CDK抑制剂NSC649890联合顺铂对人骨肉瘤细胞U2-OS的抑制作用

[目的]探讨CDK抑制剂NSC 649890联合顺铂对人骨肉瘤U2-OS细胞抑制作用及可能的机制。[方法]MTT法检测分别采用50、100、200、400、800 nmol/L的NSC 649890 2、4、6、8、10μg/ml顺铂、50 nmol的NSC649890联合2μg/ml顺铂、300nmol的NSC 649890联合6μg/ml顺铂培养48 h后细胞增殖情况,金氏q值评价联合用药效应;流式细胞仪、Western blotting检测分别采用300 nmol/L的NSC 649890、6μg/ml顺铂及二者联合培养48 h后细胞凋亡及凋亡通路相关蛋白表达情况,以上实验均以单纯U2-OS细胞作为对照组。[结果]U2-OS细胞经不同浓度顺铂、NSC 649890单独处理48 h后,细胞抑制率随两种药物浓度增加而显著升高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在联合用药组中,顺铂与NSC 649890联合浓度(2μg/ml+50 nmol/L)组两药为协同作用,(6μg/ml+300nmol/L)组两药为相加作用。流式细胞仪检测显示,顺铂组、NSC 649890组及联合组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与对照组相比,顺铂和NSC 649890单独作用后均可下调Bcl-2蛋白、procaspase-3蛋白的表达水平及上调Bax蛋白的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05),而两者联合作用时效果更加显著(P<0.05)。[结论]NSC 649890能增强顺铂对人骨肉瘤U2-OS细胞的抑制作用。     

小分子抑制剂Spautin-1增强骨肉瘤细胞化疗敏感性

目的 观察小分子抑制剂Spautin-1对骨肉瘤细胞株(U2OS)化疗敏感性的影响.方法 培养U2OS细胞,使用有效自噬抑制浓度的Spautin-1(10 μmol/L)和顺铂(5μmol/L)处理U2OS,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测Spautin-1对于顺铂(Cisplatin)介导的U2OS的增殖抑制作用的影响,流式细胞术和Western blot检测Spautin-1对顺铂介导的U2OS的凋亡诱导作用的影响.结果 有效自噬抑制浓度的Spautin-1(10 μmol/L)对U2OS无明显的生长抑制及凋亡诱导作用(P＞0.05),而此浓度的Spautin-1可明显增强顺铂对U2OS的增殖抑制(P＜0.05),与顺铂处理组(16.5％)比较,Spautin-1与顺铂共处理后U2OS细胞凋亡比例明显增加(35.0％),切割后的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)明显升高.结论 小分子抑制剂Spautin-1可增强U2OS对顺铂的敏感性.     

阻断PI3K/AKT/mTOR通路增强顺铂诱导的人皮肤黑素瘤细胞株A375凋亡的机制研究

目的:本实验探讨抑制PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡作用及其机制。方法:用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞后Western blot检测细胞凋亡、PI3K/AKT/mTOR通路的活化情况以及细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)。用PI3K的抑制剂LY294002(LY)和mTOR的抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,Rap)分别预处理以研究其对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用。为进一步探索阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用机制,采用Western blot检测阻断PI3K/AKT/mTOR后联用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达。结果:顺铂处理后的A375黑素瘤细胞中PARP的活化剪切体表达量水平呈浓度和时间依赖性增加,细胞活力呈浓度和时间依赖性降低(P0.05)。顺铂处理A375黑素瘤细胞后PI3K/AKT/mTOR通路的活化。阻断PI3K/AKT/mTOR通路再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞后PARP的活化剪切体表达量明显上调以及细胞活力明显降低(P0.05)。阻断PI3K/AKT/mTOR通路后再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞发现Bcl-2蛋白和Bcl-xl表达水平下调。结论:阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导的细胞凋亡具有协同作用,该协同作用可能与Bcl-2和Bcl-xl蛋白下调有关。     

