增免抑瘤方及有效组分对卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤Notch/Jagged1信号通路的影响

目的:观察增免抑瘤方(ZMYL)及其有效组分(PAWU)对卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及对肿瘤组织Notch信号受体(Notch)/Notch信号配体1(Jagged1)信号通路的影响。方法:无血清悬浮培养卵巢癌干细胞,建立卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤模型,分为模型组、增免抑瘤方组(ZMYL,36 g·kg~(-1)),有效组分组(PAWU,5. 8 g·kg~(-1)),顺铂组(DDP,2. 5 mg·kg~(-1)),有效组分联合顺铂组(PAWU,5. 8 g·kg~(-1)+DDP,2. 5 mg·kg~(-1))。成功造模后,灌胃给药21 d。观察增免抑瘤方及有效组分对裸鼠瘤重的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的形态变化;免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中Notch信号受体1(Notch1),Notch信号配体1(Jagged1),发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白和mRNA的表达水平。结果:各给药组对裸鼠皮下移植瘤的生长均具有抑制作用,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组抑瘤率分别为35. 91%,32. 94%,57. 65%,69. 05%,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组瘤重明显降低(P0. 05),与PAWU组比较,PAWU+DDP组瘤重明显降低(P0. 05);免疫组化结果表明,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组Notch1,Jagged1蛋白阳性表达明显减少(P0. 05),ZMYL组,DDP组,PAWU+DDP组Hes1蛋白阳性表达明显减少(P0. 05);与PAWU+DDP组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组Notch1,Jagged1,Hes1蛋白阳性表达明显上调(P0. 05);Real-time PCR结果表明,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组Notch1 mRNA表达率明显减少(P0. 05),ZMYL组,PAWU组,PAWU+DDP组的Jagged1,Hes1 mRNA表达率明显减少(P0. 05),与DDP组比较,PAWU+DDP组Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达率明显减少(P0. 05)。结论:增免抑瘤方及有效组分可以抑制卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤的生长,有效组分与顺铂联合应用有明显的协同增效作用,其机制可能与抑制Notch/Jagged1信号通路的激活相关。     

补肾中药对绝经后骨质疏松症大鼠肾组织Notch信号通路的影响

目的：本研究旨在观察去卵巢骨质疏松症大鼠模型肾组织Hes1、Jagged1和Notch1 mRNA及其编码蛋白HES1、Jagged1和Notch1的活性变化,探究补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法：将75只雌性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补肾复方组、福善美组,模型组采用切除雌性SD大鼠双侧卵巢的方式建立骨质疏松症模型,补肾复方组运用补肾复方对模型大鼠治疗8周,用福善美作为阳性药物对照组。8周后采用ELISA法检测各组肾组织HES1、Jagged1以及Notch1含量;RT-PCR检测各组Hes1、Jagged1和Notch1相对表达量。结果：与正常组相比,模型组肾组织Hes1、Jagged1和Notch1及其编码蛋白表达明显减少（P<0.01）;与模型组相比,补肾复方组和福善美组肾组织Hes1、Jagged1和Notch1及其编码蛋白的表达均明显增加（P<0.01）;结论：骨质疏松症的发生机制与Notch信号传导通路有关;补肾复方通过激活Notch信号传导通路,可以促进成骨细胞分化,抑制破骨细胞活性,起到防止骨质疏松症的作用。     

通幽汤含药血清对食管鳞癌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨通幽汤含药血清对食管鳞癌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:将28例食管鳞癌患者随机分为对照组和治疗组,每组14例,空白组于治疗前制备血清。对照组予化疗,治疗组在化疗基础上予口服通幽汤汤剂,治疗2个月制备含药血清。将各组血清加入食管鳞癌细胞培养体系中,qRT-PCR的方法检测TGF-β1 RⅠ、TGF-β1 RⅡ、p-Smad2/3、Smad4及Smad7 mRNA在食管癌细胞系中的表达;Western-blot检测以上蛋白在不同处理组细胞中的表达;ELISA法测定培养上清液中MMP-2、MMP-9及TIMP-1的含量。结果:与对照组比较,治疗组TGF-β1 RⅠ、TGF-β1 RⅡ、p-Smad2/3、Smad4表达明显降低,Smad7蛋白水平明显升高;MMP-2、MMP-9明显下降,而TIMP-1水平明显升高。结论:通幽汤含药血清可能通过调控食管鳞癌细胞TGF-β1/Smad信号通路中关键分子的表达,抑制TGF-β1/Smad信号通路传导,进一步减少MMP-2、MMP-9的表达,增加TIMP-1的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的 基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表...     

