化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏NLRP3、Caspase1、IL-1β表达的影响

目的观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β表达的影响。方法将40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、造模组(30只),采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)手术复制梗阻性肾病模型,成功后随机分为模型组、西药组和中药组,每组各10只。西药组给予依普利酮100 mg/(kg·d),中药组给予化瘀解毒方13.7 g/(kg·d),假手术组和模型组给予等量生理盐水,连续给药10天。检测各组血清IL-1β含量,检测肾脏NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,检测肾脏TUNEL阳性细胞率。结果假手术组NLRP3表达不明显,Caspase-1及IL-1β呈弱表达,仅见少量TUNEL阳性细胞。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达升高(P0.01);NLRP3主要表达于肾间质巨噬细胞及肾小管上皮细胞,Caspase-1及IL-1β主要见于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞增多,以间质扩张的远端小管上皮细胞为主(P0.01)。与模型组比较,两个给药组血清IL-1β含量降低(P0.01),NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达降低,TUNEL阳性细胞率降低(P0.05,P0.01)。结论化瘀解毒方可下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,减轻肾组织炎症损伤。     

基于NALP3炎性体信号通路研究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制

目的:探究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎以及对NALP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins-3,NALP3)信号通路的影响。方法:将SD大鼠分为6组,分别为正常组,模型组(踝关节腔注射尿酸钠制备),栀黄止痛颗粒低、中、高剂量(1.0,2.5,5.0 g·kg-1)和阳性药组(秋水仙碱,3.0 g·kg-1),酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)含量,造模后24 h评定大鼠步态以及关节炎症指数,造模前、造模后6,12,24,48 h测定大鼠裸关节肿胀度。苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化法检测关节组织中NLRP3,IL-1β,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与正常组比较,模型组血清中TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α,IL-6,IL-1β含量(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠步态较差、关节肿胀显著(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、药物处理组步态、关节肿胀得到所改善,随着药物剂量浓度的增加,步态、关节肿胀分级逐渐降低(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组踝关节组织中NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组均显著降低NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白的表达(P0.01)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1表达阳性表达量显著升高,而与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒中、高剂量组显著降低阳性表达率(P0.01),具有剂量依赖性。结论:栀黄止痛颗粒能够缓解痛风性关节炎大鼠关节肿胀,其机制可能与抑制NALP3炎性体信号通路有关。     

加味四妙散汤对急性痛风性关节炎大鼠炎性细胞因子及多靶点调节信号通路影响

目的:探讨加味四妙散汤对急性痛风性关节炎大鼠炎性细胞因子及多靶点调节信号通路影响。方法:选取由本院实验动物中心提供雄性Wistar健康大鼠40只,依据随机数字表法分为四组,对照组、模型组、秋水仙碱组与加味四妙散汤组,每组10只;制备急性痛风性关节炎大鼠模型,使用ELISA法检测各组大鼠关节液内炎症因子含量,免疫印迹法检测关节周边组织内Caspase-1、TLR4、ASC及NF-κB蛋白表达情况,RT-PCR检测关节周边组织内Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达情况。结果:模型组IL-6、TNF-α及IL-1β含量较对照组上升,加味四妙散汤组和秋水仙碱组较模型组下降,差异均有统计学意义(P0.05),加味四妙散汤组TNF-α含量较秋水仙碱组升高,差异有统计学意义(P0.05);模型组Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达量较对照组上升,加味四妙散汤组Caspase-1、ASC mRNA表达量较模型组下降,秋水仙碱组Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达量较模型组和加味四妙散汤组下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:加味四妙散汤可抑制急性痛风性关节炎大鼠关节液内炎性因子含量,同时调节信号通路内蛋白及mRNA表达水平起到治疗作用。     

牡丹花总黄酮对痛风性肾病大鼠NLRP3炎症小体及炎症因子表达的影响

目的：探究牡丹花总黄酮对大鼠痛风性肾病模型保护作用的可能机制。为治疗痛风性肾病的药物研究提供科研数据支撑。方法：使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠痛风性肾病模型,大鼠随机每12只分为空白组、模型组、别嘌醇组(42 mg·kg^-1)、阳性药痛风舒片组(600 mg·kg^-1)、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组(TFPF,260、130、65 mg·kg^-1);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠肾脏组织匀浆中转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-1β含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织细胞形态变化;原位末端标记法(TUNEL)观察肾脏组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法观察肾脏NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织中NLRP3、Cas...     

