联合肝脏分割和门静脉结扎二步肝切除术大鼠模型的建立

目的:建立联合肝脏分割和门静脉结扎(PVL)二步肝切除术(ALPPS)大鼠模型。方法:将健康60只SD雄性大鼠随机均分为PVL组、ALPPS组、假手术组。PVL组行肝左外叶、左中叶、右叶门静脉分支结扎及尾状叶切除,保留肝右中叶分支;ALPPS组在PVL组手术的基础上,将肝左中叶与右中叶在缺血带处离断;假手术组仅游离出门静脉各分支,不结扎。检测大鼠术后肝再生率(HRR)、肝功能情况,以及肝左中叶病理损伤程度与肝右中叶Ki-67的表达。结果:与假手术组比较,ALPPS组、PVL组术后各时间点肝右中叶HRR均明显升高(均P0.05),且第4、7天ALPPS组肝右中叶HRR明显高于PVL组(155.96%vs.118.15%;174.86%vs.133.55%,均P0.05)。PVL组术后早期肝功能指标好于ALPPS组(均P0.05),但后期无统计学差异(均P0.05)。组织病理学检查显示,ALPPS组术后第1天肝左中叶坏死明显多于PVL组;ALPPS组肝右中叶Ki-67表达第2、4天明显高于PVL组(85.36%vs.61.84%;43.40%vs.29.06%,均P0.05)。结论:ALPPS与PVL均能促进肝再生,并且ALPPS比PVL能更快的促进肝再生;成功建立大鼠ALPPS模型,为研究ALPPS肝再生机制及相关并发症奠定了基础。     

ALPPS术后肝再生与内质网应激IRE1α-XBP1通路的关系研究

目的探讨内质网应激在联合肝脏分割和门静脉结扎二步肝切除术(ALPPS)一期手术后肝再生过程中的作用。方法将72只C57bl/6小鼠随机均分为ALPPS组、门静脉结扎组(PVL组)和假手术组(Sham组),每组24只,分别行ALPPS一期手术、单纯PVL和假手术。3组小鼠分别在术后第1、2、4及7天各取材6只,检测各组小鼠的肝重体质量比,并取肝脏组织行免疫组织化学染色以计算Ki-67阳性细胞比,行Western blot法以检测肌醇酶1α(IRE1α)和X盒连接蛋白1(XBP1)蛋白的表达水平。结果 (1)肝重体质量比:术后第4天和第7天时,同时点下Sham组、PLV组和ALPPS组的肝重体质量比依次增加,3组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。(2) Ki-67阳性细胞比:术后第2天时,Sham组、PLV组和ALPPS组的Ki-67阳性细胞比依次增加,3组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05);术后第4天时,ALPPS组与PVL组的Ki-67阳性细胞比仍高于Sham组(P0.05)。(3) XBP1和IRE1α的表达水平:术后第2天和第4天时,与Sham组和PVL组比较,ALPPS组的XBP1和IRE1α的表达水平均较高(P0.05);术后第7天时,与Sham组比较,ALPPS组的XBP1和IRE1α的表达水平较高(P0.05);与PVL组比较,ALPPS组的XBP1的表达水平较高(P0.05)。结论在小鼠体内ALPPS术式诱导的肝再生较传统的PVL术式引起的肝再生更具有优势,这可能是因为ALPPS术后更为明显的内质网应激激活状态,导致IRE1α-XBP1的表达上调,从而参与了肝细胞细胞周期的调控,进而促进了肝细胞的增殖,促进了快速肝再生。     

