小肠缺血预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察小肠缺血预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用。方法：采用大鼠肠系膜动脉缺血预处理的方法，观察对离体心脏缺血再灌注损伤的影响。结果：缺血预处理能明显减轻心脏缺血再灌注损伤的程度，表现为乳酸脱氢酶及组织蛋白酶D漏出减少，心肌水肿程度减轻，丙二醛生成减少（P均＜0．01）。结论：小肠缺血预处理对心脏缺血再灌注损伤具有一定保护作用，表明器官间存有交叉预处理现象。     

大鼠心肌缺血预处理及缺血/再灌注损伤模型的改进

目的改进和完善大鼠心肌缺血/再灌注损伤(I/R)模型的制备,简化多次缺血预处理(IP)操作,提高制模成功率。方法成年SD大鼠80只,随机分成四组:改进的缺血/再灌注组及预处理组(PIR,PIP);以往的缺血/再灌注组及预处理组(TIR,TIP)。改进组心电图记录,左颈动脉插管压力测定、TTC染色心肌梗死面积评估。结果①造模成功率:PIR组与TIR组分别为95%和55%(P<0.05);PIP组及TIP组分别为95%和10%(P<0.01)。②PIP组发生心律失常起始时间比PIR组延迟27.1(%P<0.05);室速、室颤持续时间比PIR组分别短77.5(%P<0.01)和68.9(%P<0.05);室速、室颤的发生率分别是PIR组的45(%P<0.05)和30.3(%P<0.05);心律失常得分仅为PIR组的70(%P<0.01)。③颈动脉压力波形的改变。④PIR组及PIP组心肌梗死面积分别为59.4±13.6%和26.8±11.7(%P<0.01)。结论改进的方法能够提高成功率,准确性地复制心肌I/R的实验模型,简化实验操作。     

地氟烷预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及作用机制

目的探讨地氟烷预处理在大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)中的保护作用是否与单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)有关。方法清洁级健康雄性大鼠50只,2~3月龄,体重250~280 g,切取离体心脏并随机分为正常对照(C)组、IR组、地氟烷预处理+IR(DR)组、地氟烷预处理+AMPK抑制剂+IR(DC)组和IR+AMPK抑制剂(CR)组各10只。DR组和DC组在给予大鼠吸入1 MAC的地氟烷30 min后立即切取心脏。采用Langendorff灌注装置并以95%O_2~5%CO_2饱和的K-H液作为灌注液,在平衡灌注15 min后,停止灌注30 min后再灌注60 min建立IR模型。分别在停止灌注前和再灌注60 min时记录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt)和左室内压最大下降速率(-dp/dt)。采用caspase-3活性检测试剂盒测定心肌组织内caspase-3活性,酶联免疫吸附(ELISA)法检测冠脉流出液中心肌肌钙蛋白(c Tn)I浓度。采用免疫组织化学法和Western印迹法检测心肌组织内AMPK(Thr-172)的磷酸化水平。结果与C组比较,IR组离体心脏再灌注60 min时HR、LVDP、+dp/dt和-dp/dt显著降低(P<0.05),心肌组织caspase-3活性和冠脉流出液中cTnI浓度显著升高(P<0.05),而AMPK(Thr-172)的磷酸化水平无显著差异(P>0.05)。与IR组比较,DR组HR、LVDP、+dp/dt和-dp/dt显著升高(P<0.05),caspase-3活性和cTnI浓度显著降低(P<0.05),AMPK(Thr-172)的磷酸化水平显著升高(P<0.05)。而与DR组比较,DC组HR、LVDP、+dp/dt和-dp/dt显著降低(P<0.05),caspase-3活性和cTnI浓度显著升高(P<0.05),AMPK(Thr-172)的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论地氟烷预处理使IR后心肌组织内AMPK(Thr-172)磷酸化水平升高而被激活,是其缓解心肌IR损伤的机制之一。     

