miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用机制

目的:探讨miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用。方法:采用qRT-PCR检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中miR-567表达。Panc-1细胞转染miR-567过表达慢病毒载体后,分别用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、qRT-PCR、Western blot法检测细胞增殖、凋亡及迁移能力,以及KPNA4 mRNA与蛋白的表达、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:miR-567在胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中的表达水平均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);miR-567慢病毒转染Panc-1细胞后,增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加,划痕愈合率明显降低、KPNA4 mRNA与蛋白表达明显下调、而caspase-3及Bax蛋白表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-567在胰腺癌细胞中表达降低,升高其表达可抑制胰腺癌细胞的生长与迁移能力,其机制可能与下调KPNA4并上调凋亡相关蛋白表达有关。     

miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及其作用

目的:探讨miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR检测miR-519d在胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、Capan-2、Panc-1及正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。将Panc-1细胞分别转染miR-519d过表达质粒(miR-519d组)与阴性对照质粒(阴性对照组),以无处理的Panc-1细胞为空白对照组,用MTT法、Transwell实验、Western blot分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力、凋亡情况以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:各胰腺癌细胞系中miR-519d相对表达量均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);与空白对照组比较,miR-519d组细胞增殖能力降低(培养72 h后明显降低)、凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱、XIAP蛋白表达量明显降低(均P0.05);阴性对照组各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-519d在胰腺癌细胞中表达下调,miR-519d表达下调有增强胰腺癌细胞增殖和侵袭能力、降低凋亡的作用,该作用可能与其调节XIAP蛋白的表达有关。     

长链非编码RNA HOST2对胰腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOST2对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测正常胰腺上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、BxPC-3、HPAC中lncRNAHOST2表达水平。将Panc-1细胞分别转染siRNA-HOST2(si-HOST2组)和阴性对照序列(阴性对照组)后,用MTT法测定细胞增殖,细胞划痕和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,Westernblot测定上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、Snail、Twist的表达。以无转染的Panc-1细胞为空白对照组。结果:与正常胰腺上皮细胞HPDE6-C7相比,lncRNAHOST2在各胰腺癌细胞系中的表达均明显上调(均P0.05)。与空白对照组比较,si-HOST2组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱,vimentin、Twist1、Snail蛋白相对表达量均明显下调(均P0.05),而阴性对照组上述指标均无明显变化(均P0.05)。结论:lncRNAHOST2在胰腺癌细胞中高表达,且与胰腺癌增殖、迁移和侵袭密切相关,其机制可能与调节EMT相关蛋白的表达有关。     

长链非编码RNA XIST在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNAXIST在胰腺癌组织中的表达及其作用。方法:实时定量PCR检测56对胰腺癌及癌旁正常胰腺组织标本中XIST的表达,以及XIST在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)及7种胰腺癌细胞系(sPC-3、Bx PC-3、Capan-1、CFPAC-1、Hs766T、Panc-1、SW1990)中的表达,分析XIST表达与胰腺癌患者临床病理因素的关系;在XISTsi RNA干扰XIST高表达的胰腺癌细胞后,分别用MTT法和Brd U实验检测细胞的活力和增殖情况,Westernblot检测细胞中Ki-67、PCNA的蛋白的表达。结果:胰腺癌组织中XIST的表达量明显高于癌旁正常胰腺组织(2.452vs.0.9729,P0.001),且XIST高表达与胰腺癌患者的肿瘤分期(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.032)有关。7种胰腺癌细胞系中XIST的表达量均明显高于HPDE细胞(均P0.05),其中SW1990细胞XIST表达量约为HPDE细胞的2.5倍。XISTsi RNA干扰SW1990细胞48h后,与未处理的SW1990细胞比较,细胞的活力(0.812vs.1.215)和增殖能力(0.708vs.1.007)均明显降低,Ki-67(0.467vs.1.027)与PCNA(0.600vs.0.997)的表达均明显下调(均P0.05)。结论:XIST在胰腺癌组织中表达升高,其高表达能促进胰腺癌细胞的生长,机制可能与其上调Ki-67、PCNA表达有关。     

