内衬上皮的管状组织工程软骨构建的实验研究

目的研究以聚丙交酯-乙交酯共聚物[poly（DL-lactide-co-glycolide）,PLGA]包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,在有免疫力的动物体内构建内衬上皮的管状组织工程软骨的可行性,为喉、气管缺损的修复探索新方法。方法取1月龄兔耳廓软骨,收集体外培养第3～4代的软骨细胞,接种于经多聚赖氨酸处理的以PLGA包埋甲壳胺无纺布的片状细胞支架材料上,体外培养7～10d后包裹于兔腹部缝制的皮管上并深埋于体内,分别于6、12、18周取材行大体和组织学观察以及HE染色、甲苯胺蓝染色和Masson＇s三色染色。结果同种异体软骨细胞/PLGA包埋甲壳胺无纺布的细胞支架复合物体外培养1周时有基质产生;植入体内6周后,复合物中有基质分泌,软骨细胞不成熟;12周时,软骨细胞接近成熟并形成凹陷,内衬上皮的管状组织工程软骨形成;18周时,新生软骨基本接近正常软骨。结论以PLGA包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,同种异体软骨细胞与细胞支架所形成的复合物在有免疫力的动物体内可构建出内衬上皮的管状组织工程软骨。     

一种新型青光眼植入物——聚砜引流管的生物相容性研究

目的 研究自行设计的新型青光眼房水引流物在兔眼上的生物相容性。方法 新西兰大白兔6只,每只兔随机取一眼作为实验眼,另一眼作为对照眼。实验眼行巩膜瓣下植入聚砜引流管,一端植入前房0.5cm;对照组眼单纯做巩膜瓣。术前和术后的1、2、 4周,测量眼压并观察眼前节形态,术后1周进行超声生物显微镜检查,术后第1、2、4周分别取2只兔,摘除双侧实验眼与对照眼各2只,行病理HE染色检查,观察兔眼局部组织对植入物的反应。结果 术后第1天,实验眼和对照眼角膜透明, 50％试验眼前房出现Tydall征（＋）,12.5%对照眼前房出现Tydall征（＋）,所有眼均未见纤维素性渗出。术后1周,实验眼与对照眼Tydall征均为（－）。实验眼与对照眼术后早期的病理组织学改变相似,都表现为炎症细胞浸润,成纤维细胞逐渐增多,未见异物巨细胞。结论 聚砜引流管具有良好的生物相容性,植入兔眼后未见局部组织排斥反应。     

骨形态发生蛋白—羟基磷灰石复合人工听小骨动物实验研究

目的：寻找一种生物相容性好并且能被机体骨组织替代的听骨链重建材料。方法：用骨形态发生蛋白（BMP）复合多孔羟基磷灰石（HA）听小骨,模拟在人行鼓室成形术的条件植入兔的听泡内。分别于术后1、2、4、8、12、16周处死动物,取材作大体及组织病理学观察,了解该种新型听小骨（BMP／HA）的成骨效应,并与单纯HA材料听小骨相比较。结果：将BMP／HA听小骨植入兔听泡后4周,人工听小骨表面被覆与正常粘膜结构一致的上皮细胞,鼓膜面周围大量间充质细胞生长;12周时在鼓膜与听小骨之间有软骨形成,16周发现有新骨生成。各时间组植入材料与听泡骨壁之间无过度纤维组织增生,对照组未见新骨生成。结果：BMP／HA人工听小骨是一种具有较强骨诱导能力、生物相容性良好的人工听小骨,作为中耳传音结构重建材料,有可能估单纯羟基磷灰石人工听小骨。     

