亡密切相关casppase-3和caspase-9酶活性变化;最后,蛋白免疫印迹法检测颗粒细胞内caspase-3和caspase-9蛋白水平的变化。结果：白藜芦醇处理PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞后,颗粒细胞的增殖活性明显增强（P=0.000）;Mito Tracker Deep Read染色结果显示线粒体质量明显增加,形状呈管状或长条状;颗粒细胞内ATP产量和线粒体膜电位也明显增加（P=0.000、P=0.000）。另外,白藜芦醇也降低了caspas...     

甲氧滴滴涕对小鼠颗粒细胞的毒性损伤及其卵巢组织线粒体的氧化应激机制

目的: 观察甲氧滴滴涕(MXC)对雌性小鼠颗粒细胞的毒性损伤及其卵巢组织的氧化应激机制.方法: 将40只雌性昆明小鼠随机分为16,32,64mg/(kg·d)组及溶剂芝麻油组(对照组),连续20天经腹腔注射染毒MXC,末次注射MXC24 h 内处死小鼠,TUNEL法、透射电镜观察卵巢颗粒细胞凋亡情况;激光共聚焦显微镜检测小鼠卵巢线粒体活性氧簇(ROS)、线粒体膜电势,紫外分光光度法检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性变化.结果: TUNEL法显示32,64 mg/kg组凋亡细胞数(40.87±3.31),(47.12±7.20 )较16 mg/kg组(14.00±1.85) 及对照组(13.25±1.67)增加,电镜下见凋亡小体等典型凋亡形态学改变,卵巢组织线粒体膜电势,呼吸链复合物Ⅰ活性在32,64 mg/(kg·d)组低于对照组(P<0.01),线粒体ROS水平则较对照组增高(P<0.01).结论: MXC可以通过引起卵巢组织的氧化应激诱导颗粒细胞凋亡发挥其促进卵泡闭锁的毒性作用.     

赤峰市首例自体造血干细胞移植治疗小细胞肺癌

小细胞肺癌（sCLC）是一种高度恶性的肿瘤,早期出现区域淋巴结及远处转移。因此临床上以化疗为主要治疗手段。该病对化疗敏感,单药有效率高,临床常用联合方案。本病例采用自体造血干细胞移植（aSCT）治疗取得很好疗效,现报告如下。     

人颗粒细胞线粒体DNA缺失的研究

目的 探讨颗粒细胞线粒体DNA突变在女性生殖老化中的可能机制，并为颗粒细胞线粒体移植提供理论基础。方法 分离70例临床行常规体外受精(IVF)和胞质内单精子注射(ICSI)患者的颗粒细胞，抽提DNA，PCR检测颗粒细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)4977bp缺失情况。结果所有颗粒细胞均未检测到mtDNA4977bp缺失。结论 人颗粒细胞mtDNA并不发生4977bp缺失．这可能与其不是有丝分裂后细胞，仍具有增殖能力，受到的氧化损伤较少有关。颗粒细胞参与生殖老化的机制可能与其mtDNA突变无关。     

卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。     

自体外周血干细胞移植治疗难治性恶性血液病8例

目的　评价自体外周血干细胞移植联合大剂量化疗治疗恶性血液病的近期疗效 .方法　 8例恶性血液病 (非霍奇金淋巴瘤 7例 ,多发性骨髓瘤 1例 )采用化疗联合G CSF动员外周血干细胞 ,CobeSpectra血细胞分离机采集循环血中的单个核细胞 ,8例平均单个核细胞数 3.0× 10 8·kg-1,平均CD34+ 细胞为 3.5× 10 6·kg-1,- 80℃冰箱冻存 .8例均在大剂量化疗后回输细胞 .结果　外周血干细胞回输后WBC恢复至 2× 10 9·L-1平均为 11d ,血小板恢复至 5 0× 10 10 ·L-1平均为 13d .8例移植后短期内均达缓解 .结论　化疗联合G CSF是一高效、低毒的动员方案 ;自体外周血干细胞移植联合大剂量化疗是治疗难治性恶性血液病的一种安全、近期疗效肯定的治疗方法 .     

