黄连素对Aβ25-35诱导的HT22细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨黄连素对β-淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein25-35,Aβ_(25-35))诱导的HT22细胞的保护作用及对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:培养HT22细胞,孵育不同浓度的黄连素(0,5,10,20,40,80μmol·L~(-1)),24 h后行甲基噻唑基四唑法确定黄连素的保护浓度。随后将HT22细胞分为空白组,Aβ组,黄连素组,TAK242组。空白组加入培养基,Aβ组加入Aβ_(25-35)(40μmol·L~(-1)),黄连素组和TAK 242组加入黄连素(20μmol·L~(-1)),TAK 242(1μmol·L~(-1))预处理1 h后加入Aβ_(25-35)(40μmol·L~(-1))。共作用24 h后行乳酸脱氢酶释放实验检测细胞生存率,并行Hoechst33342染色检测细胞凋亡率蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测TLR4,磷酸化(p)-NF-κB和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL~(-1)β)的蛋白水平。结果:与空白组比较,20μmol·L~(-1)的黄连素促进细胞增值,40μmol·L~(-1)和80μmol·L~(-1)的的黄连素抑制细胞增值(P0.01),在各药物组中,20μmol·L~(-1)的黄连素组的细胞增殖率最高(P0.01);与空白组比较,Aβ组的细胞生存率降低(P0.01),与Aβ组比较,黄连素组和TAK 242组的细胞生存率升高(P0.01);与空白组比较,Aβ组的细胞凋亡率升高(P0.01),且染色质凝集,核萎缩,凋亡小体增多,与Aβ组比较,黄连素组和TAK 242组的细胞凋亡率降低(P0.01),且染色质凝集,核萎缩和凋亡小体较少;与空白组比较,Aβ组的TLR4,p-NF-κB和TNF-α和IL~(-1)β的表达增多(P0.01),与Aβ组比较,黄连素组和TAK 242组的TLR4,p-NF-κB和TNF-α和IL~(-1)β的表达减少(P0.01)。结论:黄连素可能通过抑制HT22细胞中由Aβ_(25-35)活化的TLR4/NF-κB通路,从而减少神经元的凋亡起到保护作用。     

抵当汤调控NF-κB通路干预DM大鼠心肌炎症反应的机制

目的:探讨抵当汤及其蕴含的泻热化瘀通络法对因核转录因子-кB(NF-κB)通路激活而导致的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠心肌炎症反应的影响。方法:选取130只体重达到220~270 g清洁级SD健康雄性大鼠,分为正常组(10只)和造模组(120只),后者按55 mg·kg-1剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液建立DM模型。72 h后将造模成功的大鼠随机分为模型组,抵当汤高、中、低剂量组(1.08,0.72,0.54 g·kg~(-1)·d~(-1)),吡咯啉烷二甲基硫脲组(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC组,0.15 g·kg~(-1)·d~(-1))以及抵当-吡咯啉烷二甲基硫脲组(DP组1.08 g·kg~(-1)·d~(-1)抵当汤+0.15 g·kg~(-1)·d~(-1)PDTC),均采用相应药物1次/d进行灌胃干预。8周后,麻醉状态下腹主动脉取血处死动物,迅速摘取大鼠心脏,置于液氮中储存备用。以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织匀浆中转录NF-κB p65蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌组织匀浆肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达,免疫荧光检测心肌组织细胞黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1),巨噬细胞趋化性蛋白-1(macrophage chemotaxis protein-1,MCP-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达均明显升高;且模型组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白。与模型组比较,各治疗组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达则明显降低;组间比较发现,DP组NF-κB p65蛋白表达与正常组最接近,抵当汤高剂量组TNF-α表达则较模型组降低更加显著;各治疗组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白不同程度减少,其中DP组被染成绿色的范围最少,与正常组最为接近。结论:泻热化瘀通络之抵当汤可通过抑制NF-κB通路的激活来减轻DM模型大鼠的心肌炎症反应。     

