HPLC测定新疆紫草不同部位中8种羟基萘醌的含量

建立同时测定新疆紫草Arnebia euchroma不同部位中左旋紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素等8种羟基萘醌含量的高效液相色谱法。采用Waters Xbridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30),检测波长275 nm,流速1mL·min~(-1),柱温30℃。定量结果显示,新疆紫草各部位中主要成分含量差异较大,根皮含量最高,其次是根,再次是茎残基,根木质部和地上部分含量较低。本研究为确定紫草药用部位提供科学依据。     

LC-MS/MS测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分的含量

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制。方法:采用Agilent ZORBAX SB C_(18)色谱柱(4. 6 mm×50 mm,1. 8μm),以0. 1%甲酸乙腈(A)-0. 1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～3 min,5%～95%A;3～7 min,95%A; 7～7. 01 min,95%～5%A; 7. 01～8. 50 min,5%A);流速0. 2 mL·min-1,柱温35℃,进样量5μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量。结果:左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10. 12～1 012μg·L~(-1)(r=0. 998 1),10. 88～1 088μg·L~(-1)(r=0. 991 2),10. 08～806. 4μg·L~(-1)(r=0. 997 6),20. 32～1 016μg·L~(-1)(r=0. 996 6),10. 37～1 037μg·L~(-1)(r=0. 999 6),10. 26～1 026μg·L~(-1)(r=0. 997 8)均有良好线性关系(r≥0. 991 2);平均加样回收率分别为95. 8%(RSD 3. 2%),103. 5%(RSD 2. 3%),105. 3%(RSD 2. 1%),96. 1%(RSD 3. 3%),98. 9%(RSD 2. 7%),100. 8%(RSD 3. 4%)。13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异。结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据。     

软紫草与硬紫草萘醌类化学成分的研究

目的:对软紫草与硬紫草中萘醌类化学成分进行研究。方法:利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等方法分离纯化,通过理化常数和波谱数据鉴定化合物结构,利用圆二色谱测定萘醌化合物绝对构型。结果:从软紫草中分离得到6个化合物,鉴定为阿卡宁(AE-1),乙酰阿卡宁(AE-2),β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁(AE-3),异丁酰阿卡宁(AE-4),α-甲基-正丁酰阿卡宁+异戊酰阿卡宁(AE-5),β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(AE-6);从硬紫草中分离鉴定了6个化合物,分别为紫草素(LE-1),乙酰紫草素(LE-2),β,β-二甲基丙烯酰紫草素(LE-3),异丁酰紫草素(LE-4),α-甲基-正丁酰紫草素+异戊酰紫草素(LE-5),β-羟基异戊酰紫草素(LE-6)。结论:软紫草中萘醌类化学成分绝对构型为S型,硬紫草中为R型。     

一测多评法同时测定新疆软紫草中6种萘醌类成分

目的建立新疆软紫草Arnebia euchroma中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素6种萘醌类成分的一测多评测定方法。方法采用高分辨LC-MS对软紫草药材中的主要萘醌类色谱峰进行鉴定。采用HPLC法,以乙酰紫草素为内参物,建立了乙酰紫草素与紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的相对校正因子,并考察了相对校正因子的耐用性和重现性。比较了外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制新疆软紫草药材的质量是准确、可靠的。     

HPLC法测定新疆软紫草属4种植物根中萘醌类成分

目的采用HPLC法测定新疆软紫草属4种植物(新疆紫草、黄花软紫草、天山软紫草、硬萼软紫草)根中7种萘醌类成分(左旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素)的含有量。方法该药材石油醚提取物的分析采用Agilent-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%甲酸;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长275 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.37%～99.75%,RSD为0.42%～1.94%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于软紫草的质量控制。     

