神经干细胞和施万细胞共移植治疗大鼠脊髓损伤

目的 观察神经干细胞和和施万细胞共移植治疗脊髓损伤的可行性。方法 体外培养胚胎脊髓源神经干细胞和施万细胞，将两种细胞共同移植到大鼠脊髓损伤部位，免疫组织化学染色鉴定神经干细胞在脊髓内的分化情况并观察记录大鼠行为学功能的恢复程度。结果 神经干细胞体外培养血清诱导分化可见大量具有少突胶质细胞特征的分化细胞，与施万细胞共培养则可促进神经干细胞向神经元方向分化。两种细胞共移植至脊髓损伤部位后，施万细胞可以促进神经干细胞的分化和成熟；共移植可以促进脊髓功能的恢复。结论 神经干细胞在体内和体外都具有多向分化能力，且其分化方向和成熟程度可以被多种环境因子所调控。神经干细胞和施万细胞共移植可以促进脊髓功能恢复。     

PDX-1促进大鼠胰腺导管上皮细胞向胰岛细胞分化的研究

胰岛移植是治疗I型糖尿病的有效手段,但胰岛来源的不足限制了胰岛移植的临床应用[1].我们采用含PDX-1(蟾蜍同系物XIHbox8)的真核表达载体体外转染大鼠胰腺导管上皮细胞,诱导其分化为胰岛β细胞,探讨外源性PDX-1在胰腺导管上皮细胞向β细胞定向分化中的作用.     

胰岛移植基础研究

胰岛移植因为安全、有效而一直成为糖尿病治疗中的研究热点。近年来,随着基因工程技术、干细胞定向诱导分化技术的不断成熟,胰岛移植可能在今后数年内得以广泛开展,现对此作一简述。1 分泌胰岛素的基因工程细胞 构建能分泌胰岛素的非胰岛β细胞,这一新思路指运用基因重组和转基因技术,将胰岛素及     

临床细胞加工与细胞治疗

随着干细胞研究从实验室走向临床,临床细胞加工技术逐步成为热点.起源于造血干细胞移植的细胞加工技术,在发展中对条件与技术的要求越来越严格和规范.该文深入探讨了临床细胞治疗中的常见种类和方法,如应用免疫磁珠筛选外周血CD34 的造血干细胞;通过体外筛选、共培养和纯化技术改良淋巴细胞,防范移植物抗宿主或进行过继免疫治疗血液系统肿瘤或实体瘤;脐血造血干细胞移植的方法和优缺点;骨髓间充质干细胞的富集和体外扩增等加工技术及其诸多临床应用;树突状细胞体外激活后移植治疗肿瘤、胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病、角膜缘干细胞移植修复角膜、神经干细胞移植治疗脑外伤和帕金森等疾病的技术方法和现状.还明确了目前临床细胞治疗的潜力和价值,强调了规范治疗的必要性.     

骨髓源性肝干细胞定向分化及脾内移植研究

目的　寻找骨髓源性肝干细胞的表面标记 ,进行定向分化及脾内移植研究。方法　流式细胞仪检测淤胆大鼠骨髓中干细胞群体的数量变化 ,寻找肝干细胞标记 ,免疫磁珠分离 ,进行体外诱导分化和肝再生模型的脾内移植 ,观察细胞形态的变化 ,免疫组织化学和免疫荧光技术检测白蛋白、AFP、CK8/18等肝细胞标记的表达。结果　淤胆鼠 β2微球蛋白阴性 (β2 m-)细胞数量较对照组数量明显增高 ,分别为 (6.17± 2 .70 ) %和 (0 .79± 0 .61) % (P <0 .0 1) ,β2 m-细胞体外培养及脾内移植均可出现肝细胞样细胞 ,白蛋白、AFP、CK8/18表达阳性。结论　β2m 细胞在体内外具有向肝细胞分化的能力 ,脾内移植是肝干细胞移植可供选择的部位之一。     

胰岛干细胞移植

胰岛细胞的替代治疗是糖尿病治疗的新方向,但由于受到供体来源的限制无法推广。利用干细胞移植分化成为胰岛功能细胞是目前的热门科研项目。本文综述了近年来从胚胎干细胞和成体干细胞分化为胰岛细胞的试验成果。     

