联合阻断CD28和可诱导共刺激分子对小鼠同种异体胰岛移植物急性排斥反应的影响

目的 在小鼠同种异体胰岛移植模型上，通过联合阻断CD28和可诱导共刺激分子（ICOS），观察CTLA-4Ig及ICOS单克隆抗体（ICOSmAb）对胰岛移植物功能的影响。方法将小鼠随机分成4组，每组10只。联合阻断组：分别于移植后0．2、4d和1、3、5d腹腔内注射CTLA-4Ig50μg／kg和ICOSmAb100μg／kg体重组。ICOS组：移植后1、3．5d腹腔内注射ICOSmAb100μg/kg体重组。CTLA4组：移植后0、2、4d腹腔内注射CTLA-4Ig50μg/kg体重组。对照组：单纯胰岛移植，不做CT-LA-4Ig和ICOSmAb处理组。观察术后移植物存活时间和病理改变，RT-PCR检测移植组织中IL-2、IL-10mRNA表达，流式细胞仪检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达。结果 联合阻断组小鼠移植物存活时间平均为（31．00±6．57）d，较其他3组延长，差异有统计学意义（P〈0．05）；IL-2和IL-10mRNA表达水平分别为（44．23±6．24）和（65．23±11．02），与其他3组比较，IL-2mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05），而IL-10mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞荧光阳性百分率分别为（13．73±0．49）％和（14．56±0．31）％，表达上调均不明显；移植胰岛光镜检查接近正常。结论 应用CTLA-4Ig和ICOSmAb联合阻断CD28和ICOS，可以明显抑制胰岛移植物排斥反应。     

雷公藤内酯醇在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的探讨雷公藤内酯醇（triptolide,TPT）在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用及其机理。方法采用BALB/c小鼠作为供体,进行胰岛分离,以链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的C57BL/6糖尿病小鼠作为受体,行左肾被膜下胰岛移植。将移植后糖尿病小鼠随机（随机数字表法）分为3组,每组8只。于胰岛移植术后前5 d分别给予腹腔注射1%吐温80溶剂（对照组）、TPT 50μg/kg（L-TPT组）和100μg/kg（H-TPT组）,之后隔天注射1次,至术后第14天结束。术后监测受体血糖水平变化;并于术后第10天每组随机（随机数字表法）选取3只小鼠,切取左侧肾脏行病理学检查,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例。结果对照组、L-TPT组和H-TPT组移植胰岛的中位存活时间分别为12.6 d（9～16 d）、21.4 d（14～27 d）和27.6 d（19～34 d）;脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例分别为（5.2±0.6）%、（12.0±1.3）%和（15.7±1.8）%。与对照组相比,L-TPT组和H-TPT组小鼠移植胰岛的中位存活时间明显延长（P〈0.05）,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例显著增高（P〈0.05）。结论 TPT通过上调移植受体CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例,减轻了胰岛移植后的排斥反应,显著延长了移植胰岛的存活时间,其免疫抑制作用呈剂量依赖性。     

小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中可诱导共刺激分子的表达及阻断其对排斥反应的影响

移植胰岛长期存活率不高，主要原因是移植术后排斥反应，共刺激信号在排斥反应的发生中起重要作用。本实验旨在观察共同刺激分子-可诱导其刺激分子（ICOS）是否参与了小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的发生，并用ICOS单克隆抗体（ICOSmAb）阻断ICOS，研究其对排斥反应的抑制作用。[第一段]     

雷公藤延缓小鼠同种皮片移植排斥反应的研究

小鼠同种皮片于移植前在３７Ｃ１５％雷公藤水煎剂浸泡１ｈ，观察其对不同品系间小鼠移植皮片延迟排斥的疗效。实验结果表明，昆明小白鼠→ＤＢＡ褐色小鼠皮片存活由对照组的１３．２０±２．２５天延长至２２．３１±３．６０天，ＤＢＡ褐色小鼠→昆明小白鼠由对照组的１１．８１±２．７５天延长至２１．５０±３．４０天，ｔ检验实验组均较对照组差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）。移植前预处理可减少全身使用治疗剂量带来的毒副作用，旨在为临床应用进行探索。     