丙泊酚预处理与缺血预处理保护大鼠体外心脏缺血再灌注损伤作用的比较

目的:以缺血预处理(IPC)为标准观察丙泊酚预处理对大鼠体外心脏再灌注损伤的保护作用并探索其可能机制。方法:建立大鼠体外心脏Langendorff灌流模型并随机分为对照组(A组, n=8)、丙泊酚预处理组(B组,n=6)、IPC组(C组,n=6)及5 羟癸酸(5 HD)对照组(D组,n=8)、5 HD加丙泊酚预处理组(E组,n=6)、5 HD加 IPC组(F组,n=7)共6组。连续记录各组心脏血流动力学指标及冠状动脉流量变化,进行再灌注性心律失常评分,并计算心脏梗死面积。结果:B、C、E组血流动力学指标、冠状动脉流量、心律失常评分、梗死面积显著优于A组,以C组最显著(P<0.01或0.05),而D、F组与A组比较差异无统计学意义。结论:丙泊酚预处理与 IPC均可改善体外大鼠心脏再灌注所致的血流动力学紊乱、冠状动脉循环受损及再灌注性心律失常的发生,并缩小心脏梗死面积,但丙泊酚上述保护效应较 IPC弱。阻滞线粒体 KATP通道开放对丙泊酚预处理作用无影响,推测该通道与其保护效应无关。     

缺血期急性高血糖对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的 探讨缺血期急性高血糖对大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)后心肌损伤的影响,并分析血糖水平与心肌损伤之间的关系.方法 在制备急性大鼠MI/R(缺血30min,再灌注6h)模型的基础上,静脉输注高浓度的葡萄糖溶液,造成2个不同浓度的缺血期急性高血糖动物模型.将32只SD大鼠随机平均分配为4组:(1)假手术组(SHAM),(2)生理盐水对照组(CON),(3)高糖1组(HG1)和(4)高糖2组(HG2).术中监测血糖水平,再灌注结束后检测心肌酶谱水平和心肌梗死面积(IS).结果 (1)与CON组相比较,HG1组和HG2组缺血期血糖水平均显著升高,分别为(10.5±1.0)、(18.0±1.2)mmol/L vs(4.7±0.7)mmol/L(P<0.05).(2)HG1组和HG2组的血肌酸激酶和乳酸脱氢酶水平明显升高,且心肌酶谱与血糖水平存在正相关(r分别为0.80和0.73,P<0.01).(3)HG1组的IS较CON组有扩大趋势,但差异无统计学意义[(40.8±5.2)%vs(37.6±5.8)%,P>0.05),HG2组的IS明显扩大[(45.6±8.5)%v8(37.6±5.8)%,P<0.05],且IS与血糖水平存在正相关(r=0.57,P<0.01).结论 缺血期急性高血糖加重大鼠MI/R损伤,且血糖水平与心肌酶谱和IS之间存在正相关.     

饱和氢盐水对心肌缺血再灌注损伤老年大鼠心肌细胞线粒体损伤的影响

目的探讨饱和氢盐水对心肌缺血再灌注损伤老年大鼠心肌细胞蛋白激酶C(PKC)/热休克蛋白90(HSP90)信号通路和线粒体损伤的影响。方法选取18月龄健康老年清洁级雄性SD大鼠150只,采用随机数字表法分为5组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组、饱和氢盐水组、生理盐水组,每组30只。HE染色观察心肌病理学。透射电镜观察线粒体超微结构。蛋白质印迹法和RT-PCR法检测心肌细胞PKC、HSP90、缝隙连接蛋白43(Cx43)、Cx45蛋白及PKC、HSP90、Cx43、Cx45mRNA表达。结果与空白对照组和假手术组比较,缺血再灌注组、饱和氢盐水组和生理盐水组大鼠心肌缺血再灌注后12h和24h心肌细胞线粒体损伤程度评分明显升高,PKC、HSP90、Cx43、Cx45蛋白及PKC、HSP90、Cx43、Cx45mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。与缺血再灌注组和生理盐水组比较,饱和氢盐水组大鼠心肌缺血再灌注后12h和24h心肌细胞线粒体损伤程度评分明显降低[(1.34±0.12)分vs(2.54±0.28)分、(2.61±0.29)分,(1.27±0.13)分vs(2.57±0.27)分、(2.64±0.28)分,P0.05],PKC、HSP90、Cx43、Cx45蛋白及PKC、HSP90、Cx43、Cx45mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论饱和氢盐水可减轻线粒体损伤,从而减轻老年大鼠心肌再灌注损伤。     

