胃肠安对SGC-7901胃癌上皮间质转化相关基因表达影响

目的观察胃肠安对人胃癌SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型上皮间质转化相关基因表达影响。方法人胃癌细胞SGC-7901建立裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为3组,每组10只。对照组予生理盐水0.3 ml灌胃,1次/d;胃肠安组予胃肠安煎剂0.3 ml灌胃,1次/d;5-Fu组予5-Fu 2 mg腹腔注射,1次/周。免疫组织化学法检测肿瘤组织上皮间质转化相关基因表达情况。结果胃肠安治疗后SGC-7901组织上皮标志基因E-cad表达升高,间质标记基因N-cad、vi-mentin表达降低,磷酸化p38-MAPK、磷酸化TrkA/B、以及Snail蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胃肠安可抑制SGC-7901胃癌上皮间质转化,可能抑制TrkA/B、p38-MAPK磷酸化以及下调Snail转录因子有关。     

小檗碱通过调控ELK-3抑制人肝癌细胞的上皮-间质转化

[目的] 研究小檗碱与ELK-3和人肝癌细胞的上皮-间质转化的关系及其作用机制。[方法] 将HuH7细胞分为空转组、pcDNA3.1-ELK-3组、小檗碱组和小檗碱+pcDNA3.1-ELK-3组。荧光倒置显微镜观察慢病毒转染后的细胞荧光状态;蛋白免疫印迹法（Western Blot）和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ELK-3和ELK-3靶基因重组人早期生长反应蛋白-1（EGR-1）蛋白和基因表达量,上皮-间质转化相关分子钙黏附素E和波形蛋白的基因和蛋白表达量,以及乙型转化生长因子-1（TGF-β1）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中TGFβ1、细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）、p38、磷酸化p38（p-p38）蛋白表达量;细胞划痕实验和体外Transwell小室实验观察HuH7细胞迁移和侵袭能力。[结果] 与空转组比较,小檗碱组的ELK-3、EGR-1和波形蛋白的基因和蛋白表达量显著降低（P<0.05）,钙黏附素E基因和蛋白表达量显著增加（P<0.05）,TGF-β1蛋白和p-ERK1/2/ERK1/2和p-p38/p38蛋白比值显著降低（P<0.05）,细胞迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05）,而pcDNA3.1-ELK-3组的结果与之相反。与pcDNA3.1-ELK-3组比较,小檗碱+pcDNA3.1-ELK-3组的ELK-3、EGR-1和波形蛋白的基因和蛋白表达量显著降低（P<0.05）,钙黏附素E蛋白和基因表达量显著增加（P<0.05）,TGF-β1蛋白和p-ERK1/2/ERK1/2和p-p38/p38蛋白比值显著降低（P<0.05）,并且细胞迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05）。[结论] 小檗碱可通过减少ELK-3的表达量,从而抑制人肝癌细胞的上皮-间质转化。     

小檗碱对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗碱对胃癌细胞系SGC7901的抑制作用及相关机制。方法:采用MTT的方法观察不同浓度小檗碱对SGC7901细胞的24h和48h抑制率,并计算24h和48h的50%抑制浓度(IC50)值;采用流式细胞技术检测不同浓度小檗碱作用48h后胃癌细胞系SGC7901凋亡的发生率和细胞周期的变化。结果:小檗碱对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用呈现出时间和剂量依赖性。24h和48h IC50分别为74.16、36.84μmol/L。1μmol/L至120μmol/L浓度梯度的小檗碱干预48h后,SGC7901凋亡率发生率逐渐增加。其中5、10、25、50、75、120μmol/L与对照组比较有统计学差异(P0.05),120μmol/L时凋亡发生率达到35.43%;5、25、75μmol/L浓度的小檗碱作用后,SGC7901胃癌细胞G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P0.05),而S期细胞比例则随浓度增加呈现出下降趋势,其中25、75μmol/L浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),对G2/M期细胞,各组比例变化无明显差别。结论:小檗碱对胃癌细胞系SGC7901具有时间和浓度依赖性的抑制作用,抑制作用与阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制DNA合成和诱导凋亡有关。     

苦豆碱对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨苦豆碱(aloperine, Alo)对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 体外培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)Alo干预处理,免疫细胞化学法观察三阴性乳腺癌细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;Real-time qPCR法检测三阴性乳腺癌细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)及EMT相关标志物如：E-cadherin、胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、间质细胞钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail的mRNA水平;Western blot法检测三阴性乳腺癌细胞内TGF-β1、ZO-1、Vimentin、 N-cadherin及Snail的表达;Transwell小室法检测三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结果 Alo可上调MDA-MB-231和MDA-MB-4...     