针刺经筋点对膝关节骨性关节炎Notch信号通路调控机制及Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2蛋白表达的实验研究

目的 通过针刺经筋点对家兔膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的干预治疗,观察家兔治疗前后血清中缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、膝关节软骨细胞中Notch1、Notch2、以及Jagge1、Jagged2蛋白的表达情况,以探讨在经筋理论指导下的针刺方法对膝关节炎家兔的Notch信号通路的调控机制。方法 选取30只清洁级日本大耳白兔,雌雄各半,随机数字表法抽取8只正常饲养做为空白组,余下兔均按左后肢伸直位石膏固定制动法(Vidman法)制造兔膝关节炎模型。制动满6周时,拆除固定,随机选取空白组和造模家兔各2只,应用量角器检测膝关节关节活动度,并处死取关节软骨作病理观察。将造模后的家兔随机分为模型组、经筋组、西药组,6只/组,并分别于干预4周后处死取样。用量角器和改良Lequesne MG评分标准分别测量和观察治疗前后兔膝关节的关节活动度(ROM)和行为学指标,取关节软骨标本并观测其形态学改变,ELISA法检测血清中HIF-2α含量,并采用Western Blot法检测Notch1、Notch2、以及Jagged1、Jagged2蛋白表达量。结果 治疗后,...     

大戟大枣汤含药血清通过PI3k/Akt通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨大戟大枣汤含药血清通过PI3k/Akt通路对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大戟大枣汤高、中、低剂量组及阴性组的含药血清,作用于体外培养的MCF-7细胞。吖啶橙-溴乙锭染色观察大戟大枣汤含药血清作用对细胞形态学的变化,Hoechst333342/PI染色分析细胞凋亡情况,免疫荧光法检测PI3k/Akt通路相关蛋白的表达,Western blot检测大戟大枣汤含药血清联合LY294002对PI3k/Akt通路相关蛋白的表达影响。结果荧光显微镜下可见大戟大枣汤含药血清作用后细胞贴壁能力下降、形态变得圆润、数量减少。与阴性对照组比较,大戟大枣汤含药血清组细胞凋亡增高(P<0.05,P<0.01),PI3k、p-Akt、p-FoxO3a蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);大戟大枣汤含药血清联合LY294002作用后,细胞中p-Akt、p-FoxO3a蛋白表达较单独使用大戟大枣汤含药血清更低。结论大戟大枣汤含药血清可通过抑制PI3k/Akt信号通路调控MCF-7细胞凋亡。     

养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠外周血T细胞Notch1,Jagged1信号通路

目的:观察养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠T细胞Notch信号受体1(Notch1)及Notch信号配体1(Jagged1)表达规律的影响,探讨其对放射性肺炎防治作用的机制。方法:将40只雌雄各半的SD大鼠以随机数字表法随机分为正常组、模型组、激素组、联合用药组,直线加速器对除正常组外的3组大鼠全胸单次照射,剂量为16 Gy。照射后第1天起各组予相应的药物灌胃。照射后4周,处死大鼠,取全肺称重计算肺系数,取大鼠肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,Notch1免疫组化染色,取全血标本进行免疫磁珠分选提取T细胞及流式细胞术检测Notch1比率,用提取的T细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Notch1,Jagged1 mRNA及蛋白表达,观察各组大鼠在放射后4周肺系数改变及Notch1,Jagged1表达的变化。结果:放射后4周,各组肺系数差异明显,正常组与联合用药组肺系数最为接近;与模型组比较,养阴清肺方联合泼尼松龙可明显降低Notch1 T细胞所占比例(P0.05),可明显降低Notch1,Jagged1mRNA表达(P0.05),明显下调Notch1,Jagged1相关蛋白表达(P0.05)。结论:养阴清肺方能明显下调放射性肺炎大鼠Notch1,Jagged1表达,可能是防治放射性肺炎发生发展的机制之一。     

