人精子蛋白17放射免疫分析方法的建立

目的:建立人精子蛋白17(Sp17)的放射免疫分析方法。方法:用重组人Sp17(rhSp17)免疫动物制备高质量的抗血清,用氯胺T法制备125I-rhSp17,建立了Sp17放射免疫分析方法,并测定了正常人(n=59)及35例患者(卵巢癌20例,子宫癌14例,宫颈癌1例)血清Sp17值。结果:测定范围3.3~800μg/L;灵敏度为2.0μg/L;批内CV为7.5%~9.8%,批间CV为8.2%~13.2%。正常人血清Sp17值为(15.60±7.66)μg/L。以Sp17>31.92μg/L为阳性,35例女性肿瘤患者血清标本15例阳性。结论:Sp17的放射免疫分析是一种简便、灵敏、特异的分析方法,可满足临床和科研的需要;Sp17的测定对研究该蛋白的功能、天然分布和异常表达有重要意义。     

精子蛋白17的研究进展

精子蛋白 17(Sp17)为一种睾丸组织特异性蛋白 ,参与精子的顶体反应。然而 ,近年来发现Sp17在正常非睾丸组织和肿瘤组织也有表达。它作为一种免疫避孕的候选抗原以及肿瘤免疫治疗的理想靶分子倍受关注。本文就Sp17的特性、表达与分布、生理学功能及临床研究的新进展进行了综述。     

AAT蛋白在人精子中的鉴定和定位

目的对α1-抗胰蛋白酶（AAT）在人精液和精子中进行鉴定以及定位。方法应用免疫印迹方法鉴定AAT蛋白，利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究AAT在精子上的定位。结果证实在人精浆和精子里都存在AAT蛋白，且其主要定位于精子的头部，尤其在赤道板处有强荧光。结论通过对AAT在人精子上的鉴定和定位，可以帮助进一步研究该蛋白对精子的作用。     

乳腺癌耐药蛋白的研究现状

乳腺癌耐药蛋白是一种新发现的耐药蛋白，其介导的多药耐药与P-糖蛋白（P-gP）不同，在肿瘤组织中的表达情况差异较大。笔者就乳腺癌耐药蛋白的结构特性及其介导的多药耐药及在肿瘤中的表达情况等研究现状作一综述。     

乳腺癌耐药蛋白的研究现状

乳腺癌耐药蛋白（ABCG2/BCRP）属于ABC（ATP-binding cas s ette）转运体家族成员,主要参与细胞内物质的转运。以往研究认为ABCG2与肿瘤细胞的多耐药性有关,近十年来研究发现ABCG2对干细胞的分化和发育具有保护作用,且在肿瘤干细胞内大量表达。因此,研究ABCG2的结构与功能、ABCG2在肿瘤耐药中的作用及ABCG2与肿瘤干细胞的关系,有助于为肿瘤治疗寻找新颖的靶点。     

人精子在附睾中的成熟

精子在人附睾内转运过程中获得使卵子受精的主要功能。这些功能包括 :相对活率、一致的形态、结合透明带的能力、发生顶体反应的能力、与卵黄和致密染色质融合的能力、体内和体外使卵子受精的能力、维持正常胚胎发育的能力等。已经鉴定了许多附睾分泌的糖蛋白 ,它们与特定的精子膜区域结合。这些蛋白可能与促进精 卵作用有关。作为辅助生殖技术的结果 ,取自附睾近端的“未成熟”精子或睾丸生殖细胞启动胚胎发育的能力依赖于精子在附睾内的转运、在女性生殖道中存活、输送直至被卵子包围。     

