应用细胞培养技术观察黄芩苷对损伤子宫内膜细胞凋亡的影响

背景:研究表明脂多糖对子宫内膜细胞具有损伤作用.目的:通过噻唑蓝和流式细胞术观察黄芩昔对脂多糖诱导的子宫内膜细胞活性、周期和凋亡率的影响.设计、时间及地点:以细胞为对象的分组对比观察实验,于2005-11/2007-03在湖南中医药大学完成.材料:子宫内膜组织标本3例,来自中南大学湘雅医学院第三附属医院和湖南省妇幼保健医院因不孕症行诊断性刮宫术,或子宫肌瘤行子宫全切除的患者;黄芩提取物由长沙艾菌生物科技开发有限公司提供.黄芩苷含量≥90%,由湖南中医药大学药学院药物制剂室制备黄芩苷药物,原液浓度为80 g/L.方法:体外培养人子宫内膜细胞.将细胞随机分为空白组、黄芩苷组(8,0.8,0.08,0.008 p/L).根据细胞活性最好的黄芩苷浓度以下实验将细胞随机分为空白组、脂多糖组、脂多糖 黄芩苷组(0.08 g/L).主要观察指标:①采用噻唑蓝法检测黄芩苷对子宫内膜细胞活性的影响.②采用流式细胞术检测黄芩苷对脂多糖诱导子宫内膜细胞凋亡率及周期的影响.结果:①噻唑蓝法检测显示黄芩苷组除0.008g/L外,其余各浓度对子宫内膜细胞活性均有抑制作用,选择0.08g/L进行后续实验.②流式细胞术检测显示黄芩苷干预后G0/G1和G2/M期细胞百分比较脂多糖组明显降低,S期明显增高,细胞凋亡率明显降低.结论:黄芩苷可以使G0/G,期细胞被诱导进入S期,从而促进细胞的增殖,降低了脂多糖诱导的细胞凋亡.     

三氧化二砷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞外基质代谢的影响

[目的]探讨三氧化二砷(ATO)对增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及细胞外基质代谢的影响.[方法]0 μmol/L(对照组)、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L的ATO作用HSF 24、48、72 h后,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法检测Ⅰ型胶原蛋白(CoLⅠ)和CoL Ⅲ含量,western blot检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达.[结果]与对照组比较,2、4、8 μmol/L的 ATO显著降低HSF细胞活力(P<0.01),提高细胞早期凋亡率及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),降低细胞中CoLⅠ、CoL Ⅲ含量(P<0.01),下调TIMP-1表达,上调MMP-1,MMP-13表达(P<0.01);与2 μmol/L 比较,4、8 μmol/L的ATO能显著显著降低HSF细胞活力(P<0.01),提高细胞早期凋亡率及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),降低细胞中CoLⅠ、CoL Ⅲ含量(P<0.01),下调TIMP-1表达(P<0.01),上调MMP1及MMP13表达(P<0.01);与4 μmol/L 比较, 8 μmol/L的ATO能显著降低HSF细胞活力(P<0.01),提高细胞早期凋亡率及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),降低细胞中CoLⅠ、CoLⅢ含量(P<0.01),下调TIMP-1表达(P<0.01),上调MMP1及MMP13表达(P<0.01).[结论]ATO能显著的抑制HSF增殖及细胞外基质合成,促进细胞外基质降解.     

白藜芦醇对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响及变化规律.方法:通过不同浓度(0.128 ～ 500 000 nmol/L)Res作用于增殖期的Capan-1,检测5 d各组细胞增殖率和细胞生长状态;通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度(killing concentration),并以此浓度再次作用细胞5 d,检测并分析其细胞周期和细胞凋亡情况.结果:Res在16 nmol/L时增殖率显著升高,而在15 000 nmol/L开始呈现抑制增长表现.Res对Capan-1的IC50为48.33 μmol/L,细胞杀伤浓度为87.40 μmol/L.流式细胞检测结果表明,Res浓度为48.33 μmol/L时,G0/G1期细胞比例显著增高于空白对照组(P ＜ 0.01).当Res浓度为87.40 μmol/L时,G2/M期细胞比例显著低于空白对照组和48.33 μmol/L组(P ＜ 0.01),且细胞凋亡率显著高于其他两组(P ＜ 0.01).结论:Res对Capan-1的增殖影响存在浓度依赖性,分别表现为促进增殖、抑制增殖、促进凋亡3个阶段浓度,其中Res抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用与其对细胞周期的阻断作用有关.     

