白藜芦醇苷对人类乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的:研究白藜芦醇苷(polydatin)在体外对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用,进一步探索其潜在的机制。方法:设定空白组及白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2,2.0,2.8 mg·L~(-1))组,5-氟尿嘧啶组,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同质量浓度白藜芦醇苷对MCF-7细胞的生长抑制率;应用细胞克隆集落形成实验验证白藜芦醇苷对MCF-7细胞增殖的抑制作用;通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测5-氟尿嘧啶(1.0μg·L~(-1))和白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L~(-1))对DNA聚合酶δ催化亚基P125(P125),P125编码基因(POLD1),p53基因(p53),细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21 mRNA表达水平的影响;应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L~(-1))对P125,p53,p21蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2,2.0,2.8 mg·L~(-1))在体外对MCF-7细胞具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01),并且这种抑制作用呈浓度依赖性。与空白组比较,白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L~(-1))均能明显抑制细胞集落的形成(P0.05,P0.01)。与空白组比较,5-氟尿嘧啶组和白藜芦醇苷(0.4,1.2 mg·L~(-1))能够显著抑制POLD1 mRNA表达水平,同时显著抑制P125 mRNA和蛋白表达水平,明显升高p53,p21 mRNA和蛋白表达水平(P0.05,P0.01)。与5-氟尿嘧啶组比较,白藜芦醇苷(1.2 mg·L~(-1))对POLD1,P125,p53,p21 mRNA和蛋白表达水平影响均无显著差异。结论:白藜芦醇苷在体外能够显著抑制MCF-7细胞的增殖,其潜在机制可能与提高p53表达水平,抑制POLD1表达,促进p21表达有关。     

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制

目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100μmol·L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

氯化两面针碱对MCF-7细胞增殖的抑制及对P125表达的影响

目的:研究氯化两面针碱(NC)对体外培养的乳腺癌细胞(MCF-7)中DNA聚合酶δ催化亚基P125(P125)表达的影响,探讨氯化两面针碱对乳腺癌细胞增殖抑制作用的机制。方法:设定NC(0.075,0.15,0.30,0.60,1.20,2.40,4.80 mg·L~(-1))组及空白组,应用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同质量浓度NC对MCF-7细胞的生长抑制率;通过细胞克隆集落形成实验进一步验证NC对MCF-7细胞的生长抑制作用;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测低、中、高质量浓度NC(0.5,1.0,2.0mg·L~(-1))对P125编码基因DNA聚合酶δ催化亚基基因(POLD1),p53基因(p53),细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21(p21)mRNA表达水平的影响;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测3种质量浓度NC对P125蛋白表达的影响,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定p53,p21蛋白表达变化。结果:NC对MCF-7细胞有明显的抑制作用,呈浓度依赖性,不同质量浓度NC(0.075,0.15,0.30,0.60,1.20,2.40,4.80 mg·L~(-1))对细胞的抑制率分别是0.16%,6.29%,19.56%,32.17%,44.46%,73.46%,83.21%。与空白组比较,NC对细胞克隆集落形成有显著抑制作用(P0.01),不同质量浓度NC组对POLD1 mRNA表达有明显的抑制作用,同时明显降低P125蛋白表达(P0.05);对p53 mRNA和蛋白的表达有明显的促进作用(P0.01);高剂量NC组对p21 mRNA和蛋白的表达有显著增强作用(P0.01)。结论:NC能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其作用机制之一可能与上调p53表达水平,抑制P125表达有关。     

辣椒碱通过下调SIRT1表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响,并初步探讨其分子生物学机制。方法：设立辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）组以及空白组,采用穿透小室（Transwell）迁移和侵袭实验分别检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）和DNA聚合酶δ催化亚基p125的编码基因POLD1（POLD1） mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125（p125）的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后,穿膜细胞数明显减少,迁移率和侵袭率显著降低,且呈浓度依赖效应（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著下调乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1,POLD1 mRNA表达水平（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著降低乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125的蛋白表达水平（P<0.01）。结论：辣椒碱能显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与下调细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平以及POLD1 mRNA和p125的蛋白表达水平有关。     

益母草碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大p38 MAPK信号通路和miRNA-1表达的影响