不同肝实质劈离方式对大鼠门静脉结扎术后预留肝脏增生的影响

目的探讨肝实质劈离在促进门静脉部分结扎(PVL)大鼠预留肝脏(FLR)再生中的作用和机制。方法用随机数字表法将健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠分为PVL组、PVL+肝实质完全劈离(ALPPS)组、PVL+肝实质部分劈离(PVL+PLP)组、PVL+结扎侧肝叶劈离组(PVL+PLL)、PVL+脾脏射频消融组(PVL+RFA)和假手术组(Sham), 术后按1、3、5、7 d共4个时相点分别处死动物采取标本, 每一时相点4只大鼠, 每组共16只大鼠。分别测定预留肝脏质量和门静脉压力, 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)和肝再生相关细胞因子(HGF)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平, 免疫组织化学检测细胞增殖核抗原(Ki-67)及磷酸化组蛋白H3(pH3)的表达并计算阳性率。计量资料以均数±标准差表示, 多组均数间的比较采用One-way ANOVA分析, 组间采用最小显著差异法(LSD法)行两两比较。结果 PVL+PLP组的FLR质量与体重之比(RML/BW)...     

门静脉结扎与栓塞在肝切除术中应用的Meta分析

目的 系统评价门静脉结扎（PVL）和门静脉栓塞（PVE）后肝切除前剩余肝体积（FLR）增长率和其他围手术期结局指标。方法 检索相关数据库,收集关于PVL与PVE在肝切除术中应用的随机对照试验（RCT）或临床对照试验（CCT）,提取相关数据后,采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果 最终纳入8项研究,共438例病人。Meta分析结果显示：PVE组与PVL组FLR增长率、术后病死率、肝功能衰竭和并发症等方面差异无统计学意义。然而,联合肝脏分隔和门静脉结扎的二步肝切除术（ALPPS）较PVE能明显增加FLR。结论 PVL与PVE在肝切除术中有着相似的FLR增长率、术后病死率和并发症。ALPPS 相比PVE能明显加速FLR增长。     

肝癌大鼠部分门静脉结扎术后血流动力学变化与不同肝叶肿瘤生长的关系

目的 探讨门静脉结扎术(PVL)后,肝脏血流动力学变化与荷瘤大鼠不同肝叶肿瘤生长的关系.方法 将18只雄性大鼠随机分为A、B组.均为荷瘤大鼠,A组行PVL术,B组为假手术组.分别于术后不同时间段,应用多普勒超声测量结扎肝叶与非结扎肝叶肝动脉及门静脉血流速度,正电子发射计算机断层显像(PET-CT)测算结扎与非结扎肝叶上肿瘤的体积变化,分析血流变化与肿瘤体积变化是否存在相关性.结果 A组PVL肝叶肝动脉血流速度明显高于B组[(4.34±0.53) ml/min比(2.07±0.04) ml/min,P＜0.05],且与结扎肝叶肿瘤体积增加呈正相关(r=0.908,P＜0.05).结论 PVL肝叶的肝动脉血流增加是PVL术后结扎侧肝叶肿瘤生长加速的促进因素.     

一种大鼠选择性门静脉分支结扎模型的建立

目的 在显微镜辅助下建立一种大鼠选择性门静脉分支结扎(sPVL)模型,观察其对肝再生的影响.方法 模型组选择性结扎70％的门静脉;假手术组仅游离门静脉但不结扎.评估各组肝功能、肝脏指数、肝再生率和肝脏组织病理学改变.结果 30只大鼠成功实施sPVL手术.术后14 d,模型组未结扎叶肝脏指数达(90.36 ±0.21)％,与假手术组(34.39±2.50)％比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结扎叶肝脏逐渐萎缩.谷丙转氨酶(ALT)水平于术后48 h达到峰值[(454.33±116.00) U/L],术后第7天回落至术前水平[(59.67 ±9.00) U/L].总胆红素(TBIL)和血清白蛋白水平无明显变化.与假手术组比较,组织病理学染色示未结扎叶肝细胞体积增大,肝血窦明显增宽,中央静脉周围及汇管区均无明显胶原沉积;而结扎叶肝细胞明显萎缩,后期出现广泛的胶原沉积.结论 成功建立有效促进残肝再生的鼠sPVL模型,且该方法稳定可靠、重复性好.     