双次自体造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤的临床分析

目的分析双次自体造血干细胞移植(DAHSCT)治疗恶性淋巴瘤的临床疗效。方法对2006年1月至2009年4月12例恶性淋巴瘤患者在确诊后1年内进行第1次DAHSCT移植,以洛莫司汀(CCNU)+足叶乙甙+阿糖胞苷+环磷酰胺进行预处理,其中5例加用洛铂;以上患者在第1次DAHSCT术后4～6个月进行第2次DAHSCT,预处理方案为米托蒽醌+阿糖胞苷+环磷酰胺,其中有7例加入洛铂。结果所有患者经DAHSCT治疗后均获造血重建,第1次DAHSCT的造血重建速度快于第2次,经24～63个月随访,存活11例,死亡1例(死亡原因为重度感染),2年无病生存率为91.7%。结论 DAHSCT治疗恶性淋巴瘤相关死亡率低,无病生存率高,可用于恶性淋巴瘤的治疗。     

自体造血干细胞移植联合大剂量放化疗治疗恶性淋巴瘤56例临床分析

目的　观察自体造血干细胞移植 (AHSCT)治疗恶性淋巴瘤的疗效。方法　自 1 991年6月至 2 0 0 2年 1 0月 ,用AHSCT治疗恶性淋巴瘤 56例。其中非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 4 4例 ,霍奇金病(HD) 1 2例 ;行自体骨髓移植 (ABMT) 1 2例 ,自体外周血干细胞移植 (APBSCT) 4 4例。外周血干细胞动员方法均采用常规化疗 (CE或CHOP)加粒或巨噬细胞集落刺激因子 (G CSF或GM CSF ;或G CSF +GM CSF) 1 0 μg·kg- 1 ·d- 1 。预处理方案为BEAM方案和MEL 1 4 0mg/m2 (或加Vp1 6 2 0 0mg)+单次全身照射 (TBI) 8Cy。 结果　全部患者移植后均重建造血 ,随访至 2 0 0 2年 1 0月 30日 ,中位随访 1 82 0d。 1、2及 5年后无病生存分别为 85 7% (48/ 56)、60 7% (34/ 56)和 57 1 % (32 / 56) ,最长存活 1 1年。 1 4例 (2 5 0 % )复发。全组患者无移植相关死亡。结论　AHSCT联合大剂量放化疗对预后不良、复发或敏感的高度恶性淋巴瘤疗效佳 ,能够改善生存率并优于常规化疗。APBSCT造血恢复比ABMT快     

VRD与VCD方案诱导治疗后序贯自体造血干细胞移植对新诊断的多发性骨髓瘤患者的疗效分析

目的 评价硼替佐米+来那度胺+地塞米松(bortezomib-lenalidomide-dexamethasone,VRD)与硼替佐米+环磷酰胺+地塞米松(bortezomib-cyclophosphamide-dexamethasone,VCD)两种诱导治疗方案对接受自体造血干细胞移植(autologous stem cell transplantation, ASCT)的多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)患者的疗效、干细胞采集和预后的影响。方法 回顾性分析首都医科大学附属北京朝阳医院自2010年10月至2019年10月间接受VRD(39例)或VCD(71例)方案诱导治疗后序贯自体外周血干细胞移植、长期随访并且资料完整的110例MM患者的临床数据。对采用两种方案的两组患者进行疗效评估和生存分析。并分析对细胞采集的影响。结果 两组患者移植后,缓解深度和二代流式法所测得的微小残留病(minimal residual disease, MRD)阴性率均得到了提高。与移植前相比,VCD组移植后3个月的完全缓解(complete response,CR)/严格意义完全缓解(stringent complete response, sCR)率从39.4%提升至59.1%(P=0.001),MRD阴性率从16.7%提高至41.7%(P=0.003)。而VRD组的CR/sCR率从51.2%提升至67.6%(P=0.008),MRD阴性率也由26.1%提高至47.8%(P=0.059)。具有高危细胞遗传学[t(4;14), t(14;16)和del(17p)]的患者也可达到相似的疗效。在生存时间方面,VCD组的中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)与总体生存期(overall survival,OS)分别为72.0个月与98.0个月,而VRD组的中位PFS及OS均尚未达到(PFS:P=0.856;OS:P=0.382)。VRD组采集CD34⁺细胞数显著低于VCD组(3.52×10⁶/kg vs 4.65×10⁶/kg,P=0.046),但两组间动员失败患者数差异无统计学意义。VRD方案诱导治疗超过4个疗程后,采集的CD34⁺细胞数即有下降趋势,而VCD方案诱导治疗3~6个疗程对CD34⁺细胞数无明显影响。结论 与VCD方案相比,VRD方案诱导治疗能够达到更深层次的缓解,但对生存并无显著影响。VRD方案的诱导治疗疗程数对干细胞的采集数量有一定影响,其采集干细胞前疗程数不宜超过4个。     

