双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡

目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制。方法:以1,10,30,50,100μmol·L~(~(-1))的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50μmol·L~(-1)的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50μmol·L~(-1)浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关。     

姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素稳定性研究

目的：研究姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素在不同pH缓冲溶液中的稳定性。方法：以一定pH的缓冲溶液为反应介质，将姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素定量加入到反应介质中，高效液相色谱法测定姜黄素类化合物浓度的变化，采用动力学方法建立姜黄素类化合物降解速率方程。结果：在相同的条件下姜黄素类化合物的稳定性依次为：双去甲氧基姜黄素≥去甲氧基姜黄素≥姜黄素。结论：去甲氧基姜黄素对姜黄素产生稳定作用最强，为姜黄素的天然稳定剂。     

姜黄中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的光稳定性分析

目的 研究姜黄中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的光稳定性,并对双去甲氧基姜黄素光化学反应产物进行考察.方法 姜黄的甲醇提取液于棕色量瓶储存,在自然光/避光条件下放置0、1、2、4、6、8h后,HPLC法测定其指标成分姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素量的变化;LC-MS法分析双去甲氧基姜黄素光化学反应产物.结果 姜黄素、去甲氧基姜黄素在自然光/避光条件下均有良好的稳定性;双去甲氧基姜黄素在避光条件下稳定,见光条件下发生光化学反应.结论 姜黄素和去甲氧基姜黄素具有良好稳定性,双去甲氧基姜黄素在自然光照射下不稳定,因此,姜黄药材分析供试液应于棕色量瓶中避光保存.     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨去甲斑蝥素对HepG2细胞凋亡的影响。方法：采用形态学观察和流式细胞分析技术。结果：去甲斑蝥素作用HepG2细胞后,凋亡小体形成,凋亡率增加。结论：去甲斑蝥素诱导HepG2细胞凋亡。     

一测多评法测定姜黄中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素

目的建立姜黄一测多评测定方法,同时测定其中3种姜黄素类成分量,并进行方法学考察。方法采用高效液相色谱法,Chromstar~(TM) C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-4%冰醋酸溶液(48∶52),检测波长为422 nm,体积流量为1.0 m L/min,柱温为30℃;以姜黄素为参照物,建立其与去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素相对校正因子,分别以外标法和一测多评法计算3种姜黄素类成分质量分数。结果该方法可同时测定姜黄中3种姜黄素类成分量,且测定结果与外标法相比无显著性差异(RSD2.0%)。结论本法简便、可行、重复性好,可为进一步完善姜黄的质量标准提供参考。     

熊去氧胆酸促进肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法 取对数生长期的肝癌HepG2细胞分为0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,各组分别加入0、5、10μmol/L UDCA药液干预24 h。24 h后采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,倒置光学显微镜观察HepG2细胞的数量、形态变化,流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率和线粒体下降的膜电位,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA相对表达量,Western blot检测Bcl-2蛋白相对表达水平。结果 与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05),且UDCA药物浓度越高抑制率越强;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞数量减少,细胞脱落变圆,悬浮细胞相对增加;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞凋亡率均增加(P均<0.05),线粒体下降的膜电位均增加(P均<0.05);与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组Hep...     

姜黄中脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素对姜黄素稳定性的影响

目的 研究姜黄中脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素对姜黄素稳定性的影响.方法 以pH 10的缓冲溶液为反应介质,将脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素定量加入到姜黄素对照品溶液中,高效液相色谱法测定姜黄素质量浓度的变化,采用动力学方法 建立姜黄素降解速率方程.结果 脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素均对姜黄素产生稳定作用,且呈量效关系.结论 姜黄中脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素为姜黄素天然稳定剂,以姜黄乙醇提取物制备姜黄素制剂,可提高制剂中姜黄素的稳定性.     

姜黄素对Hepa1-6肝癌细胞凋亡及ROS影响

目的:观察姜黄素对小鼠肝癌Hepa 1-6细胞凋亡及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法:不同浓度姜黄素处理Hepa 1-6肝癌细胞,MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot法检测活化型caspase-3,2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(DCFH-DA)染色法结合荧光酶标仪检测姜黄素对胞内ROS产生的影响。结果:2～40μmol/L姜黄素作用24 h、48 h均可抑制肝癌Hepa 1-6细胞增殖,并呈现一定的时间与剂量依赖性。5～20μmol/L姜黄素作用48 h后Hepa 1-6细胞呈现凋亡形态变化,细胞凋亡率呈一定程度剂量依赖性,同时可检测到活化型caspase-3、以及ROS产生。结论:姜黄素可以抑制Hepa 1-6细胞增殖,促使Hepa 1-6细胞凋亡,可能与活化caspase-3及提高细胞内ROS水平相关。     