基于NLRP3炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg·kg-1),每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P0.01)。结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

二陈汤加味通过抑制NLRP3通路对慢性阻塞性肺疾病的防治作用

目的:观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体相关基因表达的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎的分子机制。方法:采用脂多糖(LPS)联合香烟烟雾方法制备COPD大鼠模型。40只大鼠随机平均分为正常组,模型组,二陈汤加味组,MCC950(NLRP3抑制剂)组。造模期间(从实验第1～30天),MCC950组于实验第1天单次腹腔注射60 mg·kg~(-1);二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)剂量灌胃,1次/2 d。造模成功后,从实验第31～45天,MCC950组腹腔注射3 mg·kg~(-1),1次/2 d;二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)剂量灌胃,2次/d;正常组、模型组灌胃生理盐水10 g·kg~(-1)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠肺组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)和趋化因子8(CXCL8)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠外周血PBMCs中NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达;光镜观察肺组织结构变化,免疫组化检测NLRP3,ASC和Caspase-1在肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织匀浆中IL-1β,IL-18和CXCL8含量均明显升高(P0.05,P0.01);PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味组PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05,P0.01),肺匀浆中IL-1β,IL-18和CXCL8含量均明显下降(P0.05,P0.01),肺组织结构明显改善。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能与抑制PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA表达,减少IL-1β,IL-18和CXCL8的释放有关。     

车前子不同炮制品抗大鼠膜性肾病的比较

目的:比较车前子生品和盐炙品水煎液抗大鼠膜性肾病的活性。方法:热回流法提取车前子不同炮制品;选用改良的Border法应用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)建立大鼠膜性肾病模型,在给药的第6周末检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)及血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),总蛋白(TP),尿素氮(BUN),肌酐(SCr)水平;采用电镜和光镜观察肾脏病理形态学变化,免疫组化法检测各组大鼠肾组织肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,转化生长因子(TGF)-β1,核转录因子-κB(NF-κB)p65的表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠的尿蛋白、肾指数、血清生化指标、肾脏免疫调节因子具有极显著差异(P0.01),肾脏病理形态变化明显;与模型组比较,贝那普利组、盐炙品3个剂量组和生品高剂量组均可显著降低模型大鼠尿蛋白、肾指数(P0.05,P0.01),使血清生化指标呈显著差异(P0.05,P0.01),病理形态结果显示,大鼠肾脏病变有明显的改善,4种细胞因子表达显著降低(P0.01,P0.05);与生品高剂量组比较,贝那普利组和盐炙品高、中剂量组尿蛋白量显著降低(P0.05,P0.01),贝那普利组和盐炙品高剂量组肾指数显著降低(P0.05),贝那普利组、盐炙品高、中剂量组血清中BUN,SCr,TC,TG的含量显著低于生品高剂量组(P0.05,P0.01),低剂量组仅BUN显著低于生品高剂量组(P0.05),贝那普利组、盐炙品高、中剂量组血清中TP显著升高(P0.05),贝那普利组对肾脏4种免疫调节因子的表达显著降低(P0.01),盐炙品3个剂量组中TNF-α,IL-1β的积分吸光度(IA)显著降低(P0.01),盐炙品高剂量组TGF-β1,NF-κB p65的IA表达显著低于生品高剂量组(P0.05,P0.01)。结论:车前子盐炙品对膜性肾病大鼠的肾保护作用和对肾脏中免疫调节因子的调节作用均优于生品,可继续深入车前子盐炙品的物质基础和药效机制研究。     

