甘氨鹅脱氧胆酸对体外细粒棘球蚴原头节活力及ROS影响

目的 研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid, GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法 将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500 μ mol/ L),应用体外培养技术,通过伊红染色法每天定时在光学显微镜下观察原头节的活力并记录存活和死亡数目。使用试剂盒检测不同浓度GCDCA处理 24 h后各组原头节体内caspase-3酶活性变化;DCFH- DA染色法荧光显微镜观察 GCDCA作用24 h后原头节内 ROS水平变化。结果 500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA处理后均可导致原头节活力减弱,且最高浓度组在第7 d时原头节全部死亡。500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA组作用原头节24 h后 caspase-3酶活性与对照组相比明显升高(F=555.162, P<0.05)。500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA作用原头节24 h后原头节内 ROS水平与对照组相比明显升高(F=216.901, P<0.05)。结论 GCDCA 能抑制体外原头节生长,促使原头节死亡,可能与活化caspase-3及提高原头节内ROS 水平相关,具体机制有待进一步研究。     

人源细粒棘球蚴喙钩形态学参数分析

目的 测定本地区人源细粒棘球蚴喙钩的形态学参数,为棘球蚴的分类及流行病学研究提供依据。方法 以外科手术的方法从患者肝脏分离肝包虫,取囊液等内容物离心沉淀制成涂片标本,光学显微镜下观察,根据形态确定棘球蚴原头蚴的喙钩,应用计算机图像分析系统采集喙钩总长、总宽、柄长、刀长4个形态学参数数据,用统计学软件进行统计分析。结果 棘球蚴的原头节上具有上下两层喙钩,上层为大钩,下层为小钩。分别采集到游离状态的大钩56个,小钩49个,测量并获得了两种喙钩的4个形态学参数:大钩的总长、总宽、柄长、刀长的平均值分别为12.38 μm、4.58 μm、5.51 μm和6.51 μm;小钩的总长、总宽、柄长、刀长的平均值分别为10.41 μm、3.76 μm、5.04 μm和4.72 μm。大钩和小钩的各项形态学参数比较结果具有统计学意义(P<0.05)。结论 本研究应用计算机图像分析系统获得本地区人源细粒棘球蚴喙钩的形态学参数,为棘球蚴的分类鉴定及流行病学研究提供了可靠的形态学资料。     

氨基醇咔唑化合物BTB3体外抗细粒棘球蚴效果的评价

目的观察氨基醇咔唑化合物BTB3体外抗细粒棘球蚴的效果。方法体外培养羊源细粒棘球蚴原头节和继发感染小鼠来源的生发层细胞,用浓度为1、2、4、8、10和20μg/ml的BTB3作用3 d后,分别采用美兰染色法和CCK-8法检测原头节和生发层细胞的活性。用扫描电镜观察10μg/ml BTB3对生发层细胞造成的损伤。体外培养细粒棘球蚴囊,用浓度为1、5和10μg/ml的BTB3作用2周后,观察其对囊的影响,并用扫描电镜观察囊内部结构的变化。结果 10μg/ml和20μg/ml BTB3组原头节的死亡率分别为(100.0±0.0)%和(85.2±7.2)%。但当浓度降低后,原头节死亡率均低于10%。生发层细胞经8、10和20μg/ml BTB3作用后,其细胞活性抑制率均达100%,其余低浓度BTB3组的抑制率随浓度的降低而降低。扫描电镜观察发现,BTB3可使生发层细胞发生脱落、皱缩以及空腔化。10μg/ml BTB3作用于棘球蚴囊14 d后,全部囊均出现塌陷。其超微结构显示,BTB3作用后棘球蚴内囊中出现了细胞脱落和不均匀的现象。结论 BTB3对体外培养的细粒棘球蚴原头节、生发层细胞和棘球蚴囊均有较强的作用,是一种潜在的抗棘球蚴药物。     

噻虫啉治疗继发性泡型包虫病的实验研究

目的 通过观察不同浓度噻虫啉(Thia)对棘球蚴的杀伤作用,评价噻虫啉应用于治疗多房棘球蚴病的效果,旨在探索噻虫啉开发为抗包虫病先导化合物的潜能。方法 体外实验中以不同浓度噻虫啉作用于多房棘球蚴原头节,以0.1%伊红染色评价原头节存活情况,并通过扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察原头节超微结构改变。体内实验将继发性感染多房棘球蚴小鼠分为3组:模型组、阿苯达唑组(ABZ, 100 mg/kg)、Thia组(20 mg/kg),以未感染小鼠作为空白对照组。经药物灌胃治疗4 w后,分离小鼠脾脏和包虫囊肿称取重量,计算脾脏指数和抑囊率,HE染色后观察囊肿形态学改变。此外,从体外(LO2和HepG2细胞)和体内(Balb/c小鼠)评价噻虫啉毒性。结果 40 μg/mL噻虫啉在体外即表现出对原头节的杀伤作用,并导致原头节体表及内部结构破坏。体内药物治疗4 w后,小鼠脾脏指数较模型组增高(P<0.05),包虫囊肿重量较模型组减轻(P<0.05)。包虫囊肿病理显示Thia组未见生发层结构。噻虫啉浓度低于80 μg/mL无明显细胞毒性,20 mg/kg噻虫啉无明显的体内肝肾毒性。结论 噻虫啉在体内外表现出明显的抗多房棘球蚴作用,并能增强小鼠的免疫功能,具有开发为抗包虫病先导化合物的潜能。     