异位劈离联合门静脉结扎对大鼠肝脏再生的影响北大核心CSCD

目的探讨异位劈离联合门静脉结扎对大鼠肝脏再生的影响。方法60只SD大鼠随机分为4组：门静脉结扎组（PVL组）、联合肝脏离断和门静脉结扎组（ALPP组）、脾脏劈离联合门静脉结扎组（ASPP组）和肾脏劈离联合门静脉结扎组（AKPP组）,分别于术后第2、4、7天检测右中叶肝再生率,ALT、AST和肝细胞增殖细胞核抗原（PCNA）标记表达数量。结果ALPP组、ASPP组、AKPP组与PVL组比较,术后第4、7天肝右中叶显著增生（F=3．750,P〈0．05;F=16．398,P〈0．01）,肝组织PCNA阳性表达数术后第4、7天显著增高（F=6．860,P〈0．01;F=3．810,P〈0．05）。ALPP组与其余三组比较。血清ALT和AST浓度术后第2、4天显著增高（ALT：分别F=8．812,21．929;AST：分别F=36．393,6．468;P〈0．01）。ASPP组、AKPP组与ALPP组比较,术后肝右中叶增生率、肝组织PCNA阳性表达数差异无统计学意义。结论异位劈离联合门静脉结扎与联合肝脏离断和门静脉结扎均可显著促进大鼠肝脏再生。而大鼠肝脏再生机制可能与肝脏、脾脏或肾脏的离断所引发的炎症反应、应激反应以及通过特定通路促使某些细胞因子高表达有关。     

门静脉阻断对原发性肝癌荷瘤大鼠不同肝叶肿瘤生长的影响

目的 观察在门静脉阻断术(PVL)后荷瘤大鼠不同肝叶肿瘤的生长.方法 将27只雄性大鼠平均分为3组.A组为无荷瘤大鼠,B、C组为荷瘤大鼠.A组(对照组)和C组(实验组)大鼠行PVL术,B组为假手术组.分别于术后不同时段,应用正电子发射计算机断层显像(PET-CT)测算不同肝叶上肿瘤生长的体积变化及肿瘤生长率.结果 C组门静脉结扎肝叶上的肿瘤体积增生明显高于B组[ (54.90±32.17) mm3比(28.41±11.04) mm3,P＜0.05],而无门静脉结扎肝叶上的肿瘤体积增生及肿瘤生长率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PVL术可加速大鼠门静脉结扎肝叶上肿瘤的生长,但不会促使无门静脉结扎肝叶上肿瘤生长的加速.     

术前门静脉闭塞对于超越门静脉闭塞侧肝叶切除术的优点

术前门静脉栓塞术可使未被栓塞的肝叶代偿肥大,能提高残留肝的功能,为了证实上述观点,取Wis－tar鼠作实验,随机分成3组：门静脉结扎一肝切除组（PVL－H）在全麻下部腹．结扎供应左外侧叶和中叶的门静脉支,另两个对照组同样显露门静脉支但不予结扎（NPVL组）。7天后,3组反映肝功能的一系列指标基本达到平衡,均无明显差异,此时进行第二次手术。PVL－H组与NPVL－88％肝切除组（NPVL－88％）均切除88％肝组织,即肝左外侧叶、中叶和右外侧叶,仅留下层叶,NPVL－67％肝切除组（NPVL－67％）仅切除肝左外侧叶和中叶。整个实…     

联合肝脏分隔和门静脉结扎的二步肝切除术临床与基础研究进展

联合肝脏分隔和门静脉结扎的二步肝切除术（ALPPS）由德国Hans Schlitt教授在2007年首创,即通过Ⅰ期手术时结扎肝脏荷瘤侧肝叶的门静脉分支,同时分隔荷瘤侧和健侧肝组织,使健侧肝脏在1~2周内快速再生,待健侧肝脏增生足够时,Ⅱ期手术切除荷瘤侧肝脏,可使相当一部分原本不能手术切除的肝癌患者重新获得根治性切除的机会。ALPPS效果显著,相对于门静脉栓塞可更快速地诱导肝脏再生,并且随着手术经验的积累和外科技术的改良,ALPPS术后并发症率明显降低,越来越多地应用于原发性和继发性肝脏肿瘤的治疗,包括结直肠癌肝转移、肝细胞癌和肝内胆管癌等。ALPPS自创立以来,其临床改良术式不断涌现,包括基本手术技术和技巧的改进、肝脏分隔的微创改进、门静脉结扎的微创改进、手术入路的微创改进和经导管动脉栓塞术补救性ALPPS等。ALPPS诱导肝再生过程中肝脏免疫微环境可发生明显的变化,但关键免疫组分的作用、肝再生的空间起源、分布及其亚群特征等仍有待明确。目前,ALPPS对肝脏肿瘤的具体影响及其机制并不完善,仍需进一步探索和证实。ALPPS的临床应用前景广阔,相关机制研究的转化也有望为临床主动诱导肝再生和肝功能衰竭的防治提供新的思路。     