敦煌平胃丸对胃癌前病变大鼠 Notch 信号通路中Notch2和 Jagged1表达的影响

目的：观察敦煌平胃丸对胃癌前病变（PLGC）模型大鼠胃黏膜组织 Notch 信号通路中 Notch2和 Jagged1表达的影响。方法：采用复合法建立 PLGC 大鼠模型,将32只大鼠随机分为4组,每组8只。敦煌平胃丸组用敦煌平胃丸浸膏按每日生药96 g ／kg 掺入饲料中喂养给药,共计12周。观察大鼠胃黏膜病理组织学变化;采用 Western Blot 检测 Notch2和 Jagged1蛋白表达;采用 RT －PCR 检测Notch2和 Jagged1mRNA 的表达。结果：PLGC 大鼠胃黏膜组织 Notch2与 Jagged1mRNA 及蛋白表达较正常大鼠胃黏膜组织均明显上调（P ＜0.05）。敦煌平胃丸能明显改善 PLGC 大鼠胃黏膜腺体萎缩、肠化增生,下调 PLGC 大鼠胃黏膜组织中 Notch2与 Jagged1表达水平（P ＜0.05）。结论：Notch2、Jagged1激活了 Notch 信号通路,在 PLGC 发生发展中有重要意义。敦煌平胃丸治疗 PLGC 可能与下调 Notch 信号通路中 Notch2与 Jagged1表达有关。     

血府逐瘀胶囊调控血管新生中Jagged1/Notch信号的作用机制

目的:探讨Jagged1/Notch信号通路在血府逐瘀胶囊调控血管新生中的作用。方法:以2.5%的血府逐瘀胶囊含药血清和空白血清分别干预人微血管内皮细胞(HMEC-1),通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测药物处理细胞12,24,36,48 h时Jagged1 mRNA水平的表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物处理细胞12,24,48 h时Jagged1在蛋白质水平的表达;在血府逐瘀胶囊促血管新生最佳药效条件下,使用γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)阻断Notch信号通路,设置DAPT处理组,二甲基亚砜(DMSO)溶剂组和空白组,通过体外成血管实验检测抑制Jagged1/Notch信号对药物诱导HMEC-1体外成血管能力的影响。结果:血府逐瘀胶囊含药血清干预内皮细胞12 h能上调Jagged1在mRNA水平表达(P0.01),药物干预细胞24 h能同时上调Jagged1在mRNA和蛋白水平表达(P0.05);DAPT阻断Notch信号后,药物促体外成血管能力下降。结论:血府逐瘀胶囊可通过调控Jagged1表达,影响Jagged1/Notch信号通路,从而调控血管新生。     

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7 d后取血制备含药血清。组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关。     

miRNA-139-5p靶向Notch1/Jagged1调控胃癌干细胞增殖转移及益气补肾方的干预作用

目的:明确miRNA-139-5p对Notch1/Jagged1信号通路的靶向调控关系,探讨益气补肾方抗胃癌干细胞增殖转移的作用机制。方法:通过免疫磁珠分选及鉴定CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC;双荧光素酶报告基因检测miRNA-139-5p与Notch1的结合作用;qRT-PCR检测不同细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达;Western Blot检测不同细胞株中Notch1、Jagged1蛋白表达;qRT-PCR检测益气补肾方含药血清干预后,胃癌细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达以及Notch1、Jagged1蛋白表达。结果:免疫磁珠能较好地分选出CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC细胞株。转染克隆有Notch13’-UTR野生型载体质粒实验中,miRNA-139-5p组荧光素酶活性明显受到抑制,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌细胞中miRNA-139-5p的表达量显著减少,Notch1、Jagged1的mRNA与蛋白表达量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。益气补肾含药血清干预后,胃癌细胞中miRNA-139-5p表达水平显著升高,Notch1、Jagged1 mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:Notch1基因是miRNA-139-5p直接作用的靶基因,益气补肾方可能是通过调控miRNA-139-5p/Notch1/Jagged1信号通路而发挥抗胃癌增殖转移的作用。     

从PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨补肾疏肝方含药血清抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:通过研究补肾疏肝方含药血清对PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响,探讨补肾疏肝方抑制肺腺癌细胞增殖和转移作用机制。方法:大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为生理盐水组(NS为2 m L),顺铂组(8 mg·kg-1),补肾疏肝方低剂量组(15 g·kg-1),补肾疏肝方高剂量组(30 g·kg-1),联合顺铂低剂量组(15 g·kg-1+8 mg·kg-1),联合顺铂高剂量组(30 g·kg-1+8 mg·kg-1),每只大鼠ig,2 m L,每天2次,共5 d。制备药物血清:经药物作用后的大鼠,经腹主动取血,分离血清,灭活,过滤,冻存。MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549细胞增殖的影响。三维细胞培养观察并计数各组细胞形成管状结构数量。RT-PCR检测含药血清对A549肺腺癌细胞AKT-1,Cyclin D1,NF-κB mRNA水平的表达,Western blot检测含药血清对PTEN,p-PI3K,p-AKT蛋白水平的表达。结果:低剂量补肾疏肝方含药血清对A549细胞有抑制作用,低剂量中药与顺铂联用有协同作用且以时间依赖方式,即补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组在48,72,96 h的抑制率均高于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组拟态血管数目均低于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组PTEN蛋白表达均高于其他组(P0.05,P0.01),补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组p-PI3K,p-AKT蛋白,Akt1,Cyclin D1,NF-κB的mRNA表达均低于其他组(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方含药血清可通过PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移。     

灯盏花素通过调控LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制研究＊

目的 基于LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路探讨灯盏花素改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、辛伐他汀组（20 mg·kg^-1）和灯盏花素低、中、高剂量组（6、12、24 mg·kg^-1），每组10只。采用先腹腔注射75%蛋黄乳液后饲喂高脂饲料的方式建立高脂血症模型，同时给药干预，1次/天，连续28d。采用ELISA法检测大鼠血清中T-CHO、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、Cr、BUN水平；测定大鼠肝脏、肾脏系数；采用HE染色法观察肝肾组织病理学变化；采用免疫组化法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平；采用RT-PCR法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平mRNA水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显升高（P<0.05），HDL-C水平明显降低（P<0.05）；肝脏、肾脏系数明显增加（P<0.05）且出现病理变化；肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显降低（P<0.05），HMGCR水平明显升高（P<0.05）；肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较，辛伐他汀组和灯盏花素低、中、高剂量组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显降低（P<0.05），HDL-C水平明显升高（P<0.05）；肝脏、肾脏系数明显减小（P<0.05）且病变程度减轻；肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显升高（P<0.05），HMGCR水平明显降低（P<0.05）；肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显降低（P<0.05）。结论 灯盏花素能够改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能，其机制与激活LKB1/AMPK通路及抑制Notch/Jagged1通路和HMGCR水平有关。     

复方补肾活血颗粒对人骨髓间充质干细胞增殖及Wnt/PI3K-AKT信号通路相关蛋白表达的影响

目的 观察复方补肾活血颗粒药物血清对人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)增殖的影响,探讨其干预骨质疏松症(OP)的作用机制.方法 从OP患者骨髓中分离培养HBMSCs,流式细胞仪检测HBMSCs表型和细胞周期;将HBMSCs分为正常组、2％空白血清组、2％药物血清组、5％空白血清组、5％药物血清组、8％空白血清组和8％药...     

PI3k/Akt通路参与二仙汤抑制顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的作用

目的：观察顺铂干预大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况,从而探讨二仙汤含药血清经PI3k/Akt通路抑制卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制。方法：SD雌性大鼠30只,随机分为3组,分别为生理盐水组、补佳乐组、二仙汤组。心脏取血,制备药物血清。SD大鼠卵巢颗粒细胞,经培养贴壁后,用顺铂损伤大鼠原代卵巢颗粒细胞。经各组药理血清作用后,应用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,并对各实验组大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡情况进行分析。应用免疫组化法,测定各分组PI3k、Akt、p-Akt蛋白的表达情况,并进行图像分析。结果：流式细胞凋亡结果显示,二仙汤可以降低顺铂损伤后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率。免疫组化结果显示,PI3k、p-Akt、Akt在细胞质内均有表达,可见棕黄色阳性物质;而二仙汤可以上调顺铂干预后大鼠卵巢颗粒细胞的PI3k、p-Akt、Akt的表达。结论：二仙汤含药血清上调了PI3k、p-Akt、Akt的表达,从而抑制了卵巢颗粒细胞凋亡,该过程可能通过调节PI3k/Akt通路实现,进而有效地保护卵巢功能。     