胃肠安对人胃癌SGC-7901细胞TGF-β1诱导上皮间质转化作用

目的:观察胃肠安对人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化的影响。方法:接种SGC-7901细胞贴壁后,按5μg.L-1加入转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)建立人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化模型。同时,胃肠安组按1 000 mg.L-1加入胃肠安药液,继培5 d后,显微镜观察细胞形态,Western blot检测上皮、间质标记基因E-cad,N-cad,vimentin蛋白与相关激酶蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB或AKT)、转录因子Twist,Snail蛋白表达情况。结果:较空白组,加入TGF-β1后,SGC-7901细胞发生上皮间质转化,细胞形态拉长变窄且细胞间连接更疏松,上皮标记基因E-cad蛋白相对表达量降低0.241;间质标记基因N-cad,vimentin蛋白相对表达量分别升高0.225,0.371。较模型组,胃肠安作用后,SGC-7901细胞大部仍成卵石状不典型上皮细胞形态,仅少数细胞出现间质细胞形态,上皮标记基因E-cad蛋白相对表达量升高0.210;间质标记基因N-cad,vimentin蛋白相对表达量分别降低0.119,0.124;相关通路AKT表达及磷酸化,转录因子Twist,Snail蛋白相对表达量分别降低0.248,0.085,0.402,0.382。结论:胃肠安可抑制人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化,可能与抑制AKT表达及磷酸化,下调转录因子Twist,Snail蛋白相关。     

丹参对人胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR蛋白表达的影响

目的应用蛋白质组学技术寻找丹参逆转人胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR相关蛋白分子,探讨丹参逆转胃癌多药耐药机制。方法以人胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR和丹参逆转后的SGC7901/ADR细胞为研究对象,用固相pH梯度等电聚焦二维聚丙烯酰胺电泳技术展示2种细胞表达的全蛋白,凝胶考马斯亮蓝染色,Image Master 2DMelanie 5.0图像分析软件分析并比较差异表达的蛋白分子。结果 SGC7901/ADR中检测到549个蛋白点,丹参逆转后SGC7901/ADR中检测到469个蛋白点,差异点87个,SGC7901/ADR细胞经丹参逆转后表达下调蛋白36个,上调蛋白51个。结论丹参逆转后SGC7901/ADR细胞中差异表达的蛋白质分子可能与丹参对胃癌多药耐药逆转机制相关。     

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响

用MTT法、克隆分析、流式细胞仪及免疫组织化学法 ,观察了小檗碱对人胃癌细胞株BGC 82 3增殖的影响 ,结果发现小檗碱对人胃癌细胞株BGC 82 3有抑制增殖作用 ,且与药物浓度呈正相关。其机理主要为使突变型 p5 3和 p2 1蛋白的表达下调 ,阻滞胃癌细胞进入细胞周期 ,使人胃癌细胞BGC 82 3的细胞周期阻滞于G0 /G1期。     

从细胞上皮-间质转化角度探讨从痰论治胃癌侵袭转移

胃癌原发灶侵袭和转移是导致患者生存质量下降及短期内死亡的主要原因,如何更早期更及时防治胃癌侵袭转移是目前研究的重点。研究证实细胞上皮-间质转化（EMT）是肿瘤侵袭转移的重要前提。根据前期研究中运用金龙蛇制剂从痰论治胃癌结果,从细胞上皮-间质转化角度来探讨从痰论治胃癌侵袭转移将具有明确的现实意义。     

从痰论治胃癌缺氧微环境逆转细胞上皮间质转化理论探析

肿瘤缺氧微环境能诱导肿瘤细胞上皮间质转化(EMT),进一步发生侵袭转移。中医认为,肿瘤的发生发展与"痰"关系密切。结合临床与基础研究,创新"胃癌痰证理论",进一步提出其核心观点是胃癌"痰环境"致病说,并认为胃癌的缺氧微环境可归于"痰环境"范畴,可导致"痰污染",诱使胃癌侵袭转移。因此,从"痰"入手,以消痰散结为治疗大法,清化"痰污染",从而逆转EMT,可最终抑制胃癌侵袭转移。     

南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响

目的：结合体内外实验研究南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的作用及分子机制。方法：取对数生长期HepG2细胞,除对照组外,分别给予南蛇藤提取物10、20、40、80、160 μg?mL^-1培养,采用Western Blotting法检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平;斑马鱼胚胎,于受精后48 h开始给药,正常组给予E3缓冲液,DMSO组为含1%DMSO的E3缓冲液,南蛇藤组各药物浓度分别为10、20、40、80、160 μg?mL^-1;给药24 h后,以Western Blotting法检测mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果：与对照组相比,南蛇藤提取物各浓度组明显增加E-cadherin的表达量,降低vimentin和mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结论：南蛇藤提取物能在一定程度上逆转人肝癌细胞EMT,其分子机制可能与mTOR 信号通路相关,mTOR可作为临床治疗肝癌的新靶点。     

黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡影响的研究

目的:探讨黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法:MTS法检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对胃癌细胞的抑制作用,Hoechst 33258染色检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对细胞凋亡的影响;Real Time Q-PCR检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达;Western blot检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:不同浓度的黄连素能显著降低人胃癌细胞SGC701活性(P<0.05,P<0.01),促进其凋亡,升高Cleaved Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:不同浓度的黄连素可诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与升高Cleaved Caspase-3、Bax的表达,降低Bcl-2的表达有关。     

粉防己碱对人胃癌耐药细胞锌指蛋白139、多药耐药基因表达的影响

目的探讨粉防己碱（tetrandrine,TET）对胃癌细胞及耐药细胞中锌指蛋白139（zincfingerprotein139,ZNFl39）及多药耐药（multidrugresistance,MDR）基因的影响。方法MTT法检测不同浓度（0．5、1．0、1．5、2．0、2．5闪,mL）TET对胃癌细胞SGC7901、SGC7901／ADR细胞株的抑制作用;通过RT-PCR法检测TET作用前后SGC7901／ADR细胞内ZNFl39、MRP-1、MDR1、GST-π表达情况,以Spearman相关分析检验ZNF139与各多药耐药因子之间关系并计算相关系数。结果MTT结果显示,2．0μg／mL及以下浓度TET对SGC7901、SGC7901／ADR两种细胞的抑制率均〈10％;在SGC7901／ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDRl、GST-πmRNA表达高于SGC7901细胞（均P〈0．05）;TET能抑制SGC7901／ADR细胞中ZNF139、MRP-1、MDR1、GST-πmRNA的水平（均P〈0．05）;TET作用前SGC7901／ADR细胞中ZNF139与MRP．1、MDR1存在相关关系,作用后这种相关性仍存在（均P〈0．05）。结论TET可能通过抑制ZNF139下调、MDR1、MRP1的表达从而逆转胃癌耐药细胞MDR表型。     

胃癌康对SGC-7901人胃癌细胞株酶活性影响的研究

目的：通过胃癌康方对人胃癌细胞株酶活性影响，探讨该药作用机制。方法：以人胃腺癌细胞株SGC-7901为受试对象，利用血清药理学和酶细胞化学染色法，观察胃癌康对SGC-7901人胃腺癌细胞株Mg^2＋-ATP酶和G-6-P酶的活性影响。结果：（1）Mg^2＋-ATP酶与G-6-P酶在细胞株内定位准确。（2）中药组，Mg^2＋-ATP酶和G-6-P酶的酶反应颗粒变小，数量减少，活性下降，明显低于对照组（P（0.01）。结论：胃癌康降低胃癌细胞株Mg^2＋-ATP酶和G-6-P酶的活性可能是体现其抗肿瘤作用机理之一。     

中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的观察中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法将人胃癌SGC7901细胞分为6组：空白对照组及肠胃清药物血清低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶（5-FU）组、5-FU联合肠胃清中剂量组。用MTT法观察肠胃清药物血清对SGC7901细胞增殖活性的影响;用流式细胞术检测肠胃清药物血清对细胞凋亡的影响;用Western blot检测方法测定细胞P53、Bax与Bcl-2蛋白表达水平;RT-PCR方法检测肿瘤细胞P53、Bax及Bcl-2基因表达。结果肠胃清药物血清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,同时明显抑制Bcl-2蛋白和基因的表达（P〈0.05或P〈0.01）,增强P53、Bax蛋白和基因表达水平（P〈0.05或P〈0.01）。结论中药复方肠胃清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax基因及抑制Bcl-2基因蛋白表达有关。     

三物白散对胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin基因表达的影响

目的观察三物白散药物血清对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin mRNA表达的影响。方法选择人胃癌细胞株SGC-7901,分为空白对照组、阳性对照组及三物白散低、中、高剂量组。三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,采用荧光染色法检测胃癌细胞的凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果不同剂量组的三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,与空白对照组比较,各组细胞的凋亡率升高,且细胞凋亡率随药物血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐升高;三物白散各剂量组survivin mRNA的表达均有不同程度的下降,与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,且survivin mRNA表达随三物白散含药血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐下降。结论三物白散可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,抑制survivin mRNA的表达。     