曲古抑菌素A通过雌激素受体α依赖和非依赖方式抑制乳腺癌细胞中细胞周期素D1的表达

目的探讨曲古抑菌素A（TSA）对ER—α阳性和ER—α阴性乳腺癌细胞系的作用机制。方法以含不同浓度TSA的培养液培养MCF-7（ER—α阳性）和MDA—MB-231细胞（ER—α阴性）；采用四甲基亚噻唑蓝（MTT）法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态；用流式细胞仪定量分析肿瘤细胞增殖周期的改变；用半定量RT—PCR法测定ER—α和cyclinD1mRNA的表达。Western blot检测ER—α、p21和细胞周期素cyclinD1的蛋白表达水平。结果ER—α阳性的MCF-7细胞对TSA的敏感性明显高于ER—α阴性的MDA—MB-231细胞，TSA作用48h时前者的IC50约为40．6nmol／L，后者的IC50约为272．4nmol／L。在MCF-7细胞系中，TSA能有效抑制ER—α和cyclinD1 mRNA的表达，并增强cyclinD1蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解，使肿瘤细胞主要阻滞在G0／G1和G2／M期。在MDA—MB-231细胞系中，TSA对cyclinD1蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解作用增强，但对其mRNA转录本表达无明显影响。结论TSA不仅可以通过依赖ER—α途径抑制cyclinD1 mRNA的表达，也可通过增强泛素-蛋白酶体通路降解cyclinD1蛋白而不依赖于雌激素途径。     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1表达对前列腺癌细胞顺铂耐药性的影响

探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表达对前列腺癌细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法 采用转染PARP-1 siRNA抑制前列腺癌细胞中PARP-1的表达，RT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1以及凋亡信号通路相关蛋白的表达差异，CCK-8检测耐药指数，计算DDP IC50。结果 PARP-1蛋白在耐药细胞PC-3/DDP中的表达量明显高于亲本细胞PC-3，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。下调PARP-1表达可增强前列腺癌细胞的DDP敏感性，逆转耐药细胞的耐药性。信号通路相关蛋白Bcl-2和pERK显著下调。结论 PARP-1在前列腺癌细胞表达水平与细胞对DDP耐药性密切相关，PARP-1表达抑制可以增强DDP对前列腺癌细胞的敏感性，其分子机制可能是通过激活凋亡通路抑制ERK磷酸化。     

细胞外信号调节激酶通路在乙肝病毒X基因改变肝癌细胞化疗敏感性中的作用

目的 观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路在乙肝病毒X基因(HBx)改变肝癌细胞HepG2对顺铂敏感性中的作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pCP10质粒中扩增482 bp HBx的开放读码框(ORF),构建表达载体pcDNA3-HBx并进行酶切及测序鉴定.应用脂质体将其转染HepG2,50 mg/L G418筛选阳性克隆,抽提mRNA,逆转录(RT)-PCR鉴定是否稳定表达HBx.Western blot法检测转染前后44×103及42×103磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.噻唑蓝(MTT)法检测转染空脂质体组、空载体组HepG2、HBx+ HepG2对2 mg/L顺铂敏感性的差异,以及顺铂联合ERK通路特异性抑制剂PD98059对HBx+HepG2抑制率的改变.结果 从pCP10中扩增得到482 bp HBx-ORF片段.将其与pcDNA3连接后经酶切及测序鉴定,成功构建HBx-ORF表达载体.从G418抗性细胞克隆中成功扩增出482 bp HBx-ORF,表明转染后的HepG2细胞稳定表达目的片段.经Western blot及灰度扫描鉴定,HBx+细胞中p-ERK蛋白表达是空脂质体组的1.97倍,是空载体组的1.67倍.MTT法检测2 mg/L顺铂作用24 h,对HBx+ HepG2的抑制率为19.56％,明显低于对空脂质体组和空载体组HepG2的抑制率(35.21％和30.18％).而先以100 μmol/L PD98059孵育2h的HBx+ HepG2,顺铂对其抑制率上升至31.20％,与未加PD98059时比较有显著提高(P＜0.05).结论 ERK信号传导通路的激活在抑制HBx+的肝癌细胞的化疗敏感性方面起重要作用,对该通路的特异性抑制有助于提高HBx+肝癌的化疗效果.     

