三种不同免疫抑制剂对胰岛细胞功能的影响

目的观察免疫抑制剂对体外培养胰岛细胞活力的影响,探讨免疫抑制剂对胰岛移植物功能的影响。方法应用体外纯化后培养的SD大鼠胰岛细胞,采用噻唑蓝法测定在不同浓度免疫抑制剂作用下胰岛细胞活力的变化。结果低剂量雷帕霉素对胰岛细胞活力无明显影响,1 ng/ml以上雷帕霉素能引起胰岛细胞活力降低;低剂量和高剂量daclizumab和FTY720对胰岛细胞的活力均无明显影响。结论雷帕霉素对胰岛细胞有直接损伤作用,这种损伤程度与浓度呈正相关,daclizumab和FTY720对胰岛细胞无明显毒性。     

西罗莫司和FTY720对大鼠胰岛细胞体外分泌功能的影响

目的:探讨西罗莫司(sirolimus)和FTY720对大鼠胰岛细胞体外分泌胰岛素功能的影响.方法:将大鼠胰岛细胞分别与西罗莫司和FTY720共培养后进行糖刺激胰岛素释放试验,用ELISA方法检测培养液中胰岛素含量并进行比较研究.结果:FTY720和西罗莫司对大鼠胰岛细胞胰岛素分泌无明显影响.结论:FTY720和西罗莫司对大鼠胰岛细胞及分泌功能无明显影响,FTY720和西罗莫司有可能作为临床胰岛细胞移植的主要免疫抑制剂使用.     

免疫抑制剂对成人胰岛细胞的毒性作用的体外观察

目的探讨免疫抑制剂对成人胰岛细胞的毒性作用,旨在筛选适用于成人胰岛细胞移植的免疫抑制剂。方法通过成人胰岛细胞与不同免疫抑制剂分别共培养后的糖刺激胰岛素释放试验,ELISA检测培养液中胰岛素含量比较,探讨免疫抑制剂对胰岛细胞的毒性作用。结果高浓度MMF(骁悉)和FK506(普乐可复)均引起成人胰岛细胞胰岛素分泌明显减少,与对照组比较,具有显著性差异,P<0.05。中低浓度MMF和FK506对成人胰岛细胞胰岛素释放无明显抑制作用。FTY720和Rapamycin(雷帕霉素)对成人胰岛细胞胰岛素分泌无明显影响,与对照组比较,差异无显著,P>0.05。结论中低剂量MMF和FK506不影响人胰岛细胞胰岛素的分泌,高剂量MMF和FK506明显抑制胰岛素的分泌。FTY720和Rapamycin对人胰岛细胞胰岛素的分泌无明显影响。FTY720和Rapamycin有可能作为临床胰岛细胞移植的主要免疫抑制剂使用。胰岛细胞移植时亦可使用中低剂量MMF和FK506。     

供体凋亡细胞输注对大鼠胰岛移植物功能的影响

目的 研究供体凋亡细胞预输注对大鼠胰岛移植后胰岛移植物功能的影响.方法 应用STZ制备SD大鼠糖尿病模型,以直线加速器照射诱导供体Wistar大鼠脾细胞凋亡.经阴茎背静脉输注供体凋亡脾细胞,7d后于糖尿病SD大鼠双侧肾包囊进行同种异体胰岛移植,通过测定血糖变化、血清胰岛素水平以及胰岛移植物存活时间来观察胰岛移植物的功能状态.结果 预输注供体凋亡脾细胞能显著延长同种异体胰岛移植物存活时间(中位生存时间达31 d),并较长时间地维持受体鼠血清胰岛素处于较高水平.结论供体凋亡细胞预输注能够显著延长同种异体胰岛移植物的存活时间,能够较长时间维持胰岛移植物的正常功能状态.     

