白藜芦醇通过TLR4通路对H9C2细胞高糖缺氧/复氧损伤的作用

目的 观察白藜芦醇(RES)对H9C2心肌细胞高糖及缺氧/复氧条件下Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨RES通过TLR4通路对糖尿病心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制。方法 培养H9C2心肌细胞建立缺氧/复氧及高糖心肌细胞损伤模型,并给予白藜芦醇处理。随机将H9C2心肌细胞分为对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+RES处理组、高糖组、高糖+缺氧/复氧组、高糖+缺氧/复氧+RES处理组。ELISA法测定各组乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,CCK8和AnnexinV/PI分别检测细胞增殖和凋亡,Western-blot法检测TLR4蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,缺氧/复氧组及高糖组细胞增殖、SOD水平明显下降(P<0.05),LDH、MDA水平明显升高(P<0.05),TLR4表达明显增多,缺氧/复氧组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),而高糖组细胞凋亡率有所升高,但差异无统计学意义。RES处理后,缺氧/复氧+RES组、缺氧/复氧+高糖+RES组LDH、MDA水平及细胞凋亡率与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较明显降低(P<0.05),SOD水平及细胞增殖能力与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较显著提高(P<0.05);TLR4蛋白的表达在缺氧/复氧和高糖组均有明显上升,在加入RES后,缺氧/复氧+RES组、缺氧/复氧+高糖+RES组TLR4蛋白表达量与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较均有下降,但差异无统计学意义。结论 白藜芦醇通过TLR4通路抑制TLR4蛋白表达可能是其减轻糖尿病心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制之一。     

氯离子通道阻滞剂对心肌低氧复氧损伤的影响

目的研究氯离子流在心肌缺氧、缺氧再灌注、缺氧预处理中的病理生理作用。方法利用培养的心肌细胞，制作低氧复氧、缺氧预处理和低渗预处理模型，并使用氯离子通道阻滞剂SITS和Tamoxifen进行干预，最后检测细胞存活率及培养细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化。结果使用氯离子通道阻滞剂后的低氧复氧组，其细胞存活率及上清液中LDH、MDA及SOD活性与对照组相比无明显差异；加入氯离子通道阻滞剂后再进行缺氧预处理、低渗预处理的各组，细胞存活率及LDH、MDA和SOD的活性与单纯低氧复氧组相比无显著性差异。结论氯离子通道阻滞剂、缺氧预处理、低渗预处理对心肌缺氧损伤均具有保护作用，而缺氧预处理、低渗预处理的这一保护作用能被氯离子通道阻滞剂阻断。     

p38MAPK信号通路的抑制减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法心肌细胞H9C2分为对照组(Con组)、缺氧复氧组(H/R组)、p38MAPK信号通路抑制剂SB203580组(SB203580组),Con组细胞正常培养,H/R组、SB203580组进行缺氧复氧处理,SB203580组细胞在缺氧前用p38MAPK信号通路抑制剂SB203580预处理24 h。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用硫代巴比妥酸比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot检测细胞中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 H/R组、SB203580组细胞存活率低于Con组,凋亡率高于Con组,细胞中MDA、ROS含量高于Con组,培养液上清中LDH高于Con组,细胞中SOD含量低于Con组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平高于Con组。SB203580组细胞存活率高于H/R组,凋亡率低于H/R组,细胞中MDA、ROS含量低于H/R组,培养液上清中LDH低于H/R组,细胞中SOD含量高于H/R组,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平低于H/R组。结论 p38MAPK信号通路抑制剂能够减轻缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡和氧化损伤。     