雷公藤甲素介导AMPK/Akt/mTOR通路对小鼠TM3睾丸间质细胞活性的影响

目的:探究雷公藤甲素(TP)对小鼠TM3睾丸间质细胞活性及AMPK/Akt/mTOR通路的影响。方法:用不同浓度(50、100、200 nmol/L)的TP处理TM3细胞,对照组为含0.1%DMSO的等体积无血清培养液,37℃恒温孵育箱培育24h后,使用乳酸脱氢酶(LDH)活性检测和凋亡检测试剂盒测定细胞膜受损程度及凋亡率,利用Western印迹检测AMPK/Akt/mTOR通路蛋白变化情况。结果:对照组LDH的活力为(157.5±20.3)%,同时其活性随TP浓度升高显著增强[50 nmol/L:(163.4±33.6)%,100 nmol/L:(346.8±148.8)%, 200 nmol/L:(422.8±113.9)%,P0.01]。流式细胞术检测显示,对照组凋亡细胞百分率为(6.27±1.41)%,TP各浓度组凋亡百分率与对照组相比均上调[50 nmol/L:(189.9±73.5)%,100 nmol/L:(284.0±103.5)%,200nmol/L:(419.2±155.7)%],其中200 nmol/L TP组与对照组比较差异显著(P0.05)。Western印迹结果显示,与对照组相比,p-AMPK/AMPK比值显著降低(P0.01),p-Akt/Akt比值升高(其中50nmol/L组,P0.05),p-mTOR磷酸化水平升高(其中200 nmol/L组P0.05)。结论:TP能破坏TM3细胞活性,诱导其凋亡,同时伴随着AMPK抑制、Akt/mTOR通路活化。     

藤黄酸联合顺铂对人骨肉瘤细胞作用的实验研究

[目的]本实验主要研究藤黄酸(gambogic acid,GA)在骨肉瘤中的抗肿瘤作用,检验藤黄酸与传统的骨肉瘤化疗药物顺铂(cisplatin,CDDP)联用是否具有协同作用,探讨其作用的机制。[方法]采用CCK-8法测定不同浓度藤黄酸、顺铂单用及联合应用对人骨肉瘤细胞MG-63的增殖抑制作用,PI染色流式细胞术检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡变化。[结果]藤黄酸对MG-63具有明显生长抑制作用,且具有浓度依赖性,IC 25为0.52μg/ml,藤黄酸诱导MG-63细胞产生G2/M期细胞周期阻滞和凋亡,而顺铂则诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞和凋亡。藤黄酸与顺铂联用时增殖抑制及诱导凋亡作用比单用时明显增强。[结论]藤黄酸通过诱导MG-63细胞周期阻滞和凋亡产生抗人骨肉瘤细胞增殖作用,藤黄酸与顺铂联用具有协同作用。     

顺铂与三甲氧基二苯乙烯对胃癌BGC823细胞作用的研究

目的:研究三甲氧基二苯乙烯与顺铂对人胃癌BGC823细胞的抑制作用。方法:设空白对照组、顺铂治疗组、三甲氧基二苯乙烯治疗组、顺铂及三甲氧基二苯乙烯联合治疗组。用MTT法测定顺铂和三甲氧基二苯乙烯对细胞的抑制作用;用电镜、流式细胞仪观察其细胞变化。结果:顺铂与三甲氧基二苯乙烯合用,细胞存活率较单用时明显降低。顺铂100μg/L细胞存活率为(67.23±8.91)%,三甲氧基二苯乙烯100μg/L细胞存活率为(51.42±9.56)%;细胞存活率在合并用药时细胞存活率明显下降,顺铂10μg/L和三甲氧基二苯乙烯10μg/L的细胞存活率为(43.62±8.34)%,浓度150μg/L时细胞存活率最低为(17.33±7.93)%。联合用药后,顺铂使用量的IC50是(110.0±9.8)μg/L,三甲氧基二苯乙烯使用量的IC50是(18.0±10.0)μg/L,增效倍数分别为2.51、4.03合并指数CI50是0.58,CI500.95。细胞生长多停滞在S期(58.0±4.0)%。结论:顺铂对胃癌BGC823细胞有抑制作用,少量的顺铂与三甲氧基二苯乙烯合用后可达到大剂量顺铂单药化疗的效果,产生了协同作用。     

