核酸筛查实验室RNA酶污染防止对策探讨

目的探讨核酸筛查实验室RNA酶污染防止对策,使核酸筛查能够顺利进行,按时发放检验报告。方法根据实验中出现的问题,采取逐步排除法,在其它条件不变的情况下,改进某一步骤,记录实验结果,以内对照失败率为主要参数,进行比较。结果排除试剂配制,核酸提取,核酸扩增检测无因RNA酶污染造成的实验失败后,采用75%酒精多次擦拭进样器,台面和向空中喷酒75%酒精,拖地,勤换手套等方法,可有效防止RNA酶污染。结论对RNA病毒进行核酸筛查时,RNA酶污染必须引起高度重视。     

番禺地区931例献血者酶免和核酸不合格结果分析

目的：通过对番禺地区献血人群中酶免和核酸的检验不合格结果的数据进行分析,探索降低临床输血风险的血液筛查策略。方法对参加献血的样本,按卫生部要求开展HBsAg、抗－HCV、抗－HIV、抗－TP输血传播病毒筛查;对部分酶免筛查项目合格的样本,进一步开展HBV－DNA、HCV－RNA和HIV－RNA 3项联合核酸筛查实验;对酶免和核酸不合格的检验结果进行分析。结果在30819人次献血者酶免检验结果中,有893人次酶免四项检验结果不合格,不合格率约为2.89％。在28237例酶免合格样本中,检出38例HBV－DNA阳性样本,频率约为0.13％。结论献血者经酶免检测合格的样本中,还存在一定比例的HBV－DNA阳性,采用酶免加核酸的检验策略能有效降低临床输血传播HBV－DNA的风险。     

核酸与酶联免疫同步检测模式在献血者归队中的应用

目的：应用核酸与酶联免疫同步检测模式分析献血者归队情况,探讨献血者归队策略。方法：通过对2016～2021年我市献血者筛查结果中酶联免疫吸附试验（ELISA）单反应性和单核酸反应性但重复检测为非反应性的献血者进行常规ELISA和核酸检测（NAT）单人份归队检测,对不同项目开展补充实验。结果：经过两轮归队检测,ELISA单反应性归队献血者83.7%(36/43)允许归队,单核酸反应性献血者44.4%(12/27)允许归队,其中HCV RNA和HIV RNA允许归队率100%,而HBV DNA允许归队率仅为21.0%(4/19)。结论：初步确定的反应性献血者归队策略有利于维护献血队伍,但由于HBV基因变异比较多样和复杂,为减少OBI的输血感染风险,血站应根据实际情况建立更科学更严密的单核酸反应性归队策略,以保障血液安全。     

核酸检测在筛查献血者乙型肝炎病毒中的应用

目的探索核酸检测在筛查献血者乙型肝炎病毒中的临床应用。方法选取2015年12月20日至2016年5月31日期间收集的100例无偿献血者血液标本,对其进行酶联免疫吸附检测和核酸检测。结果对100例无偿献血者血液标本进行筛查,经酶联免疫吸附检测发现,1例(1.00%)为阳性标本,99例(99.00%)为阴性和灰区标本,核酸检测对酶联免疫吸附检测的99例阴性和灰区标本检测,发现4例(4.04%)为阳性标本,95(95.96%)例为阴性标本。结论核酸检测在筛查血标本乙型肝炎病毒中效果显著。     

新型冠状病毒核酸PCR检测假阳性核酸污染类型的鉴别方法

目的 探讨新型冠状病毒核酸检测实验室出现污染类型的内部鉴定方法。方法 通过脱氧核糖核酸酶(deoxyribonuclease, DNase)的处理、去除反转录步骤等手段观察DNA质粒型质控品、RNA假病毒型质控品以及阳性患者核酸标本的扩增反应情况变化。结果 DNase处理1∶5、1∶25、1∶125和1∶625四个稀释度的DNA质粒型阳性质控品在15 min以上均有很好的清除作用,对RNA型的作用不大,可用于验证DNA型污染;去除反转录步骤对RNA型假病毒质控品的靶基因扩增有明显的影响,而对DNA型没有作用,可用于验证RNA型污染。结论 通过结合DNase和去除反转录步骤的方法可以鉴定出新型冠状病毒核酸实验室污染成分的类型。     

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用效果探讨

目的 探究核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用效果.方法 选取2018年6月至2020年6月于基层血站进行无偿献血的45520名志愿者作为研究对象,采用核酸检测技术对志愿者血液进行筛查,分析和研究检测结果,分析本地区的酶免阴性核酸阳性标本感染特征,并比较核酸检出率的准确度.结果 47例患者为HBV-DNA阳性,阳性确认率为58.75％;HBV感染患者31例,感染率为88.57％.结论 在基层血站血液筛查中开展核酸检测技术,应用效果显著,血液筛查结果准确,值得在血液筛查中推广应用.     