银杏叶提取物对糖尿病肾病大鼠NLRP3炎性体的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠NLRP3炎性体介导的炎症反应的影响,探讨GBE保护糖尿病肾病肾脏的部分机制。方法 Wistar大鼠随机分成对照组、糖尿病组(DM)和糖尿病肾病银杏叶治疗组(DM+GBE)。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)的方法建立DM模型,并于实验12周对动物进行处理,免疫组化技术检测Caspase-1、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的水平。RT-PCR检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1βm RNA表达,ELISA技术检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β水平。结果与对照组比较,DM组大鼠血糖水平升高(P0.01);与DM组大鼠相比,DM+GBE组大鼠血糖水平降低(P0.05)。与对照组相比较,DM组大鼠肾皮质IL-1β、IL-18水平均升高(P0.05),与DM组大鼠相比,DM+GBE组大鼠肾皮质IL-1β、IL-18水平均降低(P0.01)。而Caspase-1水平略有下降,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,DM组大鼠NLRP3、ASC、IL-1βm RNA表达显著升高(P0.05),与DM组相比,DM+GBE组大鼠MDM的NLRP3、ASC、IL-1B m RNA水平均下降(P0.01)。与对照组大鼠相比,DM组大鼠血清中TNF-α、IL-1β均升高(P0.05),与DM组相比较,DM+GBE组大鼠血清中TNF-α、IL-1β均降低(P0.01)。结论 NLRP3炎性体相关炎性因子的表达及活化可能参与DN的发生及进展,经银杏叶提取物干预后,炎性反应减轻,提示银杏叶提取物肾脏保护机制可能是通过抑制NLRP3炎性体的活性来实现的。     

清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织TXNIP/NLRP3炎性通路的影响

目的:探究清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织的影响,并初步探讨相关分子机制。方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性药组(灌胃尼莫地平200 mg·kg~(-1))、清热化痰解毒方低、高剂量组(100,200 mg·kg~(-1)),每组10只,除假手术组外,采用改良4动脉阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,造模后,给药3 d。肺湿/干重(W/D)分析,采用苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学分析;酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18水平;肺髓过氧化物酶试剂盒检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;免疫组化分析核苷酸结合域样受体蛋白3(nucleotide-binding domain-like receptor 3,NLRP3)阳性细胞数;半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)比色测定试剂盒检测Caspase-1活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3,ASC,Caspase-1mRNA和蛋白表达,免疫共沉淀检测硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)-NLRP3蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量,MPO活性均明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量及MPO活性均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白和mRNA相对表达明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白和mRNA相对表达均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀增加。与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀减少。结论:清热化痰解毒方对全脑缺血再灌注大鼠的炎症性肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,从而抑制TXNIP-NLRP3炎症通路介导的促炎介质IL-1β和IL-18的分泌,最终抑制肺组织中炎性细胞浸润,缓解肺组织损伤。     

芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-...     

槲皮素对尿酸性肾病大鼠肾脏NLRP3和TLRs表达的影响

目的 研究槲皮素对尿酸性肾病大鼠模型的干预作用及其分子机制。方法 设对照组,模型组,槲皮素低、中、高剂量（25、50、100 mg/kg）组和别嘌呤醇（5 mg/kg）阳性对照组。除对照组外,其他组大鼠每天ig给予腺嘌呤100 mg/kg＋乙胺丁醇250 mg/kg 1次,连续给予3周造模。每天给予造模药物后1 h,槲皮素组和别嘌呤醇组ig相应药物1次,连续给药3周。观察大鼠肾脏组织病理学变化,检测血清和尿液中尿酸（Sur和Uur）及肌酐（Scr和Ucr）的水平,检测血清尿素氮（BUN）水平,计算分级尿酸排泄系数（FEUA）;RT-PCR和Western blotting法检测肾脏NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症体各组分NLRP3、细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1和TLRs信号通路关键因子Toll样受体2（TLR2）、TLR24基因和蛋白表达。结果 与模型组比较,槲皮素各剂量组和别嘌呤醇组大鼠血清中Sur、Scr水平显著降低,24 h的Uur、Ucr排泄量升高,并能恢复FEUA。模型组大鼠肾脏中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR2、TLR4基因和蛋白表达显著上调,而槲皮素和别嘌呤醇能够逆转上述指标的改变。结论 NLRP3炎症体和TLRs信号通路的激活参与尿酸性肾病的发病过程,槲皮素可通过对其的调控缓解尿酸性肾病。     

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg~(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。     