脑神康胶囊对培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的 观察益气补肾中药脑神康胶囊对体外培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,随机分为对照组,损伤组,脑神康胶囊高、中、低浓度组.对照组正常培养,损伤组及脑神康胶囊各浓度组建立缺氧复氧损伤模型,其中脑神康胶囊各浓度组于复氧时换以不同浓度(5%、10%、20%)含药血清的培养液,检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力及丙二醛(MDA)含量,测定细胞存活率及凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达及两者比值.结果 与对照组比较,损伤组SOD活性及细胞存活率均明显下降(P＜0.01),MDA含量、LDH活力及细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高,bcl-2/bax降低(均P＜0.01);脑神康胶囊各浓度组均较损伤组SOD活性及细胞存活率均升高(P＜0.01),MDA含量及细胞凋亡率均降低(P＜0.01),LDH活力及bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),bcl-2 mRNA表达升高,bcl-2/bax增加(均P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性.结论 脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其提高神经元抗氧化能力、调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关.     

人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用

目的观察人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用。方法采用人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧进行预处理,通过检测氧化应激、凋亡指标观察人参皂苷Rb1的作用。将细胞随机分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧加人参皂苷Rb1(50、100、200μmol/L),按实验设计因素处理后,通过蛋白电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3,检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS),TUNEL法检测细胞凋亡。结果缺氧复氧处理可使H9c2心肌细胞的ROS和MDA水平显著增加,SOD活性显著下降,上调caspase-3的表达,增加H9c2心肌细胞的凋亡。人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞MDA表达量,增加SOD活性,降低ROS水平,且人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞caspase-3的表达量及凋亡细胞数量。结论人参皂苷Rb1可降低缺氧复氧对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及凋亡,从而对缺氧复氧H9c2心肌细胞起保护作用。     

PTEN对缺氧复氧肝细胞HL7702氧化损伤的影响研究

目的研究第10号染色体同源缺失性磷酸酶—张力蛋白(PTEN)对缺氧复氧肝细胞HL7702氧化损伤的影响。方法取肝细胞HL7702,进行缺氧复氧处理,用qRT-PCR和Western blotting法检测细胞中PTEN表达水平。在HL7702细胞中转染PTEN siRNA,缺氧复氧处理后,Western blotting检测细胞中PTEN的表达水平,丙酮酸氧化酶法检测培养液上清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,紫外-苹果酸脱氢酶法检测培养液上清中谷草转氨酶(AST)水平,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)水平,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中剪切的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果缺氧复氧处理后的HL7702细胞中PTEN mRNA和蛋白水平均高于未经处理的细胞(P0.05)。细胞中转染PTEN siRNA后可以下调缺氧复氧处理的HL7702细胞中PTEN的表达水平。缺氧复氧诱导HL7702细胞中MDA含量升高,降低细胞中SOD活性,提高培养液上清中ALT和AST水平,促进细胞凋亡和细胞中Caspase-3的活化,与未经处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。转染PTEN siRNA后的HL7702细胞经缺氧复氧处理以后,细胞中MDA含量降低,SOD含量升高,培养液上清中ALT、AST水平降低,细胞凋亡减少,细胞中Caspase-3活化水平降低,与未经转染的HL7702细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论缺氧复氧诱导肝细胞中PTEN表达上调,敲低其表达后可以减轻缺氧复氧氧化损伤,减少细胞凋亡。     

基于Caspase-3基因的RNA干扰对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 研究RNA干扰Caspase-3基因表达对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响,探讨Caspase-3基因表达的RNA干扰方法在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用与机制.方法 以基于Caspase-3基因的small interferenceRNA(siRNA)处理缺氧诱导的心肌细胞,不同时期分别检测心肌细胞凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出、钙浓度、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测Caspase-3基因表达水平和蛋白表达水平.结果 缺氧诱导心肌细胞后,心肌细胞、凋亡率随时间进程明显增加.缺氧诱导使心肌细胞LDH漏出、钙浓度、MDA含量增加而SOD活性降低.缺氧诱导下RNA干扰组心肌细胞Caspase-3基因mRNA转录水平、蛋白表达水平和心肌细胞凋亡率较空白对照组和错义RNA干扰组差异有统计学意义(P<0.05).结论 基于Caspase-3基因的RNA干扰显著抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡率,提示Caspase-3基因表达在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中具有重要的作用.     