心肌肽对缺血再灌注损伤后心肌保护的机制研究

心肌肽是国内单位首先从乳猪心室肌中提取的小分子多肽。许多动物实验证实,该肽具有显著的生物活性,对多种原因尤其急性缺血所致的心肌损伤具有明显的防治作用。近年来,许多研究结果表明,热休克蛋白（HSP）70具有抗心肌缺血作用,提示多肽或蛋白质物质可望成为一类新的抗心肌缺血药物。研究表明能量代谢障碍是缺血再灌注的主要发病基础,自由基的作用是发病的重要环节。     

氯化锂对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌凋亡以及氯化锂的干预作用.方法:健康SD大鼠随机分4组:①正常对照组(A组,5只), ②心肌缺血再灌注组(B组,15只),③心肌缺血再灌注+0.9%氯化钠组(C组,15只), ④心肌缺血再灌注+氯化锂组(D组,15只),B,C,D组又分为1 h、3 h、6 h 3个亚组,每个亚组5只大鼠.流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR和Western Blot分别检测凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达.结果:与A组比较,B、C组3 h心肌细胞凋亡率增高、Bcl-2减少、Casepase-3增多,差异有统计学意义;D组心肌细胞凋亡率下降、Bcl-2和Casepase-3表达与A组差异无统计学意义.结论:心肌再灌注损伤引起心肌细胞凋亡增多, Bcl-2降低以及Caspase-3增高,氯化锂能够减轻以上变化.     

单克隆抗体的缺血再灌注损伤中的心肌保护作用

细胞粘附蛋白可介导中性粒细胞与内皮细胞的相互作用,引起内皮细胞功能不良,导致缺血再灌注损伤。实验证明,应用某些单克隆抗体可抑制这些粘附分子的作用,从而提高心脏对缺血再灌注损伤的耐受性,使心脏手术更安全。     

磷酸肌酸对大鼠缺血再灌注后心肌损伤的影响

目的 观察磷酸肌酸对大鼠缺血再灌注后心肌损伤的影响.方法 60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、磷酸肌酸组.结扎大鼠左前降支冠状动脉使心肌缺血,30 min后恢复血流并持续120 min,复制缺血再灌注损伤模型.磷酸肌酸组分别于缺血再灌注前30 min经右颈内静脉注射磷酸肌酸3 mg/kg,模型组及假手术组给予等量的生理盐水.测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)及心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量并观察心肌超微结构的变化.结果 磷酸肌酸组与模型组比较,血清LDH、CK值降低,心肌组织MDA值减小,SOD值升高.光镜及电镜下心肌细胞变性坏死程度及心肌细胞超微结构形态改变显著减轻.结论 磷酸肌酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤均有保护作用.     

caspase-3活性对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的　探讨特异的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )活性水平对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤 (MIRI)的影响。　 方法　大鼠在体心肌缺血再灌注模型 ,设青年组和老年组 ;各组分设缺血 3 0min再灌注 1、3、6、12h和 2 4h时相点 ,用荧光分析法检测caspase 3活性 ,缺口末端标记法 (TUNEL)标记凋亡细胞 ,用酶法测定中性粒细胞 (PMNs)浸润数 ,红四唑 (TTC)染色法测梗死范围。　 结果　MIRI时 ,青年组和老年组caspase 3活性、心肌细胞凋亡指数 (AI)、PMNs浸润数、心肌梗死范围均随再灌注时间延长而逐渐增加。青年组caspase 3活性和心肌细胞AI于再灌注 12h达到高峰 ,其后维持在较高水平 ;而老年组在再灌注 2 4h仍未下降。所有指标除再灌注 1h外 ,其余各时相点老年组明显较高 ,P <0 0 5～ 0 0 1。　 结论　caspase 3参与介导了MIRI时心肌细胞凋亡和PMNs对心肌组织的浸润 ;caspase 3活性水平的增高可能是导致老年大鼠MIRI较青年组严重的重要因素之一。     

Effect of remote ischemic preconditioning on hepatic microcirculation and function in a rat model of hepatic ischemia reperfusion injury

Background:

Liver transplantation involves a period of ischemia and reperfusion to the graft which leads to primary non-function and dysfunction of the liver in 5–10% of cases. Remote ischemic preconditioning (RIPC) has been shown to reduce ischemia reperfusion injury (IRI) injury to the liver and increase hepatic blood flow. We hypothesized that RIPC may directly modulate hepatic microcirculation and have investigated this using intravital microscopy.

