miRNA-139-5p靶向Notch1/Jagged1调控胃癌干细胞增殖转移及益气补肾方的干预作用

目的:明确miRNA-139-5p对Notch1/Jagged1信号通路的靶向调控关系,探讨益气补肾方抗胃癌干细胞增殖转移的作用机制。方法:通过免疫磁珠分选及鉴定CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC;双荧光素酶报告基因检测miRNA-139-5p与Notch1的结合作用;qRT-PCR检测不同细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达;Western Blot检测不同细胞株中Notch1、Jagged1蛋白表达;qRT-PCR检测益气补肾方含药血清干预后,胃癌细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达以及Notch1、Jagged1蛋白表达。结果:免疫磁珠能较好地分选出CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC细胞株。转染克隆有Notch13’-UTR野生型载体质粒实验中,miRNA-139-5p组荧光素酶活性明显受到抑制,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌细胞中miRNA-139-5p的表达量显著减少,Notch1、Jagged1的mRNA与蛋白表达量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。益气补肾含药血清干预后,胃癌细胞中miRNA-139-5p表达水平显著升高,Notch1、Jagged1 mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:Notch1基因是miRNA-139-5p直接作用的靶基因,益气补肾方可能是通过调控miRNA-139-5p/Notch1/Jagged1信号通路而发挥抗胃癌增殖转移的作用。     

血府逐瘀胶囊调控血管新生中Jagged1/Notch信号的作用机制

目的:探讨Jagged1/Notch信号通路在血府逐瘀胶囊调控血管新生中的作用。方法:以2.5%的血府逐瘀胶囊含药血清和空白血清分别干预人微血管内皮细胞(HMEC-1),通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测药物处理细胞12,24,36,48 h时Jagged1 mRNA水平的表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物处理细胞12,24,48 h时Jagged1在蛋白质水平的表达;在血府逐瘀胶囊促血管新生最佳药效条件下,使用γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)阻断Notch信号通路,设置DAPT处理组,二甲基亚砜(DMSO)溶剂组和空白组,通过体外成血管实验检测抑制Jagged1/Notch信号对药物诱导HMEC-1体外成血管能力的影响。结果:血府逐瘀胶囊含药血清干预内皮细胞12 h能上调Jagged1在mRNA水平表达(P0.01),药物干预细胞24 h能同时上调Jagged1在mRNA和蛋白水平表达(P0.05);DAPT阻断Notch信号后,药物促体外成血管能力下降。结论:血府逐瘀胶囊可通过调控Jagged1表达,影响Jagged1/Notch信号通路,从而调控血管新生。     

增免抑瘤方及有效组分对卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤Notch/Jagged1信号通路的影响

目的:观察增免抑瘤方(ZMYL)及其有效组分(PAWU)对卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及对肿瘤组织Notch信号受体(Notch)/Notch信号配体1(Jagged1)信号通路的影响。方法:无血清悬浮培养卵巢癌干细胞,建立卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤模型,分为模型组、增免抑瘤方组(ZMYL,36 g·kg~(-1)),有效组分组(PAWU,5. 8 g·kg~(-1)),顺铂组(DDP,2. 5 mg·kg~(-1)),有效组分联合顺铂组(PAWU,5. 8 g·kg~(-1)+DDP,2. 5 mg·kg~(-1))。成功造模后,灌胃给药21 d。观察增免抑瘤方及有效组分对裸鼠瘤重的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的形态变化;免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中Notch信号受体1(Notch1),Notch信号配体1(Jagged1),发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白和mRNA的表达水平。结果:各给药组对裸鼠皮下移植瘤的生长均具有抑制作用,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组抑瘤率分别为35. 91%,32. 94%,57. 65%,69. 05%,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组瘤重明显降低(P0. 05),与PAWU组比较,PAWU+DDP组瘤重明显降低(P0. 05);免疫组化结果表明,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组Notch1,Jagged1蛋白阳性表达明显减少(P0. 05),ZMYL组,DDP组,PAWU+DDP组Hes1蛋白阳性表达明显减少(P0. 05);与PAWU+DDP组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组Notch1,Jagged1,Hes1蛋白阳性表达明显上调(P0. 05);Real-time PCR结果表明,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组Notch1 mRNA表达率明显减少(P0. 05),ZMYL组,PAWU组,PAWU+DDP组的Jagged1,Hes1 mRNA表达率明显减少(P0. 05),与DDP组比较,PAWU+DDP组Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达率明显减少(P0. 05)。结论:增免抑瘤方及有效组分可以抑制卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤的生长,有效组分与顺铂联合应用有明显的协同增效作用,其机制可能与抑制Notch/Jagged1信号通路的激活相关。     