骨形态发生蛋白-羟基磷灰石复合人工听小骨动物实验研究

目的 :寻找一种生物相容性好并且能被机体骨组织替代的听骨链重建材料。方法 :用骨形态发生蛋白(BMP)复合多孔羟基磷灰石 (HA)听小骨 ,模拟在人行鼓室成形术的条件植入兔的听泡内。分别于术后 1、 2、 4、 8、12、 16周处死动物 ,取材作大体及组织病理学观察 ,了解该种新型听小骨 (BMP/ HA)的成骨效应 ,并与单纯 HA材料听小骨相比较。结果 :将 BMP/ HA听小骨植入兔听泡后 4周 ,人工听小骨表面被覆与正常粘膜结构一致的上皮细胞 ,鼓膜面周围大量间充质细胞生长 ;12周时在鼓膜与听小骨之间有软骨形成 ,16周发现有新骨生成。各时间组植入材料与听泡骨壁之间无过度纤维组织增生。对照组未见新骨生成。结果 :BMP/ HA人工听小骨是一种具有较强骨诱导能力、生物相容性良好的人工听小骨 ,作为中耳传音结构重建材料 ,有可能优于单纯羟基磷灰石人工听小骨。     

自制天然软骨细胞外基质支架材料的生物相容性研究

目的：对自行研制的天然脱细胞基质(NECM)进行一系列牛物相容性试验，评价其组织相容性。方法：采用细胞毒性试验、全身毒性试验、溶血试验、热原试验、淋巴细胞转化试验及异体体内植入试验来评价其生物相容性。结果：自制NECM支架材料无细胞毒性．无溶血现象，无全身毒性，无致热源作用，无致敏淋巴细胞作用，体内埋植不引起炎症反应。结论：自制NECM具有良好的生物相容性，有可能成为理想的天然生物支架材料。     

自体骨髓间质干细胞诱导的软骨细胞修复兔耳廓软骨缺损

目的探讨自体骨髓间质干细胞（Bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSC）诱导的软骨细胞修复兔耳廓软骨缺损的可行性。方法取新西兰大白兔BMMSC体外培养扩增,以含转化生长因子（TGF-β1）、地塞米松和维生素C的培养液做诱导培养,实验组以诱导后的软骨细胞与聚丙交酯-乙交酯共聚物Poly（dl-lactideco-glycolide）（PLGA）包埋甲壳胺无纺布的新型支架形成复合物修复兔自体耳廓软骨缺损;对照组以PLGA/甲壳胺无纺布支架修复兔耳廓软骨缺损。分别于移植后6周、12周、18周取材,行HE和甲苯胺蓝染色,观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果术后18周,实验组缺损区完全由软骨组织修复,缺损表面光滑,软骨陷窝明显,与周围正常软骨组织无明显界限;对照组为纤维组织修复。结论自体BMMSC诱导的软骨细胞可用于修复兔耳廓软骨缺损。     

一般问题

20050001自制天然软骨细胞外基质支架材料 的生物相容性研究/王彦君…//临床耳鼻咽喉科 杂志.2004,18(6).363～366 目的:对自行研制的天然脱细胞基质(NECM) 进行一系列生物相容性试验,评价其组织相容性。 方法:采用细胞毒性试验、全身毒性试验、溶血试验、 热原试验、淋巴细胞转化试验及异体体内植入试验 来评价其生物相容性。结果:自制NECM支架材料 无细胞毒性,无溶血现象,无全身毒性,无致热源作 用,无致敏淋巴细胞作用,体内埋植不引起炎症反 应。结论:自制NECM具有良好的生物相容性,有 可能成为理想的天然生物支架材料。图6表2参 1…     

带蒂肌筋膜瓣充填与包裹构建喉支架形态组织工程软骨

目的 探讨带蒂肌筋膜组织瓣构建组织工程喉支架形态软骨方法,为肌筋膜瓣复合组织工程化软骨修复重建喉软骨支架功能提供实验依据.方法 采用溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉支架形态聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate),PHBHH]生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养1周后用于体内植入.12只新西兰白兔,以其脊背部一侧骶棘肌及其筋膜制备肌筋膜组织瓣,采用筋膜衬里方法充填与包裹软骨细胞-PHBHH喉支架形态复合物(实验组9只),原位植入.设空白对照组(3只).分别于术后6、12和18周取材,行大体形态观察,组织学和免疫组化检测评估喉支架形态组织工程化软骨成形与再生情况.结果 制备的PHBHH多孔生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,形似喉支架形态,乙醇静态容积测定孔隙率＞90％.筋膜衬里的带蒂肌筋膜组织瓣血运丰富,可有效充填与包裹喉支架形态塑形物.不同时间点均获取大体形态维持良好的喉支架形态组织工程软骨,组织学和免疫组化检测均证实体内植入6周即可形成软骨组织,12周及18周软骨组织进一步成熟.单纯PHBHH喉支架作为对照组体内植入未检测到软骨组织.结论 带蒂肌筋膜组织瓣可保障血运,采用筋膜衬里的肌筋膜组织瓣充填与包裹方法可构建喉支架形态组织工程软骨.     