雷公藤延缓小鼠同种皮片移植排斥反应的研究

小鼠同种皮片于移植前在37℃15%雷公藤水煎剂浸泡1h,观察其对不同品系间小鼠移植皮片延迟排斥的疗效。实验结果表明,昆明小白鼠→DBA 褐色小鼠皮片存活由对照组的13.20±2.25天延长至22.31±3.60天,DBA 褐色小鼠→昆明小白鼠由对照组的11.81±2.75天延长至21.50±3.40天,t 检验实验组均较对照组差异有非常显著意义(P<0.01)。移植前预处理可减少全身使用治疗剂量带来的毒副作用,旨在为临床应用进行探索。     

Tregs对同种异体牙移植免疫排斥反应的抑制作用

目的 探讨Tregs对同种异体牙移植术后免疫排斥反应的抑制作用,提供一种免疫移植方法.方法 免疫抑制剂Tregs给予白鼠尾巴静脉注射1周,建立白鼠同种异体牙移植模型,术后观察移植牙存活、排异发生率及程度.结果同种异体牙均诱发免疫排斥反应,但Tregs注射后免疫排斥反应的时间缓慢,组织切片存活时间显著延长（P＜0.01）.结论 使用免疫抑制剂是预防同种异体牙移植免疫排斥反应的有效方案,可以使同种异体牙移植免疫排斥反应延迟,存活时间延长.     

调节性细胞过继回输在器官移植中的研究及应用进展

排斥反应和长期使用免疫抑制药所带来的不良反应严重影响器官移植受者的生存率和生活质量,诱导免疫耐受是提高器官移植受者生存率,改善生活质量的关键。近年来,调节性细胞过继回输治疗取得了巨大的进展。本文就调节性T细胞（Treg）、髓源性抑制细胞（MDSC）以及调节性B细胞（Breg）在动物实验及临床应用中的进展进行综述,并总结调节性细胞过继回输临床上所面临的主要问题、嵌合抗原受体Treg的应用情况及免疫评估的细胞治疗概念,以期加深广大研究者对调节性细胞治疗的理解,促进调节性细胞在器官移植免疫耐受中的应用,改善器官移植效果和受者生存质量。     

骨髓间充质干细胞移植途径对胰岛移植物免疫排斥反应的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)与胰岛共移植对诱导胰岛移植物免疫耐受的作用,并比较MSC不同途径移植的效果。方法:SD大鼠和Lewis大鼠分别作为供、受体。取SD大鼠股骨,贴壁培养法分离和扩增MSC,胶原酶V分离胰岛。应用链脲佐菌素制备Lewis大鼠糖尿病模型后,将其随机均分为A组(将BrdU标记的MSC与胰岛经门静脉混合输入),B组(将胰岛经门静脉输入,BrdU标记的MSC经尾静脉输入),C组(胰岛经门静脉输入,联合应用环孢素A)和D组(单纯胰岛门静脉移植)。观察各组术后血糖变化,比较各组胰岛移植物存活时间。术后第7天切取各组部分存活大鼠肝脏、胸腺、脾脏行免疫组化染色观察MSC归巢位置。结果:A,B两组大鼠术后正常血糖维持时间最长,C组次之,D组最短;各组胰岛存活时间A组为(12.1±2.3)d,B组为(8.6±1.4)d,C组为(13.2±1.9)d,D组为(2.2±0.6)d;MSC归巢部位观察显示,A组BrdU阳性的MSC主要分布于肝脏,并在植入胰岛周围形成"类微囊化效应",B组BrdU阳性的MSC主要分布于胸腺、脾脏。结论:MSC与胰岛共移植能诱导胰岛移植物免疫耐受,且MSC和胰岛混合经门静脉移植效果优于胰岛门静脉移植联合MSC外周静脉移植。     

紫外线对大鼠胰岛树突状细胞的影响

目的　探讨紫外线对大鼠胰岛树突状细胞 (Dendriticcell,DC)结构和功能的影响。　方法　分离大鼠胰岛经紫外线照射后利用免疫组织化学 (ABC)方法显示胰岛Ia DC ,透射电镜观察其超微结构 ,同时将处理的胰岛移植于糖尿病小鼠模型。　结果　分离胰岛经紫外线照射后内分泌细胞变化不明显 ,Ia DC的突起缩短 ,着色变浅 ,电镜观察胞质中形成抗原肽 MHCⅡ复合物的小泡状结构及吞饮小泡减少 ,异种移植实验胰岛移植存活期 10 .5 4± 2 .0 6天 ,紫外线照射组存活期 17.5 8±1.88天 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。　结论　适量的紫外线照射对胰岛内分泌细胞无明显损伤 ,DC结构受损 ,功能受到抑制。异种移植实验表明紫外线照射后胰岛移植物存活期延长。     

