抗HER-2抗体chA21对人乳腺癌SKBR3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的探讨抗HER-2工程抗体chA21在体外对高表达HER-2的人乳腺癌SKBR3细胞凋亡的诱导作用及其分子机制。方法采用透射电镜和原位末端标记技术(TUNEL)观察和检测chA21对SKBR3细胞凋亡的诱导,采用免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因bc l-2、bax、Fas及caspase-3表达的改变。结果chA21作用72 h,可见SKBR3细胞凋亡,chA21高浓度组(5.4mg/L)凋亡指数显著高于低浓度组(0.2 mg/L)(P<0.01);chA21处理组SKBR3细胞的bax、Fas及caspase-3表达增加,而bc l-2表达及bc l-2/bax比值降低,上述改变在chA21高、低两个浓度组间有显著差异(P<0.01)。结论chA21在体外可诱导SK-BR3细胞凋亡,其分子机制与调节凋亡相关基因bax、bc l-2、Fas及caspase-3的表达有关。     

抗HER-2工程抗体chA21对人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤血管生成的影响

目的 探讨抗HER-2工程抗体chA21对过表达HER-2的人卵巢癌细胞株SKOV3裸小鼠移植瘤血管生成的影响.方法 建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型,随机分成阴性对照组和chA21组,连续5周尾静脉注射给药,观察肿瘤生长变化;5周后处死裸鼠取下瘤体,利用组织芯片及免疫组化方法结合显微图像分析系统定量检测VEGF、DLL4表达情况,并用CD31免疫组化染色比较两组微血管密度(MVD)值.结果 chA21组肿瘤组织中VEGF、DLL4的表达及MVD值均显著低于阴性对照组(P<0.05).结论 抗HER-2工程抗体chA21能显著抑制人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的血管生成.     

黄连素抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导凋亡

黄连素(berberine)对多种肿瘤有抑制增殖和诱导凋亡的作用[1-2],但在卵巢癌中的作用尚未见报道.本研究以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,观察黄连素对SKOV3细胞增殖抑制作用及凋亡诱导效应.     

WT1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的抑制作用

目的观察WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,应用ASODN技术,将WT1-ASODN转染到SKOV3细胞中,利用MTT法检测WT1寡核苷酸的最适作用浓度和作用时间及WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的影响。结果脂质体介导的WT1反义寡核苷酸在体外能够明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论 WT1反义寡核苷酸能诱导卵巢癌细胞凋亡,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,可望成为一种卵巢癌临床有效的治疗方法。     

Influence of andrographolide on SKOV3 cell apoptosis and HER2 protein expression

目的:研究穿心莲内酯对人卵巢癌SKOV3细胞株生长、凋亡及HER2蛋白表达的影响.方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测穿心莲内酯诱导SKOV3细胞凋亡的凋亡率;Rh123染色荧光显微镜检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化;免疫细胞化学法测定穿心莲内酯处理前后SKOV3细胞磷酸化HER2蛋白表达变化.结果:穿心莲内酯对SKOV3细胞生长增殖具有明显抑制作用;作用细胞16h出现MMP下降;可下调磷酸化HER2蛋白表达.结论:穿心莲内酯可明显抑制SKOV3细胞增殖,并诱导其凋亡;其诱导SKOV3细胞凋亡可能与MMP下降、磷酸化HER2蛋白表达下调有关.     

miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖-凋亡的影响

目的探讨miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。方法RT-qPCR检测21例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织中miR-146a表达;将miR-146a模拟物和miR-146a阴性对照转染到卵巢癌SKOV3细胞中,RT-qPCR检测转染后SKOV3细胞中miR-146a的表达;CCK8检测转染后miR-146a对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染后miR-146a对细胞凋亡的影响;Western blot检测SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的表达。结果 miR-146a在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织;转染miR-146a模拟物能显著提高SKOV3细胞miR-146a的表达量,显著降低SKOV3细胞的增殖能力,提高SKOV3细胞的凋亡率,抑制SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的蛋白表达(P0.01)。结论 miR-146a在卵巢癌癌组织低表达,转染miR-146a模拟物能抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。     