研制14型肺炎链球菌培养基和优化其荚膜多糖提纯的工艺

目的研制国产培养14型肺炎链球菌的培养基,然后制备和纯化该菌的荚膜多糖,并对其全过程的工艺进行优化。方法测试添加不同种血清、培养基成分对肺炎链球菌生长的影响,在此基础上对比进口培养基和本实验自制培养基培养细菌的效果。测试不同裂解细菌方案对获得荚膜多糖多少的影响,并比较DNA酶和RNA酶酶解方法和常规乙醇沉淀方法去除残留核酸的效果。结果实验室自配培养基与进口培养基均能使肺炎链球菌较好生长。用1%NP40加胰酶的裂解方法可使多糖从细菌菌体更好的释放,使用DNA酶和RNA酶去除残留核酸,在多糖产量和核酸去除效率方面都取得了较好的结果,再进一步纯化后可以得到较纯的多糖。结论本文在培养基国产化、菌体裂解后多糖释放和核酸去除三大方面为肺炎球菌荚膜多糖提取提供了有效可行的方案。     

现行常规采血流程对HIV RNA筛查的影响评估

目的了解样本采集、运输和储存等过程对HIV病毒核酸检测的影响，评估在现行常规采血流程条件下进行HIV RNA NAT（nucleic acid amplification techniques）筛查的可行性。方法采用Roche公司AmpliScreen HIV筛查试剂，确定本实验室条件下的检测灵敏度；模拟实际采血流程，设计不同的保存时间、保存温度和溶血程度等样本保存条件，验证以上因素对检测灵敏度的影响。结果本实验条件下Roche公司AmpliScreen HIV筛查试剂检测灵敏度为10IU／ml，4℃条件下血浆保存72h对检测灵敏度无显著影响，溶血对HIV RNA筛查有严重影响。结论现行常规采血流程可以适合HIV RNA NAT筛查。     

实施同步核酸检测和血清学检测的结果分析

目的通过对核酸检测和血清学检测并行的检测模式的效果进行分析,对核酸检测和血清学检测在降低输血相关感染风险中的作用进行全面评估。方法对2016年3月1日至2017年5月31日共计73559份献血者标本进行血清学检测(HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体、谷丙转氨酶及血型),同时进行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的3联检核酸定性检测。统计各项检测的检出率;将酶免检测HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体3项检测与核酸检测结果进行对比分析。结果在检测的73559份标本中,酶免检测HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体三项阳性同时核酸阳性的标本共407份(0.55%);单纯核酸阳性489份,检出率为0. 67%,经鉴别,HBV DNA阳性131份,无HCV RNA和HIV RNA的检出。核酸检测阴性而酶免检测双试剂阳性的标本共有61份,其中HBsAg双阳性44份,抗-HCV双阳性17份,无HIV抗体/抗原双阳性标本。结论核酸检测对于HBsAg(-)的HBV感染献血者的检出效果比较明显,但是核酸检测不能完全代替血清学检测,两者结果不一致,具有一定的互补作用。     

儿科听诊器消毒及微生物监测的研究

目的了解儿科听诊器的微生物污染情况,探寻有效的消毒措施。方法将儿科使用过的90个听诊器平均分成三组,分别用75%酒精、0.5%碘伏、2%消佳净消毒后进行微生物监测。结果随机抽样的90个听诊器消毒前微生物污染阳性率86.67%,并分离出6种微生物,消毒后污染阳性率降至13.33%,两者显著差异（P〈0.01）。结论听诊器污染严重,用75%酒精、0.5%碘伏、2%消佳净消毒听诊器是有效的方法。     

