血管内皮细胞生长因子对内皮细胞放射损伤的保护作用

目的 探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）对原代脐静脉内皮放射损伤的保护作用。方法 采用HE染色及MTT法观察6Gy和12Gy辐射对内皮细胞形态及增殖活性的影响，同时观察EGF对内皮细胞放射损伤的保护作用。结果 放射损伤组在细胞大小和形态方面发生明显改变，6Gy能引起内皮细胞增殖活性增强，而12Gy则导致活性下降；VEGF明显促进内皮细胞增殖，并能改善12Gy所引起的损伤。结论 VEGF可作为放射损伤的拮抗剂，在创面修复中具有很好的应用前景。     

血管内皮细胞生长因子研究进展

大量研究证实,在许多病理过程中都存在着新生血管的形成,如创伤愈合过程、炎症过程以及肿瘤发生过程。在实体肿瘤中,如果没有微血管的发生,肿瘤仅可通过扩散缓慢生长到1～2mm3,只有在新生血管形成以后,肿瘤才能迅速长大,并进一步向周围浸润和进入血液循环向远处转移。迄今为止,有关影响血管生成因素的研究已有很多,其中对血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)的研究较为全面。本文拟就VEGF的结构、功能、在肿瘤血管发生中的作用及其受体进行综述。1　VEGF的结构和功能Ferrara等于196 8年在牛垂体滤泡星状…     

血管内皮细胞生长因子研究进展

在实体肿瘤中 ,如果没有微血管的发生 ,肿瘤仅可通过扩散缓慢生长到 1～ 2mm3,只有在新生血管形成以后 ,肿瘤才能迅速长大 ,并进一步向周围浸润和进入血液循环向远处转移〔1〕。迄今为止 ,有关影响血管生成因素的研究已有很多 ,其中对血管内皮细胞生长因子 (Vascularendothelia     

肝细胞生长因子对心肌细胞及血管平滑肌细胞、血管内皮细胞生长因子分泌的作用

观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的牛冠状动脉血管内皮细胞 (BCAEC)、牛冠状动脉血管平滑肌细胞 (BCASMC)和小鼠心肌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌的影响。BCAEC对照组与HGF组 12hVEGF浓度分别为 10 5 1± 2 90和 9 31± 2 78pg/ml;BCASMC对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 3 35倍和 3 93倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 0 6倍和 2 4 2倍 ;心肌细胞对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 5 4 3倍和 4 0 9倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 74倍和 2 0 6倍。提示BCAEC、BCASMC及小鼠心肌细胞均具有自分泌VEGF的作用 ,HGF促进BCASMC和心肌细胞VEGF的分泌 ,对BCAEC无影响     

炎性损伤对肺微血管内皮细胞β-受体的影响

用放射性配基结合分析法 ,测定 β 肾上腺素能受体 ( β AR)在大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)的分布情况 ,并观察炎性损伤对它的影响。结果表明 ,β AR的最大结合容量Bmax为 ( 5 .5 83± 0 .30 6 )fmol/1 0 5 细胞 ,Kd值为 ( 0 .2 7± 0 .0 3)nmol/L ;LPS、TNF和H2 O2 作用后 ,β AR的Bmax均较正常对照组显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 )。提示 :RPMVEC胞膜存在高亲和力的 β AR ;LPS、TNF和H2 O2 可引起 β AR的显著下调。     

高压氧对小鼠结肠癌移植瘤血管内皮细胞生长因子表达及微血管密度的影响

目的 探讨高压氧(HBO)对小鼠结肠癌移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达和肿瘤微血管密度(MVD)的影响.方法 建立小鼠结肠腺癌细胞CT26移植瘤模型16只,按数字表法随机分为对照组(8只)和HBO组(8只).HBO组每天HBO暴露1次,每次60 min,共15次.HBO处理结束后检测肿瘤生长情况,计算抑瘤率,并采用免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF表达和肿瘤MVD的改变.结果 与对照组[(2.692±0.391)cm3]比较,HBO组[(1.729±0.402)cm3]肿瘤的增长速率减慢(P＜0.05),且HBO组VEGF的表达(1.82±0.43)及MVD计数(23.43±4.05)与模型对照组VEGE(2.37±0.16)和MVD(31.57±6.32)比较均显著性降低(P＜0.05).结论 HBO可能通过抑制VEGF的表达、降低肿瘤血管生成进而抑制肿瘤的生长.     