转化生长因子β对肝纤维化大鼠肝部分切除术后肝功能及肝脏再生的作用及机制

背景与目的:肝脏纤维化是肝脏内一系列纤维组织增生的病理反应,肝纤维化可能导致肝切除后出现肝脏再生不足或未再生。本研究探讨肝纤维化动物肝部分切除术后转化生长因子β(TGF-β)通路对肝功能及肝脏再生的作用和机制。方法:将40只SD大鼠用腹膜内注射CCl4方法构建肝纤维化模型后,将其中32只行70%肝切除手术,并分别在术后第1、3、5、7天,每个时间点取8只大鼠检测血清肝功能指标、肝组织TGF-β和Smad的m RNA和蛋白表达水平,另外8只大鼠行假手术作为对照组。此外,以相同的造模方法,观察TGF-β/Smad通路抑制剂(术前腹膜内注射GW788388)对肝纤维化大鼠部分肝切除后肝功能与肝再生能力的影响。结果:与假手术组比较,部分肝切除术组大鼠术后第1天天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶水平明显升高,此后随时间逐渐降低(均P<0.05);肝组织TGF-β和Smad的m RNA与蛋白水平明显升高,均在术后第3天达到峰值(均P<0.05),而后降低,并在术后第7天降低至假手术组水平(P>0.05)。肝切除术前注射GW788388的大鼠与单纯行肝切除术的大鼠比较,AST和ALT水平升高更为明显,且肝组织细胞增殖标志物Ki-67与干细胞标志物LGR5表达均明显减少(均P<0.05)。结论:TGF-β/Smad信号在通路在肝纤维化大鼠肝部分切除术后保护肝功能、促进肝再生方面起了重要作用,机制可能与该通路调节细胞增殖及干细胞的分化有关。     

肝内外干/祖细胞参与肝再生的研究进展

肝再生是指由损伤刺激(手术、创伤、中毒、感染、坏死等)引起的受损肝组织迅速增生使残肝体积增大,质量增加。根据肝损伤原因和损伤的程度肝再生可以主要分为3个不同的层次:肝细胞主导的肝再生、肝内干/祖细胞介导的肝再生和肝外干/祖细胞参与的肝再生。当肝脏受到轻至中度损伤时,肝脏再生通常由成熟的肝细胞所参与完成;当肝脏受到严重的损伤或肝细胞的增殖受到明显抑制时,肝干/祖细胞将参与肝再生过程。除了肝内干细胞参与作用外,肝外的骨髓来源干细胞,内皮祖细胞来源的干细胞均参与了肝再生,但其具体机制目前尚不明了。笔者就肝再生最新关注的焦点,尤其是干/祖细胞参与的肝再生和其潜在的临床应用进行综述。     

ALPPS Offers a Better Chance of Complete Resection in Patients with Primarily Unresectable Liver Tumors Compared with Conventional-Staged Hepatectomies: Results of a Multicenter Analysis

Background

Portal vein occlusion to increase the size of the future liver remnant (FLR) is well established, using portal vein ligation (PVL) or embolization (PVE) followed by resection 4–8 weeks later. Associating liver partition with portal vein ligation for staged hepatectomy (ALPPS) combines PVL and complete parenchymal transection, followed by hepatectomy within 1–2 weeks. ALPPS has been recently introduced but remains controversial. We compare the ability of ALPPS versus PVE or PVL for complete tumor resection.