鱼藤素增加人胃癌细胞株SGC-7901对氟尿嘧啶的敏感性

目的 观察鱼藤素对胃癌细胞化疗敏感性的影响.方法 胃癌SGC-7901细胞以1 μmol/L鱼藤素处理24h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测对其对氟尿嘧啶处理48 h的敏感性变化;经鱼藤素联合氟尿嘧啶(12.5 mg/L)处理后形态学观察进一步验证MTT结果;提取1μmol/L鱼藤素处理24 h后细胞总蛋白,Western blot法检测相关蛋白表达水平的变化.结果 鱼藤素预处理后可明显增强氟尿嘧啶对SGC-7901细胞的抑制作用,其IC50值降至7.86 mg/L(P＜0.05);增强氟尿嘧啶对SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用;鱼藤素可明显降低蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平.结论 鱼藤素可通过下调Akt的活性,增强SGC-7901细胞对氟尿嘧啶的敏感性,与化疗药物联用可能有助于提高抗肿瘤治疗效果.     

顺铂对肝细胞癌Hep3B细胞程序性死亡配体1表达及药物敏感性的研究

目的 探讨顺铂对肝细胞癌Hep3B细胞程序性死亡配体1(PD-L1)表达以及PD-L1对顺铂敏感性的影响。方法 使用不同浓度的顺铂（0、5、10、20 mg/L）处理Hep3B细胞,利用q PCR、Western blotting法检测细胞中PD-L1的表达情况。设置对照组（加入PBS）、顺铂组（5 mg/L）、MK2206组（AKT抑制剂,5μmol/L）和顺铂+MK2206组（5 mg/L顺铂处理前1 h给予5μmol/L MK2206）,分别干预Hep3B细胞,Western blotting检测AKT、p-AKT和PD-L1的表达情况。si RNA-PD-L1转染Hep3B细胞,Western blotting检测PD-L1和上皮-间质转化标志物（E-cadherin和N-cadherin）表达变化,CCK-8、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞功能变化。结果 顺铂可上调Hep3B细胞中PD-L1的蛋白表达水平（P<0.05）。与对照组相比,5 mg/L的顺铂显著促进Hep3B细胞中PD-L1的m RNA水平（P<0.05）。MK2206可抑制顺铂对p-A...     

鱼藤素诱导人前列腺癌细胞凋亡及其机制研究

目的 观察鱼藤素对于激素抵抗型前列腺癌(HRPC)细胞PC3和DU145增殖、细胞周期和凋亡的影响并探讨其机制.方法 设阴性对照组(有细胞但不加药),空白对照组(无细胞仅有培养液),阳性对照组(渥曼青霉素100 nmoL/L),及鱼藤素分别10、100、1 ìmol/L共6组.CCK-8法进行细胞毒性实验,检测细胞生长抑制率.流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Westem-blot检测Akt、MAPK及其磷酸化蛋白表达,探讨药物作用机制.结果 10 nmol/L～1 ìmol/L鱼藤素对PC3细胞均有生长抑制作用,呈现明显的时间、浓度依赖性,对DU145细胞则无此作用.鱼藤素使PC3细胞出现G2/M期阻滞现象并引起浓度依赖性的凋亡,而未改变DU145细胞的周期分布也不能诱导其凋亡.鱼藤素能够阻断P13K/AKT通路而对MAPK通路无影响.结论 鱼藤素通过阻断PI3K/AKT通路实现抑制PC3细胞增殖、诱导凋亡的作用.两株细胞间实验结果 的差异是因为其PI3K/AKT通路活化状态的差异造成的.     