目的:研究益母草碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的作用,并分析其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路和微小RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)表达的影响。方法:以AngⅡ(0. 1μmol·L~(-1))诱导肥大心肌细胞。实验分为空白组,模型组,p38 MAPK抑制剂组(SB203580,10μmol·L~(-1))以及益母草碱低、中、高浓度组(5,10,20μmol·L~(-1))。以图像分析软件测量心肌细胞表面积; Folin-酚试剂法(Lowry)检测心肌细胞蛋白含量;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞miRNA-1 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞内皮素-1(endothelin-1,ET-1),p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK),肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor 2,MEF2),β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量明显升高(P 0. 05),ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平明显上调(P 0. 05),α-MHC蛋白及miRNA-1 mRNA的表达水平明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,益母草碱高浓度组明显减少肥大心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量(P 0. 05);下调ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平(P 0. 05);上调α-MHC蛋白及miRNA-1的表达水平(P 0. 05)。结论:益母草碱高浓度组(20μmol·L~(-1))可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化和上调miRNA-1的表达有关。     

p53途径在氯化两面针碱抑制SMMC-7721细胞增殖中的作用

目的 研究氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)处理后p53通路的分子水平变化,以说明p53途径在NC抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖中的作用。方法 应用MTT比色法测定NC对SMMC-7721细胞存活率的影响,细胞克隆集落形成实验测定NC对细胞增殖的抑制作用;实时荧光定量PCR检测不同剂量NC对p53、p21mRNA表达的影响;酶联免疫吸附法测定p53、p21蛋白含量的变化。结果 NC (0.15,0.30,0.60,1.20,2.40,4.80 mg·L-1)浓度依赖性地降低SMMC-7721的存活率,作用48 h时IC50值为(1.03±0.18)mg·L-1;NC可明显抑制细胞集落形成,剂量为0.15,0.30 ng·L-1时,抑制率分别是74.65％、88.48％,剂量为0.60 mg·L-1时,抑制率达到了100％; NC可明显提高癌细胞中p53、p21 mRNA和蛋白的表达,并呈浓度依赖性。结论 p53通路可能在NC诱导的SMMC-7721细胞增殖抑制中起重要作用。     

12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF表达的影响及其相关机制

目的:观察狼毒大戟根部提取物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯(12-deoxyphorbol 13-palmitate,DP)对MCF-7细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,及其是否通过Von Hippel-Lindau蛋白(VHL)/低氧诱导因子(HIF-1α)信号通路进行调节。方法:实验分为常氧空白组、常氧实验组(10,20,40μmol·L-1DP)、乏氧空白组和乏氧实验组(10,20,40μmol·L-1DP),其中乏氧空白组和乏氧实验组用150μmol·L-1Co Cl2预处理细胞。当细胞密度达70%~80%时进行药物处理;MTT法检测DP对MCF-7细胞在6,12,24 h细胞存活率的影响;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测DP对MCF-7细胞分泌VEGF的影响;实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)检测DP对VEGF mRNA表达的影响;Western blot检测DP对MCF-7细胞中VEGF,HIF-1α和VHL蛋白表达;细胞免疫荧光法(IF)检测DP对HIF-1α表达及其在细胞中分布的影响。结果:MTT法结果显示,乏氧状态下细胞存活率在12,24 h且DP浓度为20,40μmol·L-1时与对照组相比有显著性差异(P0.05);乏氧条件下,VEGF和HIF-1α的表达较常氧条件下升高,与乏氧组相比,DP能降低VEGF(P0.05)和HIF-1α(P0.05)的表达;乏氧条件下VHL表达较常氧条件下降低,当药物处理后,相较于乏氧组,VHL浓度明显上升(P0.05)。结论:DP可能通过调节VHL/HIF-1α信号通路从而下调MCF-7细胞VEGF表达。     

香叶木素通过线粒体凋亡途径对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨香叶木素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将MCF-7细胞分为对照组(0μmol·L^-1)和香叶木素5、10、20、30、40、50、60、70μmol·L^-1浓度组。采用CCK-8法及2,4二硝基苯肼法检测MCF-7细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)泄露量;采用罗丹明123(Rh123)荧光染色法、流式细胞术及荧光显微镜检测MCF-7细胞线粒体膜电位(MMP);DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)含量;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western Blot法检测p53、Bax、Caspase 3及Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组比较,香叶木素在5~70μmol·L^-1范围内能够浓度依赖性地抑制MCF-7的细胞活力及促进LDH的泄露(P<0.01,P<0.001),选取浓度10、30、50μmol·L^-1进行后续实验;香叶木素10、30、50μmol·L^-1浓度组能显著降低MCF-7细胞线粒体膜电位(P<0.05,P<0.01,P<0.001),促进细胞内ROS的积累(P<0.01,P<0.001),提高细胞凋亡率(P<0.001),显著上调p53(30、50μmol·L^-1)、Bax及Caspase 3蛋白的表达(P<0.001),下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。结论香叶木素可能通过ROS及p53介导的线粒体凋亡途径抑制MCF-7细胞的增殖及促进其凋亡。     