小鼠胰岛α细胞的缺失对移植胰岛功能的影响

目的　探讨胰岛α细胞的丢失对胰岛素分泌功能的影响。方法　在人胰岛分离过程中 ,经胶原酶的过度消化造成胰岛周边α细胞缺失 ,用免疫组化及胰岛素 /胰高糖素含量分析予以证实。在体外 ,检测葡萄糖刺激引起的实验性糖尿病小鼠胰岛素的分泌 ;在体内 ,评价胰岛移植后对糖尿病小鼠血糖的调节 ,并研究胰高糖素对α细胞缺失胰岛功能的影响。结果　胶原酶的过度消化引起胰岛周边的α细胞丢失 ,使分离胰岛内胰岛素 /胰高糖素比值明显升高。与正常胰岛相比 ,α细胞缺失胰岛对葡萄糖刺激产生的胰岛素明显降低 ,胰岛素释放在正常胰岛和α细胞缺失胰岛分别为2 2 2 7uU/ml± 32 1uU/ml和 12 4 6uU/ml± 12 6uU/ml(P <0 0 1)。在体内 ,移植α细胞缺失的胰岛到糖尿病的C5 7/BL小鼠后不能有效地纠正动物的高血糖 ,胰岛移植后的平均血糖浓度在正常胰岛组和α细胞缺失胰岛组分别为 :8 9mmol/L± 1 98mmol/L和 2 1 3mmol/L± 2 2mmol/L(P <0 0 1) ,而给予外源性的胰高糖素可以在体外及体内明显改善α细胞缺失胰岛的胰岛素分泌功能。结论　胰岛α细胞的缺失明显降低胰岛的胰岛素分泌功能 ,用外源性的胰高糖素可以改善α细胞缺失胰岛的胰岛素分泌功能。     

DPP-4抑制剂对2型糖尿病患者胰岛功能的影响

随着全球糖尿病患病率的逐年升高,科学家们对糖尿病病理生理的研究也不断深入,人们发现2型糖尿病是一种由基因、环境等多种因素影响的缓慢进展的慢性代谢性疾病,相应的针对各种途径的降糖药物亦层出不穷。二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂（即DPP-4抑制剂）作为由肠促胰岛索衍伸而来的新型口服降糖药物不仅能够改善患者高血糖状况,还能促进胰岛B细胞增殖,使糖尿病的治疗水平达到一个新的高度。     

10例糖尿病纯胰岛细胞移植临床观察

１０例糖尿病纯胰岛细胞移植临床观察第二医院内科林国云张志广闻淑君泌尿研究所畅继武张淑敏泌尿科姚庆祥胰岛移植是近１０多年来国内外治疗糖尿病的一项新技术，并且大量的研究工作［１～３］已证明胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病有肯定疗效，在这些工作基础上，本组利用纯胰岛...     

免疫抑制剂依维莫司对大鼠胰岛细胞的毒性作用

目的 观察依维莫司等免疫抑制剂对大鼠胰岛瘤细胞(INS-1)和SD大鼠正常胰岛细胞代谢活性和功能的影响,旨在探讨依维莫司在胰岛移植免疫抑制治疗中的安全性和可行性.方法 不同浓度梯度免疫抑制剂依维莫司、西罗莫司、环胞霉素A和霉酚酸酯处理INS-1和正常胰岛细胞,用MTT法检测细胞的代谢活性;用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验检测胰岛细胞的胰岛素分泌功能.结果 临床血药浓度以上的依维莫司和西罗莫司高浓度组胰岛细胞增殖抑制率低于环胞霉素A和霉酚酸酯(P＜0.05);依维莫司在临床血药浓度范围和其它免疫抑制剂一样可以抑制胰岛细胞的胰岛素分泌功能,各组间的刺激指数差异无统计学意义.结论 依维莫司和西罗莫司对INS-1细胞及SD大鼠胰岛的毒性作用较小,环胞霉素A和霉酚酸酯对INS-1和SD大鼠胰岛具有较为明显的毒性作用,依维莫司有望作为新型免疫抑制剂应用于临床胰岛移植.     

游离脂肪酸对大鼠胰岛分泌功能和胰岛细胞凋亡的影响研究

目的：研究游离脂肪酸对体外培养SD大鼠胰岛功能和胰岛细胞凋亡的影响并探讨可能机制。方法：取健康雄性SD大鼠胰岛原代分离培养,分为6组,培养1d：NC1组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA1组（0．25mmol／L）、FFA2组（0．5mmol／L）;培养3d：NC2组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA3组（0．25mmol／L）、FFA4组（0．5mmol／L）;每组6个样本,每个样本20个胰岛。采用RT—PCR扩增胰岛素、PDX-1、Bax、Caspase-3基因mRNA表达,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率,放射免疫法检测胰岛素水平。结果：①FFA1、FFA2组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC1组明显下降,FFA1、FFA2组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC1组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;②FFA3、FFA4组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC2组明显下降,FFA3、FFA4组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC2组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：游离脂肪酸抑制体外培养SD大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能,其可能机制是FFA抑制胰岛素基因、PDX-1基因的合成,刺激胰岛细胞凋亡基因Bax、Caspase-3表达,并导致胰岛细胞凋亡,最终导致胰岛细胞分泌功能下降。     

甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞功能的影响

OBJECTIVE: To study the effect of triglycerides (TGs) on the function of in vitro cultured rat islet cells. METHODS: SD rat islet cells were isolated for monolayer cell culture and treated with TGs at different concentrations (0, 0.5, 2.5, 5.0, 10.0 mmol/L) for 72 h. Insulin level in the cell culture media was measured after glucose loading test, and the deposition of fat droplets in the islet cells observed by oil red O-staining. RESULTS: No obvious effect was observed after a 72-h incubation of the islet cells with TGs at low glucose level (2.8 mmol/L), while with the stimulation of high-level glucose (27.8 mmol/L), the insulin secretion was significantly inhibited by TGs of higher concentrations (5.0, 10.0 mmol/L). The deposition of fat droplets was found in the islet cells after incubation with TGs, with TGs of higher concentrations. CONCLUSION: TGs induces deposition of fat droplets in islet cells in vitro, and may inhibit the insulin-secreting function of the cells.     

Effects of cyclosporine A on insulin content and insulin release in neonatal rat islet cell monolayer cultures]

We investigated the effects of cyclosporine A (CsA) on insulin content and insulin release in neonatal rat islet cell monolayer cultures. Insulin content in 5.5-day-old monolayers was not affected after 12-hour incubation in the medium containing 16.7 mmol/L glucose plus 0.1 or 100 micrograms/ml CsA and 5.6 mmol/L glucose plus 10 micrograms/ml CsA. Insulin release in 7.5-day-old monolayers was inhibited after 12-hour incubation in the medium containing 5.6 or 16.7 mmol/L glucose plus 0.01-100 micrograms/ml CsA in a dose-responsive manner. At 16.7 mmol/L glucose, CsA less than or equal to 0.1 microgram/ml did not affect insulin release, while CsA greater than or equal to 1.0 microgram/ml significantly inhibited insulin release and the inhibitory effect did not return to normal after a 16-hour incubation in CsA-free medium. At 5.6 mmol/L glucose, CsA 1.0 microgram/ml did not affect insulin release. CsA 100 micrograms/ml inhibited insulin release less than it did at 16.7 mmol/L glucose. These experimental data demonstrated that high doses of CsA have inhibitory effects on insulin release in islet monolayer cultures.     

促红细胞生成素对体外培养的SD大鼠多巴胺能神经元细胞活力的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对体外培养的SD大鼠帕金森病细胞模型多巴胺能神经元细胞活力的影响.方法:取孕14.5 d的SD大鼠胚胎中脑原代培养.将细胞分成:正常对照组、6-羟基多巴(6-OHDA)组和6-OHDA+不同剂量EPO(0.10、1.00、3.25、10.00和32.50 U)组.在培养的第6天给实验组加入不同剂量的EPO,第8天加入6-OHDA(100 umoL/L)作用0.5 h,收集各组细胞,用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色法观察TH阳性神经元生长情况,用MTT法测定多巴胺能神经元的细胞活力.结果:与正常对照组相比,6-OHDA组TH阳性细胞数减少,为(27.2±3.4)个/mm2,而预先给予EPO干预的各组细胞6-OHDA的毒性作用明显减轻,TH阳性细胞数分别为(28.0±1.1)、(39.2±1.9)、(41.8 4-1.3)、(66.4±4.2)和(65.3 4±3.0)(F=48.29,P=0.02)个/mm2.与正常对照组相比,6-OHDA组多巴胺能神经元的细胞活力为(51.2±1.2)%,而预先给予EPO干预的各组细胞6.OHDA的毒性作用明显减轻,细胞活力分别为(52.2±1.0)%、(60.5 4±3.5)%、(68.1 4±2.7)%、(89.6±3.1)%和(76.5±4.0)%(F=28.42,P=0.01).结论:EPO能够对抗6-OHDA的毒性作用.增加多巴胺能神经元的细胞活力.     

玻璃化冷冻预处理对大鼠胰岛细胞功能的影响

目的探讨玻璃化冷冻预处理对胰岛细胞功能的影响。方法用酶消化法、非连续密度梯度法分离纯化胰岛。将其随机分成两组,Ⅰ组给予玻璃化冷冻处理,Ⅱ组给予常规培养。分别移植入造模成功的Balb/c型糖尿病小鼠,分为A组（玻璃化预处理组）、B组（常规培养组）、并设立C组（糖尿病对照组）。测定各组小鼠的血糖、体重,并观察各组胰岛移植物存活时间。结果 A、B组间血糖变化（A=9.8±1.32mmol/L,B=11.0±1.17mmol/L）差异不明显,无统计学意义,与C组（C=20.8±1.36mmol/L）相比较,血糖降低,有统计学意义;移植物存活时间相比较A组（12.8±2.4d）大于B组（10.6±1.8d）,有统计学意义。结论预处理组与未处理组中的小鼠血糖变化,组间相差不大,预处理组中胰岛细胞存活时间长于未处理组,表明经玻璃化预处理过的胰岛细胞对胰岛功能无明显影响,甚至优于常规培养组胰岛细胞。     