罗格列酮对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用及其机制。 方法 MTT法检测罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞系（WT9-12）细胞增殖的作用;流式细胞术检测罗格列酮对WT9-12细胞周期及凋亡的影响;Western印迹法检测罗格列酮对哺乳类动物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70核糖体S6激酶（p70S6K）信号通路的影响。给予PPARγ特异性抑制剂GW9662及PPARγ siRNA瞬时转染WT9-12细胞,检测罗格列酮对细胞增殖及对mTOR信号通路的作用是否为PPARγ依赖性的。 结果 罗格列酮抑制WT9-12细胞增殖,此作用在0~200 mol/L范围内呈剂量依赖性及时间依赖性,作用72 h的50%抑制率浓度为100 mol/L。细胞周期分析显示,罗格列酮（50、100 mol/L）作用后,G0/G1期细胞较对照组显著增多（65.43%、64.02%比49.65%,P ＜ 0.05）。50、100 mol/L罗格列酮对细胞凋亡影响不大,高浓度（200 mol/L）罗格列酮可使凋亡细胞达6%（正常对照组为4%）。罗格列酮可呈时间及剂量依赖性下调WT9-12细胞p70S6K磷酸化表达,而对mTOR及其另一个下游4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平无明显影响。加入GW9662及转染PPARγ siRNA阻断PPARγ表达后,可部分阻断罗格列酮对p70S6K磷酸化的影响（P ＜ 0.01）。 结论 罗格列酮可抑制ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖和阻滞细胞周期,可不依赖于mTOR途径直接下调p70S6K磷酸化表达。罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞p70S6K磷酸化的影响是PPARγ依赖性的。     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

KLF4通过mTOR/P70S6K途径激活细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:分析Krüppel样转录因子4(KLF4)对高糖诱导的足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养MPC5细胞,将MPC5细胞分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+空载质粒对照组(HG+NC组)、高糖+KLF4过表达组(HG+KLF4组)。采用qRT-PCR法检测细胞中KLF4 mRNA表达水平,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,HG组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中突触足蛋白(synaptopodin)、足蛋白(podocin)、肾蛋白(nephrin)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1蛋白表达量降低,P62蛋白表达量、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR和磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-P70S6K)/P70S6K比值升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG组比较,HG+KLF4组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量升高,细胞增...     

TAp63在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨TAp63在胰腺癌中的表达及其意义。方法:分别real-time PCR和Western blot检测TAp63 m RNA与蛋白在21例胰腺癌及其配对癌旁组织、3种胰腺癌细胞(PANC-1、CFPAC-1、Bx PC3)及正常胰腺细胞(HPDE6-C7)中的表达;用TAp63-si RNA转染PANC-1细胞后,观察TAp63 m RNA与蛋白表达的变化,并用MTT和Brd U法检测转染后PANC-1细胞的增值情况。结果:胰腺癌组织中TAp63 m RNA表达量明显低于癌旁正常胰腺组织(t=2.572,P=0.0158);TAp63m RNA与蛋白在3种胰腺癌细胞株中的表达量均明显低于正常胰腺HPDE6-C7细胞(均P0.05)。与未处理的PANC-1细胞比较,转染TAp63-si RNA后的PANC-1细胞TAp63 m RNA与蛋白明显降低,但细胞增殖与DNA合成能力均明显增强(均P0.05)。结论:TAp63在胰腺癌组织与细胞中表达降低,且表达量越低,细胞生长能力越强。     

异硫氰酸苯己酯对前列腺癌PC3细胞组蛋白乙酰化及Akt信号转导通路的影响

目的 研究异硫氰酸苯己酯(PHI)对前列腺癌PC3细胞株组蛋白乙酰化及Akt信号转导通路的影响,阐述其诱导细胞凋亡机制. 方法 采用TUNEL法检测PHI对PC3细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法观察PC3细胞组蛋白H3、H4乙酰化水平及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K表达的变化. 结果 PHI 0、10、20、40 μmol/L作用7 h后,PC3细胞凋亡率分别为(1.55±0.78)%、(14.30±4.32)%、(49.45±5.63)%、(76.35±6.21)%,呈浓度依赖性(P＜0.05).与对照组比较,PHI 10、20、40 μmol/L处理3 h后,H3乙酰化水平分别增加1.22、2.13、3.46倍,7 h后分别增加2.30、3.53、7.64倍;不同浓度PHI处理3 h后,H4乙酰化分别增加1.09、1.45、2.02倍,7 h后分别增加2.52、2.87、3.50倍.Akt、mTOR、p70S6K表达无变化,p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K表达均下降.结论 PHI可使PC3细胞株组蛋白H3、H4乙酰化表达增加,且可通过去磷酸化抑制Akt信号转导通路,从而参与了PHI抑制PC3细胞的增殖、诱导凋亡的过程.     