细粒棘球蚴和多房泡球蚴在人体内蛋白质表达谱初步分析

目的 初步掌握流行于青海省细粒棘球绦虫幼虫棘球蚴(原头节、囊壁、囊液)和多房棘球绦虫幼虫泡球蚴在中间宿主人体内蛋白质表达情况。方法 利用SDS-PAGE和 Western-blot分析棘球蚴原头节、囊壁、囊液蛋白质和泡球蚴总蛋白表达谱。结果 细粒棘球蚴原头节的蛋白质浓集在分子量72 kDa处,囊壁的蛋白质浓集在72 kDa、26 kDa和17 kDa 处,囊液的蛋白浓集在72 kDa、43~55 kDa、26 kDa和17 kDa;泡球蚴总蛋白质浓集在分子量72 kDa、55~72 kDa和26 kDa处。结论 不同地区细粒棘球蚴在人体内蛋白的表达存在差异;不同亚种泡球蚴原头节蛋白的表达存在差异。     

过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞Caspase-3表达及超微结构改变的影响

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响。方法RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测原头节细胞凋亡情况,用过氧化物酶标记链霉卵白素(SP)染色半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)。在透射电镜下观察原头节细胞超微结构的变化。结果过氧化氢诱导原头节细胞凋亡细胞增加,caspase-3表达增加,电镜观察原头节细胞异染色质增加,部分细胞染色质异常浓缩呈现凋亡细胞征象。结论H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,且caspase-3参与原头节细胞的凋亡。     

达克罗宁对细粒棘球蚴原头节体外作用及其ROS水平的影响

目的初步探究达克罗宁对细粒棘球蚴原头节体外生长的影响以及原头节内ROS的表达情况。方法用达克罗宁与细粒棘球蚴原头节体外共培养,采用0.1%曙红排斥试验观察原头节的形态,统计存活率并绘制原头节的生存曲线;将DCFH-DA探针加入孵育原头节的培养基以检测其ROS活性;用SOD和Caspase-3试剂盒测定SOD和Caspase-3的活性。结果 40μg/ml达克罗宁可使体外培养的原头节在第4d全部死亡;达克罗宁以剂量依赖的方式使原头节的ROS和Caspase-3表达量增加,同时降低SOD的活性。结论达克罗宁具有体外抗细粒棘球蚴原头节作用,通过激活ROS诱导氧化应激导致Caspase-3被激活从而引起细粒棘球蚴原头节的凋亡。     

绵羊肝脏、肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达分析

目的 探讨绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达谱,为虫体生长、发育调控特异性蛋白筛选奠定基础。方法 提取寄生于绵羊肝脏与肺脏棘球蚴原头节蛋白质样本进行 SDS-PAGE 分析后,利用iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析(LC-MS/MS)寄生于绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节蛋白质表达谱,通过Mascot软件和GO软件分析寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节的差异表达蛋白质。结果 本研究共鉴定了1 229个有意义的蛋白质点,通过肝脏与肺脏比较有无差异性(肝脏原头节 VS肺脏原头节)和调节趋势后获得217个差异表达蛋白质,在肝脏上调蛋白74个(脂肪酸绑定蛋白、ɑ纤维蛋白原、环氧化物酶、过氧化氢酶、酰基COA合成酶、载脂蛋白A4、磷酸化酶、6-磷酸葡萄糖内脂酶、乙酰辅酶酰基转移酶、还有一些未鉴定的蛋白等);下调蛋白143个(乳酸脱氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、内质网氧化还原酶、肌动蛋白、肌球蛋白、天冬酰胺酶、铁蛋白、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、热休克蛋白90、胶原纤维I,胶原纤维IV、波形蛋白、玻连蛋白、磷脂转运蛋白、磷酸甘油酸激酶)。结论 本研究发现寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节蛋白质表达存在差异。     