石榴皮乙酸乙酯提取物对胰岛细胞生长活力的影响

目的 研究新疆石榴皮乙酸乙酯提取物对大鼠胰岛细胞生长活力的影响.方法 将石榴皮依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯提取得到石榴皮乙酸乙酯提取物,将阳性对照组、正常对照组及石榴皮提取物不同浓度组与胰岛细胞共同孵育一定时期,分别在不同时间,采用MTT法测定细胞生长活力(OD值).结果 石榴皮乙酸乙酯提取物低、高剂量组与正常对照组相比,细胞生长活力差异有统计学意义(P＜0.01).结论 石榴皮乙酸乙酯提取物在体外能显著促进胰岛细胞生长.     

胰岛-内皮细胞复合体对IBMIR的影响

目的探讨胰岛-内皮细胞复合体能否显著减轻立即经血液介导的炎症反应（IBMIR）。方法本实验将雄性Wistar大鼠分为3组：实验组、对照组、阴性对照组。结果实验组和对照组血浆中的抗凝血酶抗体（TAT）、补体C3a、血小板的数量在灌注后60分钟有明显差异（P〈0.05）。结论胰岛-内皮细胞复合体并不影响胰岛的功能,能够显著减少胰岛移植初期的凝血激活、补体激活、血小板消耗,从而显著减轻IBMIR的反应,有可能成为临床胰岛移植中胰岛预处理的一种新方法。     

不同浓度谷氨酸钠摄入对Wistar大鼠代谢及胰岛细胞凋亡的影响

目的 探索不同浓度谷氨酸钠(MSG)摄入对大鼠代谢及胰岛细胞凋亡的影响。方法 将40只Wistar 大鼠随机分为对照组、MSG标准剂量组、MSG 4倍标准剂量组、MSG 8倍标准剂量组,每组10只。对照组给予生理盐水灌胃,MSG组给予自配的MSG溶液灌胃,每周空腹取尾静脉血1次,测血糖、甘油三酯、总胆固醇水平,于33周取颈动脉血测其血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇水平。结果 不同组间血糖水平差异无统计学意义(P＞0.05),但MSG 8倍标准剂量组与其他3组比较,甘油三酯、总胆固醇、胰岛素水平均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),MSG 8倍标准剂量组的胰岛素抵抗指标与其他3组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),说明该组出现了胰岛素抵抗;各MSG组均造成胰岛细胞的形态学改变,且随着MSG浓度的升高,胰岛细胞的凋亡率也逐渐升高, 8倍MSG剂量组与其他组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 高剂量MSG摄入会造成代谢紊乱并损伤胰岛功能,一旦胰岛功能由胰岛素抵抗发展至胰岛失代偿,可能会引发高血糖。     

甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞功能的影响

目的研究甘油三酯对胰岛细胞分泌功能的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛细胞并进行单层细胞培养,以不同浓度(0、0.5、2.5、5.0 10.0 mmol/L)甘油三酯与胰岛细胞共同孵育72 h后,进行葡萄糖负荷试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素水平,以评价胰岛细胞功能变化;同时采用油红染色方法,光镜下观察细胞内脂肪堆积情况。结果低糖(2.8 mmol/L)刺激下,甘油三酯对胰岛细胞的胰岛素分泌无明显影响,高糖(27.8 mmol/L)负荷下,高浓度甘油三酯(5.0、10.0 mmol/L)可抑制胰岛细胞的胰岛素分泌(P<0.05);油红染色见甘油三酯处理组胰岛细胞内均有脂肪堆积,尤以高浓度组明显。结论甘油三酯可导致体外培养胰岛细胞内脂肪堆积,抑制细胞的分泌功能。     

不同剂量青霉素致SD大鼠癫痫的实验研究

目的:建立不同剂量青霉素诱导的急性癫痫大鼠模型并观察其行为和脑电图变化。方法:将24只SD大鼠随机分为对照组、青霉素模型Ⅰ组和青霉素模型Ⅱ组,每组8只。对照组注射生理盐水,模型Ⅰ、Ⅱ组分别于大鼠腹腔按500万U.kg-1、700万U.kg-1注射青霉素,观察并比较大鼠行为变化和脑电图记录。结果:两个剂量青霉素组均能成功诱发大鼠癫痫,癫痫大鼠的行为以强直和阵挛为主,同时其脑电图上具有明显的痫样放电。结论:500万U.kg-1、700万U.kg-1的青霉素诱导的急性癫痫大鼠模型是一种稳定而可靠的动物模型。