六味地黄汤及其“补泻”药对对绝经后骨质疏松大鼠股骨和肾脏中OPG及RANKL蛋白表达的影响

目的:观察六味地黄汤及其3个"一补一泻"药对对绝经后骨质疏松模型大鼠股骨及肾脏中骨保护素(OPG)及核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。方法:将3~4月龄SD大鼠随机分为空白组(假手术组,蒸馏水10 m L·kg-1),模型组(蒸馏水10 m L·kg-1),六味地黄汤组(6.75 g·kg-1),山茱萸-牡丹皮组(1.89 g·kg-1),熟地黄-泽泻组(2.97 g·kg-1),山药-茯苓组(1.89 g·kg-1),阿仑膦酸钠组(阳性药物组,6.3 g·kg-1)。除空白组外,其余各组大鼠均采用摘除双侧卵巢的方法制备绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模后第16天开始,各组按相应剂量连续灌胃给药90 d,每周观察各组大鼠体重的变化,并采用免疫组化法检测股骨成骨细胞和肾脏肾小管上皮细胞中OPG,RANKL蛋白的表达。结果:与模型组比较,六味地黄汤组能上调股骨成骨细胞及肾脏肾小管上皮细胞中的OPG的蛋白表达、下调RANKL的蛋白表达;但山茱萸-牡丹皮药对仅能降低股骨成骨细胞中OPG的灰度值(P0.05),升高RANKL的灰度值(P0.01),即山茱萸-牡丹皮药对仅能上调股骨成骨细胞中OPG的蛋白表达、下调RANKL的蛋白表达(灰度值越低,OPG,RANKL的蛋白表达越强)。结论:六味地黄汤改善绝经后骨质疏松症的机制之一可能与其方中山茱萸-牡丹皮药对调节股骨中的OPG及RANKL的蛋白表达有关。     

人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法:不同浓度的人参皂苷Rb1作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测药物对成骨细胞增殖功能的影响,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA,分析药物对破骨细胞分化的影响。结果:人参皂苷Rb1(1.12×10-9-1.12×10-5mol/L)作用于体外培养的大鼠成骨细胞3d时,1.12×10-8-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的增殖(P0.05或P0.01);1.12×10-7-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-9-1.12×10-8mol/L人参皂苷Rb1可显著上调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-7-1.12×10-5mol/L人参皂苷Rb1可显著下调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,促进破骨细胞的分化(P0.01)。结论:人参皂苷Rb1对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。     

薯蓣皂苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究薯蓣皂苷元对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配基(OPG/RANKL) mRNA的影响,探讨薯蓣皂苷元预防与治疗骨质疏松的作用机制。方法:在体外培养的大鼠成骨细胞培养基中分别加入不同浓度的薯蓣皂苷元作用不同时间,用MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,检测成骨细胞内ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,用半定量RT-PCR检测成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的表达量,分析药物对破骨细胞重要信号传导通路OPG/RANKL/RANK系统的影响。结果:3.64×10-8-3.64×10-7mol/L的薯蓣皂苷元作用于大鼠成骨细胞3d,可促进成骨细胞的增殖(P<0.01),上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.01);作用7d,可提高成骨细胞内ALP活性(P<0.05或P<0.01)。结论:适量浓度薯蓣皂苷元可促进成骨细胞的增殖、分化及抑制破骨细胞的形成。     

杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的测定

目的探讨改进杜仲中松脂醇二葡萄糖苷测定方法。方法采用"石油醚除胶-甲醇提取"法提取杜仲特征性成分松脂醇二葡萄糖苷,色谱条件为Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(25∶75),检测波长为277 nm,柱温为30℃。结果改进方法测得松脂醇二葡萄糖苷含有量高于药典法,松脂醇二葡萄糖苷在0.499 6～7.494μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.03%,RSD为2.18%。结论该方法简单、准确、重复性好,可用于杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的测定。     

不同温补肾阳中药有效成分对TM3小鼠睾丸间质细胞生长抑制作用比较研究

目的比较不同温补肾阳中药有效成分对睾丸间质细胞生长的影响。方法以小鼠TM3睾丸间质细胞为实验对象,分别采用10、20、40、80、160和320μmol·L~(-1)淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、松脂醇二葡萄糖苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷和耐斯糖处理细胞24h、48h和72h,并设置0.1%DMSO为对照组,运用MTT方法检测各时点细胞增殖情况。结果铺板24~72h内,对照组细胞进入快速的指数生长期;同一时点,与对照组比较,40~320μmol·L~(-1)淫羊藿苷显著抑制TM3细胞增殖(P0.05),80~320μmol·L~(-1)补骨脂素和异补骨脂素显著抑制TM3细胞增殖(P0.05),320μmol·L~(-1)松脂醇二葡萄糖苷显著抑制TM3细胞增殖(P0.05),大于160μmol·L~(-1)仙茅苷显著抑制TM3细胞增殖(P0.05)。然而,各浓度的金丝桃苷、松果菊苷和耐斯糖对TM3细胞生长无明显抑制作用。结论相同浓度的各温补肾阳中药有效成分对小鼠TM3睾丸间质细胞增殖抑制作用由强到弱分别是,淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、松脂醇二葡萄糖苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷、耐斯糖。     