中药单体通过NF-κB信号通路防治动脉粥样硬化研究进展

心血管疾病是当今世界上最主要的死因。动脉粥样硬化（AS）是一种动脉管壁增厚或功能退变的慢性炎症性疾病,病变后期斑块破裂发生血栓,进而引起组织或器官缺血,故也是导致各类心血管疾病发生的病理基础。核转录因子-κB（NF-κB）作为炎症反应中重要的核转录因子,被激活后可介导炎症因子的转录,能诱发AS发病或是加重病情。血管内皮细胞在炎症因子等刺激下相关机制被激活,NF-κB介导内皮细胞内相关调控基因,分泌黏附分子、趋化因子和凝血因子,促进单核细胞等选择性聚集,上调黏附分子的表达,使黏附分子黏附于细胞内皮并向内膜迁移,促进细胞外基质的降解,形成不稳定斑块等。近年来,中医药在防治AS上取得了一定成效,发现了许多中药可以抗AS,可作用于人体的多个靶点,在不同环节上影响AS发生和发展。该文章主要介绍了NF-κB通路及其与AS的关系,黄酮类、萜类和生物碱类等不同类型的75个中药单体成分在基于NF-κB通路抗AS中的研究现状,发现中药单体主要通过调节NF-κB通路起到调控胆固醇平衡、抑制炎症反应、减少细胞增殖、抑制细胞间黏附和抑制泡沫细胞形成等作用,以期为防治AS的研究提供参考。     

基于NF-κB信号通路探讨中医药治疗脓毒症的研究进展

脓毒症（sepsis）是重症医学科常见的急危重症,具有高发病率和高病死率的特点。目前,临床上针对脓毒症的治疗用药多以西药为主,长期使用存在抗生素耐药、激素不良反应和费用高昂等问题。因此,探寻新型、高效、安全、廉价的药物和治疗模式是现阶段研究的重点方向。中医药凭借其“整体观念、辨证论治、一人一方”的独特优势,在脓毒症的预防和治疗中积累了相当丰富的临床经验。近年来,中医药与脓毒症核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的研究较多。该文通过筛选相关临床研究与文献,从脓毒症的病因病机,辨证论治,发病机制,NF-κB信号通路和中医药对脓毒症的干预等方面进行系统归纳整理,研究发现一些单味中药及其提取物、中药复方和中药注射液可以通过调控NF-κB信号通路的激活,调节巨噬细胞的免疫功能,有效抑制NF-κB介导的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1（IL-1）,IL-6等炎症因子及其蛋白的表达,显著减轻全身炎症反应和各脏器损伤,改善预后。但囿于客观条件的限制,部分研究也存在促炎-抗炎平衡机制模糊、药代动力学不明及药物安全性评价较低等问题,有待进一步研究与探索,以期为中医药治疗脓毒症提供新的理论基础和诊疗思路。     

梓醇对NF-κB活化减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的影响

目的:观察梓醇对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导EA.hy926细胞炎症因子的影响,并从核因子-κB(NF-κB)的活化角度探讨其可能的作用机制。方法:将常规培养的EA.hy926细胞随机分为空白组,梓醇组(0.5 mmol·L-1),ox-LDL组(100 mg·L-1),梓醇高、低剂量组(0.5,0.05 mmol·L-1),各药物组先孵育24 h,空白组与ox-LDL组给予空白配养基孵育24 h,孵育后加入100 mg·L-1ox-LDL继续培养24 h。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;Hoechst细胞核染色检测细胞凋亡比率;Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测NF-κB的活化。结果:与空白组比较,梓醇保护组细胞损伤明显减轻,TNF-α,VCAM-1 mRNA及蛋白表达均显著降低,NF-κB活化明显受抑制,且呈剂量依赖性(P0.05)。结论:梓醇能够有效减轻ox-LDL诱导EA.hy926细胞炎症反应,保护EA.hy926细胞,其机制可能与其抑制NF-κB活化有关。     

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/核转录因子-κB抑制蛋白（IκB）信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg·kg^-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤（4.05 g·kg^-1）,血府逐瘀汤（7.02 g·kg^-1）,抵当陷胸汤（8.10 g·kg^-1）灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺（3 mg·kg^-1）灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降（P<0.01）;组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显（P<0.05,P<0.01）。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。     

