Geminin:一个潜在的肿瘤治疗靶点

Geminin通过与Cdt1的相互作用抑制DNA的重复复制,保证在一个细胞周期内DNA仅被复制一次。Geminin在肿瘤细胞系及肿瘤组织中高水平表达,与肿瘤临床病理学的许多指标相关,可指示的肿瘤的预后。但当降低Geminin的表达水平时,在肿瘤细胞系出现了DNA的重复复制,细胞增殖停止,而正常细胞系的DNA复制则不受影响,细胞正常增殖。因此,以Geminin为治疗靶点能够选择性的抑制肿瘤细胞生长而不影响正常细胞,其有望成为一个理想的肿瘤治疗靶点。     

Geminin在血管平滑肌细胞分化表型转化中的介导作用

目的 通过比较静止状态的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)与血清刺激后的VSMCs在分化表型改变中Geminin的表达变化情况,探讨Geminin对VSMCs表型转化的影响.方法 实验设置静止状态(血清饥饿)对照组、血清刺激组,研究不同时相两个组Geminin的分布、活性及表达水平的差异.血清饥饿法可以诱导出VSMCs表型分化及活性差异;免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察Geminin核内定位;应用PCR检测Geminin基因表达的变化;Western blot检测Geminin蛋白、VSMC合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及收缩型标志物平滑肌肌动蛋白相关蛋白(actin-related proteins,ARP)表达的变化.结果 ①静止状态下(血清饥饿)VSMCs以收缩型为主,血清刺激后以合成型为主;②静止状态Geminin几乎全部存在于细胞质内,而血清刺激后Geminin几乎全部定位于胞核内;③Geminin mRNA在血清刺激时明显升高,且在刺激48 h时差异表达最明显,与无血清比较差异具有统计学意义(P<0 05);④Geminin蛋白和骨桥蛋白在血清刺激时均明显升高,与无血清比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Geminin参与介导了VSMCs由收缩型向合成型的转化.     

CDK4和Geminin在胶质瘤中的表达及其与预后的关系

目的：探讨细胞周期依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase 4,CDK4）和Geminin在胶质瘤中的表达及其临床病理意义。方法：采用免疫组织化学方法,检测70例胶质瘤中CDK4和Geminin的表达,分析CDK4和Geminin的表达和其相关性,以及二者与胶质瘤临床病理因素及生存时间的关系。 结果：CDK4、Geminin在胶质瘤中的总阳性率分别为70.0%（49/70）、75.7%（53/70）;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中CDK4阳性率分别为52.8%（19/36）、84.6%（22/26）、100.0%（8/8）,Geminin阳性率分别为58.3%（21/36）、92.3%（24/26）、100.0%（8/8）,CDK4和Geminin在不同级别胶质瘤中的表达有显著差异（P＜0.05）。且二者表达呈正相关;CDK4、Geminin阳性表达与肿瘤大小及细胞核分裂像多少有关（P＜0.05）,与患者年龄、性别以及肿瘤组织有无坏死无关（P＞0.05）;Kaplan-Meier单因素统计分析结果显示 CDK4、Geminin阳性表达组的患者术后生存时间明显短于CDK4、Geminin阴性表达组（P＜0.001）。结论：CDK4和Geminin表达与胶质瘤的分级、预后有关,联合检测CDK4和Geminin有助于判断胶质瘤恶性程度及评估预后。     

siRNA干扰Geminin基因对脑胶质瘤放疗敏感性的影响

目的 观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法 利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组：si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布，进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法，用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果 脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织，且Geminin表达越高，脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比，si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表...     

