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1.
目的探讨人HER2阳性乳腺癌细胞对树突状细胞表型及功能的影响。方法分离培养外周血单个核细胞来源的树突状细胞。培养的第5天,实验组HER2’MCF-7细胞的培养上清液孵育24小时,以不加上清液的树突状细胞作为对照组,流式细胞术检测树突状细胞表面标志CDS0、CD86、CD40、CD83和HLA—DR的表达水平,ELISA法检测树突状细胞细胞因子IL-12、TNF—α、IL-6和IL-10的分泌水平。用改良的MTT比色法检测上清液处理的树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力和ELISA法检测树突状细胞刺激T细胞分泌细胞因子的能力。结果树突状细胞与HER2’MCF-7细胞的上清液共培养后,树突状细胞表面分子CD80、CD83、CD86及CD40均表达升高,同时伴随着IL-12、TNF-α、IL-6的分泌增加。与对照组相比较,上清液处理的树突状细胞对激活同种异体T细胞增殖和分泌细胞因子的能力明显增强(P〈0.01)。结论HER2’MCF-7细胞能改善树突状细胞的抗原递呈功能和刺激T细胞活化增殖的能力,提示HER2’MCF-7细胞对树突状细胞是免疫刺激作用,对于HER2’的乳腺癌可采用基于树突状细胞疫苗的免疫治疗。  相似文献   

2.
[目的]探讨乳腺癌组织中浸润树突状细胞及其表面分子表达的意义。[方法]采用免疫组化方法对乳腺癌及周围组织中树突状细胞的表达及其表面分子表达情况进行分析。[结果]26例乳腺癌组织中树突状细胞主要分布于癌周,少量分布于癌灶中;26例患者中有5例肿瘤组织中有CD1a+、CD83+表达,但均不表达CD54+;癌旁组织中的CD1a+、CD83+、CD54+表达明显高于乳腺癌组织,差异具有统计学意义(P〈0.05)。免疫抑制因子IL-10、TGF—β1的mRNA表达在肿瘤组织中阳性率为76.9%,VEGFA阳性率为65.4%,而癌旁组织中IL-10、TGF—β1的阳性率为26.9%、VEGFA阳性率为11.5%,两者比较差异也具有统计学意义(P〈0.05)。[结论]乳腺癌组织中浸润性树突状细胞数量减少及表面分子低表达或不表达可能降低树突状细胞抗原提呈功能,导致机体免疫功能低下。  相似文献   

3.
目的 :探讨细菌脂多糖 (LPS)对正常成人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (Dendritic cell,DC)表面分子表达及免疫功能的影响。方法 :分离正常人 (n=5 )外周血单个核细胞 (PBMC)以 GM-CSF、IL-4联合诱生 DC,实验组在培养的第 2天加入LPS,正常对照组不加。于第 4、8天 FACS检测 DC表面分子 CD1a、CD14、CD83、CD80、HL A-DR的表达。同期检测 DC的增殖和刺激同种异体 T淋巴细胞的增殖情况。结果 :经 LPS刺激后 ,正常人 DC早期、晚期表面分子 CD1a、CD83、CD80表达增高 ,CD14表达降低 (P<0 .0 5 )。DC数量的增加及刺激同种异体 T细胞能力明显增强。结论 :GM-SF、IL-4和 L PS联合刺激能促进正常人 DC的成熟和免疫功能的提高  相似文献   

4.
人外周血树突状细胞的体外培养及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的在体外从人外周血中培养、鉴定树突状细胞。方法取正常健康人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离,获得单个核细胞,取贴壁细胞加入重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4,体外培养第7天,加入肿瘤坏死因子-α促进其分化成熟。用倒置显微镜观察其形态,用流式细胞仪进行表型测定。结果从正常人外周血分离获得的单个核细胞经rhGM-CSF,rhIL-4和TNF-α联合培养,获得大量树突状细胞。具有典型的树突状细胞形态和免疫表型,高表达HLA-DR,CD83,CD80,CD86、HLA-DR CD83 及CD80 CD86 。结论用rhGM-CSF,rhIL-4和TNF-α联合培养可以从人外周血诱导培养出大量的树突状细胞且高表达HLA-DR,CD80,CD83,CD86、HLA-DR CD83 及CD80 CD86 。  相似文献   