白桦脂酸对脂肪变性细胞RAGE/NF-κB/iNOS信号通路表达的影响

目的:探讨白桦脂酸(BA)对脂肪变性的LO2细胞的作用。方法:以梯度浓度(0,10,20,40,80,160,250μmol·L~(-1))的BA干预LO2细胞24 h,应用噻唑蓝(MTT)比色法观察各组细胞的活力,确定BA干预终浓度。设置空白组,模型组,二甲基亚砜组(DMSO组)和BA干预组(BA组);BA组依据干预终浓度又分为低、中、高浓度3个亚组。首先以含10%Lipid Mix 1培养基培养模型组,DMSO组及BA组的LO2细胞24 h建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)离体模型,空白组以不含药培养基培养24 h。然后分别以含0.1%DMSO,20,40,80μmol·L~(-1)BA培养基干预DMSO组及BA低、中、高浓度组细胞24 h,正常组和模型组予不含药培养基继续培养24 h。干预结束后以油红O染色及尼罗红染色法观察各组细胞内脂滴沉积变化;免疫荧光法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞氧化应激相关蛋白糖基化终产物受体(RAGE),核转录因子-κB(NF-κB p65)和i NOS的表达。结果:80μmol·L~(-1)浓度以内的BA干预LO2细胞24 h对细胞无明显毒性作用。与空白组比较,模型组细胞内脂滴沉积明显增多,氧化应激相关蛋白RAGE,NF-κB p65和i NOS表达均明显增加(P0.05)。与模型组比较,DMSO组细胞内脂滴沉积与模型组相似,两组间各蛋白表达水平无明显差异;而BA组各组细胞内脂滴沉积则均明显减少,高浓度组细胞内RAGE,NF-κB p65及i NOS蛋白表达均明显减少(P0.05,P0.01)。结论:BA能显著改善LO2细胞内脂滴沉积,其机制可能通过抑制LO2细胞内氧化应激相关蛋白RAGE,NF-κB p65和i NOS的表达有关。     

五味消毒饮对脂多糖诱导大鼠肾系膜细胞NF-κB信号通路的影响

目的 观察五味消毒饮对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法 将大鼠肾系膜细胞随机分为正常组、模型组、贝那普利组（50 μmol·L^-1）、五味消毒饮高、低剂量组（2.75、0.69 g·kg^-1）。正常组、模型组、贝那普利组使用10%正常大鼠血清,五味消毒饮高、低剂量组使用10%含药血清。除正常组外,其余4组给予LPS（100 μg·L^-1）以体外干预。倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光法（IF）检测NF-κB p65的表达;噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、层粘连蛋白（LN）和纤连蛋白（FN）的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞中IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶β（p-IKKβ）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）、NF-κB p65蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组细胞增殖显著增多（P<0.01）,细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量显著增多（P<0.01）,IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA表达显著升高（P<0.01）,p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组细胞增殖明显降低（P<0.05,P<0.01）,细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量明显减少（P<0.05,P<0.01）,IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白的表达显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 五味消毒饮可减轻由LPS诱导的肾系膜细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的启动有关。     

肺肠合治法对LPS诱导急性肺损伤大鼠NF-κB炎症通路和巨噬细胞极化的影响

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的作用与保护机制。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。通过LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射成功复制ALI大鼠模型。观察与记录各组大鼠一般状态;采用肛温测量法记录各组大鼠造模后0~8 h体温数值;造模后24 h取材,收集血清与肺组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、精氨酸酶-1（Arg-1）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化核转录因子抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白的表达量;免疫荧光双标检测大鼠肺组织经典激活型（M1）巨噬细胞标记物CD80、IL-1β、巨噬细胞标记物F4/80、IL-10表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体温和热效应指数（TRI）显著升高,血清促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10水平显著升高（P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）,肺组织巨噬细胞标志物F4/80、M1巨噬细胞标志物CD80和IL-1β的表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,肺肠合治各组和地塞米松组大鼠体温与TRI指数降低（P<0.01）,血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平降低（P<0.05,P<0.01）,血清抗炎因子IL-10、Arg-1水平升高（P<0.05,P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,肺组织M1巨噬细胞标志物CD80、IL-1β表达显著降低和IL-10表达显著升高（P<0.01）,巨噬细胞标志物F4/80表达无明显变化。结论 肺肠合治方剂对ALI大鼠的发热与炎症状态有明显的改善,其机制可能与NF-κB炎症通路被抑制,肺组织巨噬细胞向抗炎表型极化有关。     