苦参碱含药血清对WB-F344细胞形态、增殖和Jagged1信号分子表达的影响

目的研究苦参碱含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞形态、增殖及Jagged1信号分子表达的影响,探讨苦参碱对肝干细胞诱导分化的作用机制。方法用不同浓度苦参碱含药血清（5%、10%、20%）作用于WB-F344细胞,以未用苦参碱含药血清处理的WB-F344细胞为空白对照组,观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学法观察ALB、Jagged1蛋白表达变化,RT-PCR观察Jagged1、Hes1mRNA表达的变化。结果经苦参碱含药血清干预后,WB-F344细胞形态发生明显改变：药物组细胞较对照组细胞体积增大,核缩小,核浆比减小,培养48 h大部分细胞呈多边形。MTT结果显示,5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清24、48、72 h均能不同程度抑制WB-F344增殖,且存在时间、剂量依赖性。免疫细胞化学结果显示,空白对照组WB-F344细胞表达Jagged1蛋白,不表达ALB蛋白,经苦参碱含药血清处理后Jagged1蛋白表达显著下降（P〈0.01）,ALB蛋白表达显著升高（P〈0.01）。RT-PCR结果显示,经苦参碱含药血清处理后Jagged1mRNA、Hes1mRNA表达显著下降（P〈0.01）。结论苦参碱含药血清可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向分化,其作用机制与调节Notch信号通路的关键分子有关。     

补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞间质转化的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立End MT模型,设立空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清高剂量组(10%含药血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清中剂量组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和补阳还五汤含药血清低剂量组(2. 5%含药血清+7. 5%空白血清+TGF-β1) 5组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光观察内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31),血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notch1,Jagged1及CBF1蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞增殖能力、迁移能力均显著增强(P 0. 01),CD31和VE-cadherin表达呈下降趋势,FSP1和α-SMA表达呈上升趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达显著上调(P 0. 01)。补阳还五汤含药血清干预后,与模型组比较,细胞增殖能力、迁移能力均明显减弱(P 0. 05,P 0. 01),且CD31和VE-cadherin表达呈上升趋势,FSP1和α-SMA表达呈下降趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可部分抑制人肺动脉内皮细胞发生间质转化,这一过程可能与调控Jagged1/Notch1信号有关。     

参芪抑瘤方含药血清对BGC-823胃癌细胞增殖和周期的影响

目的:探讨参芪抑瘤方含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和周期的影响,并探讨其作用机制。方法:以参芪抑瘤方3%,5%,10%含药血清干预BGC-823细胞后,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinase inhibitor,CDKN)1B,CDKN1C mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p27,p57蛋白表达情况。结果:不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24,48,72 h后,细胞存活率显著降低(P0.01),且与时间和浓度呈依赖关系;不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;Real-time PCR结果表明,与溶剂组和空白血清组比较,参芪抑瘤方各组CDKN1B,CDKN1C mRNA表达上调(P0.05,P0.01);Western blot结果显示,与溶剂组比较,参芪抑瘤方各组p27,p57蛋白表达上调(P0.05,P0.01)。结论:参芪抑瘤方含药血清可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能通过调节CDKN1B,CDKN1C mRNA及p27,p57蛋白表达,进而干预细胞周期有关。     

川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。方法体外建立神经干细胞培养体系,川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)处理神经干细胞72 h。CCK-8和BrdU法检测NSCs增殖;细胞免疫荧光检测NSCs分化;DAPI染色检测NSCs的凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)对NSCs增殖无影响(P0.05)。川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中浓度)促进神经干细胞分化(P0.05),促进Notch1、Tublin、caspase-3 mRNA表达(P0.05),抑制Jagged1、Hes1、Sox2,Pax6 mRNA表达(P0.05,P0.01);高浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进神经干细胞凋亡(P0.05),促进GFAP mRNA表达(P0.05),抑制Ngn1 mRNA表达(P0.01)。中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进Tublin蛋白及Ngn1 mRNA表达,抑制GFAP、Jagged1蛋白及GFAP mRNA表达(P0.05,P0.01),而对caspase-3蛋白表达无影响。结论中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清通过抑制Jagged1的表达,阻断Notch信号通路,诱导NSCs向神经元方向分化。     