Methods:

A rat model of liver IRI was used with 45 min of partial hepatic ischemia (70%) followed by 3 h of reperfusion. Four groups of animals (Sham, IRI, RIPC+IRI, RIPC+Sham) were studied (n= 6, each group). Intravital microscopy was used to measure red blood cell (RBC) velocity, sinusoidal perfusion, sinusoidal flow and sinusoidal diameter. Neutrophil adhesion was assessed by rhodamine labeling of neutrophils and cell death using propidium iodide.

Results:

RIPC reduced the effects of IRI by significantly increasing red blood cell velocity, sinusoidal flow and sinusoidal perfusion along with decreased neutrophil adhesion and cell death.

Conclusions:

Using intravital microscopy, this study demonstrates that RIPC modulates hepatic microcirculation to reduce the effects of IRI. HO-1 may have a key role in the modulation of hepatic microcirculation and endothelial function.     

缺血后处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌梗死面积和细胞蛋白激酶Cα表达的影响

目的 研究心肌缺血后处理对老年大鼠急性心肌缺血再灌注损伤后心肌梗死面积、心肌细胞蛋白激酶Cα(PKCα)表达的影响,并探讨其可能机制.方法 120只健康雄性Wistar大鼠,根据鼠龄分为老年和成年组,每组再分为对照组(缺血30 min再灌注3 h,12只)和5 s、10 s、30 s、60 s组(缺血30 min,再灌注开始时分别给予5 s、10 s、30 s、60 s再通-闭塞冠状动脉处理后再灌注共3 h,每组12只).2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色测定心肌梗死面积,免疫组化技术检测心肌细胞PKCα表达.结果 不同时间缺血处理心肌梗死面积和PKCα表达不同,对照组、10 s和30 s再通-闭塞处理均可缩小老年和成年大鼠心肌梗死面积[分别为(55.9±6.0)%和(47.4±5.5)%、(48.1±5.3)%、和(39.2±5.7)%、(48.8±6.8)%和(40.2±6.1)%],PKCα表达增加(均P<0.05);老年5 s组再通-闭塞处理可增加大鼠心肌梗死面积,老年5 s组梗死面积为(63.5±5.4)%,PKCα表达降低(均P<0.05).结论 缺血后处理对老年大鼠急性心肌缺血再灌注损伤具有保护作用;缺血后处理效果与再通-闭塞时间有关.     

脂质胞壁酸诱导的预适应对自发性高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对自发性高血压大鼠(SHR)心脏缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是否参与其作用。方法:采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注复制大鼠心肌I/R模型,结扎前24h注射LTA,检测心肌再灌注60min后血清心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH),并用dUTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,用Western Blot方法检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的蛋白表达。同时采用实时RT-PCR技术和Western Blot方法分别检测心肌再灌注末iNOS mRNA和蛋白的表达。结果:与I/R组比较,LTA预适应组能显著减少室性心律失常(VA)评分值(P<0.01);LTA预适应还能明显减少I/R后血清CK-MB和LDH的漏出(P<0.01,P<0.05),减少心肌细胞凋亡(P<0.01),凋亡相关蛋白Bcl-2表达明显上调(P<0.01),而Bax蛋白表达则下调(P<0.01)。再灌注末,预适应组iNOS mRNA的平均相对表达量较I/R组增加了0.71倍(P<0.01),LTA预适应组iNOS蛋白的表达量较I/R组增加了0.96倍(P<0.05)。不论在LTA预适应前或缺血前期给予iNOS抑制剂氨基胍或是单独给予氨基胍,上述观测指标均与I/R组比较差异无统计学意义。结论:LTA预适应能显著减轻SHRI/R导致肥厚心肌的坏死和细胞凋亡,iNOS/NO作为触发和效应环节在介导LTA预适应中发挥关键作用。     