去甲氧基姜黄素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路调控细胞自噬对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用研究

目的:探讨去甲氧基姜黄素(DMC)通过调控自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及可能机制。方法:清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、不同剂量DMC预处理组(10、15和30 mg/kg)组。给药7 d后,采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备MI/RI模型。检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;TTC法检测心肌梗死面积;HE染色法观察心肌组织病理变化;Western blot法检测LC3II、Beclin1、p62、PI3K、Akt和mTOR的蛋白表达及磷酸化水平。结果:与假手术组相比,模型组血清中CK-MB、LDH、MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01);心肌梗死面积显著增加(P<0.01),心肌纤维结构紊乱、溶解和炎性浸润;心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01)...     

姜黄素、去甲氧基姜黄素和二去甲氧基姜黄素对照品的制备及姜黄素细胞毒性初步研究

目的建立从姜黄中制备姜黄素、去甲氧基姜黄素和二去甲氧基姜黄素对照品的方法,并对姜黄素进行细胞毒性初步研究。方法通过硅胶柱色谱对姜黄丙酮提取物进行分离纯化,IR、MS、1H-NMR波谱学方法对化合物进行结构鉴定,通过TLC和HPLC对其进行纯度检测;倒置显微镜观察姜黄素对高侵袭性人乳腺癌MCF-7细胞、低侵袭性人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肝癌HepG2细胞的毒性。结果从姜黄中分离、纯化出姜黄素、去甲氧基姜黄素和二去甲氧基姜黄素对照品,质量分数均>98%。10、100 ng/mL的姜黄素能明显抑制MCF-7、MDA-MB-231和HepG2细胞的生长,对HepG2细胞杀伤力较大。结论该法制备出的姜黄素、去甲氧基姜黄素和二去甲氧基姜黄素对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为姜黄药材及其制剂质量控制以及中药药效物质基础研究用的化学对照品;一定质量浓度的姜黄素能明显抑制人乳腺癌细胞和人肝癌细胞生长。     

绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

Baicalein Triggers Autophagy and Inhibits the Protein Kinase B/Mammalian Target of Rapamycin Pathway in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells

Baicalein (BA), isolated from the Chinese medicinal herb Scutellariae radix (Huangqin in Chinese), is a flavonoid with various pharmacological effects. Herein, we found that BA only slightly reduced the cell viability on HepG2 cells after 24‐h treatment as determined by 3‐(4, 5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2, 5‐diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay. However, BA (50 μM) effectively blocked the colony formation. Meanwhile, BA remarkably induced the formation of autophagosomes after 24‐h treatment as determined by immunofluorescence with monodansylcadaverine staining as well as transmission electron microscopy, respectively. Moreover, BA obviously up‐regulated the expression of microtubule‐associated protein 1A/1B‐light chain 3‐II in concentration‐dependent and time‐dependent manners in HepG2 cells. When combined with the autophagy inhibitor chloroquine and BA, the cell viability and colony formation were significantly decreased, indicating that BA triggered protective autophagy, which prevented cell death. Further study showed that BA concentration‐dependently and time‐dependently decreased the expression of p‐AKT (S473), p‐ULK1 (S757) and p‐4EBP1 (T37 and S65), suggesting the involvement of protein kinase B (AKT)/mammalian target of rapamycin (mTOR) in BA‐triggered autophagy. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

红景天苷对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响简

 目的 观察红景天苷(salidroside)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响, 探讨其抗肿瘤的可能机制。方法 以体外培养的人肝癌HepG2细胞作为研究对象, 倒置显微镜观察红景天苷对肝癌细胞形态的影响;采用MTS法检测红景天苷对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-8的表达。结果 红景天苷能显著抑制肝癌细胞HepG2增殖并促进其凋亡, 下调细胞Bcl-2 表达, 上调Bax、caspase-3及caspase-8的蛋白表达量。结论 红景天苷在体外对人肝癌HepG2细胞具有显著的抑制增殖和促进凋亡作用, 其机制可能与其调节凋亡基因Bcl-2、Bax、caspase-3与caspase-8的蛋白表达有关。     

肝复康胶囊对人肝癌细胞系HepG2的影响

目的:探讨肝复康胶囊抑制人肝癌细胞系HepG2增殖的作用机制。方法:采用MTT比色法测定肝复康胶囊对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖的影响;用流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡,分析各时期细胞周期的变化;用免疫细胞化学方法检测药物作用后诱导凋亡蛋白Omi/HtrA2和casepase-3的表达。结果:肝复康胶囊具有较好的抑制HepG2细胞增生的作用,呈现出时间-剂量依赖性;应用肝复康胶囊后HepG2细胞G2期比例升高,G1期和S期细胞比例降低,并使细胞凋亡率升高。结论:肝复康胶囊能够抑制人肝癌细胞系HepG2增殖,促进其凋亡。     