秦皮甲素和秦皮乙素在大鼠体内的药物动力学研究

目的测定秦皮甲素和秦皮乙素在大鼠体内的血药浓度及药代动力学参数。方法大鼠口服给予秦皮甲素和秦皮乙素各60 mg·kg~(-1),于给药后不同时间点采血,UPLC法测定血浆秦皮甲素和秦皮乙素含量,3P87计算药代动力学参数。结果秦皮甲素和秦皮乙素的主要药动学参数:T_(max)分别为0.164,0.0643 h;C_(max)分别为4.778,3.576μg·m L~(-1);AUC_(0-4)分别为5.360,5.682μg·m L~(-1)·h;AUC_(0-∞)分别为7.449,11.691μg·m L~(-1)·h;CL/F(s)分别为7.938,11.055 mg·kg~(-1)·h·μg~(-1)·m L;二者均符合二室模型。结论建立了大鼠血浆中秦皮甲素和秦皮乙素的UPLC检测方法,方法灵敏准确,适用于药代动力学研究。     

高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量

目的 建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 采用Diamonsil C18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15850.5)为流动相,检测波长227 nm.结果 样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%,96%～103%;绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98 μg,r=0.999 9和0.872～8.72μg,r=0.999 8.结论 贵州不同产地杜仲药材皮及叶中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量差异很大.     

高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量

目的 建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱法.方法 采用Diamonsil C18柱(5μm,250mm×4.6 mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15:85:0.5)为流动相,检测波长227nm.结果 样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%,96%～103%;绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98μg,r=0.9999和0.872～8.72μg,r=0.9998.结论 贵州不同产地杜仲药材皮及叶中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量差异很大.     

HPLC同时测定蓬子菜中7种成分的含量

目的:利用高效液相色谱配置二极管阵列检测器,旨在建立同时测定蓬子菜中鸢尾苷,saikoisoflavonoside A,槲皮素-3-O-β-D葡萄糖苷,槲皮素,香叶木素,芹菜素和5,4'-二羟基-3,6,7,8,3'-五甲氧基黄酮的方法。方法:Ultimate XB C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱;柱温35℃;流速1.0 m L·min~(-1);检测波长蓬子菜中鸢尾苷,saikoisoflavonoside A,槲皮素-3-O-β-D葡萄糖苷,槲皮素,香叶木素,芹菜素和5,4'-二羟基-3,6,7,8,3'-五甲氧基黄酮为260 nm。结果:蓬子菜中鸢尾苷,saikoisoflavonoside A,槲皮素-3-O-β-D葡萄糖苷,槲皮素,香叶木素,芹菜素和5,4'-二羟基-3,6,7,8,3'-五甲氧基黄酮分别在9.3~186 mg·L~(-1)(r=0.999 4),12.8~256 mg·L~(-1)(r=0.999 3),50~1 000 mg·L~(-1)(r=0.999 3),38.7~774 mg·L~(-1)(r=0.999 5),14.5~290 mg·L~(-1)(r=0.999 2),27.4~548 mg·L~(-1)(r=0.999 7)和8.6~172 mg·L~(-1)(r=0.999 6)呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.15%(RSD 2.4%),101.30%(RSD 2.2%),99.18%(RSD1.1%),99.96%(RSD 1.4%),101.88%(RSD 0.9%),100.02%(RSD 2.3%)和101.71%(RSD 1.4%)。结论:该方法操作简单、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,可用于同时测定蓬子菜乙酸乙酯有效部位中7种主要有效成分,将为蓬子菜质量控制提供科学依据。     

天山雪莲愈伤组织提取物对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响

目的研究天山雪莲愈伤组织提取物(extract from callus of Saussureainvolucrate,ESI)对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响,探讨ESI抗骨质疏松的作用及机制。方法以MG-63为研究对象,采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测ESI对成骨细胞增殖的影响,相关试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性和羟脯氨酸(Hyp)水平,茜素红染色法观察对矿化骨结节形成的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测骨保护素(OPG)和核因子-κB活化因子受体配体(RANKL)基因表达水平;Western blotting法检测OPG/RANKL蛋白水平;检测p38特异性抑制剂SB203580对ESI作用于成骨细胞增殖、分化、矿化以及OPG/RANKL表达的影响。结果 ESI低于125μg/mL对成骨细胞无细胞毒性,31.25、62.5μg/mL对成骨细胞生长有促进作用;ESI显著提高ALP活性、Hyp水平以及矿化骨结节形成;显著上调MG-63细胞OPG mR NA水平,下调RANKLmR NA水平,上调OPG/RANKL蛋白水平;SB203580显著抑制ESI对成骨细胞增殖、ALP活性、矿化结节形成的促进作用以及对胶原蛋白积累量和OPG/RANKL值的提高作用。结论 ESI能够促进成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与调节OPG和RANKL基因表达有关,并且可能通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路进行信号转导。     