血管内皮细胞生长因子-海藻酸钙缓/控释微球的制备及其对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的研制血管内皮细胞生长因子(VEGF)-海藻酸钙微球缓/控释系统并观察其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,为VEGF缓/控释促进组织工程骨血管化提供理论依据。方法应用锐孔挤出-离子交联法制备微球,检测其理化及体外释药性质；培养HUVEC,依据培养基添加物不同,设空白对照组、空白微球组、单用VEGF组及VEGF-海藻酸钙微球组,通过细胞计数法、四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞仪测细胞周期考察细胞增殖情况。结果微球球形圆整,粒径(560±50)μm,载药量0．72ng/mg,包封率54%,体外释药平稳,达10d以上。细胞培养初期,VEGF组的促分裂增殖作用最强,中后期,VEGF微球组的促分裂增殖作用最强,差异有统计学意义(P＜0．05),空白微球组与空白对照组间在细胞计数、细胞活性、细胞周期的各时相点差异均无统计学意义。结论海藻酸钙微球可以保存VEGF活性并持续释放VEGF 10d以上,在较长时期内促进HUVEC的增殖。     

放射损伤对内皮细胞增殖与凋亡的影响

放射损伤在平战时均可发生，合并放射损伤时组织修复常常延缓，创伤愈合延迟，即出现创伤难愈现象，但其机理尚未完全阐明。创伤局部的组织修复细胞，如血管内皮细胞和成纤维细胞等在创伤愈合过程中具有重要作用。合并全身放射损伤时创伤局部内皮细胞生物学特性异常可能是创伤难愈的重要原因。因此，本实验探讨不同照射剂量对内皮细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响，并观察bFGF对内皮细胞放射损伤的拮抗作用，为创面修复提供新思路。     

血管内皮生长因子转基因治疗小鼠辐射损伤的实验研究

目的 通过构建血管内皮生长因子(VEGF)基因的真核表达质粒,并将其转入受照小鼠机体,研究VEGF蛋白表达对放射损伤的救治作用及其分子机制。方法 昆明种小鼠通过随机化分组表法随机分为正常对照组、单纯照射组和转基因组。转基因组应用VEGF重组质粒进行肌肉注射,注射后24 h接受8 Gy X射线照射,进行小鼠临床表现和死亡率观察。并于照后不同时间处死动物,进行组织器官病理学和原位胸腺和脾细胞凋亡检测。结果 用PCR方法从pSP73/H_VEGF165质粒扩增得到VEGF₁₆₅基因片段,经双酶切后与酶切的pcDNA3.1载体连接,构建重组质粒pcDNA3.1/ VEGF₁₆₅,经电泳和测序表明序列与GeneBank完全一致。X射线8 Gy照射小鼠,单纯照射组14 d内死亡率为64%,而转基因组为36%,两组比较差异有统计学意义(t=3.92,P＜0.05)。转基因组小鼠胸腺和脾组织的细胞凋亡率显著降低(t=3.11、3.53,P＜0.05),放射病理损伤明显改善。结论 成功构建了重组质粒pcDNA3.1/ VEGF₁₆₅,重组质粒转基因治疗可显著降低严重辐射损伤小鼠的死亡率,显著减低胸腺和脾脏细胞凋亡率,明显改善免疫器官的病理变化。     

增敏(89)Sr内照射时小鼠骨髓DNA损伤的实验研究

目的　探讨89Sr内照射治疗时增敏剂烟酰胺和Carbogen对小鼠骨髓网织红细胞DNA损伤的影响。方法　昆明系小鼠 ,按组注射烟酰胺和 (或 )吸入气体Carbogen ,对照组注射同体积生理盐水。经小鼠尾静脉“弹丸”注射 2 0 0 μl89SrCl,放射性活度 74 0 0kBq( 2 0 0 μCi)。正常组注射同体积生理盐水。分别于注射后第 1,2 ,3,4 ,6 ,8,15 ,2 0 ,30 ,6 0和 90天批量处死小鼠 ,立即分离股骨骨髓 ,荧光法进行小鼠骨髓网织红细胞微核测定。结果　治疗组微核出现频率随观察时间呈双峰 ,各组第 1峰出现时间在第 2～ 4天 ,第 2峰在第 10～ 14天。阴性对照和阳性对照组比较 ,微核产生频率差异有显著性 (F =15 5 17,P <0 0 0 1)。其余各组 ( 89Sr N C ,89Sr,89Sr N和89Sr C)间相比较差异无显著性 (F =0 717,P >0 0 5 )。与89Sr组比较 ,单微核、双微核及三微核形成率差异均无显著性。未观察到四微核细胞。结论　增敏剂烟酰胺和Carbogen的应用在增敏89Sr治疗时不增加89Sr对小鼠的损伤     