灭活Chk1/2基因增强H4细胞放疗后凋亡敏感性

o照射可引起H4细胞G2/M期阻滞,以10 Gy 60C0照射12h G2/M期阻滞最明显;单独反义封闭Chk1或Chk2基因可增强放疗后凋亡敏感性100%～200%,而同时反义封闭Chk1和Chk2基因具有协同作用,增强放疗后凋亡敏感性300%,其机制是通过解除G2/M期阻滞实现的.结论 放疗可激活细胞周期检测点信号传导通路导致放疗抵抗,而阻断该信号通路的关键激酶Chk1和Chk2可显著增强放疗后凋亡敏感性.     

ERK1/2通路介导硫化氢在人骨髓间质干细胞对抗顺铂诱导损伤中的作用

 目的 探讨硫化氢在人骨髓间质干细胞（human marrow mesenchymal stem cells,HMMSCs）对抗顺铂诱导损伤中的作用及其机制。方法 0、5、10、20、40、60、80 mg/L顺铂分别作用HMMSCs 24 h;20 mg/L顺铂分别作用0、6、12、24、36、48 h;在20 mg/L顺铂作用24 h前分别用0、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L的NaHS预处理30 min;0.6 mmol/L的NaHS预处理30 min前用ERK1/2通路抑制剂U0126处理30 min或用激动剂人上皮生长因子共同预处理30 min。检测细胞存活率、细胞凋亡率、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）和总ERK1/2（t-ERK1/2）的表达。结果 5、10、20、40、60、80 mg/L顺铂作用后细胞存活率分别降至71.72%±2.72%、59.41%±5.44%、50.37%±4.55%、38.97%±2.92%、30.11%±4.64%、21.71%±5.35%,与0 mg/L组的差异有统计学意义;20 mg/L顺铂作用不同时间后细胞存活率分别降至70.30%±6.20%、61.63%±2.70%、51.29%±3.13%、38.72%±3.66%、27.57%±2.32%,与0 h组的差异有统计学意义;不同浓度NaHS预处理可使细胞存活率升高至65.99%±2.67%、72.93%±5.44%、75.10%±4.71%、76.56%±5.25%,与顺铂处理组的差异有统计学意义;0.6 mmol/L的NaHS预处理使细胞凋亡率从35.29%±2.77%下降至18.62%±0.97%;20 mg/L顺铂作用24 h使p-ERK1/2表达下调,NaHS预处理可抑制顺铂对p-ERK1/2表达的抑制作用。应用U0126或人上皮生长因子分别抑制或促进了NaHS的保护作用及上调p-ERK1/2表达的作用。结论 硫化氢预处理能通过激活HMMSCs的ERK1/2通路对抗顺铂诱导的细胞损伤。     

缺氧诱导因子-1α参与胃癌多药耐药的机制

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α参与胃癌SGC7901/DDP细胞株多药耐药的机制.方法 采用化疗药物顺氯胺铂(顺铂,DDP)按浓度梯度递增法(0.02～1.00mg/L)诱导胃癌SGC7901细胞株,10个月后成功建立对顺铂稳定耐药并具有MDR、MRP4表型的胃癌SGC7901/DDP细胞株,应用HIF-1α通路抑制剂YC-1(75 μmol/L)抑制HIF-1α在敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中的表达,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞凋亡率,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中HIF-1α和耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)的表达变化.结果 YC-1抑制HIF-1α表达后,耐药株SGC7901/DDP的药物敏感性显著增加,对DDP的半数抑制浓度(IC50)由(52.175±6.163)mg/L降低为(11.078±3.645)mg/L(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的细胞凋亡率由1.03%增加为14.26%(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的P-gP在基因和蛋白表达水平均明显减低,分别由1.846±0.135和2.017±0.102下降至0.814±0.057和0.962 ±0.039(P＜0.01).结论 HIF-1α可通过调节P-gP表达及抗凋亡信号通路参与胃癌顺铂耐药,可成为逆转胃癌耐药的新的靶点.     

p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U20S细胞凋亡的研究

目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂（5μM）处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。     

p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡的研究

目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂(5μM)处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。     