血液混样HBV DNA全自动提取方法的应用研究

目的 探讨在加样仪上实现血液样本汇集，在Roche MPLC上全自动提取样本HBVDNA，在COBUS AMPLICOR上进行扩增和检测的方法，为血液HBV DNA筛查提供应用依据。方法 在酶联免疫吸附实验(ELISA)筛查血液基础上，应用STAR2030加样仪自编程序进行全自动血样汇集(24例份)，在MPLC上全自动方法提取样本核酸，应用PCR方法在COBAS AMHLICOR进行扩增和检测分析结果，从检出限量及抗干扰能力方面进行考评。结果 用国际标准核酸质控品考评及常规应用，表明全自动汇集，全自动核酸提取及扩增和检测HBV DNA95％检出限量为39．6U／ml，20mg/dl胆红素、1g/dl血红蛋白及中等程度的脂血对结果无影响。通过对5136例份样本共214汇集池分析，HBVDNA阳性6例，阳性率为0．12％。结论 本实验结果认为MPLC全自动核酸提取方法可应用于血液混样核酸筛查工作。     

第4代Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂在血液筛查中的应用价值

目的探讨第4代Murex HCVAg/Ab联合检测试剂在血液筛查中的应用价值。方法应用Murex HCVAg/Ab联合检测试剂与Murex HCVAb检测试剂,对987份血液筛查中HCV抗体初筛阳性和灰区标本及1份确认窗口期标本进行比较检测,应用RIBA、病毒核酸检测试剂进行补充验证实验,并对结果进行统计学分析。结果 Murex HCVAg/Ab联合检测试剂与Murex HCVAb试剂阳性检出率分别为73.5%和75.4%,阴性检出率分别为95.8%和90.8%,总检出率分别为85.8%和84.0%,差异有统计学意义(P均﹤0.05)。Murex HCVAg/Ab与Murex HCVAb两种试剂的阳性符合率为76.7%,阴性符合率为94.5%,总符合率为87.6%。两种试剂检出不一致标本123份,其中5份RIBA-/RNA+标本,Murex HCVAg/Ab检出4份(包括确认窗口期标本),Murex HCVAb试剂检出1份;15份RIB-A+/RNA-标本,Murex HCVAg/Ab检出5份,Murex HCVAb试剂检出10份。结论 Murex HCVAg/Ab联合检测试剂对HCVRIBA-/RNA+标本有较高的检出率;与Murex HCVAb试剂相比符合率不高;MurexAg/Ab联合检测试剂和MurexAb试剂均存在抗体检测漏检的可能。联合使用不同的酶联免疫HCV试剂进行血液HCV两次检测,可以最大限度地防止经血HCV的传播。     

核酸检测方法在献血员肝炎筛查中的初步应用

目的 将核酸检测方法应用于献血员肝炎筛查，了解某地区血液安全水平和常规血液筛检中两次酶免检测方式的可靠性。方法44份Murex-abbott抗-HCV阳性标本经科华酶免试剂复检后，使用罗氏COBAS Ampliscreen单独检测HCV RNA；486份来自某地区的合格献血标本采用24份标本混合检测的方法，用罗氏COBAS AmpliScreen检测HBV DNA和HCV RNA。结果44份标本用科华酶免试剂复检，结果只有13份标本呈抗-HCV阳性；3份HCVRNA阳性标本中1份为科华试剂检测抗-HCV阴性。486份合格献血标本进行罗氏COBAS AmpliScreen 24份混合形式筛检后，发现3例HBV DNA阳性标本，阳性率为0．62％，未发现其他核酸标记物阳性的标本。结论我国血液筛查的HBsAg检测存在漏检的现象，在常规血液筛检中，NAT检测只能作为酶免抗体检测的一种补充手段，如果NAT能取代我国血液二次酶免筛检中的一次，则能在最大程度上保障血液安全。     

实验用猪胰腺和小肠组织总RNA提取及鉴定

目的:探讨提取猪胰腺和小肠组织总RNA并尽量减少RNA降解的方法,为胰腺和小肠组织高质量RNA的提取和进一步研究奠定基础。方法:取新鲜猪胰腺和小肠组织,RNA提取采用酸性一步法。结果:RNA琼脂糖凝胶电泳显示RNA没有明显降解。结论:胰腺和小肠组织RNA酶含量丰富,极易降解RNA。操作速度、RNA提取试剂盒的质量和防止RNA污染的综合措施是成功制备高质量RNA的关键。     