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L~(-1))和秋水仙碱组(0.2 mg·L~(-1)),除正常组外,其余各组均用400 mg·L~(-1)MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL-1β前体(Pro-IL-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0～32 mg·L~(-1)TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌水平显著升高(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达显著升高(P0.01);与模型组比较,1～30 mg·L~(-1)TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达明显降低(P0.05,P0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL-1β分泌而发挥抗炎作用。     

基于NF-κB通路的参芍胶囊保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制分析

目的:观察参芍胶囊及有效组分对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及基于核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路探讨其作用机制。方法:雄性Wistar大鼠,采用左冠状动脉前降支结扎30 min,再灌注120 min制备大鼠MIRI模型。随机分为7组,分别为假手术组(Sham),模型组(I/R),参芍胶囊250 mg·kg~(-1)组(SS250),参芍胶囊500 mg·kg~(-1)组(SS500),人参茎叶总皂苷组(TGSL),白芍浸膏粉组(Pae)及阿托伐他汀组(Ator),预灌胃7 d。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测大鼠心肌梗死面积;生化法测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH);酶联免疫吸附测定(ELISA)法测白细胞介素(IL)-1β,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10含量;蛋白质免疫印迹(Western blot)测NF-κBp65,p-NF-κBp65水平。结果:与I/R组比较,SS250组,SS500组,TGSL组,Pae组及Ator组心肌梗死面积缩小(P0.05,P0.01);SS250组,SS500组,TGSL组及Ator组血清CKMB及LDH水平明显下降(P0.05,P0.01);SS250组,SS500组和TGSL组TNF-α含量降低(P0.05,P0.01);SS250组,SS500组,Pae组和Ator组IL-1β含量明显降低(P0.05);SS250组,SS500组IL-10含量明显升高(P0.05,P0.01);SS250组和SS500组p-NF-κBp65蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:参芍胶囊对MIRI大鼠心脏具有保护作用,抑制NF-κB炎症通路的过度激活是其作用机制之一,在抑制NF-κB表达方面参芍胶囊高剂量组优于其单一有效成分。     

酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺大鼠学习记忆及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨酸枣仁汤改善睡眠剥夺诱导学习记忆障碍的作用机制。方法:将实验大鼠随机分为正常组、模型组、褪黑素组(2. 5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和酸枣仁汤组(12. 96 g·kg~(-1)·d~(-1)),除正常组外,其他各组构建慢性睡眠剥夺模型。各组连续给药28 d后,采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆力,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测大鼠海马中TLR4,NF-κB p65及核转录因子抑制蛋白α(IκBα)的m RNA表达水平,采用免疫组化(IHC)检测大鼠海马中TLR4,IκBα,p-IκBα和NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间明显增加(P 0. 01),而穿越平台次数和目标象限时间显著减少(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间减少(P 0. 05,P 0. 01),而穿越平台次数和目标象限时间增加(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠血清中TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠血清中TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平下降(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠海马中TLR4,NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平升高(P 0. 01),而IκBαm RNA及蛋白表达水平下降(P 0. 01)。与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中TLR4,NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平降低(P 0. 05,P 0. 01),而IκBαm RNA及蛋白表达水平升高(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠海马中p-IκBα的蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中IκBα的蛋白表达水平升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:酸枣仁汤具有改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的作用,其机制可能与其抑制海马中TLR4/NF-κB信号通路相关。     