5.
慢性乙型肝炎病人外周血树突状细胞功能的研究   总被引:32,自引:3,他引:29  
Li R  Chen H  Fei R  Cong X  Sun J  Wei L  Wang Y 《中华医学杂志》2002,82(13):887-890
目的:体外培养慢性乙型肝炎病人的树突状细胞,并从细胞表型和功能方面与正常人树突状细胞进行比较。方法:从慢性乙型肝炎病人及正常人外周血分离单个核细胞,加入含1000U/ml GM-CSF和500U/ml IL-4的无血清培养基AIM-V体外培养,获得树突状细胞。利用流式细胞仪检测细胞因子TNF-α对树突状细胞培养的影响,IL-12ELISA试剂盒检测树突状细胞分泌IL-12的水平,并采用MLR方法检测树突状细胞刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。结果:1.慢性乙型肝炎病人的外周血单个核细胞用AIM-V培养及细胞因子诱导后,可获得成熟的具有典型形态的树突状细胞,加入TNF-α后,IL-12分泌增高,CD83表达增加;2.病人树突状细胞与正常人比较,CD80表达较正常人的低(P<0.05),刺激同种异体T细胞增殖能力低于正常人。结论:1.慢性乙型肝炎病人的树突状细胞与正常人一样可用AIM-V无血清培养基及特定的细胞因子诱导在体外大量获得;2.慢性乙型肝炎病人的树突状细胞与正常人相比较在功能上降低,在形态数量上差异无显著意义。  相似文献   

6.
目的 为肿瘤治疗提供参考 ,研究恶性肿瘤病人的细胞免疫功能状况。方法 应用SAP法检测T细胞亚群百分率 ,SP法检测NK细胞数 ,植物血凝素 (PHA)体外形态学法检测淋转功能 ,对 165例几种类型的肿瘤病人进行检测。结果 恶性肿瘤病人存在免疫受抑 ,CD3 + 、CD4+ 百分率低下 ,CD8+ 百分率升高 ,CD4+ /CD8+ 比值降低。以上指标与正常比较差异均显著 (P <0 0 5 ) ,NK细胞CD16+ 、CD57+ 与正常比较差异不显著 ,淋巴增殖功能与CD4+ /CD8+ 比值呈正相关 (rs=0 .83 4,P <0 0 5 )。结论 恶性肿瘤患者免疫功能低下、紊乱 ,随着疾病发展至晚期免疫功能抑制明显 ,CD4+ /CD8+ 比值与淋转功能呈一致性降低。  相似文献   

7.
聂志林  靳风烁  王洛夫  梁培禾 《重庆医学》2007,36(14):1365-1367
目的 探讨树突状细胞(DC)在膀胱癌中的浸润及其在膀胱癌免疫逃逸中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法及流式细胞仪检测36例膀胱移行细胞癌(TCCB)和10例正常膀胱黏膜组织中S-100加浸润性树突状细胞(TIDC)的数目及TIDC表面CD83及共刺激分子CD80、CD86的表达情况.结果 TCCB组织中S-100加TIDC的数目与正常膀胱组织比较无明显减少,与膀胱癌的病理分级、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移、复发等临床病理参数无关.而TCCB组织中TIDC表面分子CD83及共刺激分子CD80、CD86的表达水平较正常膀胱组织降低(P<0.05),且随着肿瘤的病理分级、临床分期的升高而下降,瘤体≥3cm、有淋巴结转移及复发者TIDC表面分子CD83及共刺激分子CD80、CD86的表达低于瘤体<3cm、无淋巴结转移及初发者.结论 TIDC的成熟受抑、共刺激分子表达下调在膀胱移行细胞癌的发生发展过程中起重要作用,可能是TCCB发生免疫逃逸的机制之一.  相似文献   

8.
过敏性哮喘患者树突状细胞对原始T细胞活化的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨过敏性哮喘病人和正常人外周血单个核细胞 (PBMC)来源树突状细胞(DC)表达表面分子 (CD1a、CD83、CD4 0、CD86 )和细胞因子 (IL -1 2 )的差异及其对Th1和Th2型细胞因子平衡的影响。方法 分别取哮喘患者和正常人外周血经Ficoll和不连续密度梯度离心法获取贴壁细胞 ,加入细胞因子 (GM CSF和IL 4)体外培养为不成熟DC(iDC) ,给予LPS刺激使其发育为成熟DC(mDC)。另取脐血同上方法获得非贴壁细胞 ,分别加CD4单抗和CD4 5RA单抗及磁珠分离得到原始T淋巴细胞 ,分别将两组mDC和原始T细胞共培养。使用流式细胞仪 (FACS)检测树突状细胞表面共刺激分子CD1a、CD83、CD4 0、CD86的表达 ,通过ELISA法检测mDC分泌的IL -1 2及T细胞分泌的IFN -γ和IL- 4的含量。结果  (1 )哮喘组PBMC来源DC表达CD86分子比对照组显著升高(P <0 . 0 1 )。 (2 )哮喘组DC产生IL- 1 2及其亚单位p4 0均较正常对照组显著减少 (P值均 <0 . 0 1 ) ;(3)混合淋巴细胞反应中 ,哮喘组T细胞释放Th1型细胞因子IFN -γ较对照组减少 (P <0 . 0 5 ) ,Th2型细胞因子IL -4较对照组显著增多 (P <0 . 0 1 ) ;(4)哮喘组CD86表达水平与IL 4浓度呈正相关(r=0 5 4 87,P <0 . 0 5 ) ;(5 )哮喘组IL- 1 2水平与IFN -γ水平呈正相关 (r =0 . 75 81 ,P <0 . 0  相似文献   

9.
目的 探讨膀胱肿瘤患者外周血源性树突状细胞(dendritic cells,DCs)的表型及免疫功能变化.方法 通过密度梯度离心法从膀胱肿瘤患者和正常人外周血分离单个核细胞,加rhGM-CSF和rhlL-4诱导培养树突状细胞,采用流式细胞仪检测2组DCs表达程序性死亡配体-1(PD-L1)、CDla、HLA和CD83的变化,混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞增殖能力和ELISA法检测分泌IL-10和IL-12的变化.结果 膀胱肿瘤患者外周血DCs表达PD-L1[(95.06±4.06)% vs (76.63±6.90)%]和分泌IL-10[(214.00±13.75) pg/mL vs(83.78±7.95) pg/mL]的水平显著高于正常组(P<0.05),DCs表达CD83[(16.20±1.91)% vs (35.53±1.58)%]及刺激淋巴细胞增殖的能力均低于正常组水平(P<0.05).结论 膀胱肿瘤患者外周血源性树突状细胞高表达PD-L1、低表达CD83及过多分泌IL-10可能是膀胱肿瘤发生免疫逃逸的原因之一.  相似文献   