紫杉醇与顺铂联合化疗对宫颈鳞癌细胞株HCE1作用的实验研究

目的 观察紫杉醇加顺铂联合化疗在宫颈鳞癌细胞株HCE1中的协同效应,指导进一步临床应用.方法 (1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片.(2)实验分组及检测:①终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的紫杉醇培养HCE1细胞;②终浓度为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂培养HCE1细胞;③紫杉醇联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24 h、48 h、72 h后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24 h、48 h、72 h三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变.结果 (1)紫杉醇处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等.(2)经终浓度分别为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L紫杉醇处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(9.5±0.66)%、(17.1±1.51)%、(33.3±1.77)%,48 h时,细胞抑制率分别为(28.0±2.27)%、(45.2±3.15)%、(66.0±2.95)%,72 h时,细胞抑制率分别为(39.4±2.81)%、(66.2±7.02)%、(81.5±1.78)%;经终浓度分别为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(3.6±0.56)%、(6.5±0.98)%、(14.1±2.52)%,48 h时,细胞抑制率分别为(6.5±0.46)%、(9.9±1.35)%、(20.0±3.05)%,72 h时,细胞抑制率分别为(14.1±3.05)%、(42.1±3.90)%、(59.4±4.26)%;联合处理组以48 h 20 μmol/L紫杉醇联合20 μg/ml顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为(30.2±3.34)%,综上可见紫杉醇和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,紫杉醇联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用.(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,紫杉醇处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,紫杉醇联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于紫杉醇处理组和顺铂处理组之间.以20 μmol/L紫杉醇作用HCE1细胞48 h为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(86.0±3.01)%、(9.1±0.66)%,40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(2.1±0.26)%、(92.2±6.24)%,20 μmol/L紫杉醇联合40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(13.2±0.78)%、(80.5±2.46)%.(4)细胞凋亡分析表明,紫杉醇处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;紫杉醇联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高.结论 紫杉醇与顺铂联合对宫颈癌细胞的抑制作用明显增强,提示紫杉醇可与顺铂对宫颈癌细胞增殖的抑制产生协同作用.     

油菜花粉脂溶性提取物对人肺腺癌细胞A549杀伤作用的实验研究

目的:探讨油菜花粉脂溶性提取物(BPE)对体外培养的人肺腺癌细胞A549的杀伤效应.方法:以人肺腺癌细胞A549为研究对象,电镜观察用药前后A549细胞形态,应用CCK-8法检测BPE对A549细胞增殖的影响,用流式细胞术检测BPE对A549细胞周期和凋亡的影响.RT-PCR检测bax/bcl-2基因表达.结果:BPE对A549细胞增殖有抑制作用,在一定浓度范围内,呈量一效关系,当BPE浓度为1 000 μg/mL时,A549细胞增殖的抑制率达到最高,为76.54%.透射电镜下可见细胞核固缩,染色质凝集或边聚,胞浆内出现空泡,并有凋亡小体出现.流式细胞仪检测结果显示A549细胞周期比例分布出现变化,G0/G1期细胞比例呈下降趋势,而S期和G2-M期比例则上升;随着时间的延长,细胞凋亡率上升.RT-PCR检测显示BPE的作用效应不是通过bax/bcl-2基因实现的.结论:BPE可抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞的凋亡.     

低分子肝素对胃癌原代细胞增殖及SDF-1表达的影响

[目的]探讨低分子肝素对胃癌原代培养细胞增殖及基质细胞衍生因子1 (stromal cell derived factor-1,SDF-1)表达的影响.[方法]将胃低分化腺癌组织和正常胃黏膜组织制成原代细胞后分为:①胃癌细胞组(A组),②胃癌细胞+低分子肝素(LMWH)组(B组),③胃黏膜细胞组(C组),④胃黏膜细胞+LMWH组(D组).MTT法检测各组细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡状况,RT-PCR检测各组细胞SDF-1 mRNA的表达量并比较.[结果]B组细胞增殖显著低于A组,同时细胞凋亡率增加,G0和G1期细胞比例显著增高,而S期比例则显著减低,G2和M期无显著差异;D组细胞数量和细胞凋亡率、G0和G1期、S和G2和M期的比例与C组比较差异无统计学意义.B组与A组相比,SDF-1mRNA表达水平下降,而D组SDF-1mRNA表达水平与C组无明显差异.[结论]LMWH可显著抑制胃癌原代细胞的增殖和增加细胞的凋亡率,影响细胞周期,同时可降低细胞SDF-1表达.     

罗格列酮对体外培养大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及GW9662的干预作用

[目的]观察罗格列酮时血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及探讨其可能机制.[方法]采用罗格列酮处理及处理前GW9662干预体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(AVSMCs),用流式细胞学法检测细胞凋亡率,原位凋亡检测法(TUNEL)检测细胞凋亡.[结果]罗格列酮对大鼠VSMCs凋亡诱导存在时阃依赖和浓度依赖:随着罗格列酮诱导时间的增加,细胞凋亡率逐渐增加,24h细胞凋亡率最高,超过24 h凋亡率没有继续增加;随着罗格列酮浓度的增加,细胞凋亡率运浙增加,100 μmol/L时细胞凋亡率最高,超过100 μmol/L细胞凋亡率不再增加.并且GW9662可逆转罗格列酮对AVSMCs凋亡的诱导.[结论]罗格列酮可能通过与PPAR-r结合并使PPAR-r激活诱导AVSMCs凋亡.     