微小RNA-124-3p通过靶向抑制RIPK1的表达对缺氧/复氧心肌细胞损伤中的保护作用及其机制研究

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)调控受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法大鼠心肌细胞随机分为Con组、H/R组、H/R+miR-124-3p组、H/R+miR-NC组、H/R+si-RIPK1组、H/R+siNC组、H/R+miR-124-3p+pcDNA组、H/R+miR-124-3p+pcDNA-RIPK1组。采用qRT-PCR法检测miR-124-3p与RIPK1 mRNA表达水平,Western blot法检测RIPK1蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因检测验证miR-124-3p与RIPK1的靶向关系。流式细胞术检测细胞凋亡能力变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况。检测乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 H/R组心肌细胞miR-124-3p表达水平显著低于Con组(P0.05),而RIPK1 mRNA及蛋白水平均显著升高(P0.05);H/R组心肌细胞LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平均显著高于Con组(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),而SOD水平及Bcl-2蛋白水平均显著低于Con组(P0.05);miR-124-3p过表达与抑制RIPK1表达可降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平,而提高SOD水平及Bcl-2蛋白水平;双荧光素酶基因检测结果证实RIPK1是miR-124-3p的靶基因;RIPK1过表达逆转了miR-124-3p过表达对H/R心肌细胞损伤的作用。结论MiR-124-3p过表达可通过下调RIPK1表达进而减轻心肌细胞H/R损伤进而对心肌细胞发挥保护作用。     

苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响

目的研究苦参素(OMT)对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法无菌环境下分离SD大鼠乳鼠心肌细胞并培养72 h后随机分为:空白对照组、缺氧/复氧(H/R)模型对照组、OMT(20μg/m L、40μg/m L和80μg/m L)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/m L)干预组(阳性对照组),每组设10个复孔。药物干预6 h后,通过MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]释放量;测定细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过RT-PCR检测细胞中bcl-2mRNA、BaxmRNA表达并计算bcl-2/Bax比值,通过Western blot方法检测细胞caspase-3蛋白表达水平并进行半定量分析。结果与模型对照组比较,OMT40μg/m L、80μg/m L干预组、SXN干预组乳鼠心肌细胞存活率显著升高,培养液中AST、CPK、LDH释放量显著降低,细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,细胞凋亡状况显著改善、凋亡率显著降低,细胞中bcl-2 mRNA表达显著上调且Bax mRNA表达显著下调、bcl-2/Bax表达比值显著升高,细胞中caspase-3蛋白表达显著升高,上述差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);其中OMT 80μg/m L干预组细胞中GSH-Px活性显著升高(P0.05)。结论苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡具有抑制作用,其作用机制可能与苦参素能有效改善抗氧化酶活性、调节凋亡相关基因表达有关。     

RNA干扰程序性细胞死亡因子4表达对缺氧/复氧H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨RNA干扰程序性细胞死亡因子4（PDCD4）表达对缺氧/复氧（H/R）H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 将H9C2心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+NC组和H/R+siPDCD4组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别检测4组H9C2心肌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,流式细胞仪检测其凋亡率,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其上清液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）水平,Western blot检测磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白水平。结果H/R组H9C2心肌细胞PDCD4 mRNA和蛋白、活化的Caspase-3、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、上清液中LDH、MDA水平及凋亡率均高于对照组,而上清液中SOD水平、H9C2心肌细胞Bcl-2和p-AKT蛋白水平均低于对照组（P<0.05）。H/R+siPDCD4组H9C2心肌细胞PDCD4 mRNA和蛋白、活化的Caspase-3、Bax蛋白、上清液中LDH、MDA水平及凋亡率均低于H/R组,而上清液中SOD、H9C2心肌细胞Bcl-2和p-AKT蛋白水平均高于H/R组（P<0.05）。结论 RNA干扰PDCD4表达可抑制H/R引起的H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路进而降低氧化应激反应有关。     