黄芩苷对HT-29细胞炎症模型PI3K/NF-κB信号通路的影响及机制探讨

目的:观察黄芩苷对人结肠癌上皮细胞株HT~(-2)9的炎症模型中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,并探讨其机制。方法:以肿瘤坏死因子(TNF)-α及脂多糖(LPS)共同诱导HT~(-2)9细胞,建立细胞炎症模型。实验分为6组,空白组加入完全培养基孵育,实验过程中不予任何药物干预,模型组给予h TNF(20μg·L~(~(-1)))黄芩苷孵育12 h后,再给LPS(1 mg·L~(~(-1)))孵育15 h;柳氮磺胺吡啶组在模型组的基础上,加入柳氮磺胺吡啶(SASP,500μmol·L~(~(-1)));黄芩苷组在模型组基础上给予不同剂量(1,10,100μg·L~(~(-1)))黄芩苷孵育24 h。噻唑蓝(MTT)法检测黄芩苷(1,10,100μg·L~(~(-1)))对细胞生长的影响;免疫印迹(Western blot)法检测黄芩苷(1,10,100μg·L~(~(-1)))对PI3K,Akt,NF-κB等蛋白表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测黄芩苷(1,10,100μg·L~(~(-1)))对细胞上清中TNF-α,白细胞介素(IL)-6等含量的影响。结果:与模型组比较,黄芩苷组、柳氮磺胺吡啶组的细胞上清液中TNF-α,IL-6,IL-8,IL~(~(-1))分泌量明显减少(P0.05),且两药联合应用对TNF-α,IL-6,IL-8,IL~(~(-1))分泌量的减弱效应更强(P0.01)。与模型组比较,黄芩苷组(1,10,100μg·L~(~(-1))),柳氮磺胺吡啶组(500μmol·L~(~(-1)))中的PI3K蛋白磷酸化水平,Akt磷酸化水平,NF-κB活化入核水平,环氧化酶~(-2)(Cox~(-2))蛋白,β-连环蛋白(β-catenin)蛋白,天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)蛋白,人凋亡相关因子配体(Fas L)蛋白表达均明显减少(P0.05)。结论:黄芩苷能减轻HT~(-2)9细胞炎症反应,抑制PI3K磷酸化,下调Akt的活化,抑制NF-κB的活化入核,从而抑制TNF-α,IL-6等炎症因子的分泌,发挥其抗炎效应,提示黄芩苷可能通过以抑制Akt的活化,抑制NF-κB的核转位,发挥其抗炎作用。     

基于NF-κB炎症通路探讨五味消毒饮对IgA肾病大鼠的抗炎机制

目的 观察五味消毒饮对免疫球蛋白（Ig）A肾病（IgAN）大鼠核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,并探讨其治疗IgA肾病的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组,模型组,贝那普利组（10 mg·kg·d^-1）,五味消毒饮组（2.75 g·kg·d^-1）,每组10只。采用牛血清白蛋白（BSA）灌胃,四氯化碳（CCl₄）皮下注射以及脂多糖（LPS）尾静脉注射方法共9周建立IgAN大鼠模型,各组给予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药28 d。检测大鼠24 h尿蛋白（UTP）,血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,血清白蛋白（ALB）水平,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）的含量,苏木素-伊红（HE）染色,免疫荧光及透射电镜观察肾脏病理改变,免疫组化法（IHC）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测肾组织中IL-6,IκB激酶β（IKKβ）,磷酸化IκB激酶β（p-IKKβ）,NF-κB抑制蛋白α（IκBα）,磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）,NF-κB p65,磷酸化NF-κB p65（p-p65）的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高（P<0.01）,肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,系膜增厚,电子致密物沉积增多,大量IgA沉积于肾小球系膜区并呈现不规则颗粒及团块状分布;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著升高（P<0.01）;肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ、IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平显著降低（P<0.01）,肾组织损伤情况均有所减轻;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著降低（P<0.01）;肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著降低（P<0.01）。各组间SCr,BUN,血清白蛋白相比无明显差异。结论 五味消毒饮可降低IgAN大鼠的蛋白尿,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路及其相关炎症因子的过度表达有关。     

泽漆醇提物对LPS诱导小鼠急性肺损伤及其炎症信号通路MAPK/NF-κB的影响

目的:研究泽漆醇提物对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤小鼠的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法:50只雄性BALB/c小鼠按体质量随机分为正常组,模型组,地塞米松组(1.5 mg·kg-1)及泽漆醇提物高、低剂量组(7.5,3.75 g·kg-1)。除正常组外,其余各组采用鼻腔内滴入LPS建立小鼠急性肺损伤模型。利用全自动血液分析仪以及瑞氏-姬姆萨复合染色法检测并观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞种类及数量;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织损伤情况;流式细胞仪检测BALF中炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定核转录因子-κB(NF-κB)通路中NF-κB p65,NF-κB抑制蛋白α(IκBα),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38,细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)及其磷酸化蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺组织出现明显损伤,其中大量炎性细胞浸润,且肺泡完整性被破坏。BALF中炎性因子TNF-α,IL-6及肺组织NF-κB p65,JNK,p38,ERK1/2磷酸化蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,泽漆醇提物高剂量组及地塞米松阳性药组小鼠肺组织病理损伤明显缓解,BALF中TNF-α,IL-6含量及肺组织NF-κB p65,JNK,p38,ERK1/2磷酸化蛋白表达水平显著下调(P0.01)。结论:泽漆醇提取物对LPS诱导小鼠急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与调控MAPK/NF-κB信号通路有关。     