参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制

目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达。结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25%,33.09%,34.50%;参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18%,49.46%,36.46%;COX-2 mRNA表达量下降90%,PTEN升高89.72%;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P0.05)。结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力。     

三子养亲汤含药血清对支气管上皮细胞中CysLTs介导的炎症通路的影响

目的:探究三子养亲汤含药血清对支气管上皮细胞中半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTs)介导的炎症通路的影响。方法:采用含药血清药理学的实验方法,以1.25%,2.50%和5.00%的三子养亲汤含药血清和空白血清来干预白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和CysLTs共同诱导刺激的支气管上皮细胞,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养基上清液中嗜酸性粒细胞趋化因子-1(eotaxin-1,Eot-1)和Eot-3的浓度,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)法检测支气管上皮细胞中半胱氨酰白三烯受体1(cysteinyl leukotrienes receptor 1,CysLTR1)和CysLTR2表达水平,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测支气管上皮细胞中CysLTR1和CysLTR2 mRNA表达水平。结果:2.50%和5.00%三子养亲汤含药血清组的细胞培养基上清液中的Eot-1和Eot-3含量明显低于同血清含量的空白组(P0.05);1.25%,2.50%和5.00%三子养亲汤含药血清组细胞中CysLTR2蛋白表达水平和CysLTR1 mRNA表达水平与同血清含量的空白组没有显著性的差异;2.50%和5.00%三子养亲汤含药血清组细胞中CysLTR1蛋白表达水平和CysLTR1 mRNA表达水平明显低于同血清含量的空白组(P0.05)。结论:三子养亲汤含药血清通过下调CysLTR1表达以及Eot-1和Eot-3表达和分泌,阻断CysLTs介导的炎症通路来治疗支气管哮喘。     

扶正抑瘤汤含药血清对胃癌SGC-7901细胞生长和凋亡的影响

目的:探究扶正抑瘤汤含药血清对胃癌SGC-7901细胞生长和凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组和扶正抑瘤汤低、中、高剂量(10g/kg、20g/kg、30g/kg)组,各组10只,灌胃处理3天后制备含药血清,使用含药血清培养胃癌SGC-7901细胞。采用MTT法检测SGC-7901细胞存活能力;采用Hoechest法检测SGC-7901细胞的凋亡;采用qRT-PCR法检测SGC-7901细胞中Bcl-2、Bax mRNA的表达;采用Western blot法检测SGC-7901细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与空白组相比,扶正抑瘤汤低、中、高剂量组可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并促进SGC-7901细胞的凋亡,下调SGC-7901细胞中Bcl-2/Bax水平,均具有剂量依赖性。结论:扶正抑瘤汤含药血清可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,促进其凋亡,可能通过下调Bcl-2/Bax通路,促进SGC-7901细胞程序性死亡。     

复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞Notch信号通路的影响

目的:观察复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) Notch信号通路的影响.方法:采用全骨髓贴壁法分离纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞;制备复方扶芳藤合剂含药血清,将30只SD大鼠随机分为2组,每组随机15只,分别为ig复方扶芳藤合剂2 g·kg-1 ·d-1 ig的药物干预组和生理盐水2 mL·kg-1·d-1ig的阴性对照组.取10％的含药血清及阴性对照组血清分别干预大鼠BMSCs,采用RT-PCR方法检测Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达变化;采用免疫细胞化学法检测Notch1,Jagged1表达变化.结果:RT-PCR显示药物干预组Notch1,Jagged1,Hes1的mRNA表达水平均高于阴性对照组(P＜0.05),免疫细胞化学显示药物干预组Notch1,Jagged1蛋白表达均高于阴性对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论:复方扶芳藤合剂含药血清可以引起大鼠BMSCs Notch信号通路上的关键基因和蛋白表达上调,激活Notch信号通路.     