ERK1/2信号通路介导心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨心肌营养素1对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其信号通路。方法用改良的方法培养出生1～3天的乳鼠心肌细胞,分为五组:对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+心肌营养素1组、缺氧复氧+心肌营养素1+PD98059(ERK阻断剂)组及缺氧复氧+心肌营养素1+DMSO组。缺氧3 h,复氧3 h。MTS法测定心肌细胞存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光磺双乙酸盐(DCFH-CA)检测细胞活性氧水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR检测心肌细胞促凋亡基因Bad mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白水平。结果缺氧复氧后心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平较对照组明显增加,分别是19.4%±2.3%比2.2%±0.2%及14.28±1.42比3.54±0.46(P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,心肌细胞线粒体膜电位下降。而心肌营养素1处理后,心肌细胞存活率明显高于缺氧复氧组,心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平显著减少,心肌细胞线粒体膜电位更高,ERK1/2磷酸化蛋白水平增加,Bad mRNA表达明显下调。心肌营养素1的这种作用能被ERK阻断剂PD9...     

下调KLF5抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大机制研究

目的探讨Krüpple样因子5(KLF5)对心肌细胞体积、细胞内总蛋白、氧化损伤及Ca~(2+)水平的影响。方法体外分离培养乳鼠心肌细胞,心肌细胞分为以下几组,对照组:不做任何处理,正常培养。模型组:在细胞培养液中添加100 nm的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)。阴性组:心肌细胞中转染siRNA阴性对照。干扰组:心肌细胞中转染KLF5 siRNA。阴性+AngⅡ组:心肌细胞中转染siRNA阴性对照,并在细胞培养液中添加100 nm的AngⅡ。干扰+AngⅡ组:心肌细胞中转染KLF5 siRNA,并在细胞培养液中添加100 nm的AngⅡ。分别检测KLF5的基因和蛋白表达水平。在心肌细胞内转染KLF5 siRNA,同时用AngⅡ处理,测定心肌细胞的体积和心肌细胞内总蛋白的含量,同时检测细胞内肥大基因心房利钠肽(ANP)mRNA的水平,Western blot方法测定细胞内钙调神经磷酸酶(CaN)蛋白水平,激光共聚焦显微镜检测静息状态下Ca~(2+)水平,二硝基苯肼法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果模型组心肌细胞中KLF5基因和蛋白表达水平高于对照组(P0.05)。干扰组心肌细胞中KLF5水平低于对照组(P0.05)。阴性组和对照组心肌细胞中KLF5水平没有差异(P0.05)。模型组心肌细胞的体积增加,细胞总蛋白含量也增加,细胞内肥大基因ANP mRNA的水平也升高,CaN蛋白表达和静息状态下Ca~(2+)水平上调,细胞内生成的MDA增加,SOD活性降低,细胞培养液中LDH水平升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。干扰+AngⅡ组心肌细胞体积和蛋白含量下降,细胞内肥大基因ANP mRNA的水平降低,CaN蛋白表达和静息状态下Ca~(2+)水平下降,细胞生成的MDA减少,SOD活性升高,细胞培养液中LDH水平降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。阴性+AngⅡ组细胞体积、蛋白含量、细胞内肥大基因ANP mRNA、CaN蛋白、静息状态下Ca~(2+)水平、细胞生成的MDA、SOD活性、细胞培养液中LDH水平与模型组比较没有明显差异(P0.05)。结论 AngⅡ诱导心肌细胞表达KLF5,KLF5下调可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与心肌细胞氧化损伤和Ca~(2+)水平有关。     