基于TLR4/NF-κB通路探讨蛤蚧提取物对利血平诱导抑郁大鼠神经炎症的影响

目的 观察蛤蚧提取物的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法 腹腔注射利血平（0.5 mg·kg^-1）诱导大鼠抑郁模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）,蛤蚧提取物高、低剂量组（12,6 g·kg^-1）,分别给予相应剂量药物,1次/d,连续给药10 d。给药结束后,通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清和前额皮层中神经递质及炎症因子的水平;通过苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织中细胞的变化情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）,核转录因子-κB（NF-κB）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的水平;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中Toll样受体4（TLR4）,NF-κB蛋白水平。结果 与正常组比较,蛤蚧提取物能明显缩短大鼠的悬尾不动时间和游泳不动时间;与模型组比较,蛤蚧提取物能明显减少大鼠眼睑下垂现象和圈内保留时间（P<0.05）;升高血清中5-羟色胺（5-HT）,多巴胺（DA）的水平（P<0.05）,降低血清和前额皮层中MAO,IL-6,TNF-α的水平（P<0.05）;降低大鼠海马组织中炎症因子IL-6,NF-κB,TNF-α mRNA的水平以及TLR4,NF-κB蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）;改善大鼠海马组织的病理症状。结论 蛤蚧提取物通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低大鼠海马组织中NF-κB,IL-6等炎症因子的表达,减轻抑郁病理损伤,从而减轻抑郁症状。     

基于NF-κB信号通路探讨苓桂术甘汤对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎保护作用

目的 观察苓桂术甘汤对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）模型小鼠的疗效及相关作用机制。方法 将72只7周龄SPF级C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg^-1）、苓桂术甘汤高、中、低剂量组（9.36、4.68、2.34 g·kg^-1）,每组12只。除正常组外,其余各组采用鼻滴法予LPS（50 μg/只）构建小鼠ALI模型。给药组分别在造模前连续灌胃给药7 d。造模后12 h取小鼠肺组织,测定双肺湿/干质量比（W/D）;苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理形态学变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）采用细胞计数仪计算总细胞数,瑞氏吉姆萨染色检测炎性细胞的分类（中性粒细胞、巨噬细胞）与数量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）炎症通路中NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65及二者磷酸化蛋白的表达,并计算磷酸化蛋白/总蛋白比值。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织严重损伤,肺泡完整结构被破坏,肺泡壁增厚,大量炎性细胞与红细胞浸润,肺水肿显著加重（P<0.01）。BALF中总细胞与炎性细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著上调（P<0.01）;与模型组比较,苓桂术甘汤高、中、低剂量组与地塞米松组小鼠肺损伤明显缓解,肺水肿显著减轻（P<0.01）。BALF中总细胞与中性粒细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著下调（P<0.01）,巨噬细胞数量明显减少（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤对LPS-ALI小鼠具有抗炎保护作用,能有效减轻炎症、利水消肿,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。     