ERK抑制剂PD98059体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用的研究

目的探讨ERK1/2抑制剂PD98059体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴,分组后分别加入100、50、25、12.5μmol/L的PD98059后继续培养7d,利用伊红染色方法在倒置显微镜下观察原头蚴的活力,实验重复3次,绘制原头蚴活力曲线;扫描电子显微镜(SEM)下观察不同浓度PD98059组原头节表面结构改变。结果 PD98059作用1d对细粒棘球蚴原头节具有杀伤作用,第7d100μmol/L PD98059组原头节的活力仅为(12.4±0.9)%。超微结构显示原头节顶突外翻、变形,顶突界面缺损,吸盘变形,甚至出现虫蛀样损害。结论 PD98059在体外有显著的抗细粒棘球蚴原头节的作用,可认为是一种新型的抗包虫药物。     

雄黄对细粒棘球蚴原头节体外生长及抗氧化酶活性的影响

目的初步探讨雄黄对体外细粒棘球蚴原头节生长及抗氧化酶的影响。方法在体外培养的基础上,将不同浓度雄黄分别作用细粒棘球蚴原头节2 d,光镜下观察原头节活力及形态变化;扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察原头节表面及内部超微结构改变;采用ELISA法测定SOD、ROS、HO-1和NQO-1表达情况;采用Caspase-3试剂盒检测原头节Caspase-3酶活性。结果250、500、1000、2000μmol/L雄黄体外作用于细粒棘球蚴原头节均能抑制其生长,雄黄作用2 d后光镜下观察原头节形态结构均发生改变,虫体萎缩,伊红染色呈红色(正常虫体为透明无色);SEM下观察原头节虫体皱缩,原头节正常形态被破坏;TEM下观察原头节内部微绒毛减少,合胞体带变薄、结构松散并有少量脂滴。EUSA检测SOD、HO-1和NQO-1活性均呈下降趋势,ROS和caspase-3酶活性均呈升高趋势(均P<0.05)。结论雄黄体外可抑制细粒棘球蚴原头节生长,破坏原头节形态结构,降低抗氧化酶活性,该抑制作用与机体抗氧化防御系统平衡失调有关。     

细粒棘球绦虫原头节在NIH株小鼠体内发育的组织学及宿主细胞反应观察

本文的观察结果表明:接种后1周,原头节的皮层内已有实质细胞长入,虫周有较大空隙,宿主细胞反应轻微。死亡原头节则已被大量炎细胞紧密包围;2～4周,大部分原头节的实质组织消失而形成细粒棘球蚴生发层,宿主细胞反应基本消失。而死虫周围则有夏科-雷登氏结晶体出现;2个月后,生发层外均已出现角质层,死亡崩解虫周的细胞反应开始减轻;4～6个月,细粒棘球蚴囊不断增大,并在生发层内陆续出现不育囊结构,虫周纤维组织较少,而解体的原头节内均已有大量胶原及网状纤维长入。对生发层的组织发生学以及适宜中间宿主对原头节的细胞反应特点进行了简要讨论。     

吡喹酮对体外细粒棘球绦虫原头节作用机理的初步探讨

细粒棘球绦虫原虫节受浓度为0.05～1μg/ml的吡喹酮作用后,其皮层即出现肿胀、空泡,严重者还发生破裂,脱落并暴露肌层或实质组织;部分细胞显示核浓缩,溶解及崩裂。该药还能迅速引起原头节体内糖原含量的减少以及AKP和ATP酶活力的减弱,但对虫体核酸及蛋白质的作用则发生较慢或影响较小。初步认为吡喹酮的体外杀虫作用主要是通过药物破坏原头节的皮层并抑制虫体的糖代谢而实现的。     

白黎芦醇体外对多房棘球蚴原头节和微囊的作用研究

目的 研究白藜芦醇(Resveratrol, RES)体外对多房棘球蚴原头节(Protoscoleces, PSCs)和微囊的作用效果,为多房棘球蚴病的临床用药提供新的依据。方法 PSCs体外经不同浓度(5、10、20、40、80、100、200和400 μmol/L)的RES作用7 d,采用台盼蓝染色观察其活力与形态变化,采用扫描电镜和透射电镜观察其超微结构变化,运用化学发光法检测上清中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)活性;微囊体外经RES(40 μmol/L)作用14 d后于光镜下观察其活力和形态变化,运用化学发光法检测上清中ALP活性。结果 不同浓度的RES体外持续作用7 d,PSCs死亡率呈剂量、时间依赖性增高,并伴随大量小钩脱落。当40 μmol/L RES作用至第6 d,PSCs死亡率达到100%,且虫体小钩、吸盘和外皮等超微结构被破坏;在同条件下,阿苯达唑亚砜(Albendazole sulfoxide, ABZ-SO)处理组中PSCs死亡率为13.25%±1.41%,对照组-二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)组PSCs死亡率仅为6%±0.71%。不同浓度的RES作用至第6 d,PSCs培养上清中ALP活性呈剂量依赖性升高(F=36.94, P< 0.001),其中,RES浓度为20和40 μmol/L时,上清中ALP活性分别为(2.72±0.24) U/L和(2.95±0.10)U/L,分别与DMSO组(1.97±0.18)U/L间差异存在统计学意义(t=2.94, P=0.0259和t=7.066, P=0.000 4)。另外,RES作用至14 d,微囊透光性降低,生发层皱缩且与角质层分离,同时上清中ALP活性(2.74±0.15)U/L高于较DMSO组(2.08±0.09)U/L(t=3.83, P=0.019),但ABZ-SO组(2.29±0.14)U/L与DMSO组间差异无统计学意义(t=1.271, P=0.273)。结论 白藜芦醇体外可抑制多房棘球蚴原头节和微囊的活性,有望成为治疗多房棘球蚴病的潜在候选药物。     