RG-14260增强子宫内膜癌细胞化疗敏感性研究

目的:研究酪氨酸磷酸化抑制剂RG-14260(RG)单独或联合阿霉素、顺铂及紫杉醇对子宫内膜癌ishikawa细胞增殖的影响,为临床应用RG治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法:应用10μmol.L-1RG与各1/2的IC50量的阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)及紫杉醇(PTX)联合,MTT法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR法检测RG、阿霉素、顺铂及紫杉醇对细胞表皮生长因子受体EGFRmRNA表达影响;Western blot法检测10μmol.L-1RG作用6,12,24 h后细胞p21蛋白表达水平。结果:RG可显著降低细胞EGFR基因mRNA水平,上调p21蛋白表达。结论:RG通过抑制EGFR信号通路,上调p21蛋白表达,增强化疗药物对子宫内膜癌细胞的杀伤作用。     

人参皂苷Rg5通过miR-125b/STARD13/NEU1信号通路对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移的影响

目的:研究人参皂苷Rg5对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移的影响,并通过微小RNA-125b(microRNA-125b,miR-125b)/类固醇敏感性调节蛋白相关脂类转运体结构域13(St AR-related lipid transfer domain protein 13,STARD13)/唾液酸酶1(neuraminidase 1,NEU1)信号通路探讨人参皂苷Rg5抑制胃癌侵袭迁移的作用机制。方法:人参皂苷Rg5(12.5,25,50μmol·L-1)处理BGC-823细胞后,采用transwell小室实验检测人参皂苷Rg5对BGC-823细胞侵袭、迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-125b,STARD13,NEU1 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测STARD13,NEU1蛋白的表达。结果:人参皂苷Rg5(25,50μmol·L-1)可有效抑制BGC-823细胞的侵袭、迁移。miR-125b,STARD13,NEU1 mRNA的表达,与空白组比较,人参皂苷Rg512.5μmol·L-1组的miR-125b相对表达水平降低,STARD13,NEU1 mRNA相对表达水平升高,但无统计学差异;人参皂苷Rg5(25,50μmol·L-1)组miR-125b相对表达水平降低,STARD13,NEU1 mRNA相对表达水平增高(P0.01)。STARD13,NEU1蛋白的表达,与空白组比较,人参皂苷Rg5(12.5,25μmol·L-1)组的STARD13蛋白相对表达水平升高,人参皂苷Rg5(12.5μmol·L-1)组的NEU1蛋白相对表达水平升高,但差异无统计学意义;人参皂苷Rg5(50μmol·L-1)组的STARD13蛋白相对表达水平升高(P0.05),人参皂苷Rg5(25,50μmol·L-1)组NEU1蛋白相对表达水平升高(P0.01)。结论:人参皂苷Rg5可能通过降低miR-125b的表达,上调miR-125b靶基因STARD13,NEU1的表达,抑制胃癌BGC-823细胞的侵袭、迁移。     

蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达

目的：研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制。方法：以早幼粒白血病HL－60细胞为靶细胞，应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化，免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21^WAF1的表达。结果：0．001μmol/L bufalin作用HL－60细胞，细胞向粒细胞方向分化，p21^WAF1表达显著升高，而PCNA表达显著下降，二者显著负相关（P＜0．01）。结论：bufalin诱导HL－60细胞分化，与其上调p21^WAF1的表达、下调PCNA表达有关。     

结直肠癌组织CDX2、p21~(WAF1)蛋白表达与中医虚证相关性的研究

目的 研究结直肠癌组织CDX2及p21~(WAF1)蛋白表达,探讨其在结直肠癌发生发展中的病理意义.在此基础上研究CDX2及p21~(WAF1)蛋白表达与中医虚证的相关性.方法 以酒泉市人民医院的结直癌手术切除标本45例为研究对象,收集病理资料进行辨证分型.采用免疫组化EliVision法检测癌组织、癌旁组织中CDX2、及p21~(WAF1)的表达.结果 CDX2、p21~(WAF1)在结直肠癌组织中的阳性率分别为86.7%、35.6%.结直肠癌组织中CDX2与p21~(WAF1)表达无相关性.p21~(WAF1)蛋白表达在虚证组(11.76%)明显低于实证组(41.67%)和虚实夹杂证组(56.25%),其差异有统计学意义(x~2=7.385,P=0.025).CDX2蛋白表达在虚证、实证、虚实夹杂组间差别无统计学意义.结论 CDX2及p21~(WAF1)阳性率在痛及切缘组织中有显著性差异,二是因可能与结肠痛发生发展相关.CDX2与p21~(WAF1)之间无相关性.p21~(WAF1)表达降低提示结直肠癌患者预后不良.p21~(WAF1)表达在虚证组中明显低于实证、虚实夹杂证组.     