黄连解毒汤对Aβ1-42诱导AD大鼠学习记忆能力及胆碱能系统的影响

目的 探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白（Aβ）_1-42诱导阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力和胆碱能系统的影响。方法 选用60只雄性SD大鼠,分为正常组,模型组,石杉碱甲组（2.1×10^-5 g·kg^-1）,黄连解毒汤高、中、低剂量组（6,3,1.5 g·kg^-1）。运用Aβ_1-42海马注射复制AD大鼠模型,术后连续灌胃治疗4周,进行Morris水迷宫实验。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马病理改变,腹主动脉取血,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清、海马中乙酰胆碱（ACh）,乙酰胆碱酯酶（AchE）,胆碱乙酰转移酶（ChAT）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测海马α7nAChR mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组动物脑组织皮质区神经元坏死、海马区锥体细胞或颗粒细胞坏死、排列紊乱和炎性细胞浸润等病理改变明显,大鼠逃避潜伏期延长、逃逸平台次数降低、有效区域停留时间、有效区域游泳路径均减少（P<0.05,P<0.01）,血清中ACh,ChAT浓度降低（P<0.01）,海马中ACh,AchE,ChAT含量,α7nAChR蛋白,α7nAChR mRNA表达降低（P<0.01）;与模型组比较,黄连解毒汤中剂量组逃避潜伏期变短（P<0.05）,逃逸平台次数、有效区域游泳路径、有效区域停留时间增加（P<0.05,P<0.01）,血清ACh,ChAT含量和海马AchE,ChAT,α7nAChR mRNA表达上升（P<0.05）,海马α7nAChR蛋白表达升高明显（P<0.01）;高剂量组有效区域有效区域停留时间延长（P<0.01）;逃逸平台次数增加,血清ACh,ChAT含量和海马ACh,AchE,α7nAChR蛋白,α7nAChR mRNA表达上升（P<0.05）。结论 黄连解毒汤可显著改善Aβ_1-42诱导AD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与改善Aβ_1-42所导致的胆碱能系统损伤,增强胆碱能系统功能有关。     

乌梅丸对2型糖尿病模型大鼠NF-κB p65及GLP-1的影响

目的:研究乌梅丸对2型糖尿病模型大鼠血糖及其核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)蛋白表达的影响。方法:将60只大鼠随机选取10只为正常组,余50只以高糖高脂乳剂灌胃8周后联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导2型糖尿病模型,剔除造模未成功大鼠,纳入30只糖尿病模型大鼠,随机平均分成模型组、二甲双胍组、乌梅丸组。正常组和模型组分别灌胃(ig)生理盐水20 m L·kg~(-1)·d~(-1),二甲双胍组ig二甲双胍200 mg·kg~(-1)·d~(-1),乌梅丸组ig乌梅丸生药20 g·kg~(-1)·d~(-1),28 d后监测大鼠血糖,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织NF-κB p65,GLP-1蛋白表达,免疫组化法检测胰腺组织NF-κB p65,GLP-1蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖明显升高,结肠和胰腺组织NF-κB p65蛋白表达量明显上升(P0.01),GLP-1蛋白表达量下降(P0.05);与模型组比较,乌梅丸组空腹血糖均明显降低(P0.01),结肠和胰腺组织NF-κB p65蛋白表达量明显降低(P0.01),GLP-1蛋白表达量明显上升(P0.01)。结论:乌梅丸可以通过调节2型糖尿病模型大鼠空腹血糖,降低NF-κB的表达,上调GLP-1的表达,从而达到防治2型糖尿病的作用。     

基于NF-κB/NLRP3通路探究十大功劳叶提取物对抑郁症大鼠炎症的影响及机制

目的 研究十大功劳叶提取物的抗抑郁作用及其潜在机制。方法 经HPLC-MS/MS手段鉴定分离十大功劳叶提取物主要化学成分。通过小鼠行为绝望实验初步探究十大功劳叶提取物的潜在抗抑郁作用,将小鼠随机分为空白组、氟西汀组（10 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,连续灌胃给药12 d,于末次给药1 h后,测定小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间。进而采用利血平（0.5 mg·kg^-1）腹腔注射诱导大鼠抑郁模型探究其抗抑郁作用机制,分组如下,分别为正常组、模型组、氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,每天灌胃给药1次,连续10 d,末次给药1 h后,做行为学检查;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;免疫组化法测定大鼠脑组织中IL-6和IL-1β蛋白的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中核转录因子-κB（NF-κB）和NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白的表达。结果 从十大功劳叶提取物中分离鉴定得到7种化学成分,主要为生物碱。小鼠行为绝望实验结果显示,与空白组比较,十大功劳叶提取物高剂量组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）。大鼠抑郁实验结果显示,与正常组比较,模型组中大鼠上睑下垂现象明显增加（P<0.05）,圈内保留时间显著延长（P<0.01）;大鼠血清中IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.05）;大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率显著升高（P<0.01）;大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,十大功劳叶提取物高剂量明显缩短大鼠在圈内保留时间（P<0.05）,降低大鼠血清中IL-6、TNF-α水平（P<0.05,P<0.01）,降低大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率（P<0.01）;降低大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 十大功劳叶提取物具有明显的抗抑郁作用,且能改善利血平诱导的抑郁大鼠炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。