Methods

A retrospective review of all patients undergoing ALPPS or conventional staged hepatectomies using PVL or PVE at four high-volume HPB centres between 2003 and 2012 was performed. Patients with primary liver tumors and liver metastases were included. Primary endpoint was complete tumor resection. Secondary endpoints include 90-day mortality, complications, FLR increase, time to resection, and tumor recurrence.

Results

Forty-eight patients with ALPPS were compared with 83 patients with conventional-staged hepatectomies. Eighty-three percent (40/48 patients) of ALPPS patients achieved complete resection compared with 66 % (55/83 patients) in PVE/PVL (odds ratio 3.34, p = 0.027). Ninety-day mortality in ALPPS and PVE/PVL was 15 and 6 %, respectively (p = 0.2). Extrapolated growth rate was 11 times higher in ALPPS (34.8 cc/day; interquartile range (IQR) 26–49) compared with PVE/PVL (3 cc/day; IQR2-6; p = 0.001). Tumor recurrence at 1 year was 54 versus 52 % for ALPPS and PVE/PVL, respectively (p = 0.7).

Conclusions

This study provides evidence that ALPPS offers a better chance of complete resection in patients with primarily unresectable liver tumors at the cost of a high mortality. The technique is promising but should currently not be used outside of studies and registries.     

早期肠内肠外营养支持对肝硬化大鼠肝切除术后的影响

目的 观察早期肠内肠外营养支持对肝硬化大鼠肝部分切除术后的影响.方法 采用24只雄性SD大鼠随机分为3组:A组正常大鼠肠内营养;B组肝硬化大鼠肠内营养;C组肝硬化大鼠肠外营养.3组大鼠行肝部分切除术后1 d分别进行等热量[690 kJ/(kg·d)]等氮量[1.22g/(kg·d)]营养支持,共5 d.术后6 d测定大鼠体质量、肝功能、前白蛋白、转铁蛋白、肝组织白蛋白(ALB)mRNA的表达及细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白表达水平.结果 与术前比较,术后A组大鼠体质量增加,B、C组体质量减轻,差异有统计学意义[A:(6.16±3.28)g;B:(5.46±2.59)g;C:(6.13±3.21)g,P＜0.05).术后B、C组大鼠肝功能与A组比较,血清AST、ALT、ALP升高,ALB降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);B组与C组比较,ALP升高,差异有统计学意义[B:(209±81)IU/L;C:(271:±92)IU/L,P＜0.05).术后B、C组大鼠血清前白蛋白和转铁蛋白与A组比较均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);C组与B组比较,血清前白蛋白降低,差异有统计学意义[B:(161±37)mg/L;C:(133±29)mg/L,P＜0.05].术后B、C组肝组织ALB mRNA表达水平比A组下降,差异有统计学意义(A:1.46±0.12;B:1. 07±0.14;C:0.84±0.18,P＜0.05);B组与C组比较,C组肝组织ALB mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).术后A组肝组织Ki-67蛋白表达指数比B、C组高,差异有统计学意义(A:8.90±0.45;B:5.60±0.34;C:3.80±0.21,P＜0.05);而B组Ki-67指数比C组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝硬化大鼠肝部分切除术后存在明显的肝功能不全和肝再生能力下降,虽经过积极的肠内或肠外营养支持,其术后各项指标的恢复均明显差于无肝硬化的大鼠.肠内营养较肠外营养更能促进肝硬化大鼠肝部分切除术后肝脏蛋白质的合成代谢和肝再生,肠内营养途径可进一步降低与肠外营养相关的胆汁淤积并发症的发生.     