Geminin over-expression promotes differentiation in rat vascular smooth muscle cells from dedifferentiation

目的 探讨Geminin基因过表达对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的影响.方法 构建真核表达载体pEGFP-N1 -Geminin,脂质体2000介导转染不同表型(去分化型和分化型)的大鼠VSMCs株,设置阳性组、阴性组和空白组(n=3),检测转染效果、VSMCs主要表型标志物(α-actin、OPN)和肌动蛋白相关蛋白1(actin related protein,ARPl)的变化情况.结果 Geminin基因成功过表达VSMCs株.与2个对照组(阴性组和空白组)比较,分化型VSMCs中表型标志物(α-actin和OPN)及ARP1含量变化不大;去分化型VSMCs中,OPN在阳性组中表达下调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P＜0.05),α-actin和ARP1在阳性组中表达上调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P＜0.05),免疫共沉淀实验结果提示经protein G plus-Agarose沉淀ARP1相互作用蛋白复合物后,用Geminin抗体进行Western blot检测,可以检测到Geminin的表达.结论 Geminin基因过表达有助于VSMCs由去分化型向分化型转化;免疫共沉淀结果提示Geminin和ARP1之间存在相互作用,ARP1可能参与了上述VSMCs表型转化过程.     

Geminin基因过表达对VSMCs表型转化的影响

目的探讨Geminin基因过表达对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-Geminin,脂质体2000介导转染不同表型(去分化型和分化型)的大鼠VSMCs株,设置阳性组、阴性组和空白组(n=3),检测转染效果、VSMCs主要表型标志物(α-actin、OPN)和肌动蛋白相关蛋白1(actinrelated protein,ARP1)的变化情况。结果 Geminin基因成功过表达VSMCs株。与2个对照组(阴性组和空白组)比较,分化型VSMCs中表型标志物(α-actin和OPN)及ARP1含量变化不大;去分化型VSMCs中,OPN在阳性组中表达下调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P<0.05),α-actin和ARP1在阳性组中表达上调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P<0.05),免疫共沉淀实验结果提示经protein G plus-Agarose沉淀ARP1相互作用蛋白复合物后,用Geminin抗体进行Western blot检测,可以检测到Geminin的表达。结论 Geminin基因过表达有助于VSMCs由去分化型向分化型转化;免疫共沉淀结果提示Geminin和ARP1之间存在相互作用,ARP1可能参与了上述VSMCs表型转化过程。     

Effect of RNA interference targeting geminin on proliferation of vascular smooth muscle cells in rats

目的 以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs) Geminin基因的表达观测VSMCs增殖情况及表型标志物.方法 分别利用RT-PCR,Western blot检测VSMCs中Geminin基因、蛋白表达的变化,筛选出干扰效果最为显著的序列用于构建慢病毒包裹的稳定干扰模型.应用[3H] -TdR、EdU掺入试验检测VSMCs增殖的情况;同时使用Western blot分别检测干扰前后相关标志性基因的表达.结果 ①siRNA转染后,以第1亚组干扰效果最为显著,与另外2个阳性亚组及对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).②[3H] -TdR、EdU掺入实验显示:阳性干扰组的掺入量较两对照组明显升高(P＜0.05).③siRNA转染使Geminin基因表达减弱后,阳性组VSMCs合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平显著升高,收缩型标志物平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-Actin)表达水平明显降低,与对照组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA干扰介导的Geminin基因沉寂可显著增强VSMCs的增殖能力,并有助于VSMCs的表型由收缩型向合成型转化.     

Geminin基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Geminin基因的表达观测VSMCs增殖情况及表型标志物。方法分别利用RT-PCR,Western blot检测VSMCs中Geminin基因、蛋白表达的变化,筛选出干扰效果最为显著的序列用于构建慢病毒包裹的稳定干扰模型。应用[3H]-TdR、EdU掺入试验检测VSMCs增殖的情况;同时使用Western blot分别检测干扰前后相关标志性基因的表达。结果①siRNA转染后,以第1亚组干扰效果最为显著,与另外2个阳性亚组及对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②[3H]-TdR、EdU掺入实验显示:阳性干扰组的掺入量较两对照组明显升高(P<0.05)。③siRNA转染使Geminin基因表达减弱后,阳性组VSMCs合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平显著升高,收缩型标志物平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-Actin)表达水平明显降低,与对照组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰介导的Geminin基因沉寂可显著增强VSMCs的增殖能力,并有助于VSMCs的表型由收缩型向合成型转化。     