10.
目的探讨舒芬太尼对人脐血树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法无菌条件下采集脐带血70 ml,经密度梯度离心法获得脐血单个核细胞,然后分3组进行培养。阴性对照组(N组):只加rhGM-CSF 50 ng/ml和rhIL-4 10 ng/ml培养10 d;阳性对照组(P组):在加入rhGM-CSF、rhIL-4培养的同时加入rhTNF-α50 ng/ml培养10 d诱导成熟树突状细胞;药物组(S组):加入rhGM-CSF、rhIL-4的同时加入舒芬太尼其浓度分别为(0.2、0.5、1.0)ng/ml(S_(0.2)、S_(0.5)、S_(1.0)培养10 d。培养过程中在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化;以流式细胞仪分析各组细胞免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA-DR分子的表达;ELISA法测定其分泌IL-12的水平;MTT法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。结果与N组比较,S组和P组细胞具有典型的树突状细胞形态学特征,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子的表达增加(P<0.05),促进同种异体混合淋巴细胞增殖的能力较强(P<0.05),IL-12表达增加(P<0.05);与P组比较,S组细胞随舒芬太尼药物浓度增加树突状伪足逐渐不明显,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子表达以及促进混合淋巴细胞增殖能力呈不典型的剂量依赖性下降趋势(P<0.05),IL-12表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐血来源的单个核细胞可在舒芬太尼的刺激下诱导为成熟的树突状细胞,但舒芬太尼对树突状细胞成熟和免疫功能的影响具有剂量依赖性下降趋势。  相似文献   

11.
目的探讨子宫颈癌患者的树突状细胞(dendritic cells,DCs)在体内外能否诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫应答。方法应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)从子宫颈癌患者外周血诱导DCs,Hela子宫颈癌抗原致敏,MTT法检测DCs激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对肿瘤细胞的细胞毒作用。皮下接种Hela子宫颈癌建立荷瘤鼠,给予抗原致敏的DCs回输;或先给予DCs免疫,后用癌细胞攻击,观察其抑制肿瘤的效果。结果从子宫颈癌患者外周血诱导的DCs高表达CD86、CD12、HLA-DR、CD54和CD83,激活的CTLs在体外特异性杀伤子宫颈癌细胞。DCs回输小鼠具有免疫保护作用,减低成瘤率;又能引起免疫治疗作用,有效抑制肿瘤的生长。结论用GM-CSF及IL-4从子宫颈癌患者诱导的DCs能有效提呈Hela子宫颈癌抗原给T淋巴细胞,并且在体内外诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫,有望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径。  相似文献   

12.
Objective To induce and culture the dendritic cells in the peripheral blood of breast cancer patients and research on their phenotype.Methods Mononuclear cells were isolated by Ficoll Hypaque centrifugation from32breast cancer patients‘peripheral blood.These cells were plated in six-well culture plates(10^6/ml,2ml/well)in RPMI1640medium supplemented with10%heat-in-activated fetal bovine serum,100ng/mlGM-CSF,20ng/mlIL-4,and/or20n g/mlTNF-α.Twohours later,nonadherent cells were gently removed and fresh medium was added.Cultured cells were ana-lyzed by flow cytometry with flujorescence labeled monoclonal antibodies.Pictures of cultured and fluores-cence stained cells were taken by confocal scanning microscope.Results The diameter of the cells was between 10and 20micron.Cells displayed a characteristicCD1a^ ,CD40^ ,CD80^ ,CD86^ and CD83^ phenotypes.All of these molecules were not specific for dendritic cells.CD1a and CD83 molecules could also be expressed on the surface of CD3^ T lymphocytes and CD19^ B lymphocytes,es-pecially on activated lymphocytes.Conclusion The molecules of CD1a and CD83 are not specific phenotypes for dendritic cells.Currently,we still need to apply both cell morphology and costimulatory molecules such as CD40,CD80,and CD86to the identification of dendritic cells.  相似文献   

