消癌解毒方对H22荷瘤小鼠血管生成相关因子的影响

目的 探讨消癌解毒方对H22荷瘤小鼠移植瘤血管生成相关因子及蛋白的影响。方法 建立H22荷瘤小鼠腹水瘤株体内移植肿瘤模型,空白组每日生理盐水灌胃,消癌解毒方低、中、高剂量组每日10,30,90 g?kg _-1灌胃,顺铂组每日1 g?kg _-1腹腔注射给药,连续给药10 d,记录瘤体体积及移植鼠体重。给药结束,取瘤体组织,称重,计算各给药组的肿瘤抑制率;通过肿瘤组织的全基因组表达谱芯片,Elisa、qRT-PCR、Western-blot观察各给药组对移植瘤的血管生成因子及相关基因STAT1、VEGF、MMP2、TGF-β、CXCL2的影响。结果 与空白组比较,顺铂组及消癌解毒方低、中、高剂量组移植瘤小鼠瘤体重量显著降低（P < 0.05）,VEGF、MMP2、TGF-β、CXCL2细胞因子水平显著降低（P < 0.05）;qPCR、western-blot实验结果表明,与空白组比较,消癌解毒方各剂量组STAT1基因及蛋白表达能够显著升高,VEGF、MMP2、TGF-β、CXCL2基因、蛋白的表达显著下降,差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论 消癌解毒方能够有效抑制H22荷瘤小鼠移植瘤生长,其中抑制肿瘤血管新生是其可能的作用机制之一。     

消癌解毒方对H22瘤荷小鼠 miRNAs表达谱的影响

目的通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织微小核糖核酸(miRNAs)表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肝癌的作用机制。方法将50只H22荷瘤小鼠随机分为模型组,消癌解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组和顺铂组,每组10只。应用病理组织学技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织光镜下的差异表现。应用miRNA芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达miRNAs。应用统计学方法分析,找出与消癌解毒方作用机制相关的差异miRNAs。结果病理组织学检查结果显示,随着消癌解毒方剂量的增加,病理性核分裂像减少,癌细胞减小,抗癌效果增强。根据miRNA芯片的分析结果,消癌解毒方对H22瘤荷小鼠肿瘤组织内一些特异miRNAs如miR-1298-5p、miR-874-3p、miR-721、miR-298-5 p、miR-551 b-5 p、miR-346-5 p、miR-105表达显著上调;miR-24-3 p、miR-3963、miR-127-3 p、miR-434-5 p、miR-1187、miR-468-3 p、miR-221-5 p、miR-6695-5 p表达显著下调。结论消癌解毒方可能通过调控多种miRNAs的表达来发挥其抗肿瘤的作用。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠基因表达谱的影响

目的 通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肿瘤的作用机制。方法 H22荷瘤小鼠随机分为空白对照组,消癌解毒方低、中、高剂量组和顺铂组。应用基因芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织的差异表达基因;应用pathway分析,找出与消癌解毒方抗癌机制相关的信号通路和基因,并针对趋化因子信号通路进行分析。结果 消癌解毒方能显著影响多个与肿瘤生长、凋亡和免疫相关的信号通路,并能下调趋化因子信号通路中CCL3、CXCL2等基因的表达。结论 消癌解毒方可能通过影响趋化因子信号通路中的某些基因的表达来发挥抗肿瘤生长和侵袭的作用。     

消癌解毒方体内抑瘤作用机制研究

目的:探讨消癌解毒方体内抗肿瘤作用的可能机制。方法:对荷瘤小鼠(H22肿瘤细胞株)用消癌解毒方煎剂剂量灌胃,观察光镜及电镜下肿瘤组织、细胞的形态,测定基质金属蛋白酶(MMP-2)含量。结果:消癌解毒方中剂量组凋亡细胞数量最大,并且所有消癌解毒方组中凋亡细胞除出现凋亡细胞一般的形态学改变,胞浆中可见大量吞饮空泡;消癌解毒方低剂量组外周血MMP-2水平显著降低(P<0.05),有统计学意义。结论:消癌解毒方对肿瘤抑制作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡,抑制MMP-2活性有关。     