纳米羟基磷灰石/聚酰胺66/成骨细胞/血管内皮生长因子165组织工程骨修复骨缺损再血管化与成骨活性

目的 探讨以转染血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor,VEGF165)基因的成骨细胞为种子细胞复合纳米网孔羟基磷灰石/聚酰胺66(nano-hydrxyapatite crystal/polyamide 66,n-HA/PA66)支架,构建的n-HA/PA66/成骨细胞/VEGF165组织工程骨修复兔桡骨缺损早期快速再血管化和成骨的能力。 方法 选新西兰大白兔56只,采用随机数字表法分成A、B两组,制作双侧桡骨骨缺损模型。A1组：将n-HA/PA66复合材料植入A组左侧骨缺损;A2组：将n-HA/PA66/ VEGF165复合材料植入A组右侧骨缺损;B1组：将n-HA/PA66/成骨细胞/VEGF165复合材料植入B组左侧骨缺损;B2组：将n-HA/PA66/成骨细胞复合材料植入B组右侧骨缺损。术后2,4,8,12周进行大体观察,数字X线摄片(DR)、组织学切片、血管计数、扫描电镜观察。 结果 B1组各个时相点各种观察指标均表明其成骨活性及再血管化明显优于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05)。A1、A2组成骨活性及再血管化远不如B1、B2组,A1、A2两组之间差异无统计学意义。 结论 n-HA/PA66/成骨细胞/VEGF1 65组织工程骨具有良好的诱导成骨作用,在早期骨愈合中能促进新生血管快速形成,加快骨缺损的愈合。     

基因修饰的组织工程骨联合血管束植入修复节段性骨缺损

目的 评价骨形态发生蛋白2（BMP-2）基因修饰的组织工程骨联合血管束植入修复节段性骨缺损效果。方法 分离培养兔骨髓基质干细胞，经BMP-2基因转染后复合异种骨支架体外构建基因修饰的组织工程骨。建立兔双侧桡骨缺损（2．0cm）模型，采用4种方法修复：A组：基因修饰的组织工程骨＋血管束植入；B组：基因修饰的组织工程骨；C组：无基因修饰的组织工程骨＋血管束植入；D组：单纯支架。术后4、8、12周行X线检查、计量组织学检查、生物力学测定和微血管墨汁灌注等观察血管形成及成骨情况。结果 A组缺损区在成骨活跃程度、再生骨量等方面均显著优于其他组，血管束发出分支向移植骨内长入，血管再生旺盛，其骨缺损得到了较彻底的修复。B组在BMP-2基因诱导下成骨速度和质量优于C组；而D组缺损内主要形成纤维组织。结论 BMP-2基因治疗联合血管束植入具有良好的成骨及血管化效果，对骨不连、长段骨缺损的治疗具有重要意义。     

血管内皮生长因子在骨形态发生蛋白-2诱导成骨细胞过程中的作用

目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导成骨过程中的作用。方法（1）取小鼠胚胎成骨细胞进行体外培养，RT—PCR法检测rhBMP-2（300ng／m1）诱导成骨细胞分化过程中VEGF受体（VEGF receptors，VEGF—R）的表达。（2）采用VEGF反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides，ASODNs）和苏拉明分别阻断VEGF的合成及功能，观察对成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）活性和钙结节形成的影响。（3）在rhBMP-2诱导成骨的同时，添加不同浓度的外源性VEGF，观察对成骨细胞体外矿化能力的影响。结果（1）VEGF—R（Flk-1和Flt-1）mRNA在成骨细胞呈稳定弱表达，rhBMP-2干预24h后VEGF—R的表达量无明显变化。（2）应用VEGF ASODNs和苏拉明可抑制rhBMP-2所诱导的ALP活性和钙结节形成，并存在剂量依赖效应。（3）单独应用VEGF并不能使成骨细胞分化为钙结节，外源性VEGF的加入亦不影响rhBMP-2刺激钙结节形成的能力。结论VEGF在成骨细胞可以自分泌的形式发挥作用，VEGF至少部分参与了rhBMP-2的诱导成骨活性。     