冬凌草甲素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及机制

目的 探讨冬凌草甲素体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及其机制.方法 10～80 μmol/L冬凌草甲素分别处理SGC-7901细胞后,CCK8法检测冬凌草甲素体外对SGC-7901细胞抑制生长的作用;用流式细胞仪分别观察冬凌草甲素诱导凋亡及细胞周期阻滞.Western blot测定凋亡相关蛋白的表达.结果 冬凌草甲素对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,并随着药物浓度的增加(10～80 μmol/L)而逐渐增强,呈浓度、时间依赖关系.此外,流式细胞术检测发现,冬凌草甲素浓度为0、10、40、60、80 μmol/L,作用24 h后,G_2/M期细胞数分别是(9.90±1.17)%、(9.94±0.27)%、(11.76±0.16)%、(15.64±1.48)%和(22.59±1.01)%;而S期细胞比例分别为(31.79±1.03)%、(30.90±0.47)%、(29.25±0.80)%、(21.46±1.61)%、(18.81±0.61)%,冬凌草甲素能够使得SGC-7901细胞周期呈剂量依赖性阻滞于G_2/M期;冬凌草甲素浓度为80 μmol/L,作用12、24 h后,凋亡率分别为(12.78±1.54)%、(20.62±2.39)%,明显高于对照组的(9.92±0.56)%,其能使SGC-7901细胞发生凋亡.随着冬凌草甲素作用时间延长,SGC-7901细胞的bel-2蛋白表达逐渐减弱,前体Caapase-3被激活.结论 冬凌草甲素能够诱导SGC-7901细胞产生凋亡,并使细胞周期阻滞在G_2/M期.其凋亡机制可能与下调bcl-2蛋白表达及Caspase-3的激活相关.     

木脂素1对人胃癌细胞株SGC-7901体外抗肿瘤作用

目的研究木脂素1抑制人胃癌细胞株SGC-7901增殖的机理。方法使用倒置显微镜观察不同浓度的木脂素1对人胃癌细胞株SGC-7901细胞形态学变化的影响;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测木脂素1在不同浓度范围内对人胃癌细胞株SGC-7901细胞存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪分析木脂素1对SGC-7901细胞凋亡以及细胞周期的影响;通过Western blot法分析木脂素1对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2及Bax表达的影响。结果形态学结果显示,木脂素1对SGC-7901细胞有不同程度的杀伤作用,其作用随浓度的增加而增强;在不同浓度范围内(2.5~20μg/m L),木脂素1对SGC-7901细胞存活率表现出不同程度的抑制作用,且呈现出时间和浓度依赖关系(P0.05),其IC50为4.19μg/m L;木脂素1干预SGC-7901细胞48 h后,随着药物浓度增加,凋亡细胞比率、G2/M期细胞比率以及Caspase3和Bax的表达增高(P0.05),而G0/G1期细胞比率和Bcl-2的表达降低(P0.05)。结论木脂素1显著抑制SGC-7901细胞增殖并通过阻滞其于细胞周期的G2/M期而诱导细胞凋亡,其机理可能与活化该细胞中的Caspase3及Bax蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关。     

SAHA联合顺铂对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖抑制作用的研究

目的：研究sAHA（辛二酰苯胺异羟肟酸）与顺铂联合应用对。肾上腺皮质癌Sw-13细胞生长增殖的抑制作用,初步探讨两种药物联合运用于治疗肾上腺皮质癌的可能性。方法：采用wsT-8法检测。肾上腺皮质癌SW-13细胞对单独使用SAHA或顺铂时的剂量反应;检测低剂量的sAHA及顺铂联用对肾上腺皮质癌SW-13细胞的毒性作用;分别在普通光学显微镜及荧光显微镜下对经各种处理的细胞进行凋亡形态学观察,采用流式细胞术对凋亡进行量化。结果：随单独用药剂量的增加,肾上腺皮质癌SW-13细胞对SAHA及顺铂呈现出较好的敏感性;低剂量的SAHA（1μmol／L）和顺铂（16mg／L）联合应用较之两种药物的单独使用能显著提高药物对肾上腺皮质癌Sw-13细胞的生长抑制作用（P〈0．01）;细胞凋亡形态学观察和流式细胞术结果也表明联合处理组的Sw-13细胞凋亡特征更明显。结论：SAHA可以有效增强肾上腺皮质癌SW-13细胞对低剂量顺铂的敏感性。