扶正消瘤方对H_(22)荷瘤小鼠抑癌及其化疗减毒作用

目的考察扶正消瘤方(人参、黄芪、猪苓等)抗肝癌作用及其减轻环磷酰胺引起的毒性。方法 ICR小鼠采用右前肢皮下接种造H_(22)荷瘤模型,灌胃给予扶正消瘤方后,检测生命延长率、瘤重、抑瘤率、T淋巴细胞增殖率、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。H_(22)荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺(50 mg/kg),测定扶正消瘤方给药后血液学指标、血清溶血素水平及抗体形成细胞数。结果扶正消瘤方可明显抑制肿瘤生长,升高血清SOD活性,减少MDA水平,促进T淋巴细胞增殖。而且,它还能拮抗环磷酰胺引起的白细胞及血小板数量下降,并升高抗体形成细胞数。结论扶正消瘤方具有良好的抗肝癌作用,并能减轻化疗所致的毒性,可能与增强机体抗氧化和免疫能力有关。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠外周血清转化生长因子β1的影响

目的:观察周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药——消癌解毒方的抗肿瘤作用机理。方法:将ICR小鼠60只随机分为空白组,模型组(生理盐水灌胃),消癌解毒方低、中、高剂量组(灌胃),顺铂组(腹腔注射),每组10只。除空白组外,其余5组均于小鼠右腋皮下接种传代培养的H22细胞。用药10天后,眼眶取血测定小鼠外周血清转化生长因子β1(TGF—β1)水平。结果:与模型组相比,空白组,消癌解毒方中、高剂量组,顺铂组外周血清TGF-β1水平显著降低(P<0.05或P<0.01);中药高剂量组和顺铂组外周血清TGF-β1水平无统计学差异(P>0.05)。结论:消癌解毒方能降低H22荷瘤小鼠外周血清TGF—β1的水平,这可能是该方发挥抗癌作用的途径之一。     

消癌解毒方抑制H22小鼠肿瘤生长及促凋亡的实验研究

观察国医大师周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药-消癌解毒方对H22小鼠肿瘤生长及细胞凋亡的影响,初步分析该方抗癌机理。方法:建立H22小鼠模型,分模型组,消癌解毒中药(高、中、低剂量)组,西药(顺铂)对照组,分别检测各组抑瘤率;流式细胞仪检测各组肿瘤细胞凋亡率;ELISA法检测各组外周血IL-6的表达。结果:与模型组比较,消癌解毒方各组、顺铂组能明显抑制实体瘤重、促进肿瘤细胞凋亡、显著降低血清IL-6水平(P<0.05,P<0.01),中药中剂量组与西药组比较无统计学意义。结论:消癌解毒方能抑制H22小鼠实体瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,抑制IL-6的产生和表达可能是其抗癌作用机制之一。     

解毒颗粒对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用的研究

目的:观察解毒颗粒对小鼠H22皮下移植瘤的抑制作用。方法:建立H22皮下瘤小鼠模型,随机分为解毒颗粒低剂量组(JL)、解毒颗粒高剂量组(JH)、索拉非尼组(SF)、生理盐水组(NS),造模1天后开始给药,连续14天,第15天每组处死6只小鼠,观察小鼠实体瘤、肝脏、肾脏组织病理形态的变化,记录给药后第21天各组小鼠的生存率。结果:与生理盐水组相比,3种治疗方案均有一定的抑瘤作用,其中解毒颗粒低剂量组和高剂量组抑瘤效果较好,并在第21天的生存率较高。解毒颗粒高剂量组和索拉非尼组均出现了肿瘤坏死程度上升,肿瘤细胞密度下降,肿瘤细胞异型性下降,核分裂像计数下降的现象(P0.01),且在肿瘤细胞密度评分和肿瘤细胞异型性方面,解毒颗粒高剂量组效果优于低剂量组(P0.05)。结论:解毒颗粒在肝癌小鼠移植瘤模型体内具有一定抗肿瘤效果,本研究为今后解毒颗粒的临床推广提供了一定的实验基础。     

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。     

消癌解毒方抗肿瘤作用的实验研究

目的 观察周仲瑛教授"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药--消癌解毒方的抗肿瘤作用.方法 采用体内试验以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为实验指标评价消癌解毒方对S_(180)移植性肉瘤的抑制作用;以荷瘤小鼠存活时间为实验指标评价消癌解毒方对H_(22)移植性腹水癌的抑制作用.结果 消癌解毒方能明显抑制实体瘤重,并延长荷瘤小鼠存活时间.结论消癌解毒方对S_(180)、H_(22)诱发的移植性肿瘤具有一定的抑制作用.     