健脾益气方含药血清通过Caspase-3/Vimentin促进人肝癌MHCC-97H细胞凋亡

目的:观察健脾益气方含药血清对人MHCC-97H肝癌细胞凋亡的影响,探讨凋亡过程中波形蛋白(Vimentin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化及其意义。方法:采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%,15%,30%体积浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin,Caspase-3,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达的影响。结果:健脾益气方中、高剂量含药血清均可以降低MHCC-97H肝癌细胞中Vimentin蛋白表达(P0.01),其下调程度与肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;Vimentin裂解组细胞增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最高;Caspase抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最低。与空白血清组比较,健脾益气方中、高剂量组,Vimentin裂解组Caspase-3蛋白表达上调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达下调(P0.01),且PARP-1蛋白出现了裂解片段;Caspase抑制组Caspase-3表达下调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达无统计学差异,PARP-1无蛋白裂解片段出现。结论:15%的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞MHCC-97H的干预效果最佳,可能通过Caspase-3下调细胞中Vimentin蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭;同时可能利用Caspase-3/Vimentin形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡。     

蠲痹历节清方抑制NLRP3炎症体抗大鼠急性痛风性关节炎机制研究

目的 观察蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NLRP3炎症体相关蛋白及白介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨蠲痹历节清方防治AGA大鼠可能存在的机制.方法 将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组,造模组造模成功后随机分成模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组、异甘草素组,并予相应药物干预,模型组及...     

三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的影响＊

目的 探究三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的调控及胃黏膜细胞焦亡的影响。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三仁汤高、中、低剂量组，每组各10只。根据前期的研究方法，利用高脂、高糖、湿热的条件，复制脾胃湿热证的模型，给予三仁汤干预，高、中、低剂量分别为16.4 g/kg，8.2 g/kg，4.1 g/kg。HE染色观察胃黏膜病理变化，免疫印迹法检测大鼠胃黏膜细胞NLRP3、Caspase-1蛋白的表达。结果HE结果显示，三仁汤高、中、低剂量组均对胃黏膜细胞焦亡有所改善。免疫印迹的结果显示模型组大鼠NLRP3和Caspase-1高表达，三仁汤高、中、低剂量组下调NLRP3和Caspase-1蛋白的表达，具有统计学差异（P < 0.05）。结论 三仁汤可能通过降低脾胃湿热大鼠的NLRP3、Caspase-1蛋白的表达，减少胃粘膜细胞焦亡，抑制胃粘膜炎症的爆发，从而防治脾胃湿热证模型大鼠，为临床治疗脾胃湿热证的胃痛提供了理论依据。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马凋亡因子及学习记忆能力的影响

目的:探讨补阳还五汤(BYHWT)对阿尔茨海默病小鼠海马组织凋亡因子及学习记忆能力的影响。方法:40只雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(0.001 g·kg~(-1)),BYHWT高、中、低剂量组(分别为37.06,18.53,9.26 g·kg~(-1))。C57小鼠作为空白组。连续灌胃BYHWT 30 d,进行水迷宫行为学测试后,取材。用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,海马组织中凋亡因子Bcl-2明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3明显增加(P0.01)。与模型组比较,BYHWT高、中剂量组能明显改善小鼠学习记忆能力,凋亡因子Bcl-2明显增加(P0.01),Bax和Caspase-3明显减少(P0.01)。结论:补阳还五汤能够明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习记忆能力,降低海马组织中Bax和Caspase-3的表达,增加Bcl-2的表达。     

附子理中汤对脾阳虚大鼠ANP含量、pGCmRNA表达及胃肠动力学的影响

目的： 观察附子理中汤对脾阳虚大鼠心房利尿钠肽（ANP）含量和非可溶性鸟苷酸环化酶（pGC）mRNA表达及胃肠动力学的影响。方法： 清洁级Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只。对照组常态饲养。模型组采用“肩胛骨间棕色脂肪组织（BAT）切除术+高脂饲料喂养+隔日寒冷环境刺激”方法造模。术后第1天喂高脂饲料共3周。在模型组基础上,附子理中汤低、中、高剂量组术后第1天按10,20, 40 g·kg^-1 ig给药,对照组及模型组则给予等容量的生理盐水,每天1次,连续3周。3周后第1天测空肠肌活动,然后取结肠标本,ELISA法检测ANP含量,RT-PCR法检测pGC mRNA表达。结果： 和对照组比较模型组的ANP含量、pGC mRNA相对表达量降低（P<0.05或P<0.01）,慢波频率显著下降（P<0.01）,快波出现频率、最大振幅、每丛快波数均增高（P<0.05或P<0.01）;纵肌收缩力振幅和环肌收缩力振幅均显著增大（P<0.01）。和模型组比较,附子理中汤高剂量组的ANP含量、pGC mRNA相对表达量升高（P<0.05或P<0.01）;附子理中汤中剂量组慢波频率上升（P<0.05）,快波出现频率、最大振幅、每丛快波数均减小（P<0.05或P<0.01）;附子理中汤高剂量组慢波频率显著上升（P<0.01）,快波出现频率、最大振幅、每丛快波数均显著减小（P均<0.01）;中剂量组纵肌收缩力振幅减小（P<0.05）,高剂量组纵肌收缩力振幅和环肌收缩力振幅均显著减小（P<0.01）。结论： 附子理中汤"止泻"的一种可能机制在于一方面上调ANP的含量及pGC mRNA表达量,进而恢复正常胃肠动力学,另一方面通过对水盐重吸收的调节作用而起效。     