13.
目的:观察Runt相关转录因子3(RunX3)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及树突状细胞表面标志物CD83,在溃疡性结肠炎患者及正常对照组肠黏膜组织中的表达,探讨抑癌基因RunX3调节TGF-β1对树突状细胞在溃疡性结肠炎中的作用。方法:选取经过临床表现、内镜、病理等方法综合诊断为溃疡性结肠炎患者40例(UC组)及正常志愿者40例(对照组)结肠镜下乙状结肠肠黏膜活检标本,用Realtime PCR方法检测RunX3mRNA、TGF-β1mRNA和成熟树突状细胞常用的表面标志物CD83mRNA。结果:(1)与对照组肠道黏膜组织相比,UC组RunX3mRNA、TGF-β1mRNA的表达下调并有统计学差异(P〈0.05),而CD83mRNA的表达上调且有统计学差异(P〈0.05);(2)UC组肠黏膜组织中RunX3mRNA与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关(r=0.629,P〈0.05),RunX3mRNA与CD83mRNA的表达呈负相关(r=-0.456,P〈0.05),TGF-β1mRNA与CD83 mRNA的表达呈负相关(r=-0.364,P〈0.05)。结论:RunX3mRNA、TGF-β1mRNA及树突状细胞与溃疡性结肠炎密切相关,RunX3基因可能通过调节TGF-β1介导树突状细胞影响溃疡性结肠炎的发生和发展。  相似文献   

14.
Zhang W  He L  Cao X 《中华医学杂志》1999,79(3):170-173
目的 通过选择性增强树突状细胞(DC)与T细胞的体内相互作用。优化其体内抗原提呈的微环境,为进一步增强DC介导的肿瘤免疫治疗效果。方法 体外培养的小鼠骨髓树突太细胞体外经Ltn重组腺病毒感染后(Ltn-DC),用3LLLeiws肺癌细胞株的Mutl抗原肽冲击致敏,按不同剂量免疫正常同系小鼠体内,观察其体内诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性保护性免疫反应。通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分  相似文献   

15.
目的探讨树突状细胞(DC)体外培养的方法。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素4、重组人肿瘤坏死因子α等细胞因子自外周血单个核细胞诱导分离DC,流式细胞仪检测其表面标志,四氮唑蓝法测定其刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。结果体外培养第10天,大量细胞出现典型的树突状形态;流式细胞仪检测高表达CD80、CD86、CD83、CD40、CD1a、人白细胞DR抗原;在体外能强烈刺激同种异体混合淋巴细胞增殖反应。结论该方法可获得较高纯度典型的DC,为DC的临床免疫治疗提供实验依据。  相似文献   

16.
Objective To establish a serum- free culture system of dendritic cells (DCs) from chronic myeloid leukemia (CML) cells so that DCs vaccine may be applied to the adoptive immunotherapy of CML in the near future.Methods Fetal calf serum, serum- free medium and autologous serum were used for culture of DCs. The usage of cytokines was classified into two groups: group A (stem cell factor, granulocyte/macrophage colony- stimulating- factor, tumor necrosis factor- α and interleukin- 4) and group B (granulocyte/macrophage colony- stimulating- factor, tumor necrosis factor- α and interleukin- 4). The phenotypes of DCs were analyzed by using indirect immunofluorescence and flow cytometry. Mixed leukocyte responses were performed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. Chromosome analysis of DCs can be achieved by displaying G banding. T cells from CML patients were stimulated with autologous DCs and T- cell cytotoxicity was measured by (MTT) assay. Results CD34(+) cells or mononuclear cells were obtained from peripheral blood or bone marrow samples of eight patients of chronic- phase CML. Group A of serum- free medium was better than group B in expansion of total cell numbers and the rate of DCs. These results of serum- free medium were not significantly different from those of fetal calf serum medium, but the results of autologous serum medium were inferior to two groups above. The expression of major histocompatibility complex class Ⅱ antigen on the surface of DCs was notable (>50%), but the expression of CD83 and the costimulatory molecules CD86 was not noticeable (10%-50%). Although CD1a+/CD14- DCs were potent stimulators of allogeneic lymphocytes, expansion of T cells from normal volunteers were not significant (average 27. 2 fold at DCs∶T cells ratio of 1∶10). At day 12, CD1a+ cells from three patients were studied by displaying G banding and Ph+ cells in these populations were 100%, 98% and 60%, respectively. At an effector∶target ratio of 40∶1, 32% to 45% cytotoxicity was noted with DC- stimulated T cells against autologous leukemia cells. Conclusions A stable serum- free culture system of CML- DCs was established. The expression of CD83 and CD86 on the surface of CML- DCs and DCs’ potent stimulation of allogeneic lymphocytes were not notable. DCs in CML patients can be derived from the malignant clone and these malignant DCs could induce anti- leukemic reactivity in autologous T lymphocytes without the necessity for additional exogenous antigens.  相似文献   