Liver regeneration after portal vein plus hepatic artery ligation performed heterochronously in rats

Abstract. Background/Purpose: Portal vein ligation (PVL) has been used clinically to decrease the amount of liver before surgical resection, consequently, minimizing postoperative dysfunction in the remaining hypertrophied liver lobes. To date, few reports in the literature have demonstrated the regenerative capacity of unaffected lobes following PVL plus hepatic artery ligation (HAL). This study was conducted in rats to determine a safe and efficacious method of PVL plus HAL, focusing on liver function, the MIB-5 labeling index, and the ratio of the weight of the nonligated lobes to the body weight. Methods: Group I rats were subjected to PVL of the left lateral and median branches alone (corresponding to approximately 70% total liver volume). In group II, we performed PVL and HAL of the same branches simultaneously, while in group III, HAL was performed 48 h after PVL. A laparotomy without ligature was performed in the control group. Rats from each group were killed at 24, 48, 72, 96, and 168 h after surgery. Standard serum liver functions were tested. Proliferative activity in the nonligated liver was expressed using the Ki-67 antigen (MIB-5) labeling index. Body and nonligated lobe weights were measured. Results: At 96 h post-surgery, the ratio of the weight of the nonligated lobe to body weight was significantly higher in group III than in group I and group II, and induction of the MIB-5 labeling index showed maximum levels in group III. However, quantitative determination of serum glutamic-oxaloacetate transaminase (GOT) showed peak levels in group II at 24 h after surgery. Conclusions: From these results, we conclude that the PVL plus HAL heterochronous procedure is safer and more efficacious than PVL only, or simultaneous PVL plus HAL. A better knowledge of the events following such heterochronous ligation should improve the clinical outcome of hepatic resection for liver diseases. Received: January 29, 2001 / Accepted: November 16, 2001     

减体积肝移植术后甘氨酸对肝脏再生的作用

目的 观察甘氨酸在大鼠减体积肝移植中对移植后大鼠生存率、脏器损伤及肝脏再生的影响.方法 雌性Sprague-Dawley大鼠(200～230 g)分为甘氨酸组和对照组.甘氨酸组:术前经静脉给予供体甘氨酸1.5 ml(300 mmol/L),对照组给予1.5 ml的林格氏液.50%大鼠肝脏在HTK液经过2 h的冷保存后行原位肝移植术.肝移植术后观察大鼠生存率、血清转氨酶、肝脏组织学及肝脏再生情况.结果大鼠减体积肝移植(50%)术后,甘氨酸显著延长大鼠生存率.减体积肝移植术后8 h对照组血清中的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)分别升至(4045.4 ±614.5)、(1972.3±338.2)、(13 079.8±2608.4)U/L,而甘氨酸可降低血清转氨酶40%～50%(P<0.05).肝脏组织学也证明了甘氨酸的保护作用(P<0.05).移植术后8 h和24 h,肝脏的再生率和肝组织中的Ki-67表达在两组中差异有统计学意义.结论 甘氨酸在大鼠减体积肝移植术后可以延长生存率,减轻肝脏损伤,并且不阻碍肝脏的再生.Kuffer细胞的失活是其主要机制.     

间断低氧预适应对大鼠肝切除术后残余肝脏再生的影响

目的 研究间断低氧预适应对大鼠肝切除术后残余肝脏再生的影响。方法 54只SD大鼠用SPSS软件随机分为3组：假手术组（SO组）、肝部分切除组（PH组）和间断低氧预适应组（IHP组）。PH组切除大鼠的左叶和中叶肝脏,约占70％。IHP组大鼠每日在低氧环境下暴露1h,连续进行1周后行肝切除术。于术后第1、3、5天每组随机选取6只SD大鼠处死进行检测。称取肝脏重量,计算肝脏再生度和再生指数。取下腔静脉血用全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。采用免疫组化方法检测残余肝组织增生细胞核抗原（PCNA）阳性率。结果 IHP组术后第1天和第3天残余肝脏的再生度和再生指数明显高于PH组（P＜0.05）,而术后第5天两组差异无统计学意义。虽然IHP组和PH组大鼠术后血清ALT和AST水平开始下降,但二者均明显高于SO组,且术后第1天IHP组明显低于PH组（P＜0.05）。术后各个时间点IHP组残余肝脏的PCNA阳性细胞比例明显高于SO组和PH组（P＜0.05）。结论 间断低氧预适应能够在一定程度上防止肝切除术后残余肝组织中肝细胞破坏,并且能促进肝脏的早期再生。但其机制需进一步研究。