PHF7在人精子中相互作用蛋白分析

目的筛选人精子中与PHF7相互作用的蛋白质并分析其作用。方法构建质粒表达GST-PHF7融合蛋白,通过GST pull-down实验串联质谱检测人精子中与PHF7特异性结合的蛋白质,进行GO富集分析和KEGG通路分析。结果利用GST-PHF7诱饵蛋白从人精子细胞总蛋白中成功钓取靶蛋白。经过质谱检测,筛选出人精子中与PHF7特异结合的蛋白75个。GO分析结果表明,这些蛋白在生物学过程上主要富集在蛋白运输和细胞内定位等;在细胞成分上主要富集在细胞器,囊泡和外泌体等;在分子功能上主要富集在结合蛋白质,核酸和酶类等。KEGG分析结果表明,这些蛋白富集在细胞代谢和遗传信息的处理等通路。结论 PHF7与精子内多种蛋白质相互作用,调节蛋白合成,运输和降解及能量代谢等可能是其调节精子发生的机制。     

人精子表面Eppin蛋白分子网络的研究

Eppin(SPINLW1;基因号:57119)基因是定位于人类染色体20q12-13.2的单拷贝基因[1-2],属丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的成员,用125I标记的重组Eppin对新鲜的、有活动力的"上游"精子饱和性结合分析表明,精子表面可能存在Eppin的结合受体[3].     

重组人睾丸精子结合蛋白对人精子运动参数的影响

目的:探讨重组人睾丸精子结合蛋白(TSBP)对体外培养人精子运动参数的影响。方法:将22例生育男性的精液经Percoll密度梯度离心后,分别与0.01mg/ml及0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外共同孵育1h或3h,同时设立对照组,Western印迹检测重组His6-TSBP与精子膜的结合情况,计算机辅助精液分析(CASA)系统测定重组His6-TSBP对精子运动参数的影响。将12例弱精子症患者的精液按同样方法处理,检测重组His6-TSBP对弱精子症患者精子运动参数的影响。结果:0.1mg/ml重组His6-TSBP与生育男性精子作用1h可以提高体外培养精子的前向运动百分率(a+b级精子百分率),培养3h后前向运动百分率和活率均有所提高,差异具有显著性(P<0.05);0.01mg/ml重组His6-TSBP对检测各指标均无显著性影响。0.1mg/ml重组His6-TSBP与弱精子症患者精子作用3h可以提高精子前向运动百分率(P<0.05),但对活率无显著影响。结论:0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外可以提高生育男性精子的前向运动百分率和活率及弱精子症患者精子的前向运动百分率。     

钙粘附分子CDH18、PCDH17在人无精子症睾丸中的表达

目的:评价钙粘附家族分子CDH18和PCDH17在人无精子症及正常睾丸组织中的表达及意义。方法:常规病理组织学切片观察人非梗阻性无精子症及正常睾丸组织支持细胞-生精细胞紧密连接改变情况,随后应用包含有多个人钙粘附家族分子在内的cDNA微矩阵芯片对正常人及无精子症睾丸组织中差异表达情况进行研究;依据杂交结果设计Western蛋白印迹验证。结果:37.5%的无精子症睾丸组织出现明显的支持细胞-生精细胞紧密连接失常;部分钙粘附分子表达出现明显改变,其中CDH18及PCDH17表达下调。结论:钙粘附家族分子CDH18及PCDH17可能在无精子症的发生与进展过程中起一定的作用,该作用可能与支持细胞-生精细胞紧密连接失常有关。     

SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨SEPT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化精子,免疫细胞化学技术检测SEPT4在特发性弱精子症患者和正常男性精子中的定位及表达变化,同时用RT-PCR和W estern印迹技术,从基因和蛋白水平检测SEPT4的表达及差异。结果:免疫细胞化学表明,SEPT4定位于精子环并且在特发性弱精子症患者精子中的表达显著低于正常男性(94.75±19.95vs111.51±17.57,t=3.452,P<0.01);RT-PCR显示,特发性弱精子症患者精子中SEPT4 mRNA的表达水平与正常男性相比显著降低(0.56±0.15vs0.71±0.16,t=3.521,P<0.05);W estern印迹结果与RT-PCR结果一致,SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达亦显著低于正常男性(0.48±0.20vs0.77±0.18,t=5.872,P<0.05)。结论:SEPT4在特发性弱精子症患者精子中的表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的原因之一。     

TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨TEKT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化特发性弱精子症患者和正常男性精子,采用RT-PCR和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测TEKT4的表达及其差异。结果:RT-PCR结果表明,TEKT4 mRNA在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比显著降低(0.59±0.13 vs 0.75±0.15,t=4.325,P<0.05);Western印迹结果与RT-PCR结果一致,TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比亦显著降低(0.48±0.14 vs 0.69±0.13,t=5.939,P<0.05)。结论:特发性弱精子症患者精子中TEKT4表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的重要环节之一。     

人细胞核自身抗原精子蛋白的研究进展

人细胞核自身抗原精子蛋白（humannuclearautoantigenicspermprotein,hNASP）是一种组蛋白结合蛋白,存在于所有的分裂细胞中。NASP作为组蛋白的转运蛋白参与细胞周期的调节。人类NASP分为睾丸型和体细胞型两种,与组蛋白结合参与核小体形成,其表达不充分将会使DNA复制停止以及细胞分裂的停止。本文就NASP的组成、活性调节、生理功能、在细胞周期调节中的作用以及其临床检测的应用进行综述。     

精子蛋白17异常表达增强卵巢癌细胞HO-8910迁移性

目的:探讨精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)异常表达对人卵巢癌细胞HO-8910迁移性的影响。方法:应用脂质体转染法将携带Sp17和增强型绿色荧光蛋白基因的重组质粒pEGFP-Sp17转染卵巢癌细胞HO-8910,RT-PCR及Western印迹法检测Sp17的表达情况;用Transwell小室法检测细胞迁移能力的改变。结果:重组质粒pEGFP-Sp17转染HO-8910细胞后,Sp17与EGFP以融合蛋白形式表达;重组质粒转染组与空载体转染组发生迁移的细胞数分别为(156.6±14.9)个/高倍视野和(39.3±8.53)个/高倍视野,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:Sp17基因异常表达明显增强卵巢癌细胞HO-8910迁移能力。     

IL-17在乳腺癌组织中的表达及其意义

分析IL-17在乳腺癌和乳腺良性肿瘤中的表达及意义。回顾性分析山东省立医院集团东营医院普外科2010年7月—2013年9月进行手术治疗的乳腺癌患者和乳腺良性肿瘤患者,采用免疫组织化学的方法,分析IL-17在病理标本中的表达差异。IL-17在乳腺癌组织中的阳性表达率53.17%,明显高于乳腺良性肿瘤(17.31%),差异具有统计学意义(P0.01)。乳腺癌患者126例,其中,浸润性导管癌59例,IL-17阳性细胞数为15.42±5.03,阳性患者33例;浸润性小叶癌49例,IL-17阳性细胞数为15.41±5.18,阳性患者24例;乳头状癌18例,IL-17阳性细胞数为16.83±5.31,阳性患者10例;乳腺良性肿瘤104例,IL-17阳性细胞数为7.37±5.64,阳性患者18例。IL-17在乳腺癌组织中的表达与临床分期、组织学类型、病理分级和淋巴转移等因素不相关(P0.05)。     

不育患者血清精子蛋白17抗体的检测及临床意义

目的:检测抗精子抗体(AsAb)阳性不育患者血清中抗精子蛋白17(Sp17)的抗体,探讨该抗体在免疫性不育血清学诊断和免疫避孕方面的潜在应用价值。方法:用重组人Sp17作为抗原,ELISA法检测62例AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率及滴度,分析AsAb中抗Sp17的含量。结果:AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率为56.5%,男女之间差异无显著性。Sp17抗体占AsAb的(10.09±7.45)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:Sp17是重要的精子抗原组分,血清中Sp17抗体的检测可作为不育患者辅助诊断指标,同时也提示Sp17可能是一种免疫避孕候选抗原疫苗。     

