吡咯喹啉醌促进软骨细胞增殖及抑制白细胞介素1β介导的软骨细胞凋亡

背景:研究发现吡咯喹啉醌可以促进许旺细胞增殖及生长因子的分泌,但其对关节软骨或关节软骨细胞有何作用尚未见报道。目的:验证吡咯喹啉醌对膝关节软骨细胞增殖及对白细胞介素1β介导的软骨细胞凋亡的影响,以探讨吡咯喹啉醌保护软骨细胞的作用机制。方法:在无菌环境下消化得到1月龄新西兰白兔膝关节软骨细胞,培养并传代,第2代软骨细胞用于实验。细胞贴壁后用吡咯喹啉醌浓度为0,6.25,12.5,25.0,50.0,100.0μmol/L的无血清培养基分别培养软骨细胞48 h,采用MTT法检测细胞的增殖活力;培养30 h,采用流式细胞术测细胞周期。细胞贴壁后用不同浓度吡咯喹啉醌预处理软骨细胞24 h,然后加入白细胞介素1β作用15 h后,采用流式细胞术测细胞凋亡率。结果与结论:吡咯喹啉醌能明显提高软骨细胞的增殖活力、S期,G2/M比例和细胞增殖指数(P0.05),且在吡咯喹啉醌浓度为12.5μmol/L和25.0μmol/L时作用最强。吡咯喹啉醌能明显抑制白细胞介素1β介导的软骨细胞早期凋亡和晚期凋亡(P0.05),在吡咯喹啉醌浓度为25.0μmol/L时作用最明显。结果表明吡咯喹啉醌可以促进膝关节软骨细胞的分裂与增殖,对白细胞介素1β介导的软骨细胞凋亡有抑制作用。     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及Sox10表达的影响

背景:许旺细胞是神经组织工程的种子细胞,但其体外增殖缓慢,难以满足科研与临床对其的需要,而吡咯喹啉醌可以对多种细胞的增殖产生促进作用。目的:观察吡咯喹啉醌对许旺细胞的增殖作用并探讨其对许旺细胞Sox10基因表达的影响。方法:体外培养及纯化大鼠许旺细胞,S-100免疫荧光鉴定许旺细胞;细胞经无血清培养12h后,加入10nmol/L吡咯喹啉醌继续培养24h观察其形态学改变;加入不同浓度(0,1,10,100,1000,10000nmol/L)吡咯喹啉醌于许旺细胞培养24h,利用RT-PCR技术检测Sox10的mRNA表达。结果与结论:吡咯喹啉醌促使许旺细胞发生形态学改变,多数呈束状或并排生长,且细胞数目增多;1~1000nmol/L吡咯喹啉醌可使许旺细胞Sox10mRNA表达增高,100nmol/L时表达最高;10000nmol/L时对Sox10的表达表现为抑制作用(P0.05)。     

脑组织提取液促进体外培养神经干细胞增殖

目的： 寻找特异性的具有促神经干细胞分裂增殖作用的物质，为神经系统发育研究和神经系统疾病包括脑退行性疾病的治疗研究提供新资料。 方法： 制备新生鼠的前脑、中脑、后脑及小脑组织提取液，体外培养新生鼠神经干细胞，观察神经球的生长情况，采用MTT细胞活性检测法和特异性蛋白质免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞的增殖能力。 结果： 中脑和小脑的提取液加入后有大量神经球生成，神经干细胞的特异性蛋白nestin免疫细胞化学染色呈阳性。 结论： 中脑和小脑的提取液可促进体外培养的神经干细胞增殖分裂，且呈一定量效关系。     

皮肤干细胞的神经分化研究进展

毛囊隆突区存在着干细胞群,有角质形成干细胞、多能神经嵴干细胞和可以形成黑素细胞体系的干细胞等.它们具有成体干细胞的分裂增殖能力和分化潜能,其中毛囊隆突区的神经嵴干细胞在一定的条件下可以分化为神经元、神经胶质细胞和黑素细胞等,而且将这类干细胞移植入受伤的神经,它们可以促进神经细胞的再生和修复.就毛囊隆突区具有神经分化潜能...     