佛手柑内酯通过PI3K/Akt信号通路诱导人肝癌细胞HepG2和Hep3B凋亡的机制

目的:探究佛手柑内酯通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路诱导人肝癌细胞Hep G2和Hep3B凋亡的机制。方法:设立佛手柑内酯(5,50,200μmol·L~(-1))组和空白组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测佛手柑内酯作用Hep G2和Hep3B细胞24,48 h细胞增殖;磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测相关m RNA和蛋白的表达含量;进行平板细胞克隆形成实验评价各组Hep G2和Hep3B细胞的克隆形成率与效果。结果:MTT实验表明,佛手柑内酯能明显抑制Hep G2和Hep3B细胞的增殖活性,且呈浓度依赖性;流式细胞仪分析结果表明,佛手柑内酯200μmol·L~(-1)组作用于Hep G2和Hep3B细胞48 h,有明显促凋亡作用(P 0. 05); Western blot结果显示,佛手柑内酯可以上调半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-8蛋白表达量(P 0. 05),并且下调B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),PI3K蛋白表达(P 0. 05); Real-time PCR显示PI3K,Akt m RNA相对表达量降低(P 0. 05);平板细胞克隆形成实验的结果显示,随着佛手柑内酯浓度的增加,各组细胞克隆形成率呈递减趋势,且佛手柑内酯200μmol·L~(-1)组作用降低明显(P 0. 05)。结论:佛手柑内酯对人肝癌细胞Hep G2和Hep3B的增殖存在抑制作用,其可能是通过PI3K/Akt信号通路诱导Hep G2和Hep3B细胞的凋亡。     

构树叶总黄酮对人肝癌细胞HepG-2增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:探讨构树叶总黄酮(TFBP)对人肝癌细胞(HepG-2)增殖和凋亡的作用。方法:采用细胞增殖实验(MTT法),取对数生长期HepG-2,随机分为药物组和对照组,用3,6,9,12 g.L-1不同质量浓度构树叶总黄酮作用HepG-2,分别干预24,48,72 h。通过流式细胞仪检测在以上质量浓度下作用细胞48 h后的细胞凋亡率,Western blont法检测以上质量浓度构树叶总黄酮作用细胞48 h后Bcl-2基因、促凋亡基因Bax表达的情况。结果:各质量浓度构树叶总黄酮对HepG-2的生长有显著的抑制作用,呈明显的时间和剂量依赖性,经不同质量浓度的构树叶总黄酮作用48 h后HepG-2凋亡率显著增加,药物组与对照组比较为(0.478±0.085 vs 0.498±0.014;0.354±0.004 vs 0.498±0.014;0.218±0.075 vs 0.498±0.014)有显著性差异,P<0.05,抑癌基因Bcl-2表达量呈逐渐下降的趋势,促凋亡基因Bax表达量随着质量浓度的升高表达量呈现上升趋势。结论:构树叶总黄酮可以有效的抑制HepG-2的生长,诱导细胞凋亡,其诱导该细胞凋亡的作用可能是通过下调抑癌基因Bcl-2的表达,可为肝癌的生物学治疗提供新的方法。     

中药复方“松友饮”诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究中药复方“松友饮”对人肝癌细胞凋亡的影响及可能的分子机制,为临床应用提供理论依据。方法：采用流式细胞术、Caspase-3活性实验及RealTimePCR技术,观察2、4、8、10、20、30及40me,／mL“松友饮”（c1、c2、c3、c4、c5、c6及c7组）对体外培养的人肝癌细胞MHCC97H凋亡的影响,并探索可能的分子机制。结果：流式细胞仪检测结果显示,同对照组相比,干预组细胞凋亡率呈时间依赖性增加,“松友饮”（c4,10mg／mL）干预72h后MHCC97H细胞凋亡率增加超过3倍。干预48h后Caspase-3显著激活,Caspase-3活化呈时间依赖性。“松友饮”浓度增加,转移抑制基因1（Metastasissuppressor1,MTSS1）抑制效果越明显,“松友饮”（c4,10mg／mL）干预48h,MTSS1基因表达抑制率为39．0％。结论：“松友饮”诱导肝癌细胞凋亡可能与MTSS1基因表达抑制、Casoase-3活化相关。