RNA干扰Geminin基因表达对脑胶质瘤恶性生物学行为的影响

目的:探讨Geminin基因沉默对人脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响及可能的发生机制.方法:选取南通大学附属医院脑外科2018-2019年手术切除的20例神经胶质瘤患者的新鲜标本,qRT-PCR结合基因表达谱数据动态分析(gene expression profilling interactive analysis,G...     

Cyclin B1与肿瘤关系的研究进展

细胞周期调控异常在恶性肿瘤发生、发展中起关键性作用,目前对细胞周期调控的研究是肿瘤研究的热点之一.细胞周期的顺序过程是在细胞周期调控因子的作用下,忠实而有顺序地启动和完成细胞周期事件的过程.细胞周期调控点的失调将引发肿瘤.     

SKP2、p27kip1与人类消化系统肿瘤的研究现状

细胞周期的调控是一个及其复杂的过程,涉及到多因子在多层次上的作用.在细胞周期的调节过程中,细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)及与细胞周期蛋白(cyclin)复合物(cyclin-CDK)在细胞周期进程中能促使细胞突破R点,由G1期进入S期,起正性调控作用.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitors,CDKI)通过与cyclin-CDK复合物结合抑止了CDK活性,使细胞周期停留在G1期,起着负性调节作用.通过近几年研究发现,p27kip1是细胞周期负性调控因子的典型代表,作为一种候选的抑癌基因已受到广泛重视.细胞S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase associated protein 2,SKP2)因能降解p27kip1,使之成为人类肿瘤发生、发展以及治疗决策研究的热点.下面就SKP2、p27kip1与人类消化系统肿瘤的研究做综述如下.     

细胞周期蛋白与胃癌

胃癌在消化道恶性肿瘤中占第一位,是严重危害健康的主要疾病之一,研究胃癌的发生机制具有重要意义.细胞增殖失控是癌症的重要特征,这表明调节细胞周期的分子机制与肿瘤的发生有关.目前,以周期素依赖性激酶(CDK)为核心的细胞周期正负调控机制在肿瘤发生中的作用受到重视,细胞周期蛋白(Cyclin)是对细胞周期进行正性调节的一类因子.下面,我们就对其在胃癌发生中的表达的研究结果做一综述.     

RNA干扰PNAS-2后U937细胞周期及相关蛋白表达的变化

目的 研究RNA干扰抑制细胞凋亡相关蛋白(PNAS-2)基因表达后,急性单核细胞白血病细胞株U937细胞周期及其相关蛋白表达的变化.方法 将已构建的靶向抑制PNAS-2的干扰组质粒和对照组质粒分别转染U937细胞.流式细胞仪分析两组细胞周期的变化;蛋白质芯片技术比较两组细胞周期相关蛋白表达水平的差异.结果 流式细胞仪检测结果显示,干扰组细胞出现G2/M期阻滞,与对照组比较差异有统计学意义;蛋白质芯片结果分析发现,有29条细胞周期相关蛋白表达变化,其中上调25条(cyclinA、cyclinE及相关调节因子p53蛋白等),下调4条.CyelinB表达水平无显著改变.结论 RNA干扰抑制PNAS-2表达后,U937细胞周期出现G2/M期阻滞,可能与细胞周期素A、p53蛋白表达上调,而细胞周期素B表达不变有关.     

热休克诱导细胞周期素D1表达水平降低的转录调控机制

目的:研究人的细胞周期素D1基因启动子热休克效应的表达调控机制.方法:以RT-PCR技术研究细胞周期素D1mRNA水平的变化;构建一系列人细胞周期素D1基因启动子报告基因质粒.通过报告基因方法确认细胞周期素D1启动子的热休克效应区.应用染色质免疫沉技术检测核心启动子区域的组蛋白乙酰化修饰情况.结果:热休克造成细胞周期素D1mRNA水平下降;报告基因结果显示人细胞周期素D1基因的热休克的效应区位于-50～+141bp范围.核心启动子区组蛋白H3第九位赖氨酸乙酰化程度降低.结论:热休克抑制人的细胞周期素D1基因的启动子转录活性,其效应区位于核心启动子的-50～+141bp范围.热休克效应与核心启动子区的组蛋白乙酰化程度下降有关.     

肿瘤坏死因子的细胞同步化作用对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNFα)使细胞周期同步化对增加鼻咽癌的放射敏感性的影响.方法 用体内实验证实鼻咽癌细胞系中确实存在放射抵抗亚克隆株,然后用流式细胞仪检测TNFα对CNE-2Z-S1细胞周期同步化的作用,应用克隆形成实验及裸鼠实验,于体外体内测定经细胞周期同步化后S1细胞对射线的敏感性.结果 (1)CNE-2Z细胞群中确实存在着放射抵抗的亚群.(2)TNFα能阻滞CNE-2Z-S1细胞周期,达到细胞周期同步化的作用.(3)体外研究证实经TNFα预处理可使CNE-2Z-S1细胞对放射的敏感性显著提高.(4)体内研究提示TNFα有可能提高CNE-2Z-S1细胞对放射的敏感性.结论 TNFα可通过促进CNE-2Z-S1细胞周期同步化进而增加放射敏感性.     

肿瘤细胞增殖标志物蛋白功能及意义的研究进展

肿瘤的发生是一个多步骤、多因素、多阶段和多基因改变的过程,其中细胞周期调控失常、细胞增殖失控被认为是肿瘤发生的重要机制.目前,用于研究细胞增殖状态的方法有丝分裂计数、流式细胞技术、细胞周期相关抗原的免疫组化等,它们各有优缺点,细胞周期相关抗原的免疫组化因其技术成熟、操作简便、指标可靠、可对常规石蜡切片作回顾性研究兼形态学评价,在临床应用和研究中使用广泛.     

流式细胞术快速测定细胞活性

0　引言　细胞周期动力学研究和细胞凋亡的研究是目前生物医学领域的热门课题之一 [1 ] ,流式细胞术 (FCM)检测细胞周期和凋亡是其主要研究手段 [2 ] .FCM对细胞周期的分析方法已很成熟 ,但是我们在分析化学或物理因素对细胞周期的影响时 ,发现在 DNA直方图上出现 DNA含量较低的细胞峰 ,为确定该细胞峰的性质 ,鉴定细胞的活性 ,我们用 FCM法和台盼蓝染色法进行对比实验 ,建立了 FCM同时检测细胞周期和细胞活性的新方法 .1　材料和方法1.1　材料　所用设备包括 :EL ITE ESP型流式细胞仪 (美国Coulter公司 ) ,XD- 10 1型倒置显微…     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

细胞周期调控与卵巢癌

细胞周期调控需要有多个元件参与,在细胞增殖过程中,细胞周期受细胞周期素、细胞周期素依赖激酶、细胞周期素依赖激酶酶抑制蛋白的精密调控.三者之间对卵巢癌的发生、发展及其预后有一定的相关关系.     

细胞周期素D2启动子曲古菌素A效应区域的研究

目的 研究在曲古菌素A(trichostatin A,TSA)处理条件下细胞周期素D2的调控机制.方法 细胞周期素D2的mRNA水平通过RT-PCR方法 检测.细胞周期素D2的启动子片段以A549细胞基因组DNA为模板,通过高保真PCR扩增获得,并克隆到pGL3-BASIC载体中;并以此为基础通过高保真PCR扩增出不同...