人胚胎纹状体区神经干细胞体外生物学特性

目的探讨人胚胎纹状体区神经干细胞在体外的生物学特性。方法从16～20周人胚胎纹状体区分离培养神经干细胞,在体外进行传代、分化,应用免疫组织化学荧光染色等方法,对此区神经干细胞在体外增殖和分化等情况进行研究。结果纹状体区神经干细胞在体外原代培养扩增1月内分裂增殖速度快,在含有EGF和bFGF的培养基中生长最为良好,平均倍增时间为3～4d。分化培养后可以形成各种神经细胞,在原代培养后2周分化情况好,分化为神经元比例高,约占50％左右,在原代培养8周以后分化为神经元的比例下降,约占20％左右。结论人胚胎纹状体区的神经干细胞在体外有较强的自我更新和增殖能力,并表达了干细胞的原始特征,在体外传代过程中,增殖速度随着时间不断下降,其分化为各种神经细胞的能力也不同。培养基中的有丝分裂原对于神经干细胞的增殖和分裂的影响不同。神经球并非均质的,内部仅有部分细胞在分裂增殖。     

CDK及Myc等对干细胞周期和多能性的调控作用

干细胞具有自我更新和分化能力,其中自我更新与在持续增殖的细胞周期保持其多能性密切相关.因此,干细胞的周期改变和调节方式均能从多方面影响其多能性,如细胞周期蛋白在干细胞多能性调节中发挥着重要作用,其中,周期蛋白依赖性激酶（CDK）等对干细胞的增殖和分化具有举足轻重的影响;S期是遗传和表观遗传学调控影响干细胞多能性的重要时期;转录因子Myc平衡着干细胞多能性和定向分化能力等.从CDK及Myc分子对干细胞周期的调节和对多能性的影响等方面进行综述和探讨,以促进细胞周期对干细胞相关调控机制的研究,为再生医学后续干细胞的深入研究提供理论依据.     

兴奋性氨基酸抑制胎鼠神经干细胞的增殖

目的：研究兴奋性氨基酸对体外培养胎鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响。 方法:体外分离、培养与鉴定SD胚胎大鼠脑室下带(SVZ)神经干细胞，利用MTT比色法测定兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）和谷氨酸（Glu）对细胞增殖的作用。 结果:成功分离出具有胚胎源性的神经干细胞，NMDA和Glu均能导致神经干细胞的增殖活性下降。 结论:培养的SVZ区域细胞具有自我更新和多分化潜能，是中枢神经系统干细胞，兴奋性氨基酸能有效地抑制神经干细胞的增殖。     

神经干细胞定向诱导分化的研究进展

长期以来,中枢神经系统疾病一直是困扰人类健康的难题。传统观点认为,成体哺乳动物中枢神经系统的神经细胞不具备更新的能力,受损后不能再生。1992年Reynolds[1]从成年小鼠脑纹状体中分离出能在体外不断分裂增殖、具有多向分化潜能的神经干细胞(NSCs)之后,人们又从胚胎和其他成     

神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化的表型特征

背景：神经干细胞促进受损中枢神经系统结构和功能再修复具有广阔的应用前景,而进行神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化表型的研究是实现这一应用的基础。 目的：观察神经干细胞在体外培养条件下的生物学特性和分化表型特点。 方法：从新生小鼠海马、嗅球提取神经干细胞。选取3代后稳定的神经干细胞采用BrdU进行标记,并进行BrdU+巢蛋白+Hochest33258免疫荧光复合染色对神经干细胞进行鉴定。体外诱导促使神经干细胞贴壁分化,对分化产生的子代细胞进行BrdU、β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白、Hochest33258复合免疫荧光染色确定分化表型。 结果与结论：来源于新生鼠海马及嗅球的细胞连续传代培养后可形成稳定悬浮的类球状细胞团,且BrdU+巢蛋白免疫荧光双染阳性。神经干细胞体外诱导贴壁分化后可产生β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白阳性的子代细胞。以上结果表明体外培养的神经干细胞具有很强的自我增殖更新的能力,在培养过程中趋向于形成稳定的神经球,经体外诱导通过不对称细胞增殖、分化产生神经元和星形胶质细胞等细胞表型。     