17.
齐莹莹  杜英  李倩如  陈惠萍  徐虹  周云  董子明 《重庆医学》2012,41(4):355-356,359,361,417
目的探讨人脐静脉内皮细胞对人脐血单个核细胞(UBMCs)向树突状细胞(DC)分化的影响,建立更便捷、更经济体外培养DC的方法。方法胶原酶消化分离出脐静脉内皮细胞(HUVEC),经鉴定和体外培养扩增后,使其平铺生长于Tran-swell板上室底部,将UBMCs接种到Transwell小室内,同时加入EC9706细胞冻融形成的蛋白质抗原,与HUVEC共培养,使UBMCs与HUVEC紧密接触并从Transwell板上室迁移到下室,收集Transwell板下室细胞,流式细胞术检测下室细胞DC相关表面标志CD80、CD40、CD83、CD1a和MHC分子;通过MTT法检测肿瘤负载的UBDC诱导CTL对靶细胞的特异性杀伤作用。结果经HUVEC诱导并负载了肿瘤细胞抗原的DC CD80、CD40、CD83、CD1a和MHC-Ⅱ类分子表达增加,产生的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性杀伤食管癌细胞EC9706;与细胞因子诱导DC活化的CTL对EC9706的杀伤率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用Transwell小室以人原代脐静脉内皮细胞诱导脐血单个核细胞分化的DC是可行的一种实验方法。  相似文献   

18.
目的比较两种树突状细胞(骨髓瘤致敏DC和未致敏DC)诱导的细胞毒T淋巴细胞抗自身骨髓瘤的细胞免疫:方法用多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓CD34^ 细胞诱生DC,将MM患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC。MTT法检测骨髓瘤抗原致敏和未致敏DC诱导的自身T细胞对患者骨髓瘤细胞的杀伤率。结果骨髓瘤冻融物致敏DC诱导的自身T细胞对患者骨髓瘤细胞的杀伤率远大于非致敏DC。结论患者骨髓瘤冻融物致敏的DC能有效诱导自身T细胞抗骨髓瘤免疫。  相似文献   

19.
人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞免疫功能及凋亡的影响   总被引:1,自引:2,他引:1  
目的:探讨人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞(DC)免疫表型、细胞因子分泌及凋亡的影响。方法:采用外周血单个核细胞培养DC,以PBS溶液为对照,应用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,其凋亡的发生率、免疫表型的表达,应用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)检测DC白细胞介素-12(IL-12)的分泌情况。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,可诱导DC发生凋亡,DC的CD80、CD83及人类白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)等表型明显下调,IL-12分泌明显下降,与对照组相比差异显著(P<0.05),且IL-12分泌随SKOV3作用时间的延长,其抑制作用更加明显。结论:人卵巢癌细胞系SKOV3可明显抑制DC的免疫功能,并诱导其凋亡。  相似文献   

20.
CD+4CD+25调节性T细胞在肿瘤免疫治疗中的价值及应用前景   总被引:1,自引:0,他引:1  
恶性肿瘤的临床治疗主要是手术治疗、化学治疗和放射治疗.近年来,随着分子生物技术的不断发展,肿瘤的生物治疗在临床应用中的地位日渐突出.但是免疫细胞过继治疗作用的一过性和功能抑制成为影响其临床应用的瓶颈,其中CD4^+CD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+ regulatory T cell ,Treg)在抑制肿瘤免疫方面起着重要作用.本文就其近年来的肿瘤临床研究进展做一综述.  相似文献   

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