吡喹酮在体内,体外抗细粒棘球蚴囊的作用（摘要）

吡喹酮在体内、体外抗细粒棘球蚴囊的作用（摘要）肖树华，杨元清，尤纪青，沈炳贵，柴君杰（中国预防医学科学院寄生虫病研究所，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海２０００２５，中国；新疆地方病防治研究所，乌鲁木齐８３０００２，中国）关键词　细粒...     

胆汁对体外细粒棘球蚴原头节的作用观察

目的探讨不同浓度的胆汁对细粒棘球蚴原头节的生长作用及形态学影响。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分别加入40％、60％、80％、100％的胆汁中体外孵育。0．1％伊红染色在倒置显微镜下检测原头节的活力及形态改变,实验重复三次;透射电子显微镜下（TEM）下观察胆汁作用后原头节表面超微结构改变。结果不同浓度的胆汁对原头节均有杀伤作用,其中浓度为100％和80％的胆汁对细粒棘球蚴原头节杀伤作用最明显。倒置显微镜下观察发现,不同浓度的胆汁作用细粒棘球蚴原头节后,原头节多呈外翻型,原头节顶突上的小钩排列紊乱,部分脱落,吸盘突起,变形,活动性减弱。随着浓度的增加,变化越明显。超微结构显示40％的胆汁作用3d后,原头节纤毛出现少量缺损,合胞体带排列较紊乱,合胞体带内出现散在少量的空泡和脂滴。60％胆汁作用3d后,合胞体带内微毛出现融合,腔内出现空泡和脂滴,数量多且大。结论胆汁作用后,可导致体外细粒棘球蚴原头节的形态发生不同程度的改变并有有抑制作用,然而关于胆汁在体内的疗效有待于进一步研究。     

P38MAPK抑制剂SB202190体外抑制细粒棘球蚴原头节生长的研究*

【摘要】 目的 探讨P38MAPK抑制剂SB202190体外抑制细粒棘球蚴原头节生长的作用。 方法 将体外培养的细粒棘球蚴原头节分别加入12.5、25、50、100μmol/L的 SB202190中体外孵育。利用伊红染色的方法,在光镜下观察原头节的活力变化。实验重复三次;扫描电子显微镜下（SEM）下观察SB202190作用后原头节表面超微结构改变;不同浓度SB202190作用24小时后,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性检测试剂盒检测caspase-3酶活性。结果 50μmol/L和100μmol/L 的SB202190作用1天后,头节活力开始下降。作用14天后,100μmol/LSB202190组无存活的头节,50mol/LSB202190组的头节活力仅为13.8%。超微结构显示100μmol/LSB202190作用6d后,原头节顶突外翻、变形,顶突界面缺损,吸盘变形,体表出现虫蛀样损害。不同浓度SB202190作用24h后,与正常对照组比较,SB202190抑制剂高浓度组原头节的caspase-3表达明显增高。结论 P38MAPK抑制剂SB202190在体外有明显的抑制细粒棘球蚴原头节生长的作用。     

Immunochemical localization of major hydatid fluid antigens in protoscoleces and cysts of Echinococcus granulosus from human origin

Monospecific rabbit antisera obtained through experimental immunization with previously purified proteins were used in the structural localization of two hydatid fluid antigens, antigen 5 and antigen B, in cyst membranes and protoscoleces of E. granulosus from human origin. The antigen-antibody reaction was revealed by an avidin-biotin-peroxidase technique. Antigen 5 was not evident in the laminated membrane of the cyst wall, but it was associated with the germinal membrane of the cyst wall and brood capsules. The parenchyma of invaginated and evaginated protoscoleces was heavily labelled. The tegument, the calcareous corpuscles, the suckers and the hooks did not contain antigen 5. Degenerated protoscoleces were also labelled. Antigen B localization was essentially identical to antigen 5, but degenerated protoscoleces were not recognized by anti-antigen B antiserum. Technical aspects and differences with previously published work are discussed.