根据CD4立体构型设计的新型免疫抑制物J2抑制小鼠胰岛移植急性排斥反应的初步观察

目的评价基于CD4立体构型设计的新型免疫抑制物J2对小鼠胰岛移植后急性排斥反应的影响。方法将900～1000个DBA/2（H-2^d）小鼠的胰岛移植在糖尿病模型C57BL/6（H-2^b）小鼠肾被膜下。移植前用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛细胞活性和纯度。将C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只,在胰岛移植后第1～10天腹腔内注射J2,每天一次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10 mg/kg）;实验组J2A组（1mg/kg）、J2B组（4 mg/kg）、J2C组（8 mg/kg）。术后监测不同时间各组小鼠的血糖变化及移植胰岛的存活时间,并观察移植胰岛在术后第三天及发生急性排斥反应时的组织病理学及免疫组化表现。结果获得的胰岛细胞的活性＞95%,纯度＞85%。胰岛移植术前各组糖尿病小鼠的血糖平均高于20.0mmol/L,术后前四天各组小鼠的血糖下降明显,均低于11.1 mmol/L,且各组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。移植第7天以后,对照组、J2A组小鼠的血糖较术后前四天明显升高（P＜0.05）。术后第八天开始,对照组、J2A组小鼠血糖升高平均高于11.1 mmol/L;CsA组、J2B组、J2C组的血糖仍低于11.1 mmol/L,三组之间无明显差异,但明显低于对照组和J2A组（P＜0.05）。病理学检查示移植后第三天各组移植的胰岛细胞轻度水肿,形态大致正常;移植后第八天对照组、J2A组的移植胰岛出现急性排斥反应病理改变,其他组病理未见排斥表现,小鼠胰岛素抗体免疫组化结果显示胰岛素阳性。CsA组（21.6±2.1 d）、J2B组（19.0±2.7d）、J2C组（18.7±2.3d）的移植胰岛存活时间比较差异无统计学意义,但分别较对照组（8.1±0.56d）、J2A组（8.3±0.48d）显著延长（P＜0.01）。结论一定剂量的J2具有和CsA相似的免疫抑制作用,可明显抑制小鼠胰岛移植后排斥反应的发生,显著延长移植物的存活时间。     

肝细胞和脾细胞单独或联合输注对异种胰岛细胞移植排斥反应的影响

目的 探讨供者的肝细胞和脾细胞输注对同一供者胰岛细胞移植排斥反应的影响。方法 经尿静脉给BALB/c小鼠糖尿病模型注射供者（猪）的肝细胞和脾细胞，腹腔内注射途径进行猪胰岛细胞移植。移植后测定受者的血糖变化，观察小鼠移植物有功能存活时间。同时测定小鼠巨噬细胞吞噬功能，脾脏淋巴细胞转化功能和自然杀伤细胞活性的变化。结果 胰岛细胞移植前输注肝细胞，脾细胞以及肝细胞和脾细胞混合悬液者，移植物有功能存活时间延长，其淋巴细胞转化率。自然杀伤细胞活性及巨噬细胞的吞噬功能均较低，以肝细胞和脾细胞联合输注者为著。结论 移植前少量多次的供者肝细胞和脾细胞输注可以降低异种胰岛细胞移植排斥反应的强度。     

基底膜对异种脱细胞真皮基质移植免疫排斥反应的影响

目的比较去基底膜与保留完整基底膜的异种脱细胞真皮基质（Xeno-ADM）移植免疫学方面的差异。方法建立SD大鼠皮下脱细胞真皮基质（ADM）移植模型，120只SD大鼠随机分为4组：去基底膜组、基底膜组、自体组、空白对照组。分别将带基底膜和去基底膜的Xeno-ADM植入大鼠背部皮下，自体组分别将大鼠自体真皮基质植入大鼠背部皮下，空白对照组不植入任何材料。于术后2-32周进行组织学观察，并采用Elisa和实时定量PCR方法，检测ADM移植后血清中TNFα、IFNγ、IL-6和IgG表达水平的动态变化。结果移植早期（〈16周）基底膜组移植物炎性反应程度较去基底膜组强烈，IgG表达水平在ADM移植2周时最高，而TNFα、IFNγ、1L-6表达水平在ADM移植后8周最高，上述所有指标在移植后16周时趋向稳定，接近对照组。但3个实验组的TNFα、IFNγ、IL-6和IgG表达水平高低依次为：基底膜组〉去基底膜组〉自体组。结论移植早期（〈16周），去基底膜的Xeno-ADM移植优于带基底膜的Xeno-ADM移植。基底膜成分是Xeno-ADM移植早期引发宿主免疫反应增强的一个因素。     