降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞磷酸肌醇-3激酶/AKT/FOXO1通路的影响

目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞PI3K/AKT/FOXO1通路中相关蛋白与基因表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛B细胞的分子机制。方法:选取FOXO1高表达INS-1稳定细胞株,分别以1%、5%、10%、15%、20%不同浓度降糖消渴颗粒含药血清干预,用MTT法计算细胞成活率以观察药物毒性,分别检测各组细胞中总FOXO1蛋白水平以确定最佳药物浓度开展后续实验。细胞用或不用PI3K抑制剂LY294002干预后,以Western blotting检测细胞中总FOXO1、p-FOXO1、Akt、p-Akt和细胞核内外的FOXO1、p-FOXO1的蛋白表达,qRT-PCR检测FOXO1mRNA和AktmRNA含量。结果:不同浓度含药血清对细胞均无毒性,其中10%为最佳药物干预浓度。10%含药血清使磷酸化FOXO1和Akt的表达升高;在胞质和胞核中,10%含药血清使FOXO1的表达降低,磷酸化表达升高,抑制剂LY294002使FOXO1和p-FOXO1表达均降低。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Akt mRNA表达升高,FOXO1mRNA表达降低,抑制剂使FOXO1mRNA表达降低,结果与Western blotting结果一致。结论:降糖消渴颗粒含药血清可通过PI3K/AKT/FOXO1通路促进FOXO1磷酸化出核以抑制FOXO核转录实现保护胰岛B细胞的作用。     

针灸对CTX荷瘤小鼠骨髓细胞中Notch信号通路差异基因jag1、notch2的影响

目的采用荷瘤小鼠为研究对象,以Notch信号通路为切入点,通过观察针刺与艾灸干预后环磷酰胺(CTX)模型荷瘤小鼠骨髓细胞中Notch信号通路差异基因jag1、notch2的表达、蛋白量以及mRNA转录情况,探讨针灸改善荷瘤小鼠骨髓抑制的相关作用机制及途径,为临床中针灸减轻肿瘤化疗患者骨髓抑制、提高生存质量及改善造血机能方面提供实验室依据及治疗思路。方法将40只昆明种雄性、清洁级小鼠自由饲养3 d后,在温度20~25℃,湿度60%左右的无菌条件下进行移植瘤模型制备,植瘤7 d后,对40只带瘤小鼠进行尾静脉采血,查其白细胞(WBC)总数并选取WBC数目接近正常范围,瘤体生长良好的荷瘤小鼠32只。将选取的荷瘤小鼠,随机分4组,每组8只,即空白组(A),模型组(B),针疗组(C),灸疗组(D)。B、C、D组均一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX)150 mg/kg,A组给予相同体积的生理盐水。C、D组选取"大椎""膈俞""肾俞""足三里"穴位分别施以针刺、艾灸,A、B组每日陪同固定,不治疗。在课题组前期初步筛选的相关差异基因jag1、notch2的基础上,进一步运用免疫组化法、Real-time PCR法、Western Blot法全面深入地测定荷瘤小鼠骨髓细胞中Notch信号通路jag1、notch2基因的变化。结果(1)与空白组比,模型组中jag1和notch2基因蛋白表达升高,具有统计学意义(P<0.05);与模型组比,针疗组与灸疗组中jag1和notch2基因蛋白表达下降,具有统计学意义(P<0.05);(2)与空白组比,模型组中jag1、notch2基因mRNA表达升高;与模型组比,针疗组与灸疗组中jag1、notch2基因mRNA表达降低,但均无统计学意义;(3)与空白组比,模型组中jag1、notch2基因蛋白含量升高且具有统计学意义(P<0.05);与模型组比,针疗组、灸疗组jag1、notch2基因蛋白含量均降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论对Notch信号通路进行靶向调控,下调荷瘤小鼠骨髓细胞Notch信号通路中关键基因jag1、notch2的蛋白表达、mRNA表达、表达含量,是针灸减轻骨髓抑制、调控造血功能、改善造血微环境的重要途径之一。为了更贴近临床恶性肿瘤患者,本次研究选用带瘤体质的小鼠,以期为临床提供新的实验室依据及新的治疗途径。