溃结康对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3炎性体基因表达及下游炎性因子影响

目的探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3炎性体及下游炎性因子的影响。方法建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎(急性期、缓解期)模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.45 g/kg)、溃结康(12.8、6.4、3.2 g/kg)组。第8天(急性期)及第21天(缓解期)实验结束时,采集结肠组织,量取各组小鼠结肠长度,HE染色观察小鼠结肠病理变化,免疫组化染色法检测结肠组织MPO表达,酶联免疫法检测结肠组织IL-18、IL-33含量变化,实时荧光定量PCR检测结肠NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达。结果模型组单位结肠长度显著缩短,结肠组织损伤明显,MPO表达显著增加,结肠IL-18,IL-33水平明显升高,NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,急性期时,柳氮磺胺吡啶组及溃结康高剂量组单位结肠长度明显增加,MPO表达显著降低,IL-18释放减少,NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著下调(P<0.05或P<0.01),同时,溃结康中剂量组IL-18水平也显著降低,NLRP3 mRNA显著下调(P<0.05);溃结康低剂量组Caspase-1mRNA表达明显降低(P<0.05)。缓解期时,柳氮磺胺吡啶组及溃结康高、中剂量组单位结肠长度均明显增加(P<0.05或P<0.01);溃结康高剂量组NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著增加,溃结康中剂量组IL18、IL-33含量明显增加,ASC、Caspase-1mRNA表达明显上调,低剂量组IL-33含量也明显增加(P<0.05),NLRP3 mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论溃结康可能通过调节UC小鼠发病不同时期(急性期、缓解期)NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、Caspase-1)基因表达及下游炎症因子的释放抑制炎症反应,促进缓解期时结肠黏膜修复。     

通腑泻肺方对脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3调控作用的实验研究

目的观察通腑泻肺方对脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3炎性体表达的影响,探索通腑泻肺方治疗脓毒症急性肺损伤的作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔法（CLP）复制脓毒症急性肺损伤动物模型。将32只清洁级健康成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组和治疗组,每组8只。空白对照组麻醉后腹主动脉采血致死;假手术组麻醉后开腹,翻动胃肠后关腹,24h后麻醉并腹主动脉采血致死;模型组于CLP后立即予生理盐水2mL灌胃1次,CLP后6h、12h,再分别给予生理盐水2mL灌胃1次。CLP后24h予麻醉并腹主动脉采血致死;治疗组于CLP后立即予通腑泻肺方中药灌胃1次,CLP后6h、12h。再分别给予通腑泻肺方中药灌胃1次,CLP后24h予麻醉并腹主动脉采血致死。观察各组大鼠的一般表现,ELISA法检测各组血清中Caspase-1含量,Western blot法检测各组大鼠肺组织中NLRP3、ASC含量,RT—PCR法检测肺组织中NLRP3、ASC的mRNA表达量。结果模型组和治疗组肺组织NLRP3、ASC的蛋白水平、mRNA表达水平以及血清中Ccaspase-1水平均显著高于空白对照组和假手术组（P〈0．01）;模型组肺组织NLRP3、ASC的蛋白水平、mRNA表达水平以及血清中Caspase-1水平显著高于治疗组（P〈0．01）。结论通腑泻肺方能够下调脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平,具有调控NLRP3炎性体合成的作用。