消癌解毒方联合顺铂通过调控组蛋白去甲基化酶抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长

目的:观察消癌解毒方联合顺铂抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长的作用及机制。方法:BALB/c小鼠皮下接种4T1乳腺癌细胞形成荷瘤模型,分别单独给予顺铂(2 mg·kg-1)、消癌解毒方(1×104mg·kg-1)及两者联合用药进行治疗,给药期间称量并记录小鼠体质量和瘤体积,15 d后脱颈处死,剥离并称量瘤块质量,计算抑瘤率,苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肾和瘤块的病理情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察肿瘤细胞凋亡情况并统计凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),组蛋白去甲基化酶1(LSD1),组蛋白H3(Histone H3),组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(Histone H3K4me2),组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(Histone H3K9me2)的表达水平。结果:与模型组相比,顺铂给药组小鼠体质量均有下降,其中消癌解毒方+顺铂组较单用顺铂组体质量增加(P0.01);消癌解毒方+顺铂较单用顺铂更能缩小移植瘤体积,提高抑瘤率(P0.01);更明显提高了肿瘤细胞凋亡率(P0.05,P0.01);更明显下调肿瘤组织Bcl-2表达水平,上调Bax表达水平(P0.05,P0.01);各给药组均能下调LSD1蛋白的表达,增加组蛋白H3K4,H3K9的二甲基化,消癌解毒方+顺铂组作用最为明显(P0.05,P0.01)。结论:消癌解毒方+顺铂用药对于4T1荷瘤小鼠抑瘤作用明显,其机制可能与下调组蛋白去甲基化酶水平有关。     

理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶对H22荷瘤小鼠移植瘤上皮间质转化的影响

目的:探讨理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对H22荷瘤小鼠皮下移植瘤上皮间质转化(EMT)的影响。方法:构建小鼠移植性肝癌模型。成瘤后,将其随机分为空白组,5-FU组(5-FU,2. 5 mg·kg-1),理冲汤加减联合5-FU组(5-FU+理冲汤加减组),理冲汤加减组(理冲汤加减25 g·kg-1),每组10只。观察理冲汤加减对小鼠皮下移植瘤的作用及与5-FU合用的效果;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组瘤体中EMT相关基因上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),锌指转录因子Snail,Twist mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组瘤体内EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Snail,波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:5-FU组,5-FU+理冲汤加减组,理冲汤加减组的抑瘤率分别为59. 18%,84. 42%,10. 39%,均能抑制肝癌移植瘤的生长,且5-FU+理冲汤加减组抑瘤率显著高于5-FU组(P 0. 01)。胸腺指数、脾指数显示,5-FU+理冲汤加减组胸腺指数与脾指数均高于5-FU组(P 0. 05,P 0. 01)。PCR显示,与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Twist的表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Twist的表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。Western blot显示,与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组,理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin的表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin的表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:理冲汤加减与5-FU单独和联合使用均对肝癌小鼠移植瘤的生长有抑制作用,且两药合用能增强化疗效果,且一定程度上抑制了5-FU的毒性,其机制可能与对肝癌EMT的抑制有关。     

加味八珍汤对S180荷瘤小鼠的免疫抑瘤作用

目的：研究加味八珍汤对S180荷瘤小鼠的免疫抑制作用。方法：以S180荷瘤小鼠为模型，系统地观察加味八珍汤对瘤重和脾细胞免疫功能的影响。结果：加味八珍汤对S180荷瘤小鼠的平均抑瘤率最高达45．9%，且剂量依赖性地抑制瘤重，明显促进NK活性和IL-2分泌，增强腹腔巨噬细胞吞噬能力。结论：加味八珍汤增强荷瘤小鼠细胞免疫功能是其抑制肿瘤效应的机制。     

化积止痛巴布剂穴位贴敷配合益气化积方内服对H22荷瘤小鼠镇痛作用的影响

目的观察化积止痛巴布剂穴贴配合益气化积方内服对H22荷瘤小鼠镇痛作用的影响,探讨其作用机理。方法昆明种雌性小鼠50只,随机分为空白组、模型组、药物组、穴贴组、药物加穴贴组。空白组灌服生理盐水并穴贴无药涂膏,不接种瘤株;其余各组接种瘤株后,模型组灌服生理盐水并穴贴无药涂膏;药物组灌服中药益气化积方并穴贴无药涂膏;穴贴组灌服生理盐水并穴贴化积止痛巴布剂;药物加穴贴组灌服中药益气化积方并穴贴化积止痛巴布剂;连续用药14d。末次用药后30min,测定小鼠痛阈值,并计算痛阈提高百分率。结果药物加穴贴组、药物组及穴贴组能够不同程度提高小鼠的痛阈值和痛阈提高百分率,其中药物加穴贴组及药物组的痛阈与空白组和给药前的痛阈比较均具有明显变化（P〈0．01）。结论化积止痛巴布剂穴贴配合益气化积方内服能增加H22荷瘤小鼠的痛阈值及提高痛阈百分率。     