槲皮素对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响

 目的：探讨槲皮素对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖抑制和凋亡的影响,为卵巢癌临床治疗提供依据。方法：不同浓度槲皮素处理卵巢癌SKOV-3细胞后,采用MTT实验检测细胞增殖抑制作用并计算抑制率,细胞免疫化学染色法鉴定细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果：槲皮素能够抑制SKOV-3细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,免疫荧光显示槲皮素对SKOV-3细胞具有诱导凋亡作用,流式细胞术显示SKOV-3细胞被阻滞在S期, G2/M期细胞比例降低,凋亡率上升。结论：槲皮素在体外能够抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,阻止细胞由S期向G2期移行,促进其凋亡。     

重组腺病毒Ad-IL-12感染淋巴细胞对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响

目的 探讨重组腺病毒Ad-IL-12感染人外周血淋巴细胞后对人卵巢癌细胞SKOV3周期、增殖和凋亡的影响.方法 采用重组人IL-12腺病毒(Ad-IL-12)感染人外周血淋巴细胞,感染48 h后与人卵巢癌细胞SKOV3共培养(SKOV3/Ad-IL-12),同时设未感染组(SKOV3)和Ad-GFP空载感染组(SKOV3/Ad-GFP)作为对照.RT-PCR检测IL-12双亚基P35和P40的mRNA表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-12 P70蛋白的分泌,CCK8法检测卵巢癌细胞增殖,流式细胞术分析卵巢癌细胞周期和凋亡,RT-PCR和Western blot检测抗凋亡蛋白BCL-2、survivin 的表达.结果 重组腺病毒Ad-IL-12可成功感染人外周血淋巴细胞,分泌较高水平的IL-12 P70蛋白;淋巴细胞过表达IL-12可抑制SKOV3细胞的增殖;与未感染组和空载组相比,SKOV3/Ad-IL-12组G1期细胞显著增加,凋亡率显著升高(P＜0.05),SKOV3细胞中抗凋亡蛋白BCL-2和survivin显著下调(P＜0.05).结论 人IL-12基因重组腺病毒可以成功感染人外周血淋巴细胞,分泌IL-12 P70蛋白,并可以通过阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖.     

内皮抑素对人卵巢癌细胞系生长的抑制作用

目的探讨人内皮抑素对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法MTT法检测细胞生长;透射电镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot法检测细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达。结果内皮抑素抑制SKOV3细胞增殖(P<0.01);能诱导SKOV3细胞凋亡;而对细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达无明显影响。结论人内皮抑素具有抑制卵巢癌细胞SKOV3生长的作用,其作用机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

大黄素对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX耐药的逆转作用

目的研究大黄素(emodin)体外逆转人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX的紫杉醇耐药效应,探讨其可能机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测大黄素对SKOV3/TAX的细胞毒作用,测定非毒性剂量大黄素联合紫杉醇作用后,SKOV3/TAX对紫杉醇耐药性的变化,采用克隆形成实验检测大黄素与紫杉醇联用时,细胞克隆形成能力。采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡情况。结果不同浓度大黄素对紫杉醇耐药细胞SKOV3/TAX有剂量和时间依赖性的抑制作用。选用对细胞抑制率较低浓度的大黄素与紫杉醇联合使用,使紫杉醇对其耐药细胞SKOV3/TAX细胞的IC50明显下降,且逆转倍数随作用时间而延长而增大。大黄素能抑制细胞的克隆形成能力,当大黄素与紫杉醇联用时,大黄素增加紫杉醇对SKOV3/TAX细胞的增殖抑制作用。大黄素在抑制细胞增殖的同时,尚可诱导细胞凋亡,且大黄素与紫杉醇联和用药后诱导细胞凋亡作用更强,大黄素能增加紫杉醇的细胞凋亡指数。结论大黄素可以逆转紫杉醇引发的卵巢癌耐药,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞氧化应激和凋亡的影响