全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞作用的研究

目的:探讨小剂量全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞短期作用的效果和意义.方法:MTT法筛选ATRA实验浓度,用筛选浓度ATRA作用LoVo细胞,MTT法检测ATRA 对肿瘤细胞的抑制率,流式细胞仪检测ATRA对肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率改变.结果:ATRA抑制LoVo细胞的作用呈时效和量效依赖性,1μmol·L-1ATRA作用48 h或72 h可明显抑制肿瘤细胞增殖,与作用12 h或24 h对肿瘤细胞的抑制率有显著差异(P<0.01);1.0 μmol·L-1ATRA作用12 h,肿瘤细胞G1期比例升高,其作用24 h伴细胞s期比例降低,其作用48 h,伴细胞G2/M期比例降低(P<0.01);1 μmol·L-1ATRA作用48 h或72 h均可明显诱导肿瘤细胞凋亡,但对肿瘤细胞的抑制率、细胞周期和凋亡率影响无差异(P>0.01).结论:小剂量/短程ATRA通过改变LoVo细胞周期和诱导细胞凋亡,可明显抑制肿瘤细胞增殖.     

紫草素对人绒癌耐药细胞株增殖的抑制及凋亡的作用

目的 研究紫草素对体外培养的人绒癌耐药细胞株(JAR/MTX)抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用.方法 经不同浓度的紫草素分别作用24 h、48 h、72 h后,应用cck-8试剂盒检测其细胞毒性,应用流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率变化,应用荧光显微镜观察凋亡现象.结果 当紫草素浓度从0.1875 μg/ml增加到3μg/ml时,其48h抑制率从46.48±12.0%升高到92.05±9.2%,0.75μg/ml紫草素分别作用24 h、48 h、72 h,其抑制率分别为43.94±10.1%、68.56±10.2%、84.97 ±18.63%,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01),可见随着紫草素剂量的增加和作用时间的延长,对绒癌耐药细胞生长的抑制率也明显增加.当紫草素浓度从0.1875 μg/ml增加到3μg/ml时,与细胞作用48h后,凋亡率由12.13±5.67%升高到30.08±7.85%(P＜0.05或P＜0.01),随着药物浓度增加凋亡率亦增加,并可见典型的凋亡细胞核形态学变化.细胞周期分布也呈浓度依赖性改变,一方面增高C,0/G1期细胞比例(P＜0.05),另一方面降低S期和G2/M期细胞比例(P＜0.05).结论 紫草素对JAR/MTX具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,值得进一步深入研究与探讨.     

华蟾素联合放疗对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的:观察华蟾素对胃癌细胞BGC-823的增殖抑制及联合放疗对细胞周期、细胞凋亡的影响。方法:MTT法测定华蟾素对胃癌细胞BGC-823的抑制率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率。结果:华蟾素能抑制胃癌细胞BGC-823增殖,48h的IC50值为1.73μg/mL。华蟾素与放疗联合使G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,联合组与各单独作用组相比差异显著。联合组诱导胃癌细胞株BGC-823的凋亡率显著高于各单独作用组。结论:华蟾素联合放疗可诱导BGC-823细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而抑制BGC-823细胞生长。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

31例误诊哮喘原因分析

目的通过对中央气道不全性梗阻和支气管结核、术后痰栓形成误诊为支气管哮喘的分析,探讨误诊原因及正确诊断的方法。方法对误诊为支气管哮喘的3l例患者的临床资料进行分析。结果临床特征以刺激性咳嗽为主,其次为活动后胸闷、气促,肺部闻及哮鸣音,胸部影像学多无特征性改变或极易漏诊,支气管舒张试验阳性率低,诊断前缺乏气管镜及病理检查,均误诊为支气管哮喘。结论中央气道不全梗阻性病变或炎性病变包括支气管结核、术后痰栓形成时原发疾病症状不典型,肺部影像学检查无异常表现或极易漏诊,故该类以表现为咳嗽、喘息、活动后胸闷,进而出现严重呼吸困难的患者常被误诊为支气管哮喘,延误诊治。支气管镜及病理检查再结合肺CT是鉴别诊断的重要方法。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

乳腺叶状肿瘤的影像分析

目的 分析乳腺叶状肿瘤的X线钼靶摄片和超声表现.方法 收集经手术病理证实的19例乳腺叶状肿瘤,术前均行超声检查,其中15例行X线钼靶摄片,回顾分析其临床特点和影像学表现.结果 19例乳腺叶状肿瘤中,良性8例,交界性6例,恶性5例.15例患者X线钼靶摄片中病灶均为高密度孤立肿块影,呈圆形(8例)或浅分叶状(7例),边界清晰(10例)或部分不清(5例),部分肿块周边见"晕"征(4例).超声检查6例发现囊性变,6例表现为后方回声增强.病灶为圆形(8例)、浅分叶状(8例)或有角状突起(3例).所有病例均未发现腋下转移淋巴结及周围组织浸润等恶性征象.结论 认识乳腺叶状肿瘤的病理类型和临床特点,结合影像表现综合分析,可提高术前诊断率.     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。