弱精子症患者精子蛋白的初步研究

目的从蛋白质水平探讨弱精子症患者精子蛋白的改变,以期寻找精子活动力低下的原因。方法运用蛋白凝胶电泳技术分离90例特发性弱精子症患者和30例正常供精者精子标本的总蛋白质,结合免疫印迹技术鉴定差异蛋白,并对试验数据进行统计学分析。结果患者组与对照组精子蛋白表达量存在差异,且患者组中精子活力低下不同严重程度者的蛋白含量也存在差异(P<0.05),对于差异显著条带的Western Blotting分析显示差异蛋白为DDX4。结论精子活力与蛋白质差异表达有关,主要差异蛋白DDX4可作为评估精子活力的生物标志物。     

死精子症精子相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:运用双向电泳(2-DE)和质谱技术比较1例死精子症患者和正常人精子的蛋白质组成差异。方法:用2-DE分离了10例正常生育者30份精子标本和1例死精子症3份精子标本的蛋白质,分别获得其参考图谱并进行比较,用质谱技术鉴定其中部分差异蛋白点。结果:在正常精子图谱和死精子症患者精子图谱分别分离出(905±57)和(792±28)个蛋白质点,死精子症患者精子图谱上有178个点未能匹配。对其中6个在患者图谱中缺失的蛋白质点进行了鉴定。结论:死精子症患者图谱上缺失的6个蛋白,可能与死精子症的形成有关。     

精子相关抗原SPAG9在人精液精子中的表达及定位

目的:SPAG9作为MAPK家族中的成员,在精卵融合过程中发挥着重要的作用。本研究检测SPAG9在人精液精子中的表达情况。方法:取人不同组织(肌肉、肝、食管、肺、胃、肾、前列腺、子宫、睾丸、附睾)标本及健康男性的精液精子,为了排除圆形细胞的污染,精液标本经非连续性Percoll梯度离心、分离纯化;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和间接免疫荧光方法,从mRNA和蛋白水平检测SPAG9在精子中的表达。结果:RT-PCR结果显示,SPAG9mRNA不仅在各种不同的组织中有表达,而且在人精液精子中也有表达;间接免疫荧光结果显示,SPAG9蛋白主要定位于人精液精子头部的赤道板和精子尾部鞭毛上。结论:SPAG9在人精液精子中有表达,可能在精子获能和运动中有一定作用。     

人工智能在乳腺癌筛查与诊断中的研究现状

目的围绕在乳腺癌筛查与诊断中开展的基于神经网络的人工智能的研究,对其现状及临床应用价值进行概述。方法检索中国知网和Pub Med数据库中神经网络和人工智能在乳腺X线、乳腺超声、乳腺磁共振及乳腺病理学诊断方面的联合研究,进行综述。结果乳腺X光数字乳腺图像数据库(DDSM)等乳腺X线公共数据库为神经网络在乳腺X线领域的研究提供了原材料,国内外运用神经网络对乳腺疾病影像进行筛查及诊断的研究中,以乳腺X线开展得最多。神经网络在乳腺X线及乳腺彩超领域均可做到病灶分割、测量、特征分析、良恶性判断及出具结构化报告。神经网络在乳腺超声领域的应用集中在乳腺疾病良恶性的诊治。三星麦迪逊集团率先将研究成果嫁接在超声仪器中。乳腺MRI具有较多高通量信息,率先成为人工神经网络与影像组学联合研究的切入点。病理图像拥有较多需测量的数据信息,数据量化分析是神经网络的优势,二者结合,可显著提高病理医生的诊断时效。结论研究人工智能在乳腺癌的筛查与诊断中的应用,实质是分析神经网络在乳腺影像及病理领域的应用。目前人工智能筛查可以作为医师辅助工具,是一个客观诊断参考助手,用于提高乳腺超声的诊断时效。随着医学影像组学及神经网络彼此的发展,人工智能在医学领域的应用可扩展到手术方式设计、疗效评估、预后分析等。