犬自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植重建梗死心肌

目的:探讨选用含有原始干细胞/多系祖细胞及基质细胞的骨髓单个核细胞(MBMC),经冠状动脉移植重建犬梗死心肌,观察其修复、重建梗死心肌及改善心功能的效果.方法:经皮穿刺球囊封堵前降支成功建立心肌梗死动物模型并存活约1周的杂种犬10条,平均分为细胞移植组和对照组.细胞移植术前1 d分离MBMC,以DAPI标记,温箱保存过夜.常规冠状动脉造影、PTCA,在球囊闭塞前降支条件下注入MBMC(每次4×106个细胞,2 ml),气囊保持充盈2 min后恢复灌注2 min,重复注入3次.分别于术前及术后2个月行超声心动图检查,动物放血处死后取心脏前壁和下壁冰冻切片,荧光显微镜观察并照相.结果:移植组术后与术前及对照组比较,平均左室舒张末容量和左室收缩末容量减少、EF和FS增加(P＜0.05);对照组则左室舒张末容量和左室收缩末容量明显增加、FS减少(P＜0.05).细胞移植组左室收缩及舒张内径和梗死长度均较移植前缩小,梗死部位室壁厚度较移植前增加(P＜0.05);而对照组梗死区室壁变薄.在细胞移植组前壁心肌组织冰冻切片中可以看到心肌细胞核发黄绿色荧光,发现带绿色荧光的丝状肌丝肌管,移植犬的下壁和对照组的前壁可见心肌细胞核发出光亮较移植组前壁淡的自发黄绿色荧光,而均未发现有带绿色荧光的丝状肌丝肌管.结论:自体骨髓单个核细胞移植可重建坏死心肌,梗死区域内有移植的新生心肌细胞,且抑制心室的重塑、防止心脏进一步扩大和心功能下降.     

自体造血干细胞移植治疗高危难治淋巴瘤生存分析

目的：探讨高危难治淋巴瘤患者自体外周血造血（APBSCT ）干细胞移植治疗后的预后与生存情况。方法回顾性分析该院110例高危难治淋巴瘤行APBSCT患者的随访资料,采用Kaplan‐Meier生存分析和Cox比例风险回归法分析影响患者APBSCT治疗后的生存及预后因素。结果110例患者中位生存时间39．4个月,移植后3年总生存（OS）率及无进展生存（PFS）率分别为80．9％和76．4％。移植前完全缓解（CR）状态（P＝0．016）、移植后巩固治疗（P＝0．006）的高危难治淋巴瘤APB‐SCT患者预后良好;而IPI评分大于2分、血清乳酸脱氢酶（LDH）偏高、骨髓浸润、乙型肝炎病毒（HBV）感染的高危难治淋巴瘤APBSCT患者预后差（P＜0．05）。结论高危难治淋巴瘤患者行APBSCT治疗可以提高远期生存率。     

造血干细胞移植治疗血液肿瘤的临床研究

目的探讨造血干细胞移植(HSCT)治疗血液肿瘤的造血重建、疗效和移植相关并发症.方法①8例血液肿瘤患者中,采用自体外周血干细胞移植(APBSCT)2例,自体骨髓移植(ABMT)1例,HLA 1～2个位点不合无关脐血移植(UCBT)3例,异基因外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)2例,分别采用CBV、Bu/Cy、Bu/Cy/BCNU和Cy/TBI 4种方案进行预处理.②患者自体外周血干细胞(PBSC)动员方案采用Cy/G-CSF,异基因供者PBSC动员方案采用G-CSF/GM-CSF.③在异基因HSCT中采用环孢霉素A(CsA)和霉酚酸酯(MMF)预防急性GVHD(aGVHD).④应用小剂量肝素预防肝静脉闭塞病(VOD).结果①3例接受自体HSCT的患者移植后均获得完全缓解(CR),2例移植后淋巴瘤复发.5例接受异基因HSCT治疗的患者中有1例未植入,异基因HSCT的植入率为80%.8例移植成功率为87.5%.②8例患者移植后于3～7 d(中位时间为4.5 d)开始骨髓脱空,骨髓脱空时间持续3～9 d(中位时间为5 d),外周血中性粒细胞绝对值(ANC)＞0.5×109/L的时间为9～27 d(中位时间为14 d),血小板计数(BPC)＞20×109/L的时间为10～41 d(中位时间为14 d),BPC＞50×109/L的时间为11～53 d(中位时间为14 d).在不同类型的HSCT中以APBSCT和Allo-PBSCT造血重建较快,ABMT和UCBT造血重建相对较晚.③5例异基因HSCT中有3例发生Ⅰ～Ⅱ度aGVHD,GVHD的发生率为60%.8例患者移植后仅1例发生咽部感染,1例发生晚期出血性膀胱炎(HC),感染和HC的发生率均为12.5%.无VOD和移植相关死亡发生.结论 HSCT可以提高血液肿瘤的CR率和治愈率,延长血液肿瘤患者的无病生存(DFS)时间.     

不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响

目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响,寻找最佳电融合参数。方法 将直径10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者间的融合,并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4~8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动,变动范围分别是电场强度1000~2000kV/cm和脉冲时程40~160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核-卵母细胞复合体的融合率,而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内,供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异,并且融合后重组胚的激活,以及发育至2细胞、4~8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外,脉冲重复次数以1~2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。