HMGB1对缺氧复氧心肌细胞氧化损伤的影响研究

目的研究高迁移率蛋白1(HMGB1)对缺氧复氧心肌细胞氧化损伤的影响。方法构建H9C2细胞缺氧复氧损伤模型,ELISA法检测培养液上清中HMGB1水平,q RT-PCR检测细胞中HMGB1基因的转录水平。在H9C2细胞中转染HMGB1 si RNA后进行缺氧复氧处理,硫代巴比妥酸比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)含量,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果缺氧复氧后H9C2细胞中HMGB1转录水平升高,细胞分泌的HMGB1水平也升高,与正常培养的细胞相比,差异具有统计学意义(P0.05);细胞中转染HMGB1 si RNA后可以明显抑制HMGB1的转录和合成;敲低HMGB1可以降低缺氧复氧后的H9C2细胞中MDA水平,促进细胞中SOD合成,减少细胞释放LDH,降低细胞凋亡水平,减少Caspase-3、Caspase-9活化,促进Bax的表达,与单纯缺氧复氧的心肌细胞相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论缺氧复氧诱导心肌细胞合成HMGB1,敲低HMGB1可以减弱缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡,减轻氧化损伤。     

缺氧后处理与氧自由基清除剂预处理对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察缺氧后处理与氧自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)联合过氧化氢酶(CAT)预处理,对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨两者调控心肌细胞凋亡的机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组。应用荧光探针测定心肌细胞线粒体活性氧水平,Hoechst染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Wesiern blot法检测心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧/复氧组、缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与缺氧/复氧组比较,缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白明显上调,Bax蛋白明显下调。结论缺氧后处理及氧自由基清除剂预处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧再灌注心肌细胞凋亡,其抗凋亡可能机制与细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关。     

丁苯酞激活Hedgehog信号通路抑制缺氧复氧心肌细胞氧化应激、炎症、凋亡的机制研究

目的探讨丁苯酞(NBP)对缺氧复氧(H/R)心肌细胞氧化应激、炎症、细胞凋亡的影响及其分子机制。方法将心肌细胞分为空白组、H/R组、NBP-L组(NBP浓度为2μmol/L)、NBP-M组(NBP浓度为10μmol/L)、NBP-H组(NBP浓度为50μmol/L)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平,试剂盒检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、PTCH、Smoothened(SMO)和Gli-1蛋白表达。使用Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4处理心肌细胞,观察其对丁苯酞诱导的缺氧复氧心肌细胞氧化应激、炎症、凋亡的影响。结果与空白组比较,H/R组心肌细胞存活率、cyclinD1、CDK2蛋白表达量、SOD活性、PTCH、SMO和Gli-1蛋白表达量明显减少(P0.05),H/R组心肌细胞凋亡率、cleaved PARP、cleaved caspase-3蛋白表达量、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平显著增加(P0.05)。与H/R组比较,NBP-L、NBP-M、NBP-H组显著提高H/R心肌细胞存活率、cyclin D1、CDK2蛋白表达量、SOD活性(P0.05),显著降低心肌细胞凋亡率、cleaved PARP、cleaved caspase-3蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平、PTCH、SMO和Gli-1蛋白水平(P0.05)。HPI-4部分逆转丁苯酞对缺氧复氧心肌细胞的保护作用。结论丁苯酞通过激活Hedgehog信号通路,促进缺氧复氧心肌细胞增殖,并抑制缺氧复氧心肌细胞氧化应激、炎症、凋亡。     

内皮素-1对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响

目的探讨在缺氧/复氧过程中不同时期给予内皮素-1（ET-1）对缺氧/复氧所致心肌损伤与凋亡的影响。方法乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Hoechst 33258染色计算凋亡率,试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果ET-1预处理组（EP）细胞生存率较缺氧复氧组（HR）提高,凋亡率下降,LDH活性下降;ET-1缺氧即刻处理组（EH）细胞生存率较HR组降低,凋亡率升高,LDH释放量增加;ET-1复氧处理组（ER）的细胞生存率、凋亡率及LDH活性与HR组均无统计学差异。结论ET-1预处理有心肌细胞保护作用,ET-1缺氧时有促进心肌细胞损伤和凋亡的作用。     