二甲双胍对人胆管癌RBE细胞的作用及其机制

目的：探讨二甲双胍对人肝胆管癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响及机制。 方法：将人肝胆管癌RBE细胞分别用二甲双胍、Compound C（AMPK抑制剂）、二甲双胍+ Compound C处理,以未处理的RBE细胞作为空白对照,分别用MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期、Western blot检测细胞AMPK/mTOR通路蛋白的表达。 结果：与空白对照组比较,二甲双胍作用后的RBE细胞存活率降低;细胞凋亡率升高;G0/G1期比例增加,而S期比例减少;磷酸化AMPK（p-AMPK）蛋白表达上调,而磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义（均P<0.05）。二甲双胍与Compound C联合作用RBE细胞后,二甲双胍的上述作用均被取消,各项指标与空白对照组差异均无统计学意义（均P>0.05）。单独的Compound C作用RBE细胞后,各项指标未见明显改变,与空白对照组差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：二甲双胍能抑制人胆管癌RBE细胞的增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞,该作用可能其与激活AMPK从而抑制mTOR下游效应分子有关。

     

Rapamycin induces autophagy and apoptosis in Kaposiform hemangioendothelioma primary cells in vitro

BackgroundRapamycin has been recommended to treat Kaposiform hemangioendothelioma (KHE) with Kasabach-Merritt phenomenon (KMP), but the underlying mechanism of the clinical effect has not been established. Therefore, we determined rapamycin cytotoxicity on KHE cells in vitro and the underlying mechanism.MethodsKHE primary cells were derived from a tumor specimen and treated with rapamycin. Immunofluorescence was applied to identify the cells. Cell viability was measured using the Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. Cell cycle and apoptosis were assessed using flow cytometry (FCM). Western blots (WB) were performed to determine phosphorylation of mammalian target of rapamycin (mTOR), p70 S6 kinase (S6K1), and eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1 (4E-BP1), as well light chain 3 (LC3) expression.ResultsRapamycin inhibited the growth of KHE primary cells in a dose- and time-dependent manner. Cell cycle progression was arrested in the G0/G1 phase and apoptosis was induced. WB results showed that LC3-II/I expression was significantly elevated in KHE primary cells treated with rapamycin, while the level of p-mTOR, p-S6K1, and p-4E-BP1 expression was reduced. LC3 fluorescent spots were increased in the rapamycin treatment group.ConclusionsRapamycin inhibited KHE primary cell proliferation, induced apoptosis and autophagy, and blocked the mTOR signaling pathway.     

LncRNA SNHG15在甲状腺癌细胞中的表达及作用

目的:探讨LncRNA SNHG15在甲状腺癌细胞中的表达及作用。方法:qRT-PCR检测人未分化甲状腺癌FRO细胞、人甲状腺鳞癌SW579细胞、人甲状腺导管癌TT细胞及正常甲状腺HT-ori3细胞中Lnc RNA SNHG15表达水平;将FRO细胞分别转染SNHG15 siRNA及阴性对照siRNA后,CCK8实验和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果:Lnc RNA SNHG15在FRO细胞、SW579细胞和TT细胞中的表达量均明显高于正常甲状腺HT-ori3细胞,且在FRO细胞中表达量最高(均P0.05);与转染阴性对照si RNA的FRO细胞比较,转染SNHG15 si RNA的FRO细胞增殖能力与克隆形成率均明显降低、细胞凋亡率明显增高、caspase-3与Bax蛋白表达量明显上调,而Bcl-2蛋白表达量明显下调(均P0.05)。结论:Lnc RNA SNHG15在甲状腺癌细胞中表达升高,且细胞分化程度越低表达越高,沉默Lnc RNA SNHG15表达可抑制抑制甲状腺癌细胞增殖并促进凋亡。     

p-mTOR、P-p70S6K蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路蛋白（p-mTOR）、核糖体蛋白s6激酶（p-p70S6K）在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及与预后的关系。方法：利用免疫组化染色检测mTOR通路蛋白p-mTOR、P-p70S6K在膀胱尿路上皮癌中的表达情况,分析p-mTOR、P-p70S6K在不同膀胱组织中的表达差异,与膀胱癌临床病理参数的关系及与膀胱尿路上皮癌预后的关系。结果：p-mTOR在膀胱尿路上皮癌中的阳性表达率（43.3％）高于正常黏膜（17．5％）,p-mTOR表达阳性率随着肿瘤分级分期的增加相应增加,多发性膀胱尿路上皮癌p-mTOR表达阳性率（70．5％）高于单发组（31．4％）,复发组（70．5％）高于未复发组（31.4％,P〈0．01）;P-p70S6K在膀胱尿路上皮癌阳性率（25．9％）高于正常膀胱黏膜（7．5％,P〈0．05）,p-p70S6K表达阳性率随着肿瘤分级分期的增加相应增加,多发性膀胱尿路上皮癌p-p70S6K表达阳性率（45．9％）高于单发组（17．1％）,复发组（30．3％）高于未复发组（17．4％,P〈0．01）;肿瘤分级、分期、数目及p-mTOR表达分别是膀胱肿瘤无瘤生存的独立预后因子。结论：mTOR／p-mTOR／p-p70S6K通路的激活与膀胱尿路上皮癌的发生发展有关,p-mTOR可以作为预测膀胱尿路上皮癌复发的预后因子。