福辛普利钠预处理结合缺血后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察福辛普利钠预处理结合缺血后适应(IPoC)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤后氧化应激和促炎性细胞因子的影响.方法 Spragn-Dawley大鼠60只,随机分为假手术组(心脏前降支下置线不结扎,n=15),I/R组(心脏前降支结扎30 min,再灌注1 h,n=15),IPoC组(心脏前降支结扎30 min,予以3次10 s的再灌注/缺血循环,再持续灌注1 h,n=15),福辛普利钠+IPoC组(福辛普利钠片0.9 mg/kg,连续灌胃14 d,于末次灌胃2 h后,施以IPoC组的干预过程,n=15).后三组大鼠再灌注1 h,所有实验大鼠腹主动脉取血并分离出心脏组织.比色法测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白T(cTnT)的含量,NBT染色测定大鼠左心室心肌梗死面积,比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,放射免疫法测定血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,酶联免疫吸附测定法测定心肌组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平.结果 IPoC组大鼠血清CK-MB和cTnT水平均显著低于I/R组(P均<0.01),大鼠心肌梗死面积明显小于I/R组(P<0.01),血清SOD含量高于I/R组(P<0.01),MDA含量低于I/R组(P<0.01),血清和心肌组织炎症因子IL.1β、IL-6和TNF-αt水平均显著低于I/R组(P值分别小于0.05、0.05和0.01).福辛普利钠+IPoC组大鼠心肌梗死面积和CK-MB含量均低于IPoC组(P均<0.05),血清SOD含量高于IPoC组(P<0.05),血清IL-6和心肌组织TNF-α水平均低于IPoC组(P值分别小于0.05和0.01).结论 福辛普利钠预处理可加强IPoC对I/R大鼠心肌的保护作用,其机制可能与抑制氧化应激和早期炎症反应有关.     

缺血预处理对肠缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察肠缺血预处理（IPC）对缺血再灌注（I／R）损伤的保护作用．探讨IPC在肠I／R损伤中的作用机制。方法对大鼠肠系膜上动脉进行4次循环的5min夹闭／Smin开放（即IPC）,24h后实施缺血30min再灌注24h,制作I／R损伤模型。检测IPC后肠组织一氧化氮（NO）含量（以NO2^-／NO3^-代表）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量及观察肠肌间神经丛一氧化氮合成酶（NOS）阳性神经元的变化,检测血清NO及血浆二氨氧化酶（DAO）．采用Chiu评分法观察肠组织损伤情况。结果IPC后肠组织NO、SOD含量下降．而MDA含量明显升高,肠肌间丛NOS阳性神经元数明显降低,DAO水平明显降低,肠组织损伤程度明显减轻。结论IPC对I／R损伤有明显保护作用,其机理与灭活了氧自由基,降低NO含量有关。     

Role of cardiac renin angiotensin system in ischemia reperfusion injury and preconditioning of heart

Cardio-vascular diseases are the leading cause of morbidity and mortality. Ischemia is a state of oxygen deprivation in tissues, whereas reperfusion is restoration of blood flow in ischemic tissues. Myocardial damage of tissue during reperfusion after ischemic insult is known as myocardial ischemia–reperfusion (I/R) injury. It induces damage to cardiac muscle via increasing expression of oxygen, sodium and calcium ions which are responsible in the activation of proteases and cell death. Heart renin angiotensin system (RAS) plays an important role in the myocardial ischemia and reperfusion injury. Angiotensin (1–7) is responsible for vasodilation and angiotensin II for vasoconstriction. Here-in we reviewed how myocardial I/R injury sets in by up-regulation of angiotensin II that leads to increased infarct size, which can be reduced by the use of ACE inhibitors, ACE2 activators and angiotensin II antagonist.     

异氟醚预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察异氟醚预处理对体外循环心内直视手术心肌的保护作用。方法:20例瓣膜置换术患者(ASA 2～3 级),随机分为预处理组(Ⅰ组)和对照组(C组)。分别于麻醉后(T_1),主动脉开放后15分钟(T_2)、2小时(T_3)、24小时(T_4)时间点取血样,检测血清CGRP、ET、cTnI;另于术前、术后第1、3天记录同步12导联心电图.测定其QTd和 QTcd。结果:主动脉开放后,CGRP含量在两组患者24小时之内都有显著增加(P<0.01),T_2时,预处理组的CGRP水平明显高于对照组的(P<0.05);ET在T_2时两组都有显著上升(P<0.01),但预处理组的上升幅度明显低于对照组(P<0.05);T3、T4时,对照组cTnI水平显著高于预处理组;术后两组QTd和 QTcd显著增加(P<0.01),其中对照组的增加较多,且第1天明显多于预处理组(P<0.05);结论:异氟醚预处理能减少心肌的缺血再灌注损伤,降低术后心律失常发生率,有利体外循环后心功能恢复。