Notch1下调对三叶青黄酮抑制食管癌EC9706细胞迁移和侵袭的影响

目的:观察三叶青黄酮(Tetrastigma Hemsleyani Radix flavone,THRF)对食管癌(esophagus cancer,EC)EC9706细胞增殖、迁移、侵袭能力及Notch1的影响,探讨其抗食管癌的可能作用机制。方法:体外培养EC9706细胞,以不同终质量浓度(0.5~20 g·L~(-1))三叶青黄酮进行处理,未加三叶青黄酮为空白组,以MW 167处理为MW167组。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8),检测三叶青黄酮对EC9706细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);采用细胞黏附实验,划痕修复实验,transwell小室体外侵袭实验观察EC9706细胞黏附力、迁移、侵袭能力,同时采用免疫细胞化学和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Notch1蛋白和mRNA表达的变化。结果:与空白组比较,三叶青黄酮可明显升高EC9706细胞抑制率(P0.05,P0.01),三叶青黄酮可明显降低EC9706细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数,Notch1阳性细胞率和mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论:三叶青黄酮能明显抑制EC9706细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,与其下调Notch1有关,可能是其抗食管癌的机制之一。     

养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠外周血T细胞Notch1,Jagged1信号通路

目的:观察养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠T细胞Notch信号受体1(Notch1)及Notch信号配体1(Jagged1)表达规律的影响,探讨其对放射性肺炎防治作用的机制。方法:将40只雌雄各半的SD大鼠以随机数字表法随机分为正常组、模型组、激素组、联合用药组,直线加速器对除正常组外的3组大鼠全胸单次照射,剂量为16 Gy。照射后第1天起各组予相应的药物灌胃。照射后4周,处死大鼠,取全肺称重计算肺系数,取大鼠肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,Notch1免疫组化染色,取全血标本进行免疫磁珠分选提取T细胞及流式细胞术检测Notch1比率,用提取的T细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Notch1,Jagged1 mRNA及蛋白表达,观察各组大鼠在放射后4周肺系数改变及Notch1,Jagged1表达的变化。结果:放射后4周,各组肺系数差异明显,正常组与联合用药组肺系数最为接近;与模型组比较,养阴清肺方联合泼尼松龙可明显降低Notch1 T细胞所占比例(P0.05),可明显降低Notch1,Jagged1mRNA表达(P0.05),明显下调Notch1,Jagged1相关蛋白表达(P0.05)。结论:养阴清肺方能明显下调放射性肺炎大鼠Notch1,Jagged1表达,可能是防治放射性肺炎发生发展的机制之一。     

灯盏花素通过调控LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制研究＊

目的 基于LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路探讨灯盏花素改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、辛伐他汀组（20 mg·kg^-1）和灯盏花素低、中、高剂量组（6、12、24 mg·kg^-1），每组10只。采用先腹腔注射75%蛋黄乳液后饲喂高脂饲料的方式建立高脂血症模型，同时给药干预，1次/天，连续28d。采用ELISA法检测大鼠血清中T-CHO、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、Cr、BUN水平；测定大鼠肝脏、肾脏系数；采用HE染色法观察肝肾组织病理学变化；采用免疫组化法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平；采用RT-PCR法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平mRNA水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显升高（P<0.05），HDL-C水平明显降低（P<0.05）；肝脏、肾脏系数明显增加（P<0.05）且出现病理变化；肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显降低（P<0.05），HMGCR水平明显升高（P<0.05）；肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较，辛伐他汀组和灯盏花素低、中、高剂量组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显降低（P<0.05），HDL-C水平明显升高（P<0.05）；肝脏、肾脏系数明显减小（P<0.05）且病变程度减轻；肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显升高（P<0.05），HMGCR水平明显降低（P<0.05）；肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显降低（P<0.05）。结论 灯盏花素能够改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能，其机制与激活LKB1/AMPK通路及抑制Notch/Jagged1通路和HMGCR水平有关。     

壁虎醇提物体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及机制研究

目的:研究壁虎醇提物(GAE)体外诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡作用及其可能机制,为激素非依赖性前列腺癌的治疗提供理论依据。方法:以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,MTT法检测3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L~(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用;3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后,另设空白组,Hoeehst33342荧光染色法,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,SP免疫组化法检测细胞内半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和Fas的表达情况并做统计学处理。结果:3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L~(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后能显著抑制PC-3细胞的生长且呈剂量和时间依赖性;与空白组比较,3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后Hoeehst33342荧光染色发现部分PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示3.5,4.0,5.0 g·L~(-1)的GAE作用48 h后,早期凋亡细胞分别占6.51%,12.48%和22.81%,且免疫组化显示细胞内蛋白Caspase-3和Fas的表达均上调且呈浓度依赖性(P0.05)。结论:GAE能够诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与死亡受体介导的信号通路有关。     