异种胶原生物膜鼓膜移植的生物相容性研究

目的研究异种胶原膜(戊二醛交联乙醇浸泡的Ⅲ型猪皮胶原生物膜)作为兔鼓膜移植材料的生物相容性。方法1.光镜和透射电镜下观察兔耳正常鼓膜和生物膜的组织形态学结构;2.测定兔体液免疫抗体含量;3.测定生物膜的抗原性;4.以大耳白兔为受体,将生物膜植入背部肌肉,观察乙醇浸泡前后移植材料的生物相容性差别;5.切除动物鼓膜,移植生物膜鼓膜,于术后10、20、40和60d观察鼓膜愈合状态。结果1.证实兔鼓膜的组织学和超微结构与人耳鼓膜相似;2.兔体液免疫学抗体含量与人类的基本一致;3.生物膜的胶原蛋白抗原性低,其氨基酸符合胶原蛋白标准;4.生物膜具良好的网状结构;5.乙醇浸泡前后组织病理学反应差异有显著性(P<0.05);6.移植组19耳成功,空白对照组无1耳愈合。结论异种胶原膜具有良好的生物相容性,是有实用价值的人类鼓膜移植材料。     

组织工程化喉软骨的构建

目的 研究组织工程化喉支架软骨的构建方法。方法 酶消化法获取幼兔肋和关节软骨细胞并进行体外培养,传代时延长胰蛋白酶作用时间3-5 min,收集第3代培养的软骨细胞用于实验;采用溶液浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉形态聚羟基烷酸酯类[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate,PHBHH)]生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养1周后,分别在成兔体内用大网膜充填复合物中空部分与整体包裹、腹内成形(9只动物)和背部筋膜瓣与肌肉组织共同充填与包裹复合物、皮下成形(9只)的方法将负载软骨种子细胞的喉形态材料塑形物植入腹腔和背部,设空白对照组(每批3只)。术后一定时间取材,大体形态观察、组织学和免疫组织化学检测评估工程化喉软骨的成形与再生情况。结果 获取的软骨细胞活性为(93±2)％,传统方法为(94±2)％(P>0.05)。制备的喉形态生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,液体(乙醇)静态容积测定孔隙率>90％。两种体内植入法均构建出喉形态组织工程化组织,大体形态维持良好,组织学和免疫组织化学均证实为软骨组织,且形态学和组织学表现两者基本一致。结论 改良培养细胞传代过程中胰酶作用程度未影响软骨细胞的成软骨性能;PHBHH可作为喉形态塑形物的塑形和构建组织工程化软骨的     

支撑喉镜下CO2激光及几丁糖局部涂布治疗喉狭窄

目的：探讨CO2激光辅以局部几丁糖涂布治疗各种类型喉狭窄的手术方法和疗效。方法：1999年1月-2002年1月在全麻支撑喉镜下共行CO2激光辅以局部几丁糖涂布治疗种类喉狭窄患者21例，其中先天性喉2例，不同原因前联合粘连狭窄13例，后联合璞形成3例，喉乳头状瘤多次手术后喉闭锁2例，甲状腺术后双侧声带外展麻痹行杓状软骨切除术后声门狭窄1例。结果：全部患者术后随访6-24个月，18例拔管保留发声功能；3例再狭窄，2例经再次手术后拔管，无误吸，发声较低沉嘶哑；另一例行喉裂开“T”形管扩张。结论：CO2激光手术 几丁糖局部涂布是一种治疗喉狭窄的有效方法，手术安全简便，可避免颈外进路手术，同时保留较好的发声功能。     

Effect of a Chitosan Gel on Hemostasis and Prevention of Adhesion After Endoscopic Sinus Surgery

ObjectivesPostoperative bleeding and adhesion formation are the two most common complications after endoscopic sinus surgery (ESS). The former sometimes can be life threatening and the latter is the most common reason requiring revision surgery. This study was designed to evaluate the effect of newly developed chitosan gel (8% carboxymethyl chitosan, Surgi shield) on hemostasis and wound healing after ESS.MethodsA prospective, randomized, double-blind controlled trial was conducted in 33 patients undergoing symmetric ESS. At the conclusion of the operation, Surgi shield was randomly applied on one side of the nasal cavity, with the opposite side acting as control and the bleeding quantity of the surgical field was evaluated every 2 minutes. And then, Merocel was placed in the ethmoidectomized areas of the both sides. Five milliliters of Surgi shield was applied to the Merocel of intervention side and saline was applied to the other side. Merocel in both nasal cavities was removed and 5 mL of Surgi shield was applied again to the intervention side on the second day after surgery. The nasal cavity was examined using a nasal endoscope and the degree of adhesion, crusting, mucosal edema, infection, and granulations were graded at 1, 2, and 4 weeks after surgery.ResultsComplete hemostasis was rapidly achieved in the Surgi shield applied side compared with the control side at 2, 4, 6, 8, and 10 minutes after application of Surgi shield (P#x0003d;0.007, P#x0003d;0.004, P<0.001, P#x0003d;0.001, and P<0.001, respectively). There were significantly less adhesions on the Surgi shield applied side at postoperative 1, 2, and 4 weeks (P#x0003d;0.001, P<0.001, and P<0.001, respectively). The degree of mucosal edema, infection, crusting, or granulation formation assessed by the endoscopic features in the Surgi shield applied side was not significantly different from that of the control side (P>0.05). No adverse effects were noted in the patient series.ConclusionSurgi shield containing chitosan can be used safely to achieve rapid hemostasis immediately after ESS and to prevent adhesion formation.     

几丁糖预防CO2激光声带切除术后声带粘连短期观察的实验研究

目的 观察CO<,2>激光切除狗声带后局部涂布几丁糖预防声带粘连的效果.方法 17只狗中的16只被随机分成2组,以CO<,2>激光切除狗的双侧声带,几丁糖组和对照组分别立即于术后局部涂布几丁糖和生理盐水各5 min.术后1周于各组中随机抽取3只,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测声带中的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和转化生长因子(TGF)-β1的表达,并以透射电镜观察声带中成纤维细胞的超微结构.术后3周对余下的10只狗粘连的声带行CO<,2>激光松解,并再次分别局部涂布几丁糖和生理盐水各5 min.每周观察声带愈合和粘连形成过程,6周后收集所有的喉标本行组织学观察胶原表达.结果 电镜观察发现术后对照组狗声带较几丁糖组成纤维细胞内超微结构发达.术后1周几丁糖组声带中bFGF和TGF-β1的表达中位数[25分位数;75分位数]分别0.235[0.215;0.255]pg/mg和1.055[0.905;1.305]pg/mg,较对照组0.155[0.137;0.165]Pg/mg和0.820[0.687;0.962]ps/mg高,Wilcoxon秩和检验证实差异均有统计学意义(z值分别为-2.887和-2.005,P值分别为0.002和0.041).术后3周对照组声带粘连程度中位数为49%,几丁糖组为7%,Mann-Whitney U检验两组间声带粘连程度比较差异有统计学意义(z=-2.619,P=0.008).术后6周Mason染色见几丁糖组声带中胶原的表达较对照组轻,两组间胶原成分分值比较Fisher精确检验差异有统计学意义(P=0.023).结论几丁糖局部涂布能减轻狗CO<,2>激光声带切除术后声带的粘连.     

胶原-壳聚糖膜在组织工程化鼓膜中的应用

目的 探讨胶原-壳聚糖膜(collagen--chitosan tissue engineering membrane,CCM)在体外对鼓膜上皮层角朊细胞(keratinocyte,KC)、纤维层成纤维细胞(fibroblast,FB)生长、增殖以及胶原分泌功能的影响.方法 热干法制备CCM,传代的大鼠鼓膜上皮KC和FB分别接种于培养板及CCM表面,通过角蛋白、细胞膜波形蛋白免疫荧光染色鉴定细胞特异性,通过细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫荧光染色测定膜上细胞的增殖能力,通过细胞培养液上清的羟脯氨酸测定评价对FB胶原分泌功能的影响.结果 传代的大鼠鼓膜上皮KC和FB在CCM上生长,细胞形态及角蛋白、细胞膜波形蛋白免疫荧光染色阳性结果均未见明显改变.分别在培养板及CCM上接种6天的KC和FB PCNA染色荧光强度差异无统计学意义(P>0.05).在培养板和CCM上接种6天的FB培养液上清中胶原含量分别为(11.26±0.68)×10~(-2)和(12.02±0.8)×10~(-2)(单位为每微克蛋白含胶元的微克量),差异无统计学意义(P>0.05).结论 体外实验证实热干法制备的CCM适合鼓膜KC和FB生长、增殖,FB可以保持良好的胶原分泌功能.     

严重颈部闭合性损伤致喉气管断裂的救治体会(附8例报告)

从1976年12月到1996年9月,我们救治了8例严重闭合性损伤致喉气管断裂的患者,男6例,女2例,年龄13～36岁,平均24岁。结果2例死亡,1例死于出血窒息,另1例尚未来得及手术而死亡;1例因救治不当发生喉气管狭窄而需进一步整复,其余5例恢复了喉的功能。强调在修复术中应最大限度地保留破碎的软骨膜、软骨和粘膜。本文重点讨论严重颈部闭合性损伤致喉气管断裂的发病机理、临床特点及急救原则。     

闭合性喉气管损伤诊断与治疗探讨

目的探讨进一步提高闭合性喉气管损伤诊断与治疗水平的措施。方法分析32例闭合性喉气管损伤患者的临床资料,对相关问题进行讨论。结果32例闭合性喉气管损伤病例,2例死亡,1例因救治不当发生喉气管狭窄而需进一步整复,其余29例恢复了喉的功能。结论对喉气管外伤准确分度,在修复术中最大限度地保留破碎的软骨膜、软骨和粘膜是提高近期疗效、预防后期喉狭窄的关键。     

泪管-耳-齿-指综合征表型与基因特征分析及文献复习

泪管-耳-齿-指综合征(LADD)是一种累及多系统的遗传性疾病,主要表现有泪道系统发育不全、耳解剖结构和听力异常、唾液系统发育不全、牙齿异常和手指、脚趾发育畸形.目前可确定成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)、3(FGFR3)及成纤维细胞生长因子10(FGF10)是该病的致病基因.该疾病发病率低,症状与其他疾病有重叠...     

筛选型老年听力障碍量表的研译及其信度和效度评价

目的：研译中文版筛选型老年听力障碍量表（the hearing handicap inventory for the elderly－screen-ing version,HHIE－S）,并检验其信度和效度。方法将英文版 HHIE－S 源量表经过翻译、回译、文化调试等步骤形成中文版 HHIE－S,采用直接采访法,对170例年龄≥65岁听力正常或老年性聋人群进行中文版 HHIE－S量表问卷调查,并进行纯音听阈测试,1～2周后再重复进行一次量表调查。结果研译后的中文版 HHIE－S 量表的10个条目均有较强关联性,量表分为情感和情境2个维度,其 Cronbach’s α系数分别为0．889和0．924,总 Cron-bach’s α系数为0．935;各维度分半信度分别为0．836和0．903,总分半信度为0．836;各条目与维度的重测信度值在0．749至0．921之间,总量表重测信度为0．963。内容效度：各条目与所在维度间相关系数在0．750和0．927之间,与量表总分间的相关系数在0．659和0．878之间。因子分析提取出2个公因子,即情感和情境两个维度,总方差解释率为73．874％。各条目的因子负荷均在0．684和0．871之间,所有条目在相应因子上的因子负荷均＞0．60,与源量表结构一致。量表的两个维度和总分与纯音听阈间呈正相关。结论研译的中文版 HHIE－S 符合汉语语言文化特点,易被老年人群接受;量表的结构稳定,具有较好的信度和效度,可用于老年人听力障碍的初步筛查。