miR-193通过细胞周期相关蛋白调控大鼠骨髓间充质干细胞的增殖能力*

 目的： 探讨microRNA-193（miR-193）对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs）增殖和凋亡的影响,并进一步分析miR-193影响MSCs增殖的可能机制。方法: 体外培养大鼠MSCs,分别转染miR-193片段或其抑制剂到MSCs。采用MTS法、BrdU细胞增殖比色法和Ki-67免疫染色法检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡,qRT-PCR检测miR-193对细胞周期相关蛋白表达的调控。结果: (1) siPORT NeoFX Transfection Agent转染miR-193到MSCs 能有效调控MSCs中miR-193的表达水平。(2) 过表达miR-193能显著促进MSCs 的增殖（P<0.05）,而抑制miR-193能显著降低MSCs 的增殖（P<0.05）。(3) miR-193对MSCs的凋亡无明显影响（P>0.05）。(4)qRT-PCR结果显示miR-193能调控细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）的表达水平（P<0.01）。结论: miR-193具有促进MSCs增殖的作用,并且可能是通过增强CDK2的表达来实现的。     

新生鼠基底前脑神经干细胞的分离和培养

目的　探讨基底前脑神经干细胞的增殖及多向分化潜能。方法　利用无血清培养技术 ,加表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (FGF 2 )刺激生长 ,在体外进行神经干细胞的克隆培养和血清诱导分化 ;采用免疫组化研究神经干细胞的增殖特性及多向分化潜能 ,并用 5 溴 2 脱氧尿苷 (BrdU)标记证实其增殖能力。结果　从新生鼠基底前脑成功分离出神经干细胞 ,该细胞具有连续增殖能力 ,可以传代培养 ,表达神经上皮干细胞蛋白抗原 ,可以分化成神经元和胶质细胞 ;BrdU标记结果阳性。结论　新生鼠基底前脑存在具有自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞     

成年大鼠活体嗅粘膜原代培养细胞中神经干细胞的生长特性及形态学观察

为建立成年活体嗅粘膜神经干细胞的简便、实用的体外培养方法 ,进而为神经干细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤的研究提供更为安全的候选细胞 ,本实验自成年大鼠活体分离剪取部分嗅粘膜经胰酶消化制成细胞悬液 ,接种于玻璃培养皿 ,用含 10 %胎牛血清的 F12培养基培养 ,动态观察神经干细胞克隆球的形成及分化过程 ,并用 nestin、NSE、GFAP、vim entin及laminin等抗体作免疫细胞化学染色 ,对阳性细胞进行形态学鉴定。结果显示 ,成年大鼠经嗅粘膜活体取材后 ,可长期存活。成体嗅粘膜细胞混合体外培养时不同类型细胞的贴壁时间存在差异 ,神经干细胞呈球形 ,不直接贴附于培养皿 ,仅粘着在首先贴壁的扁平基底细胞上分裂形成克隆球 ,球内细胞 nestin免疫细胞化学染色阳性。原代培养 14 d后克隆球不再生长 ,球周细胞逐渐向外迁移分化为嗅细胞和嗅鞘细胞。提示 ,成体嗅粘膜神经干细胞可在普通培养基中形成干细胞克隆球 ,嗅粘膜中的其它细胞作为神经干细胞的基底饲养细胞有助于干细胞克隆球的形成 ;活体分离成体嗅粘膜作混合细胞体外培养获取神经干细胞的方法简便、安全、可行 ;本结果为嗅粘膜神经干细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤的可行性研究提供了动物实验资料。     

大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定和诱导分化

近年研究发现，哺乳动物无论在胚胎发育期还是在成年，其中枢神经系统内都存在具有自我增殖和多向分化潜能的神经干细胞，这一发现为神经损伤修复的研究提供了一条新思路。分离培养神经干细胞，并在体外稳定的增殖与分化，为研究神经干细胞的增殖、分化特性、干细胞移植以及建立细胞系等，提供了细胞来源和保证。本研究利用胎鼠和乳鼠的大脑皮层和海马，用含EGFP和bFGF的NSC培养基培养、分离了具有自我增殖和多向分化潜能的神经干细胞，并观察其生长、增殖和分化特点，以期为神经干细胞的基础研究奠定基础。     