免疫抑制剂对器官移植中树突状细胞的影响

近年的研究表明，免疫抑制剂不仅作用于T淋巴细胞，而且还影响树突状细胞的发育及功能。本文就该领域的研究进展进行综述。     

肾移植排斥反应免疫风险评估与监测

肾移植是终末期肾衰竭最有效的治疗方法。虽然目前移植肾早期存活率及功能恢复都得到了很大的提高,但是移植肾长期存活仍有待改善。免疫因素所引发的抗体介导的排斥反应（AMR）及T细胞介导的排斥反应（TCMR）仍是导致移植肾衰竭的最主要因素。本文对肾移植受者等待移植期间、肾移植术前和术后3个阶段的免疫风险评估及监测内容进行了综述,通过对肾移植术前受者体内预存人类白细胞抗原（HLA）抗体和非HLA抗体、HLA匹配、淋巴细胞毒交叉配型、免疫记忆细胞等的评估,对肾移植术后受者进行移植肾程序性活组织检查,HLA抗体和非HLA抗体及供者来源性细胞游离DNA（dd-cfDNA）的监测,制定个体化免疫抑制治疗及监测方案,预防排斥反应发生,及时发现和诊断排斥反应,根据免疫监测结果避免无效治疗或过度治疗,从而优化移植物长期存活。     

CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响

目的 观察体外分离的CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响.方法 免疫磁珠法分离CD4+CD25+调节性T细胞,体外试验观察其对CD4+CD25-T细胞增殖的影响.将数量达1×106的CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体,对比其对移植物存活的影响.结果 分离的CD4+CD25+调节性T细胞体外试验可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖.单纯胰岛移植组移植物物存活期为(5.57±0.79)d,回输受体CD4+CD25+调节性T细胞数量1×106、2×106时,胰岛移植物存活时间分别为(15.29±2.29)d和(25.43±2.30)d(P《0.01).CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体可显著延长移植物存活期,诱导免疫耐受的作用为剂量依赖性.结论 CD+CD25+调节性T细胞体外、体内试验可抑制效应性T细胞功能,诱导胰岛移植免疫耐受.     

同种异体神经移植研究中降低免疫排斥反应的进展

周围神经缺损,无论在平时或战时,都十分常见.缺损后,临床上首选自体神经移植,但自体神经来源有限,并给供区造成一定的功能障碍.目前,解决神经缺损的研究主要集中在两个方面:一方面是研究采用肌桥、静脉管、硅胶管、组织工程等替代物,前三种的结果都不如人意,而后者尚处于实验阶段;另一方面是研究同种异体神经移植,它不但具有其它替代材料所没有的网管状神经内部结构,利于神经的再生,而且来源广泛,可以得到与缺损神经长短相似的移植物,但存在免疫排斥问题.     

抗原特异性CD4+CD25+T细胞对同种异体胰岛移植影响及作用机制研究

目的:探讨抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫对同种异体胰岛急性移植排斥反应的影响和机制。方法:用MACS分选供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫糖尿病BALB/cByJ受体小鼠，以ICR小鼠胰岛为供体行同种异体胰岛移植。观察移植后小鼠的存活时间、移植前后外周血CD4+和CD8+T细胞亚群的变化和移植物中Th1/Th2细胞因子mRNA表达水平的变化。结果:抗原特异性Treg细胞联合胰岛移植组(C组)胰岛移植物平均生存期为(34.57±17.15)d，显著长于单纯胰岛移植组(B组)的(10.6±1.82) d (P<0.01)；移植后第3天，C组外周血CD4+/CD8+的值显著低于B组(P<0.01)；C组移植物中IL-10,TGF-β mRNA表达比B组显著增强。B组移植物中IL-1β，IL-2及IFN-γ mRNA表达明显强于C组。结论:抗原特异性CD4+CD25+ Treg细胞可通过调节Th2/Th1之间的反应平衡而延长同种异体胰岛移植物的存活时间。     