 目的: 探讨胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用及机制。方法: 采用MTT法检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞生长的作用;流式细胞术检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响;采用DCF-DA染色荧光显微镜观察细胞内的活性氧簇(ROS)水平;采用Western blot检测卵巢癌SKOV3细胞细胞色素C(Cyt C)和活化caspase-3的水平。结果: 与对照组比较,胡桃醌对SKOV3细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度和时间的增加而增强(P<0.05)。流式细胞术检测50 μmol/L胡桃醌作用细胞24 h和48 h后诱导细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均高于对照组(P<0.01)。胡桃醌显著提高细胞内的ROS水平,上调细胞Cyt C和活化caspase-3的蛋白水平。结论: 胡桃醌通过促进SKOV3细胞ROS的积累诱导细胞凋亡和抑制细胞生长。     

线粒体相关内质网膜在顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨卵巢癌细胞SKOV3在顺铂的作用下,对线粒体相关内质网膜(MAMs)的影响。方法:用6 mg/L顺铂处理SKOV3细胞0、12和24 h;通过间接免疫荧光法检测顺铂对active caspase-3的蛋白表达水平以及B细胞受体相关蛋白31(BAP31)和电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1)的共定位的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;并通过透射电镜观察线粒体相关内质网膜的变化。结果:激光共聚焦结果显示,顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞中active caspase-3蛋白水平升高,同时也增加了BAP31和VDAC1的共定位;流式细胞术结果表明,顺铂可明显诱导细胞凋亡;透射电镜结果表明顺铂增加了线粒体和内质网之间的关联(P0.05)。结论:顺铂诱导了SKOV3细胞凋亡,并伴有线粒体和内质网之间关联的增加,推测线粒体相关内质网膜可能参与了顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的过程。     

siRNA沉默RALA基因影响人白血病K562细胞增殖和凋亡

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 猴白血病病毒癌基因同系物A(RALA)基因表达对人慢性粒细胞性白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法: 利用Lipofectamine^TM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RALA siRNA对K562细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测RALA siRNA对K562细胞存活率的影响;real-time PCR检测RALA mRNA表达水平;Western blotting检测RALA蛋白表达水平;annexin V/PI双染流式 细胞仪检测RALA siRNA对K562细胞凋亡的影响;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果: RALA siRNA可明显抑制K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达(P<0.05);与阴性对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);流式细胞术结果显示转染RALA siRNA的K562细胞凋亡较阴性对照组显著增加(P<0.05);Hoechst 33258染色见转染RALA siRNA的K562细胞出现典型的凋亡形态学变化。结论: 癌基因RALA在白血病发生发展过程中发挥重要作用。siRNA下调RALA mRNA和蛋白的表达,可抑制人白血病K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,提示RALA可能是白血病治疗的新靶点。     

活化蛋白C对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响研究

目的：观察不同剂量活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用。方法:将培养成功的HUVECs通过LPS（1 mg/L）孵育诱导细胞凋亡模型，并给予APC（10 μg/L）或APC（50 μg/L）建立药物治疗组，同时设立正常对照细胞组和单独LPS（1 mg/L）诱导细胞凋亡组。应用电镜观察细胞超微结构；DNA ladder与TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡情况；Annexin-Ⅴ/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。同时采用MTT法测定细胞存活率和Western blotting测定增殖细胞核抗原（PCNA），以观察细胞的增殖变化。结果:通过细胞形态，DNA ladder和TUNEL荧光染色发现单独LPS诱导组的细胞可见明显的凋亡现象，而通过APC治疗组的细胞凋亡改变明显减轻和细胞凋亡率下降，同时细胞存活率和PCNA表达率增高，尤其在50 μg/L时，与单独LPS诱导组细胞比较差异显著（P<0.05）。结论:APC拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡并促进细胞的增殖，发挥保护细胞的作用。     

XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。     

野生型PTEN基因对卵巢癌细胞株的影响

目的： 观察转入野生型PTEN基因的卵巢癌细胞生物学行为变化，探索该基因对卵巢癌细胞周期的影响和抑制肿瘤侵袭的机制。 方法： 将野生型PTEN基因的pcDNA3.1Hygro(-)真核质粒载体转染SKOV3细胞系，潮霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养；采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化；用MTT法检测细胞抑制率。分别用RT-PCR检测转染前后PTEN mRNA表达水平变化；采用重组基底膜侵袭模型，观察转染前后细胞侵袭力的变化。 结果： 成功转染SKOV3并稳定表达PTEN，转染PTEN可以明显改变SKOV3细胞周期，使其阻滞于S期；明显抑制肿瘤细胞的侵袭力。 结论： 提示转染外源野生型PTEN基因可使SKOV3细胞周期阻滞于S期，并且通过抑制肿瘤细胞侵袭与生长，而具有明显的抑癌作用。     

独蒜兰乙酸乙酯萃取物通过内源性线粒体通路诱导白血病K562细胞和HL-60细胞凋亡

目的:探讨独蒜兰乙酸乙酯萃取物对人慢性粒细胞白血病K562细胞和急性髓性白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响以及诱导凋亡的途径。方法:采用XTT法、台盼蓝拒染法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和Western blot法研究不同浓度独蒜兰乙酸乙酯萃取物对上述2种白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期和凋亡相关蛋白表达等方面的影响。结果:独蒜兰正丁醇萃取物对K562细胞活力几乎没有抑制作用,而乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞的活力和增殖。乙酸乙酯萃取物对于HL-60细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC_(50))为(42.14±2.54)mg/L,对于K562细胞的IC_(50)为(51.28±3.12)mg/L。Annexin V-FITC/PI和DAPI染色结果显示,乙酸乙酯萃取物呈剂量依赖性诱导2种细胞凋亡,且50 mg/L的乙酸乙酯萃取物作用后K562细胞的凋亡率为33.1%,而HL-60细胞的凋亡率为63.1%,说明HL-60细胞对乙酸乙酯萃取物更加敏感,伴有典型的细胞核凋亡形态学改变。PI染色结果显示HL-60细胞和K562细胞都被阻滞于G_2期。Western blot结果显示,随着药物浓度的升高,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达降低,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和活化的多腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达逐渐升高,内源性线粒体凋亡的特征胞浆中细胞色素C和凋亡诱导因子表达也逐渐升高。结论:独蒜兰乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞增殖,并通过触发内源性线粒体凋亡通路诱导这2种细胞凋亡。     

自噬在熊果酸诱导的人脐静脉内皮细胞损伤中的作用

目的: 研究自噬在熊果酸诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤中的作用。方法: 体外培养HUVECs,运用不同浓度的熊果酸处理36 h,采用MTT法检测HUVECs增殖率的变化;透射电镜观察细胞超微结构的改变;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察熊果酸对HUVECs自噬表达水平的影响;Western blotting检测微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3, LC3)及自噬相关蛋白Beclin-1的变化;RT-PCR检测LC3及Beclin-1 mRNA的变化;流式细胞术检测自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)抑制自噬前后经熊果酸处理的HUVECs凋亡率的变化。结果: 熊果酸抑制HUVECs增殖并呈剂量依赖性;熊果酸可诱导HUVECs产生自噬:透射电镜和MDC染色均显示HUVECs经熊果酸处理后自噬囊泡明显增加且自噬在基因及蛋白水平的表达均增加;3-MA与熊果酸联合作用于HUVECs时抑制了熊果酸诱导的HUVECs自噬空泡的积聚并且可明显促进HUVECs凋亡。结论: 熊果酸抑制HUVECs增殖,并诱导其发生自噬,自噬在此过程中对HUVECs起保护作用。自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸诱导的HUVECs的增殖抑制作用并且促进HUVECs发生凋亡。