Hes1在成年小鼠脑中表达的免疫组织化学分析

背景:近年来的研究显示,在胚胎神经系统发育过程中,Hes1的表达调控对保持神经干细胞的数量、调控其分化至关重要。此外,成年个体内处于静止期的纤维母细胞重新获得分裂增殖的能力需要Hes1表达的上调。这表明Hes1在成体中也与某些潜在干细胞的增殖具有密切的关系。因此研究Hes1在成体神经干细胞中的表达及其与成体神经细胞生成的关系也就被提上日程。但Hes1在成年个体神经系统的表达至今未明。目的:观察和分析小鼠脑中不同部位Hes1的表达及Hes1阳性细胞的细胞类型。方法:12只成年雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为单染组和双染组,每组6只。单染组直接取材,采用免疫组织化学技术检测Hes1在小鼠脑中各部位的表达。双染组小鼠以200mg/kg Brdu的剂量每天腹腔注射1次,连续注射3d,第4天取材,采用双标记物染色观察分析海马区Hes1阳性细胞的细胞类型。结果与结论:在所有观察的解剖部位中,Hes1表达于所有存在神经细胞的部位,Brdu阳性细胞几乎全部表达Hes1,NeuN阳性细胞全部表达Hes1,而神经胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞则完全不表达Hes1。由此可知,Hes1表达于神经细胞和神经干细胞中,胶质细胞不表达Hes1。     

绿色荧光蛋白、菲立磁体外双标记神经干细胞及其活性的研究

目的探索用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组逆转录病毒和菲立磁(超顺磁性氧化铁,,Superparamagnetic Iron Oxide,SPIO)体外双标记神经干细胞的可行性及其对细胞活力的影响。方法用病毒介导的GFP基因转导大鼠胚胎神经干细胞。用SPIO和Lipofectamine体外磁化标记经GFP标记的胚胎神经干细胞。用荧光显微镜观察双标记神经干细胞,并行普鲁士蓝染色,了解转染成功率。MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测标记神经干细胞的细胞增殖活力。结果双标记神经干细胞分化的细胞荧光显微镜下观察见发出绿色荧光,普鲁士蓝染色呈阳性。而未标记神经干细胞荧光显微镜下观察未见发出绿色荧光,普鲁士蓝染色呈阴性。MTT法检测发现GFP和SPIO双标记神经干细胞的增殖活力与未标记神经干细胞相比无改变。结论绿色荧光蛋白重组逆转录病毒和菲立磁可以有效地标记体外分离培养的大鼠胚胎神经干细胞。双标记神经干细胞的增殖、分化活力与未标记神经干细胞相比无改变。     

人参皂苷Rb1对体外培养胎鼠神经干细胞增殖及分化的影响

目的:探讨人参皂苷Rb1对体外培养胎鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响及其可能的作用机制。方法:分离培养胎鼠皮层NSCs,CCK-8法及BrdU掺入法测定不同浓度人参皂苷Rb1对NSCs增殖的影响,确定促进NSCs增殖的最佳人参皂苷Rb1浓度;细胞免疫荧光法检测各组β-Ⅲtubulin、GFAP及DAPI的表达,计算GFAP/DAPI、β-Ⅲtubulin/DAPI百分比;Western Blot、CCK-8法测定PI3K/Akt抑制剂LY294002干预下Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平及其OD值。结果:人参皂苷Rb1能够促进体外培养的NSCs增殖,最佳浓度为1μmol/L;不同浓度人参皂苷Rb1组GFAP/DAPI及β-Ⅲtubulin/DAPI百分比与对照组相比无显著性差异(P0.05);但人参皂苷Rb1组(1μmol/L)的OD值及p-Akt蛋白水平均较对照组高(P0.01),且这种作用可以被LY294002逆转。结论:人参皂苷Rb1在一定浓度范围内可以促进体外培养神经干细胞的增殖,PI3K/Akt信号通路在人参皂苷Rb1促进神经干细胞增殖作用中发挥重要作用。     