附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 凋亡及细胞周期的影响

目的：观察附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 的增殖以及凋亡的影响。方法：运用MTT 法,测定经附子生物碱处理后体外培养SGC-7901 细胞的增殖活性。分别采用Annexin-V/PI 双染法、流式细胞仪检测附子生物碱对细胞凋亡周期的影响。结果：淤附子生物碱分别作用人胃癌细胞株SGC-7901 24 h、48 h、72 h 后的IC50 为0.231 8±0.002 2、0.160 1±0.022 7、0.103 1±0.023 1 mg·mL-1,与空白对照组比较有显著性差异（P<0.01）。于当附子生物碱浓度达到0.8 mg·mL-1 时出现明显的凋亡,凋亡率为（59.38±5.05）%。盂流式细胞仪检测发现,与空白对照组相比,给药组处于S 期细胞的比例显著增多,并且G0/G1 期前出现凋亡亚二倍体峰。结论：附子生物碱体外对人胃癌细胞SGC-7901 具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,还可使SGC-7901 细胞阻滞于S 期。     

复方青龙衣胶囊对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的形态学影响

目的:研究复方青龙衣胶囊对人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的形态学影响,探讨其抑制人胃癌细胞的作用机制.方法:复方青龙衣胶囊设定3个不同药物浓度梯度(终质量浓度分别为2.0×10-3,1.0×10-3,0.5 ×10-3 g·L-1及阳性对照药羟基喜树碱(HCPT,0.5×10-3g·L-1)预处理人胃癌细胞SGC-7901 48 h,透射电镜观察其对SGC-7901细胞超微结构影响;荧光显微镜下观察其对SGC-7901细胞凋亡形态的影响.结果:以不同浓度的复方青龙衣处理人胃癌细胞SGC-7901 48 h,透射电镜结果显示,对SGC-7901细胞的超微结构有影响,提示可诱导细胞凋亡;荧光显微镜结果显示,经Hoechest33258染液染色后的SGC-7901细胞随着给药剂量的增大,凋亡细胞比例逐渐增加.结论:复方青龙衣胶囊可诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生凋亡.     

软坚散结颗粒对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用及相关机制

目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的发生发展是肿瘤转移的关键因素之一,对胃癌EMT现象的研究可能有助于控制胃癌转移。本课题旨在研究软坚散结方(RJSJ)对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用并探讨相关机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用;采用transwell方法观察RJSJ对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观测SGC-7901细胞EMT过程中锌指E盒结合同源盒蛋白1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,Zeb1),锌指E盒结合同源盒蛋白2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,Zeb2)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:(1)MTT结果显示,不同浓度RJSJ组均能有效抑制SGC-7901细胞的增殖(P0.05),RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖。(2)transwell侵袭实验结果显示,不同质量浓度RJSJ(250,500,1 000 mg·L-1)对SGC-7901细胞的穿膜能力有不同程度的抑制作用(P0.05)。(3)Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,RJSJ各组均能使E-cadherin mRNA和蛋白表达增加,Zeb1,Zeb2mRNA和蛋白表达减少,其中RJSJ高剂量组能够明显上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Zeb1,Zeb2 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:RJSJ对SGC-7901细胞有直接的抑制作用;RJSJ对SGC-7901细胞EMT有抑制作用,其机制可能与下调Zeb1,Zeb2 mRNA及蛋白表达,上调E-cadherin mRNA及蛋白表达有关。     

三物白散对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的通过体外实验观察三物白散大鼠含药血清对人胃癌SGC-7901细胞的增殖、凋亡抑制作用及其机制。方法选择雄性SPF级大鼠随机分成4组,分别予以0.035、0.07、0.14g/（kg.d）三物白散及生理盐水灌胃,按＂通法＂制备三物白散大鼠含药血清。体外实验选择SGC-7901细胞,以5-氟尿嘧啶为阳性对照,采用四甲基偶氮唑蓝比色及吖啶橙、EB染色法检测低、中、高3组三物白散大鼠含药血清对SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。结果不同剂量组的三物白散含药血清处理细胞12~72h后,各组OD比值均有不同程度的下降。且随三物白散含药血清质量浓度的增大、作用时间的延长,OD比值及存活率逐渐下降,且抑制率以高剂量三物白散含药血清作用48h为最高,可达69.2%。三物白散含药血清处理48h后的细胞中,低、中、高剂量三物白散含药血清作用SGC-7901细胞48h后各组的凋亡率依次为25%、32%、54%,并随质量浓度的升高、时间的延长而增加。高质量浓度的三物白散作用后,细胞凋亡率随作用时间的延长而增加。结论三物白散在一定剂量、时间范围内,能够抑制SGC-7901细胞增殖,并呈一定的剂量、时间依赖性。三物白散可诱导细胞凋亡,该作用呈一定的剂量、时间依赖性。