骨髓基质干细胞分化为胰岛样细胞的形态学观察

目的　探讨体外自体骨髓基质干细胞 (MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞的可能性。方法　对Wistar大鼠MSC进行体外培养 ,通过不同的条件诱导MSC向胰岛样细胞分化 :LN组 ,10mmol/L尼克酰胺 1mmol/Lβ 巯基乙醇的低糖Dulbecco最低必须培养基 [L DMEM ,含 2 0 %胎牛血清 (FSC) ]预先诱导 2 4h ,10mmol/L尼克酰胺 1mmol/Lβ 巯基乙醇的无血清高糖Dulbecco最低必须培养基 (H DMEM )诱导 10h。HN组 ,含 2 0mmol/L尼克酰胺的L DMEM (2 0 %FSC)预先诱导 2 4h ,2 0mmol/L尼克酰胺的无血清H DMEM诱导 10h。通过倒置显微镜观察诱导细胞的形态学变化。结果　LN、HN组细胞均可见部分骨髓基质干细胞分化、增殖 ,形成胰岛样细胞团 ,部分细胞向神经元样细胞分化 ;对照组细胞未见明显分化。结论　体外诱导骨髓基质干细胞定向分化为胰岛样细胞存在可行性。     

胰岛干细胞移植

胰岛细胞的替代治疗是糖尿病治疗的新方向，但由于受到供体来源的限制无法推广。利用干细胞移植分化成为胰岛功能细胞是目前的热门科研项目。本文综述了近年来从胚胎干细胞和成体干细胞分化为胰岛细胞的试验成果。     

骨髓间充质干细胞定向分化肝细胞及肝内移植研究

目的 观察体外诱导骨髓问充质干细胞分化及肝纤维化形成环境中移植情况。方法 首先行骨髓间充质干细胞提取、分离和培养，加入肝细胞生长因子（HGF，20μg／L）和表皮生长因子（EGF，1．5mg／L）诱导定向分化。肝纤维化形成的大鼠随机分成2组，每组10只。使用5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记诱导的骨髓间充质干细胞，经门静脉向肝纤维化形成的SD大鼠肝脏移植，对照组用BrdU标记未经诱导的骨髓间充质干细胞。2周后通过免疫组织化学方法检测大鼠肝脏标记细胞的分布及BrdU^＋／ALB^＋细胞数量。结果 体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化的细胞CK8及ALB表达阳性。移植2周后大鼠肝脏均可检测到BrdU标记细胞，与对照组相比诱导后骨髓问充质干细胞组BrdU^＋／ALB^＋细胞数较多，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 经体外诱导骨髓间充质干细胞能分化为肝细胞，移植在大鼠肝纤维化形成环境中，白蛋白表达细胞数更多。     

胰岛移植基础研究

胰岛移植因为安全、有效而一直成为糖尿病治疗中的研究热点。近年来，随着基因工程技术、干细胞定向诱导分化技术的不断成熟，胰岛移植可能在今后数年内得以广泛开展，现对此作一简述。     

骨髓基质细胞体外分化移植治疗大鼠脊髓损伤的初步研究

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞体外分化为神经干细胞后移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性。[方法]骨髓基质细胞经培养及定向分化为神经干细胞，后者由5-溴脱氧尿嘧啶核苷法标记，制备大鼠脊髓损伤模型，伤后第9d移植神经干细胞，实验分组：细胞移植组、PBS填充组、正常对照组。应用组化法观察移植细胞是否存活，取材前24h显露坐骨神经，行辣根过氧化物酶逆行示踪法观察脊髓损伤处的修复重建。[结果]骨髓基质细胞在定向分化为神经干细胞后标记并移植于脊髓损伤区，标记的阳性细胞可在受体脊髓内检测到，辣根示踪技术显示细胞移植组较PBS填充组阳性细胞明显增多，差别有统计学意义。[结论]大鼠骨髓基质细胞在体外分化为神经干细胞后移植于脊髓损伤区，移植细胞可以存活，并参与脊髓损伤处神经传导通路的结构重建。     

同种异体胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病

目的 观察同种异体大鼠胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植在糖尿病治疗中的作用.方法 分离胰腺组织获得胰岛及胰腺导管上皮细胞,将具有干细胞潜能的胰腺导管上皮细胞在体外培养27d.将新鲜分离的胰岛(200±50)个及诱导分化2周的胰腺干细胞来源的胰岛样结构(2×106)个序贯移植到糖尿病大鼠的肾被膜下观察大鼠的血糖及生存情况.结果 将胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植到同一糖尿病大鼠3周后血糖仍在5 mmol/L水平,对照组血糖无明显下降.结论 胰腺干细胞可诱导分化为分泌胰岛素的胰岛样结构,胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植对大鼠糖尿病有治疗作用.     