上调Yes相关蛋白对缺氧复氧心肌细胞损伤保护作用的实验研究

目的研究Yes相关蛋白(YAP)在缺氧复氧(H/R)心肌细胞损伤中的作用。方法用过表达YAP重组慢病毒感染心肌细胞,给予H/R处理,用real-time PCR和Western blot检测细胞中YAP表达情况。CCK8法测定增殖变化,二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞术检测凋亡变化,Western blot检测活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白水平,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot法检测胞浆和线粒体中细胞色素C(Cytochrome C)蛋白水平。结果过表达YAP重组慢病毒感染可以提高H/R条件下心肌细胞中YAP表达水平。H/R处理后的心肌细胞增殖活性降低,LDH漏出率升高,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白水平升高,ROS水平也升高,SOD活性降低,线粒体膜电位下降,胞浆中Cytochrome C蛋白水平升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低。上调YAP可以提高H/R条件下心肌细胞增殖活性,降低LDH漏出率,减少细胞凋亡,降低细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白水平表达,提高SOD活性,减少细胞中ROS水平,提高线粒体膜电位,降低胞浆中Cytochrome C蛋白水平,提高线粒体中Cytochrome C蛋白水平。结论上调YAP减轻缺氧复氧心肌细胞损伤,减少细胞凋亡,作用机制可能与提高抗氧化酶活性,减少细胞内ROS水平,抑制线粒体凋亡途径有关。     

生脉注射液对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨生脉注射液对纯化培养的乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组、缺氧复氧损伤＋维拉帕米组、缺氧复氧损伤＋生脉注射液组,分别测定其乳酸脱氢酶（LDH）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及ATP水平。结果生脉注射液可明显提高LDH、SOD活性,降低MDA、提高ATP水平。结论生脉注射液具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌的作用。     

缺氧后适应与心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及机制探讨

目的 探讨缺血后适应与心肌营养素-1（CT-1）对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及其机制.方法 将体外培养的H9C2细胞株分为正常对照组（a组）、缺氧复氧组（b组）、缺氧复氧＋缺氧后适应组（c组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋ CT-1组（d组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋ ERK抑制剂组（e组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋二甲基亚砜组（f组）,MTS法检测各组细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测细胞外调节激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达、Q-PCR检测Bad mRNA的表达.结果 与a组比较,其他各组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA和p-ERK1/2（除外e组）表达量增加,P均＜0.05;与b组比较,c组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,Bad mRNA表达、凋亡率下降,P均＜0.05;与c组比较,d组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,细胞Bad mRNA表达、凋亡率下降（P均＜0.05）;与d组比较,e组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA表达量增加,p-ERK1/2表达量下降;d、e组各项指标指标比较差异无统计学意义.结论 缺氧后适应可减少心肌细胞缺氧复氧损伤,联合CT-1后保护作用明显加强,而ERK1/2抑制剂可阻断这种保护作用;该保护机制可能与CT-I激活ERK1/2信号通路,下调Bad mRNA的表达有关.     

石蒜碱上调Notch1信号通路并减轻心肌细胞缺氧/复氧诱导的损伤

目的 研究石蒜碱对H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用及机制。方法 将H9c2心肌细胞随机分为4组：对照组、H/R组、H/R+石蒜碱低剂量组、H/R+石蒜碱高剂量组；使用CCK-8分析H9c2心肌细胞活力；用试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）释放量，丙二醛（MDA）和活性氧簇（ROS）的含量，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性；用流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western blot检测Notch1蛋白水平；用Realtime聚合酶链反应检测HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平。结果 与对照组比较，H/R组H9c2心肌细胞的活力减弱（P<0.05）,SOD和GSH-Px的活性减弱（P<0.05），细胞凋亡率，LDH释放量，MDA和ROS含量，Notch1蛋白水平，HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平均增加（P<0.05）；与H/R组相比，石蒜碱低、高剂量组H9c2心肌细胞的活力增强（P<0.05）,SOD和GSH-Px的活性增强（P<0.05），细胞凋亡率，LDH释放量，MDA和ROS含量均降低（...