氡暴露致小鼠骨髓细胞的DNA损伤

目的 研究氡暴露致小鼠骨髓细胞的DNA损伤。方法 采用雄性BALB/C小鼠24只,随机分为4组,每组6只,除对照组外,处理组小鼠整体暴露于多功能生态氡室,吸入氡及其子体的累积剂量分别为27(低剂量组)、52(中剂量组)和105(高剂量组)工作水平月(WLM)。采用单细胞凝胶电泳(SCGE)、微核(MN)实验、激光共聚焦显微镜(LSCM)检测小鼠骨髓细胞的DNA链断裂、微核细胞率及凋亡率,观察氡暴露致小鼠骨髓细胞的DNA损伤。结果 高剂量氡暴露可造成小鼠骨髓细胞DNA断裂,尾长和尾DNA百分含量与对照组相比,差异有统计学意义(F=201.9,40.78,P<0.05);微核率和凋亡率增加差异有统计学意义(F=16.28,41.62,P<0.05)。而中、低剂量组则无明显改变。结论 高剂量氡暴露引起DNA损伤,从而对小鼠骨髓细胞产生毒效应。     

不同剂量水平椎体IMRT对比格犬椎体骨细胞的损伤作用

目的 通过比较不同剂量水平椎体适形调强放疗(IMRT)对成年比格犬椎体骨细胞的损伤作用,初步探讨一次全椎体IMRT的安全剂量范围。方法 选取纯种比格犬30只按随机数字表法平均分为5组,以全椎体IMRT的治疗方式分别对5组比格犬胸9~10椎体给予0、40、50、60和70 Gy剂量的照射,于照后3个月处死,取相同部位的胸9~10节段椎体骨进行HE染色、电镜观察后,免疫组织化学法定量检测椎体中血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达,TUNEL法定量检测椎体骨中凋亡骨细胞。结果 HE染色结果提示随着IMRT剂量的增大,比格犬椎体骨空骨陷窝率增加明显(F=2.57,P<0.05),骨小梁断裂程度增加,但面积未见明显下降(P> 0.05);电镜结果提示40 Gy IMRT组部分骨细胞出现凋亡,而50 Gy及以上剂量IMRT组绝大多数骨细胞凋亡。TUNEL表达结果提示40 Gy IMRT组骨细胞凋亡率低于50 Gy及以上剂量组骨细胞凋亡率(F=3.52,P<0.05),50 Gy及以上剂量组骨细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。50 Gy以上组的VEGF蛋白表达高于40 Gy组(F=3.64,P<0.05),但50、60、70 Gy组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 50 Gy可作为临床选择治疗总剂量界限的参考标准。     

转染骨形态发生蛋白-2基因的人骨髓间质干细胞复合异种骨支架异位成骨的效果

目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)罐因转染的人骨髓间质干细胞复合异种骨支架异位成骨效果。方法 分组：(1)BMP-2基因转染细胞 异种骨支架[去抗原牛松质骨(BCB)]；(2)对照基因转染细胞 BCB；(3)未转染细胞 重组BMP-2 BCB；(4)未转染细胞 BCB；(5)BCB。分别将各组人工骨植入裸鼠皮下，于术后4，8周行组织学观察．结果 体内植入后3d，细胞持续表达外源基因BMP-2基因转染组8周时完全由新形成的编织骨构成，血管丰富。结论 BMP-2基因转染后细胞复合BCB支架，可以在异位形成骨组织并诱导毛细血管长入。     

EGFP标记的VEGF165重组质粒的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建pIRES2-EGFP-VEGF165真核表达质粒,并在大鼠骨髓间充质干细胞内表达。方法应用DNA重组方法构建pIRES2-EGFP-VEGF165,并将其转染到大鼠骨髓间充质干细胞内,采用ELISA和MTT法检测转染后细胞培养上清液中VHGF165的含量及生物活性。结果成功构建了pIRES2-EGFP-VHGF165,将其转染骨髓间充质干细胞后,VEGF蛋白表达水平明显增高．转染后的细胞培养上清具有促使内皮细胞增殖的生物活性。结论成功构建了真核表达质粒pIRES2-EGFP-VEGFl65．将其转染骨髓间充质干细胞后可高水平地表达具有生物学活性的VEGF蛋白。     

Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法对SCID小鼠辐射防护的初步探讨

目的 探讨辐射诱导启动子调控的造血因子基因表达对照射后造血保护的作用。方法 将构建的携带有Egr-1启动子的Flt3配基（FL）cDNA和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）cDNA双顺反子表达载体导入基质细胞后，联合人CD34^ 细胞输入经亚致死剂量照射的重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内，观察外周血象动态改变和人造血细胞及其基质细胞植入的变化。结果 实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻，恢复加快，骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞，而各组间骨髓中CD45^ 细胞、CD34^ 细胞、CFU－GM及骨髓有核细胞计数差异无显著性。结论 Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法具有一定的辐射造血保护作用。