体外缺氧条件下新生鼠神经干细胞pERK1/2表达与叶酸的影响

背景:课题组前期实验已经证实,神经干细胞在正常培养条件下,叶酸可通过丝裂原活化蛋白激酶通路激活ERK1/2的磷酸化,进而促进神经干细胞的增殖。目的:探讨叶酸在体外缺氧条件下对神经干细胞外信号调节蛋白激酶pERK1/2表达的影响。方法:采用无血清培养法体外分离培养新生鼠神经干细胞,以1×108L-1接种于培养瓶,设立4组,除正常对照组外,缺氧模型组、叶酸缺乏组、叶酸添加组细胞均于第3天放入自制缺氧装置,37℃恒温箱中缺氧培养6h,4组的叶酸含量分别为4mg/L,4mg/L,0.65mg/L,8mg/L。收集增殖6d的细胞,锥虫蓝计数细胞密度,RT-PCR法检测pERK1/2 mRNA的表达,Westernblot法检测pERK1/2蛋白的表达。结果与结论:与正常对照组比较,缺氧模型组神经干细胞增殖能力、pERK1/2 mRNA及蛋白的表达均明显降低。与缺氧模型组比较,叶酸添加组能促进缺氧条件下神经干细胞增殖以及pERK1/2 mRNA、蛋白的表达,而叶酸缺乏组则抑制缺氧条件下神经干细胞的增殖以及pERK1/2 mRNA、蛋白的表达,各组间比较差异有显著性意义(P0.001)。证实添加叶酸后可激活ERK1/2磷酸化,进而促进缺氧条件下神经干细胞的增殖。     

体外磁共振观察胎鼠神经干细胞的标记

背景：神经干细胞移植后的细胞存活、识别和迁移需动态监控。 目的：通过体外磁共振技术对胎鼠神经干细胞体外标记,为神经干细胞在神经系统修复中的应用提供依据。 方法：采用胎鼠神经干细胞的分离与培养标记、染色剂鉴定及神经干细胞的活性检测,构建大鼠脑缺血再灌注模型,采用超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞并移植至模型大鼠左侧脑内,未标记的胎鼠神经干细胞移植至右侧脑中,对标记的细胞进行普鲁士蓝染色,观察其定植和迁移情况,并通过磁共振示踪动态的监测神经干细胞在活体移植之后的信号改变情况。 结果与结论：超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠神经干细胞的方法效率达95%以上,电镜结果显示超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞内含铁颗粒,且集中在溶酶体和内涵体当中,磁共振结果显示胎鼠标记的神经干细胞呈现低信号改变,细胞活性的影响与未标记组差异无显著性意义,但标记的胎鼠神经干细胞T2WI 与 T2*WI信号降低。证实超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞可高效表达,磁共振的监控可以用于神经干细胞的活体示踪。   中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Hes1蛋白的表达差异

目的:研究Hes1蛋白在大鼠肌源性干细胞(MDSCs)体外诱导分化为神经样细胞过程中的表达差异。方法:大鼠乳鼠骨骼肌消化后体外培养增殖,第5代传代后细胞分为两组:对照组完全培养基培养,实验组加入诱导剂培养。6d后观察两组细胞的形态变化,并进行神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫细胞化学鉴定。然后通过免疫荧光和Western Blot技术观察Hes1蛋白的表达差异。结果:实验组细胞呈NSE染色阳性,对照组基本不表达;免疫荧光和Western Blot结果显示,与对照组比较,实验组Hes1蛋白表达较强(P0.05)。结论:在体外,大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Hes1蛋白表达降低。     

Detla1基因在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达

目的:研究Detla1基因在大鼠肌源性干细胞体外诱导分化为神经样细胞过程中的表达.方法:大鼠乳鼠骨骼肌体外培养增殖,分为对照组完全培养基培养,实验组加入诱导剂培养.通过RT-PCR、免疫荧光和免疫印迹法观察Detla1基因存诱导组和对照组的表达差异.结果:对照组Detla1基因表达强阳性,实验组基本不表达.结论:大鼠肌...