复方乌梅散对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用和生存期影响的研究

目的:观察复方乌梅散对小鼠移植性肝癌H22实体瘤抑制作用及生存期的影响。方法:(1)抑瘤作用观察:小鼠接种H22腹水瘤后,造成移植性小鼠肝癌模型。随机分为阴性对照组(NS组)、阳性对照组(5-FU组)、复方乌梅散水提液组、复方乌梅散醇提液组、复方乌梅散超微粉碎组,分别观察荷瘤小鼠的抑瘤率。(2)生存期观察:造模方法同前,随机分为阴性对照组(NS组)、阳性对照组(5-FU组)、复方乌梅散超微粉碎组,观察其对荷瘤小鼠生命延长率的影响。结果:(1)复方乌梅散水提液组、复方乌梅散醇提液组、复方乌梅散超微粉碎组肿瘤抑制率分别为:27.08%(P<0.05)、33.05%(P<0.05)、34.44%(P<0.05)。(2)复方乌梅散超微粉碎组生命延长时间为27.6%(P<0.05)。结论:复方乌梅散醇提液组、复方乌梅散超微粉碎组可抑制肿瘤生长,复方乌梅散超微粉碎组可有效延长小鼠生存期。     

益气解毒消癌方联合化疗治疗晚期转移性结直肠癌脾虚瘀毒证的临床观察

目的:观察晚期转移性结直肠癌(AMCC)脾虚瘀毒证患者应用益气解毒消癌方联合化疗治疗的临床疗效及不良反应。方法:筛选2013年1月至2015年6月宜兴市中医医院收治的AMCC脾虚瘀毒证患者62例,分层随机分为两组,对照组采用四君子汤联合伊立替康-亚叶酸钙-氟尿嘧啶(FOLFIRI)方案化疗,观察组采用益气解毒消癌方煎剂口服联合FOLFIRI化疗治疗,分别随访两组临床疗效、无进展生存期、中位总生存时间、肿瘤标志物、生活质量、不良反应,并比较两组患者的疗效差别。结果:治疗后,观察组疾病控制率(80.65%)高于对照组(54.84%)(P0.05);观察组中位无进展生存期、中位总生存时间分别为11.51,25.54个月,均高于对照组的8.77,20.75个月(P0.01)。在对两组患者中30例肝转移患者随访中,观察组15例患者疾病控制率分别为82.25%,高于对照组15例患者的46.77%(P0.05)。治疗后,观察组肿瘤标志物CEA,CA199水平低于对照组(P0.05,P0.01)。观察组生活质量改善水平明显优于对照组(P0.05),不良反应发生率低于对照组(P0.05),其他指标组间比较差异无统计学差异。结论:AMCC脾虚瘀毒证患者应用益气解毒消癌方联合化疗治疗可其增加肝转移患者的疾病控制率,延长生存期,减轻化疗带来的不良反应、降低血液肿瘤标志物、提高生活质量。     

合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响

目的:观察合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群、细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,凋亡诱导因子(Fas),凋亡诱导因子配体(Fas L)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响,探讨其对细胞免疫功能的干预机制。方法:昆明种小鼠60只随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、合欢皮总皂苷高、中、低剂量组,建立小鼠H22荷瘤模型。给药组分别按环磷酰胺20 mg·kg-1·d-1,合欢皮总皂苷4,2,1 mg·kg-1·d-1ip,连续治疗11 d后,检测抑瘤率,血清IL-2,TNF-α水平,免疫组化染色检测肿瘤细胞Fas,Fas L和PCNA蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态。结果:与模型组比较,合欢皮总皂苷高、中、低剂量组小鼠移植瘤的平均质量均显著下降(P0.05,P0.01),合欢皮总皂苷中剂量组能明显提高CD4+T细胞,CD8+T细胞数量(P0.05,P0.01),对CD4+/CD8+无影响,合欢皮总皂苷中、高剂量组IL-2水平明显上升(P0.05),TNF-α水平无变化,合欢皮总皂苷各剂量组Fas L,PCNA蛋白表达显著降低(P0.01),中、高剂量组Fas表达水平显著升高(P0.01)。结论:合欢皮总皂苷能够调节细胞免疫功能,其机制可能与其上调CD4+,CD8+T细胞亚群,促进IL-2分泌,提高Fas蛋白表达并抑制Fas L,PCNA蛋白表达有关。