他克莫司与来氟米特对异种胰岛移植术后T细胞亚群的影响

目的 研究他克莫司(FK506)和来氟米特(Lef)对异种胰岛移植后急性排斥反应的抑制作用。方法 将大鼠胰岛移植于糖尿病小鼠肾被膜下。观察移植后不用药对照组、单独应用FK506组、单独应用Lef组以及联合应用FK506和Lef组的胰岛存活情况；并于移植后第5d检测外周血T细胞亚群分布和血清IL-2含量。结果 单独用药组与不用药对照组比较，胰岛存活时间明显延长；联合用药组又明显长于单独用药组。各用药组外周血CD4 T淋巴细胞明显低于未用药组。结论 FK506与Lef通过抑制CD4 T淋巴细胞的增殖而阻止或延缓异种胰岛移植的急性排斥反应。     

胆汁回输联合早期肠内营养对良性梗阻性黄疸患者术后血清CRP及免疫功能的影响

目的 探讨胆汁回输联合早期肠内营养（early enteral nutrition,EEN）对良性梗阻性黄疸患者术后血清C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）及免疫功能的影响.方法 将57例术后行胆汁外引流的良性梗阻性黄疸患者随机分为胆汁回输组（A组）、EEN组（B组）、胆汁回输联合早期肠内营养组（联合组,C组）,分别于术前1 d,术后第1、3、7天晨同一时间空腹抽取外周静脉血10 mL,测定CRP、C3、C4、IgA、IgM、IgG、T淋巴细胞亚群（CD3＋,CD4＋,CD8＋,CD4＋/CD8＋值）.观察患者病情转归情况,统计术后感染发生率.结果 联合组患者术后血清CRP水平低于EEN组及胆汁回输组（P＜0.05）.联合组与EEN组相比较,其T淋巴细胞功能恢复更迅速、恢复程度更高（P＜ 0.05）,免疫球蛋白及补体系统术后恢复较快（P＜0.05）;联合组与单纯胆汁回输组比较,两组术后免疫球蛋白及补体系统的恢复,在速度和程度上的差异不具有统计学意义（P＞ 0.05）.联合组术后感染发生率低于EEN组及胆汁回输组（P＜ 0.05）.结论 胆汁回输联合早期肠内营养能有效改善良性梗阻性黄疸患者的体液及细胞免疫功能,减轻术后炎症反应,降低术后感染发生率,促进术后快速康复.     

供体骨髓间充质干细胞干预非协调性异种肝移植免疫排斥反应的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对非协调性异种肝移植排斥反应的免疫干预作用。方法密度梯度离心法分离培养豚鼠MSCs,流式细胞仪检测其膜表面CD34、CD45、CD44和CD29的表达,脂肪细胞诱导液培养诱导MSCs向脂肪细胞分化。豚鼠MSCs输注大鼠后检测不同时相免疫球蛋白IgG、IgM、IgA以及补体C3、C4的浓度变化。豚鼠和大鼠各30只随机分为3组,所有大鼠受体经环磷酰胺预处理,A组为MSCs输注组;B组为生理盐水输注组;C组为地塞米松输注组。各组行豚鼠大鼠原位肝脏移植手术,观察受体的存活情况及排斥反应情况。结果MSCs膜表面CD34阴性、CD45阴性、CD44阳性、CD29阳性。脂肪细胞诱导液培养后细胞内出现脂滴沉着。MSCs细胞悬液输注受体后各个时相的免疫球蛋白IgG、IgM和补体C3较输注前有显著降低(P<0.01),而IgA和补体C4与输注前相比无明显变化(P>0.05),输注后的免疫球蛋白IgG、IgM和补体C3各个时相点之间的浓度变化无显著差异(P>0.05)。肝脏移植模型A组受体存活时间为(431±27)min,较B组和C组的存活时间[(148±16)min、(141±22)min]显著延长(P<0.01)。A组受体超急性排斥反应发生较迟,程度轻。结论MSCs的鉴定可根据细胞形态,膜表面标志物和分化能力来确定,MSCs可干预异种肝脏移植的超急性排斥反应的发生。