一种核酸筛查系统在无偿献血检测中的应用价值

目的分析2018年10月至2019年5月浩源核酸筛查系统运行以来的检测数据,评估该系统在无偿献血核酸检测(NAT)中的应用价值。方法根据浩源核酸筛查系统运行情况、献血者标本检测数据及2019年卫健委临床检验中心(NCCL)、中国国际输血感染预防和控制(CITIC)核酸检测室间质评样本的反馈结果进行统计分析。结果浩源核酸筛查系统共检测57 434例标本,混检阳性pools数69个,其中34个pools拆出阳性标本,阳性标本共37例(其中3个pools各检出2个标本),有效拆分率、阳性检出率分别为49.28%(34/69)、0.06%(37/57 434)。运行期间设备故障6次,无效pools 59个,31例阳性标本的复检符合率为87.1%(27/31)。10个NCCL标本检测结果与反馈结果一致,15个CITIC标本中有3个低浓度HBV DNA标本初次检测未检出核酸,再次检测为反应性。结论浩源筛查系统能在酶免阴性标本中检出核酸阳性标本,进一步保障血液安全,对检测过程中存在的问题及时分析和整改,有助于进一步提高检测效率。     

WB抗体不确定/阴性受检者HIV-1-RNA检测结果分析

目的 探讨核酸定量检测对诊断HIV-1抗体不确定/阴性受检者感染的临床应用价值。方法 收集贵州省3市2021年1月—10月艾滋病初筛实验室进行的筛查实验(酶联免疫吸附法、化学发光和快速检测法)且抗体有反应性的受检者进行免疫印迹法(western blotting, WB),对WB检测结果为HIV-1抗体不确定/阴性受检者进行随访追踪并增加核酸定量检测作为补充实验，后将初筛试验结果、WB试验结果及核酸定量检测结果纳入统计分析。结果 3 800例初筛有反应性的受检者经过WB确证为抗体阳性占76.9%、抗体阴性占6.6%、抗体不确定占16.4%。876例WB抗体不确定及阴性受检者核酸定量检测分布显示，病毒载量(viral load, VL)>5 000copies/ml有175例，占20.0%;VL水平在250～5 000copies/ml有4例，占0.5%;低于检测下限6例，占0.7%;未检出691例，占78.9%。初筛试验不同检测方法间与VL阳性率有明显差异，快速检测法和VL阳性符合率最低，占12.1%,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent as...     

浅析临床电脑鼠标医院感染的预防

目的 了解电脑鼠标消毒效果,进一步有针对性的对电脑鼠标加强监督和监测,预防医院感染的发生.方法 对本院52台电脑鼠标分别用75%酒精及200mg/L含氯消毒剂擦拭做细菌监测,进行消毒效果的对比.结果 电脑鼠标未消毒监测发现细菌污染率100%,用75%酒精擦拭鼠标后污染菌的清除率为89.2%,用200mg/L含氯消毒剂擦拭的细菌清除率可达99.3%.结论 用200mg/L含氯消毒剂擦拭电脑鼠标是高效、低廉、实用、有效的方法.     

输血前梅毒检验方法对比研究

目的:评价在输血前梅毒筛查中三种不同方法检测梅毒螺旋体结果的符合程度,选择敏感、快速的方法提高阳性检出率,防止医患纠纷。方法:应用甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)三种方法对梅毒的检测结果进行比较。结果:TRUST、ELISA、TPPA三种方法的敏感性分别为70.6%、95.6%、95.6%,特异性分别为84.6%、97.9%、98.6%。结论:TRVST方法仅适合梅毒患者治疗后滴度的检测及疗效观察;ELISA方法灵敏度高,适合自动化操作,资料便于保存,适用于血液筛查;TPPA方法特异性好,适用于梅毒筛查后阳性标本的确认实验。     

全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA

目的 寻找一种有效实用的全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA，HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS。方法笔者采用ACR OMETRIX公司的NAC^TM HBV DNA。HCV RNA及HIV-1 RNA核酸对照品，卫生部临床检验中心的HBV DNA，HCV RNA质控对照品，检测该系统的灵敏度；同时采用我中心酶免法(ELISA)初筛检结果阳性，经中和实验确认HBsAg阳性标本10份，经RIBA确认抗-HCV阳性标本3份。经Western Blot确认抗-HIV阳性标本3份，检测该系统的阳性符合率；检测大量临床ELISA筛检结果为阴性的标本来检测其特异性，并且每次实验设立内对照，阴阳性对照以进行临床标本检测。结果该系统的检测灵敏度(95％可信限)为HBV病毒为24-60IU／mL，HCV病毒为78-125IU／mL，HIV-1 RNA病毒为45-67IU／mL。阳性符合率为100％，假阳性率为0.13％。结论全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA。HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS用于检测临床标本是有效实用的，可进一步加大临床标本检测数量，将该系统更好地用于酶联阴性结果的大规模筛查。