Simultaneous Determination of Pinoresinol Di-gluco- pyranoside and Pinoresinol Glucoside in Rat Plasma by HPLC-tandem MS/MS for Pharmacokinetic Study

Objective Pinoresinol di-glucopyranoside(PDG) is one of the main active lignans of Eucommiae Cortex considered to be a high-quality antihypertensive drug. In this study the pharmacokinetic process of PDG and its primary in vivo metabolite pinoresinol glucoside(PG) in the portal and jugular vein were surveyed and evaluated simultaneously. Methods A sensitive high-performance liquid chromatography coupled with tandem quadruple mass spectrometry(HPLC-MS/MS) method and sample preparation protocol were developed and validated in method of selectivity, sensitivity, precision, stability, and extraction recovery for the simultaneous determination of PDG and its primary metabolite PG in rat plasma. The double intubation technique was used to simultaneously collect blood from common jugular vein and hepatic portal vein after single ig administration of PDG. Results Using this method, the quantification linearity ranges of PDG and PG in rat plasma were both 0.05-100 ng/mL. This method was successfully applied to the evaluation of the absolute oral bioavailability of PDG and determination of the pharmacokinetic properties of PDG and PG after ig administration of single dose in rats. The bioavailability of PDG at common jugular vein was 51.3% compared to that of 91.6% at hepatic portal vein. Conclusion We conclude that liver is the major conversion site of PDG to PG.     

杜仲原生皮与再生皮中松脂醇二葡萄糖苷的含量比较

目的:为了评价杜仲再生皮质量,测定了杜仲三次再生皮中降压有效成分松脂醇二葡萄糖苷(P inores-inol d iglucoside,PDG)含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为国产YWG C18柱(46×250 mm,10μm),以甲醇-水(30∶75)为流动相,流速1.0 m l/m in,柱温为室温,检测波长为277 nm,进样量为10μl。结果:第一次剥皮后的再生皮中PDG含量略高于原生皮;第二次剥皮后的再生皮中PDG含量与剥皮前的一次再生皮相当;第三次剥皮后的再生皮中PDG含量明显低于剥皮前的二次再生皮。结论:为了保证药材质量,杜仲剥皮再生可进行两次,每次间隔时间不少于5年,第三次剥皮后的再生皮中PDG含量有待提高。     

RP-HPLC同时测定三圣汤及其固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量

目的建立同时测定三圣汤固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的高效液相色谱方法。方法采用 Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.4%冰醋酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长277 nm,柱温40℃。结果样品中松脂醇二葡萄糖苷的线性范围为5.0～50.0μg,r＝0.9999(n＝6);绿原酸的线性范围为5.4～54.0μg,r＝0.9996(n＝6)。二者的平均加样回收率分别为98.75%、101.11%,RSD分别为1.39%、2.69%。结论所建立的方法准确、可靠。三圣汤固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量高于三圣汤汤剂。     

谈人参在《伤寒论》中的应用

人参为五加科植物人参的根。最早见于《神农本草经》,列为上品,书云:“人参味甘微寒,主补五脏,安精神,定魂魄,止惊悸,除邪,明目,开心,益智。”其味甘、微苦,性微温。归脾(胃)、肺、心经。具有大补元气,补脾益肺,益气生津,宁心安神之功效。在《伤寒论》中,仲景应用人参共40次,入     

阴阳升降理论探析与启迪

通过梳理《内经》及相关医家关于阴阳升降的论述,探讨阴阳升降的内容及阴阳升降的不同内涵。从阐述人体生理变化和脏腑特点、阐述疾病的病机、解释治则治法和方药配伍应用等方面分析阴阳升降对临床的启迪作用。     

非酒精性脂肪肝诊治的问题及对策

目的探讨非酒精性脂肪肝临床治疗中有效对策。方法结合近代非酒精性脂肪肝治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治非酒精性脂肪肝。结果中西医结合防治此病有效。结论中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》虚劳病精气神调治原则与方法

从中医精气神辨识角度认识虚劳病,总结虚劳病病因病机。通过观察面容、形态、神色、五官、舌象、脉象等辨识精气神状态,确立虚劳病精气神调治原则。在精气神辨识理论指导下,对《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》相关条文、方药进行解析,总结虚劳病相关治则治法。根据精气神调养原则,为虚劳病临床应用提供指导。     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

全蝎配伍蜂房之祛风攻毒作用探析

通过梳理古本草文献中全蝎、蜂房的有关记载和现代临床对该药对的配伍应用,探讨并阐释该药对祛风攻毒增效的作用机制,认为全蝎配蜂房,药力迅捷,内走脏腑,外达肢节,透骨搜风,既可祛风通络止痛,又可攻毒散结消痈.尤其适宜于治疗风湿顽痹、痈疽恶疮、癌肿等.