低温胁迫对新疆紫草悬浮细胞次生代谢物的影响

目的通过考察低温胁迫后新疆紫草悬浮细胞次生代谢物量的变化,探讨道地产区特有的环境因子对新疆紫草的作用。方法 4℃低温胁迫新疆紫草悬浮细胞24h后,HPLC法分别测定胁迫前(计为0h)和胁迫后12、24、48、72、168h5个时间点迷迭香酸、紫草酸B、紫草呋喃A、紫草呋喃E、乙酰紫草素、脱氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素和总紫草素类化合物的量。结果低温胁迫后不同时间点同类化合物的变化趋势基本一致,但其量差异显著,除β,β'-二甲基丙烯酰紫草素外,其他化学成分量的最大值均出现在低温胁迫组。结论低温胁迫可以促进新疆紫草悬浮细胞积累次生代谢物,并对揭示新疆紫草道地性形成的机制有重要作用。     

甲基丙烯酰紫草素对肝癌的抑制作用研究

目的:研究甲基丙酰紫草素的抗癌作用,并初步探讨其作用机制.方法:MTT法、生长曲线检测甲基丙酰紫草素的体外抗肝癌作用,并计算半数抑制浓度(IC50)值;应用H22荷瘤小鼠模型进行体内抗瘤试验,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;免疫组化方法检测肿瘤组织的凋亡相关蛋白NF-κB p65的表达.结果:甲基丙烯酰紫草素有显著的体外抗癌作用,且与剂量呈正相关,对SMMC-7721的IC50值分别为(21.16±0.96)μg/ml;小鼠移植瘤H22抗瘤试验结果显示,在0.38 mg/kg、0.75mg/kg和1.50 mg/kg的剂量下甲基丙烯酰紫草素的抑瘤率分别为22.98%、39.08%、47.13%.免疫组化结果表明随甲基丙烯酰紫草素浓度增加NF-κB p65蛋白表达下调.结论:甲基丙烯酰紫草素具有较强的体内外抗肝癌作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关.     

HPLC 测定紫草提取物中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的:建立HPLC测定紫草提取物中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量.方法:采用HPLC,Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相乙腈-水-甲酸(70:30:0.05),检测波长275 nm,柱温40℃,流速1 mL· min -1.结果:β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁在50～200 μg具有良好的线性关系(r=0.9998),平均加样回收率103.31％,RSD 1.44％ (n =5).结论:方法准确,重复性好,可作为紫草提取物的含量控制.     

HPLC法同时测定解毒生肌膏中6种成分

目的建立HPLC法同时测定解毒生肌膏(紫草、白芷、当归等)中6种成分的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.5%冰醋酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;检测波长300 nm(欧前胡素、异欧前胡素)和516 nm(紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素);进样量20μL。结果欧前胡素、异欧前胡素、紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素分别在2.74~54.80μg/m L(r=0.999 1)、1.90~38.00μg/m L(r=0.999 5)、2.12~42.40μg/m L(r=0.999 2)、8.48~169.60μg/m L(r=0.999 8)、4.92~98.40μg/m L(r=0.999 7)、4.66~93.20μg/m L(r=0.999 1)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为99.72%(1.15%)、97.39%(1.49%)、98.29%(1.87%)、99.29%(1.94%)、98.51%(1.42%)、97.21%(1.55%)。结论该方法简便准确,专属性强,重复性好,可用于解毒生肌膏的质量控制。     

新疆紫草羟基萘醌类成分对炎症细胞因子的抑制作用

目的研究新疆紫草羟基萘醌化合物对炎症细胞因子的抑制作用。方法采用酶联免疫法测定新疆紫草羟基萘醌化合物对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1D（IL-1D）等炎症细胞因子的抑制作用。采用Griess法测定分离纯化的6种不同羟基萘醌化合物（紫草素、去氧紫草素、乙酰紫草素、β’β-二甲基丙烯酰紫草素、α-甲基丁酰紫草素、异丁酰紫草素）对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放炎症细胞因子一氧化氮（N0）的抑制作用。结果新疆紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放TNF—α和IL-1D具有抑制作用;6种紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放NO具有抑制作用。结论新疆紫草羟基萘醌成分对炎症细胞因子均有不同程度的抑制作用,为进一步研发以炎症因子TNF-α抑制剂为靶向的类风湿关节炎治疗药物提供了一定的理论依据。