狼疮平颗粒剂对狼疮肾炎p21~(cip1)表达及PCNA干预的实验研究

[目的]观察中药狼疮平颗粒剂对LN小鼠肾组织细胞周期抑制蛋白p21~(cip1)、PCNA表达的影响。[方法]由LPS诱导BALB/C小鼠多克隆B细胞活化制成LN模型,随机分为正常组、模型对照组、狼疮平颗粒剂组、强的松组、中药加西药组,观察用药4周后各组血Scr、BUN、尿蛋白、抗ds-DNA抗体、IgG、补体C3指标,及肾组织中p21~(cip1)蛋白、PCNA表达情况。[结果]与对照组相比,中药组能明显减轻尿蛋白,降低抗ds-DNA抗体、IgG、Scr、BUN水平,升高补体C3值(P<0.05);中药组肾组织中p21~(cip1)表达明显增加(P<0.05),PCNA表达明显下调(P<0.05)。[结论]狼疮平颗粒剂可促进LN肾组织p21~(cip1)蛋白表达,抑制PCNA过度增殖,减轻肾脏免疫损伤,改善肾功能,是治疗LN有效方剂。     

善胃Ⅰ号方对血瘀热毒型胃粘膜异型增生p21蛋白的影响

[目的]观察中药善胃Ⅰ号方对慢性萎缩性胃炎(CAG)胃粘膜异型增生的治疗效果,并观察ras癌基因蛋白p21在治疗前后的表达情况.[方法]将内镜和病理确诊为CAG胃粘膜异型增生的患者且符合中医血瘀热毒证型82例,随机分为治疗组和对照组.治疗组34例,予善胃Ⅰ号方;对照组48例,予市售猴头菌片,两组均用药12周.[结果]1)治疗组患者治疗前后症状缓解总有效率为81%;对照组患者治疗前后症状缓解总有效率为44.74%,P＜0.005;2)病理改变:中药治疗后多数患者病理改善,粘膜萎缩消失8例,转为轻度12例,重度转为中度7例,无变化6例,加重1例;而对照组消失2例,转为轻度4例,转为中度5例,无变化33例,加重4例,中药组明显优于对照组,P＜0.005;3)中药治疗组治疗前后p21蛋白表达阳性指数下降较对照组更为明显,两者有显着性差异(P＜0.05).[结论]中药善胃Ⅰ号方对萎缩性胃炎有良好的治疗作用,并在一定程度上可使胃粘膜异型增生逆转.     

他莫昔芬对人肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究他莫昔芬对人肝癌细胞Hep3B增殖、凋亡以及雌激素受体(ER)表达的影响。方法:按他莫昔芬浓度分别为7.5、15、30mol/L分为3组,对照组为空白培养基,每组设10个平行孔,每孔加入细胞浓度为1×105个/mL的细胞悬液0.1mL,分别培养24、48及72h。采用MTT法测定OD值,计算细胞增殖抑制率;用RT-PCR方法在mRNA水平检测p21WAF1以及流式细胞术来观察细胞凋亡情况;用免疫组化方法观察他莫昔芬对Hep3B细胞雌激素受体表达的影响。结果:他莫昔芬抑制人肝癌细胞Hep3B增殖(P<0.05),并随其浓度及处理时间的增加而抑制率增加;他莫昔芬提高细胞凋亡率;他莫昔芬抑制雌激素受体的表达(P<0.05),促进p21WAF的表达。结论:他莫昔芬通过影响肝癌细胞ER和p21WAF的表达抑制肝癌细胞增殖。     

人参皂苷Rh2对食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2(ginenoside-Rh2,GS-Rh2)对人食管癌细胞Eca-109生长抑制及细胞周期的影响.方法:应用MTT法测定GS-Rh2对细胞的生长抑制作用,HE染色后光镜观察细胞形态变化,应用免疫细胞化学和Western blot检测细胞周期调控因子cyclinE,CDK2(cyclin-dependent kinase 2),p21WAF1基因蛋白表达,采用半定量RT-PCR检测基因mRNA表达.结果:GS-Rh2对Eca-109细胞生长有抑制作用,并呈剂量、时间依赖性.20μg·mL-1GS-Rh2作用1 d后细胞达到半数抑制,作用3 d的Eca-109细胞较对照细胞数目明显减少,细胞形态向正常细胞方向逆转.细胞周期分析显示,随着GS-Rh2药物剂量的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,S和G2/M期细胞数逐渐减少,10μg·mL-1和20μg·mL-1 GS-Rh2处理组和对照组比较有显著性差异.20μg·mL-1SS-Rh2处理细胞后,随着作用时间延长,cyclinE和CDK2蛋白及其mRNA表达水平逐渐增高,而p21WAF1蛋白及其mRNA表达水平逐渐降低.结论:GS-Rh2可以将人食管癌细胞Eca-109阻滞于G0/G1期,诱导肿瘤细胞分化,并且通过影响细胞周期调控因子cy-clinE,CDK2,p21WAF1基因的表达抑制食管癌细胞的增殖.     

导痰汤对颈动脉硬化家兔内皮细胞黏附分子-1及p21表达的影响

目的:研究导痰汤是否能通过对内皮细胞黏附分子-1(intercellular adhesion molecular-1,ICAM-1)和p21通路的调节而干预颈动脉粥样硬化.方法:将25只雄性新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组、导痰汤治疗组(分为高、中、低剂量组).对照组给予基础饲料喂饲,模型组和导痰汤治疗组予以高脂饲料喂饲,并在喂饲1周后实施颈动脉内膜空气干燥术,术后导痰汤治疗组分别按照10,8,6 g·kg-1,ig每日给药1次.4周后处死家兔,取每只家兔右侧颈动脉远端1 cm,固定后行HE染色,观察病理改变.应用免疫组化SABC法检测ICAM-1和p21表达情况.结果:模型组血管内皮细胞、平滑肌细胞的胞浆中有ICAM-1 (0.200 ±0.035)和p21(0.297±0.097)强阳性表达,显著高于对照组ICAM-1 (0.037±0.005),p21 (0.078±0.016),(P＜0.01).导痰汤低、中、高剂量治疗组细胞内ICAM-1 (0.166±0.043,0.104±0.011,0.098±0.010)和p21(中剂量:0.173±0.021,高剂量:0.128±0.026)阳性表达显著低于模型组(P＜0.05),且随剂量的增加,导痰汤对ICAM-1和p21的抑制逐渐增强;而p21与ICAM-1水平呈显著正相关(r=0.772,P＜0.01).结论:导痰汤可以有效抑制颈动脉硬化家兔血管内皮细胞中ICAM-1和p21的表达.     

结直肠癌组织CDX2、p21WAF1蛋白表达与中医虚证相关性的研究

目的研究结直肠癌组织CDX2及p21WAF1蛋白表达,探讨其在结直肠癌发生发展中的病理意义。在此基础上研究CDX2及p21WAF1蛋白表达与中医虚证的相关性。方法以酒泉市人民医院的结直癌手术切除标本45例为研究对象,收集病理资料进行辨证分型。采用免疫组化EliVision法检测癌组织、癌旁组织中CDX2、及p21WAF1的表达。结果CDX2、p21WAF1在结直肠癌组织中的阳性率分别为86．7％、35．6％。结直肠癌组织中CDX2与p21WAF1表达无相关性。p21WAF1蛋白表达在虚证组（11．76％）明显低于实证组（41．67％）和虚实夹杂证组（56．25％）,其差异有统计学意义（X^2=7．385,P=0．025）。CDX2蛋白表达在虚证、实证、虚实夹杂组间差别无统计学意义。结论CDX2及D21WAF1阳性率在癌及切缘组织中有显著性差异,二基因可能与结肠癌发生发展相关。CDX2与p21WAF1之间无相关性。p21WAF1表达降低提示结直肠癌患者预后不良。p21WAF1表达在虚证组中明显低于实证、虚实夹杂证组。     

补肾益肺解毒方对大鼠肺癌的干预及K-ras、P21基因表达的影响

目的 观察补肾益肺解毒方对Wista大鼠肺癌干预作用及其机理,为临床上应用补肾益肺解毒方防治肺癌提供客观依据.方法 SPF级Wista大鼠72只,随机分为3组,分组后建立肺癌模型,观察补肾益肺解毒方对肺癌大鼠一般情况,肺指数及脾指数的影响.运用免疫组化技术,测定肺癌组织中K-ras、p21蛋白的表达.结果 部分大鼠出现肺部肿瘤,部分出现支气管上皮不典型增生,模型组大鼠肺癌(包括癌前病变)发生率高于用药组;模型组大鼠脾指数低于用药组,肺指数则高于用药组(P＜0.05).中药高剂量组可降低大鼠癌基因K-ras的表达,与肺癌模型组相比有显著差异(P＜0.05);中药高剂量组大鼠抑癌基因p21表达高于模型组(P＜0.05).结论 补肾益肺解毒方能增强机体的免疫功能,抑制大鼠肺癌的发生、发展,为临床进一步应用提供了科学依据.