成人胰腺干细胞分离及转分化为胰岛的研究

目的 通过对成人胰腺干细胞分离和转分化为胰岛过程的研究以便更进一步了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法 成人胰腺组织以胶原酶消化，密度梯度离心法获得纯化的胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛。导管上皮细胞在体外共培养27d，观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX—1，CK—19蛋白等的表达。结果 上述方法可获得大量胰腺导管上皮细胞。体外培养第1天即可见PDX—1，CK—19阳性细胞，胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后，平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论 用改进的方法可获得大量成人胰腺导管上皮细胞，并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛，可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新途径。     

骨髓间充质干细胞的培养及向软骨细胞诱导的方法学研究进展

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)可向软骨分化,具有来源广泛、取材方便、易于培养且无明显自体移植免疫排斥反应等优点,在体外进行定向分化可作为软骨修复的种子细胞.体外分离培养纯度高、活力强、生物特性单一的软骨细胞,对组织工程及细胞的实验至关重要.然而,在骨髓中BMSCs含量极低,体外分离培养诱导方法不一,培养难度大.因此,总结骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并归纳细胞形态学、表面标志物鉴定及其向软骨细胞方向诱导分化的方法很有必要.     

PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景

1型糖尿病主要是由于胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏引起,胰岛β细胞无法再生,也不能进行异种移植,干细胞移植是治疗糖尿病的新型方法。已有研究证实了脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSC)能够被诱导分化成胰岛素分泌细胞,也有研究显示了胰十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)可诱导非胰岛分泌细胞如骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞等向胰岛素分泌细胞分化,提示PDX-1在改善胰岛β细胞再生和促进胰岛细胞恢复中有着巨大潜能。本文就当前PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景作一综述。     

Notch通路在肌源性干细胞分化为胰岛素分泌细胞过程中的表达

干细胞技术的应用为解决糖尿病胰岛移植供体不足、扩增β细胞提供了可能[1].我们采用含有促进胰腺、胰岛细胞再生及增殖生长因子的胰腺提取液诱导肌源性干细胞(MDSCs)分化为有功能的胰岛素分泌细胞后,探讨在胰腺发育过程中起重要作用的Notch通路的表达[2].     

脑脊液诱导人间充质干细胞定向分化为神经干细胞神经前体细胞的研究

目的 探索脑脊液诱导人间充质干细胞定向分化为神经干细胞的可行性.方法 分别采用同种异体脑脊液和细胞生长因子为诱导剂,体外诱导人脐血源和骨髓源间充质干细胞分化为神经干细胞.从形态学、免疫组化、荧光免疫绀化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定.结果 两种方法诱导后间充质干细胞呈现神经干细胞改变,均可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并表现相应的特征形态结构、表型和生物学特性,细胞长势良好.而脑脊液诱导组,从形态上与细胞生长因子诱导组基本一致,但从时间上缩短神经干细胞、神经样细胞的生长周期.结论 两种诱导方法均可在体外定向诱导不间来源人间充质干细胞转化为神经样细胞,而脑脊液诱导组诱导时问和细胞周期均较短.     

多潜能干细胞定向分化为胰腺β细胞的研究进展

近几年利用多潜能干细胞体外诱导分化为胰岛β细胞的研究进展迅速.本文主要讨论近几年来维甲酸、骨形态发生蛋白、成纤维生长因子家族在多潜能干细胞分化为胰岛β细胞过程中的作用及其可能机制方面的研究进展,以及多潜能干细胞于体外诱导分化为胰岛β细胞的不同阶段其表面抗原CD14、CD49e、CD238、CD24、上皮细胞表面黏附分子阶段特异型胚胎抗原1和 3的表达与分化的关系及组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导小分子1和2、间变性淋巴瘤激酶的抑制物1和2在分化中的作用.     

骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的研究进展

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)是位于骨髓中的一种干细胞,因在体外经适当的培养条件可以向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞等多种间充质来源的组织细胞分化,又被称为间充质干细胞(mesenchymal stem cell).骨髓基质细胞位于骨髓,具有取材方便,易于体外扩增,自体移植无免疫排斥性等优点,是骨组织工程中种子细胞的理想来源.骨髓基质细胞,其向成骨细胞的定向诱导分化将是关键的一步.笔者就骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化有关影响因素的研究进展作一综述.     

不同形式生物人工胰腺的研究进展

目前,糖尿病患者胰岛移植治疗方面仍存在供者短缺与长期使用免疫抑制剂的问题,因此,生物人工胰腺(Bioartiff-cial pancreas,BAP)相对于传统胰岛移植而言具有较强的优势.BAP通过采用一种半通透性膜材料包裹胰岛素分泌细胞调控血糖,该装置可使患者避免长期使用免疫抑制剂,并且允许使用动物胰岛、干细胞诱导或基因工程化胰岛素分泌细胞,以此解决供者短缺问题.本文综述了国内外有关BAP发展的研究概况,包括不同膜材料的微囊、扩散室、生物血管复合物装置以及糖敏感性BAP等.