基于硫氧还蛋白还原酶1探究堆心菊灵对人前列腺癌细胞中活性氧产生的影响

目的 探究堆心菊灵在人前列腺癌细胞中的抗癌作用及其潜在的作用机制。方法 人前列腺癌DU145和PC-3细胞分别以不同浓度的堆心菊灵处理48 h,CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase1,TrxR1)m RNA表达情况。从人类蛋白免疫组化表达数据库中检测前列腺癌组织和正常组织中TrxR1蛋白表达情况;经堆心菊灵或活性氧（reactive oxygen species,ROS）抑制剂处理后,采用DCFH-DA染色法检测ROS的产生;敲除或过表达TrxR1,经堆心菊灵处理后,检测2种细胞中ROS水平。结果 堆心菊灵显著抑制前列腺癌细胞存活率和TrxR1 m RNA表达水平（P<0.05、0.001）,呈剂量相关性。与正常组织相比,TrxR1在前列腺癌组织中高表达。堆心菊灵显著诱导了前列腺癌细胞中ROS的产生,敲除TrxR1显著提高了前列腺癌细胞中ROS水平,过表达TrxR1抑制了前列腺癌细胞中ROS产生;而堆心菊灵可改善TrxR1过表达对ROS产生的抑制作用。结论 堆心菊灵可以通过靶向人前列腺癌细胞中的TrxR1来...     

四君子汤含药血清调控hTERT，TRF1，Tankyrase表达及对UCAC的影响

目的:应用四君子汤含药血清干预肠癌SW480细胞,观察人端粒酶逆转录酶(hTERT),端粒结合因子1(TRF1),端锚聚合酶(Tankyrase)mRNA及蛋白的表达变化,探讨其防治溃疡性结肠癌相关癌变(UCAC)的可能机制。方法:体外培养肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、四君子汤含药血清、美沙拉嗪含药血清干预,将经过干预后的SW480细胞,采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测肠癌SW480细胞中hTERT,TRF1及Tankyrase mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白血清组比较,四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组和美沙拉嗪含药血清组均能降低hTERT,TRF1,Tankyrase mRNA表达(P0.05);与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤(4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组明显降低hTERT,TRF1 mRNA表达(P0.05),四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组Tankyrase mRNA表达明显升高(P0.05)。与空白血清组比较,四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组和美沙拉嗪含药血清组hTERT,TRF1蛋白表达均降低(P0.05),美沙拉嗪含药血清组Tankyrase蛋白表达降低(P0.05);四君子汤含药血清组Tankyrase蛋白表达呈下降趋势,但无统计学差异;与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤(8.64 g·kg-1)含药血清组hTERT蛋白表达明显降低(P0.05),四君子汤(4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组TRF1蛋白表达明显降低(P0.05),四君子汤(2.16 g·kg-1)含药血清组Tankyrase蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:四君子汤含药血清可能通过下调hTERT,TRF1,Tankyrase表达,抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,达到防治UCAC的作用。     

健脾益气方含药血清通过Caspase-3/Vimentin促进人肝癌MHCC-97H细胞凋亡

目的:观察健脾益气方含药血清对人MHCC-97H肝癌细胞凋亡的影响,探讨凋亡过程中波形蛋白(Vimentin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化及其意义。方法:采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%,15%,30%体积浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin,Caspase-3,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达的影响。结果:健脾益气方中、高剂量含药血清均可以降低MHCC-97H肝癌细胞中Vimentin蛋白表达(P0.01),其下调程度与肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;Vimentin裂解组细胞增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最高;Caspase抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最低。与空白血清组比较,健脾益气方中、高剂量组,Vimentin裂解组Caspase-3蛋白表达上调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达下调(P0.01),且PARP-1蛋白出现了裂解片段;Caspase抑制组Caspase-3表达下调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达无统计学差异,PARP-1无蛋白裂解片段出现。结论:15%的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞MHCC-97H的干预效果最佳,可能通过Caspase-3下调细胞中Vimentin蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭;同时可能利用Caspase-3/Vimentin形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡。