肝癌常用治法复方抑制肝癌细胞恶性增殖的机制研究

目的:观察肝癌常用治法代表方及其拆方联合G418抑制肝癌细胞增殖的作用,及其与金属硫蛋白家族(MTs)的关系。方法:观察全方及其清热、活血、健脾等拆方或联合G418对SMMC7721肝癌细胞及转染MTs iRNA质粒肝癌细胞增殖的抑制作用(MTT法),后者与转染表达绿荧光蛋白质粒对照。结果:中药全方和3个不同拆方具有不同程度的抑制肝癌细胞增殖作用,且存在量效关系;联合G418用药后作用显著增强(P<0.05)。肝癌细胞被转染MTs iRNA载体后,与荧光质粒比较,无论是中药复方单独给药还是联合G418给药,对肝癌细胞增殖抑制的作用均较强(健脾方例外),提示MTs确有抵御药物治疗的作用。G418给药1d后撤药,2d后肝癌细胞出现增殖加速(P<0.05);全方、清热方、活血方、健脾方等联合G418后撤药2d,细胞增殖仍不活跃(P<0.05),提示不同治法中药联合G418用药具有减缓停药后细胞增殖反跳的作用。结论:SMMC7721肝癌细胞中MTs的过表达是该细胞耐药机制之一,临床常用防治肝癌复方及其拆方联合G418具有显著抑制肝癌细胞恶性增殖,并减缓其停药后恶性增殖加速的作用。     

蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究＊

目的 研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 采用20 - 100 μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h，运用MTT方法检测细胞增殖；采用20 - 80 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h，运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达；采用 60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h，运用流式细胞术检测细胞周期，以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达，Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27^Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、p-eIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1% DMSO为对照组，并以0.1 μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果 与对照组比较，100 μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，其抑制率为36.76%（P < 0.05）；60 - 100 μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为30.84%-52.49%（P < 0.05）；40 - 100 μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为32.7%-73.15%（P < 0.05）。大于60 μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达（P < 0.05）。60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后，G1期细胞数增加、G2期和S期减少，且CyclinD1、CyclinE1和p27^Kip1蛋白表达显著被抑制（P < 0.05）。20 - 80 μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后，均显著促进GRP78、DDIT3（CHOP）、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达（P < 0.05）； 20 μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达（P < 0.05）；80 μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达（P < 0.05），且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论 蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，从而发挥抗肝癌活性。     

健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达的影响

目的:观察健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-x L(B-cell lymphoma/leukemia-x L,Bcl-x L)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响。方法:建立裸鼠肠癌原位瘤模型,分为模型组,健脾益气组(15 g·kg-1),化瘀解毒组(15 g·kg-1),健脾消癌方组(全方组,15 g·kg-1),5-氟尿嘧啶组(5-Fu,20 mg·kg-1),共5组。分别予以相应药物干预4周,观察裸鼠体重、瘤体抑制率、转移率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3,Bcl-x L,Bax蛋白表达。结果:健脾益气组、全方组体重下降低于模型组(P0.05),化瘀解毒组体重下降高于模型组(P0.05);健脾益气组对瘤体的抑制与模型组比较无统计学差异,与空白组比较,化瘀解毒组、全方组对瘤体均有较好抑制作用(P0.05);各组均出现不同程度地转移,其中模型组、健脾益气组总体转移率达90%,化瘀解毒组、全方组转移率分别为70%,60%,低于模型组(P0.05);与模型组比较,化瘀解毒组及全方组能够上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3,Bcl-x L蛋白表达(P0.01)。结论:健脾消癌方中健脾益气组优势在于稳定体重,化瘀解毒组优势在于抑制肿瘤,抑制转移;全方组能够稳定体质量,抑制肿瘤,抑制转移,全方配伍疗效最优,其抗肿瘤机制可能是上调凋亡相关蛋白Bax及下调Caspase-3,Bcl-x L,诱导肿瘤细胞凋亡。     

基于MMP-2、MMP-9探讨胃肠安方及其拆方抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤生长及转移的部分配伍机制

目的通过体内研究探讨胃肠安方及其不同功效组成药物拆方对胃癌裸鼠原位移植瘤生长及转移作用效果及其配伍规律。方法将胃肠安方按其功效拆分为健脾理气、清热解毒、软坚散结三大组成部分,采用2×2×2析因实验设计方案,建立裸小鼠人胃癌原位移植模型。观察胃肠安方不同功效组成药物抑制胃癌生长及转移作用效果及其之间是否存在交互作用。结果①胃肠安方全方组及健脾理气组、软坚散结组、健脾清热组的抑瘤率分别为28.5%、24.6%、28.8%及30.2%,与模型组瘤重比较明显下降,差异有统计学意义(P0.05);软坚散结因素在抑制瘤重方面具有主效应,健脾理气及软坚散结因素存在交互作用。②胃肠安全方组、清热解毒组、健脾清热组的转移率分别为22.22%、10.00%、18.18%,与模型组75.00%比较,能明显降低裸鼠胃肿瘤的转移率(P0.05)。③胃肠安全方组及其不同治则拆方配伍各组中除软坚散结组外,均能抑制MMP-2蛋白表达,尤其以健脾理气组及全方组作用最为明显(P0.05);健脾组、健脾清热组及全方组对MMP-9蛋白表达抑制作用最为明显(P0.05)。析因分析结果显示,在软坚散结因素存在时,健脾理气因素与清热解毒因素在下调MMP-2蛋白表达方面具有协同作用。胃肠安方及其拆方对裸鼠胃肿瘤组织MMP-2基因表达具有不同程度的抑制作用,以全方组、健脾软坚组、清热软坚组作用最为明显(P0.01)。析因分析结果显示,健脾理气与清热解毒及清热解毒与软坚散结组之间对MMP-2的基因表达抑制具有相互交互作用。全方组、健脾软坚组对裸鼠胃肿瘤组织MMP-9 mRNA表达抑制作用明显(P0.01),健脾理气与清热解毒及健脾理气与软坚散结组对MMP-9 mRNA表达抑制具有相互交互作用。胃肠安方全方组及健脾理气组明显抑制裸鼠胃肿瘤组织MMP-2及MMP-9的活性(P0.01),析因分析结果显示,在清热解毒因素存在时,健脾理气与软坚散结因素在抑制MMP-2及MMP-9活性方面具有协同作用,而在缺乏清热解毒因素时,健脾理气与软坚散结因素在抑制MMP-2及MMP-9活性方面存在拮抗作用。结论胃肠安方全方组、清热解毒组、健脾清热组能明显抑制胃癌的生长和转移,清热解毒组抑制胃癌转移效果最为明显,健脾理气因素抑制瘤重主效应具有显著性,健脾理气及软坚散结因素在抑制瘤重方面存在交互作用;析因分析结果显示,在软坚散结因素存在的情况下,健脾理气和清热解毒因素对下调MMP-2蛋白表达具有协同作用,在软坚散结因素缺乏时,健脾理气和清热解毒因素对下调MMP-2蛋白表达具有拮抗作用。在清热解毒因素存在的情况下,健脾理气和软坚因素对抑制MMP-2和MMP-9活性具有协同作用,在清热解毒因素缺乏时,健脾理气和软坚因素对抑制MMP-2和MMP-9活性存在拮抗作用。     

不同中药体外不同给药对人肝癌细胞恶性增殖的影响实验

目的：观察肝癌治疗清热解毒方、行气活血方水提取物及大鼠含药血清细胞给药对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖的影响与差异。方法：常规方法制备清热解毒方和行气活血方水提取物（2.0 g生药/mL）,及其大鼠含药血清;采用MTT法观察不同中药体外不同给药对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖的影响。结果：与正常细胞（3 d）相比,清热解毒方或行气活血方水提取物对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖均具有抑制作用（P〈0.01）,存在量效关系。与正常细胞（3 d）相比,清热解毒方或行气活血方含药血清对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖亦均具有抑制作用（P〈0.01）,存在量效关系的趋势。行气活血方直接给药的药效较其含药血清更显著。结论：清热解毒方与行气活血方对人肝癌SMMC7721细胞的恶性增殖均具有抑制作用;行气活血方含药血清的药效较直接给药有下降趋势。     

通莲Ⅰ号方对食管癌Eca109细胞NF-κB信号通路影响的研究

目的 从分子水平揭示通莲Ⅰ号方对食管癌细胞的抑制作用及其治疗噎膈的机制.方法 体外培养食管鳞癌Eca109细胞,通莲Ⅰ号方及3拆方分别作用于细胞,以MTT法检测细胞半数有效量,Western blot法观察NF-κB信号通路各基因表达变化情况.结果 通莲Ⅰ号方及活血行气、清热解毒拆方可显著抑制Eca109细胞增殖,通莲Ⅰ号全方IC50=412 mg·L-1,清热解毒拆方IC50 =718 mg·L-1,活血行气拆方IC50=693 mg·L-1;可抑制NF-κB信号通路相关分子IKKβ3、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β3表达,作用强弱依次为:通莲Ⅰ号全方＞活血行气拆方＞清热解毒拆方＞滋阴养血拆方.结论 通莲Ⅰ号方用于治疗食管癌的有效组分在活血行气、清热解毒、滋阴养血类药物的协同作用,通过调节NF-κB介导的信号通路相关基因表达,抑制癌细胞增殖.     

塔斯品碱衍生物对人肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用研究

目的:分析探讨塔斯品碱衍生物对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制作用,研究其作用机制。方法:采用MTT法测定5种塔斯品碱衍生物对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测Tas-D1对肝癌SMMC7721细胞周期的影响,ELISA法测定Tas-D1对肝癌SMMC7721细胞EGF和VEGF蛋白的影响,PCR法测定Tas-D1对EGF和VEGF的mRNA水平的影响。结果:塔斯品碱衍生物Tas-D1对SMMC7721细胞生长具有明显的抑制作用,使细胞阻滞在S期,呈现出良好的剂量依赖性。ELISA法和RT-PCR法结果表明Tas-D1对SMMC7721细胞的EGF和VEGF蛋白质的表达和mRNA的表达有一定的抑制作用(P<0.05)。结论:塔斯品碱衍生物Tas-D1能抑制人肝癌SMMC7721细胞的生长,转换细胞周期,初步作用机制主要为Tas-D1抑制SMMC7721细胞EGF和VEGF的表达。     

益肾降浊化瘀方及其拆方对肾间质纤维化大鼠TNF-α及IL-8表达的影响

目的:观察益肾降浊化瘀方及其拆方对腺嘌呤致肾间质纤维化模型大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)表达的影响,探讨益肾降浊化瘀方对肾间质纤维化的作用机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠70只分正常组,模型组,尿毒清组,全方组,拆方1组,拆方2组,拆方3组,除正常组比较,用腺嘌呤ig法制作肾间质纤维化模型。正常组,模型组予生理盐水(10 m L·kg~(-1)·d~(-1)),尿毒清组(2.5 g·kg~(-1)·d~(-1)),全方组(20.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),拆方1,2,3组(11,8.2,7.9 g·kg~(-1)·d~(-1))。给药4周后,酶联免疫吸附法(Elisa法)检测血清TNF-α,IL-8含量,免疫组织化学法检测肾组织中TNF-α,IL-8蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组TNF-α和IL-8在血清和肾组织中含量明显升高(P0.05);与模型组比较,全方组、拆方1组、拆方2组、拆方3组血清和肾组织TNF-α,IL-8含量明显降低(P0.05),其中全方组肾组织TNF-α,IL-8蛋白表达和血清TNF-α,IL-8含量明显低于各拆方组(P0.05)。结论:益肾降浊化瘀方全方组及其拆方1组、拆方2组、拆方3组均能下调TNF-α,IL-8的表达,其中以益肾降浊化瘀方全方组作用最显著。     

健脾疏肝活血方对H22肝癌小鼠ICAM-1基因表达的影响

目的:探讨健脾疏肝活血方对H22肝癌小鼠细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响。方法:采用细胞接种的方法建立小鼠H22肝癌动物模型,将小鼠分为正常组,模型组,环磷酰胺组,健脾疏肝活血方低、中、高剂量6组,采用RT-PCR方法检测健脾疏肝活血方对肝癌组织ICAM-1基因表达的影响。结果:健脾疏肝活血方高、中剂量组的血清sICAM-1皆降低;与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);健脾疏肝活血方中剂量组下调ICAM-1的基因表达;与模型组比较,具有统计学意义(P<0.01)。结论:健脾疏肝活血方下调ICAM-1的基因表达是治疗肝癌的分子机制之一。     

柯里拉京对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究柯里拉京对转移性人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:分别通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,划痕实验,transwell实验检测不同浓度的柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H的增殖、迁移和侵袭的作用;通过细胞免疫荧光法观察不同浓度柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H肌动蛋白纤维的分布、丝状和片状伪足形成等的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)研究柯里拉京抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。结果:MTT实验显示,柯里拉京抑制人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H增殖的半数抑制浓度(IC50)分别为388.67,314.42μmol·L~(-1)。划痕实验显示,200μmol·L~(-1)柯里拉京对SMMC7721细胞迁移的抑制作用最强,迁移率为12.16%;120μmol·L~(-1)柯里拉京对MHCC97H细胞迁移的抑制作用最强,迁移率为9.84%。Transwell实验显示,200μmol·L~(-1)柯里拉京对SMMC7721细胞和MHCC97H细胞侵袭的抑制作用最强,侵袭的细胞数分别为(40.44±3.01),(36.69±3.36)个。细胞免疫荧光显示,柯里拉京可使SMCC7771,MHCC97H中F-肌动蛋白(F-actin)骨架发生重塑,浓度增高,细胞边缘的丝状伪足和片状伪足形成逐渐减少、张力纤维数目逐渐增多,这种影响在SMMC7721为200μmol·L~(-1)时最显著,MHCC97H为120μmol·L~(-1)最明显。Western blot显示,柯里拉京能明显下调肝癌细胞SMMC7721和MHCC97H上皮-间充质转分化(EMT)的钙黏附蛋白-N(N-Cad)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达(P0.05),下调有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的磷酸化-细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达(P0.05),上调磷酸化-p38(p-p38)蛋白表达(P0.05)。结论:柯里拉京能抑制2种人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H的增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能是通过抑制EMT通路中的N-Cad,Vimentin,MAPK信号通路p-ERK蛋白表达和上调p-p38蛋白表达,从而调控细胞骨架重塑来实现的。     

红花多糖对肝癌细胞增殖阻滞的机制探讨

目的： 通过研究红花多糖（safflower polysaccharide,SPS）对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,探讨SPS抗肿瘤作用的分子机制。 方法： 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,加入含不同质量浓度SPS（0,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28 g·L^-1）的培养液,分别培养24,48 h,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测SPS对细胞增殖的影响;用免疫组化法检测0.16,0.32,0.64 g·L^-1SPS作用肝癌细胞48 h,细胞的细胞周期素B₁（cyclin B₁）蛋白表达;采用实时荧光定量PCR技术（realtime PCR,RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测细胞分裂周期25B（Cdc25B）基因的表达。 结果： 肝癌细胞的生存率随SPS浓度和作用时间的增加而降低,而1.28 g·L^-1SPS组除外。SPS作用48 h后SMMC-7721细胞的cyclin B₁蛋白、Cdc25B蛋白和mRNA表达降低,并具有剂量依赖性。 结论： SPS可能通过抑制细胞周期相关基因的表达,诱导肝癌细胞增殖阻滞,进而起到抗肿瘤作用。     

乌梅丸及其拆方的镇痛作用

目的: 观察乌梅丸及其拆方的镇痛作用。 方法: 实验动物分为对照组、模型组、全方组、寒热并用组、温热组、寒凉组、补益组、收敛组,各组给药依照拆方原则分别给予乌梅丸方13.3 g·kg^-1,寒热并用方9.0 g·kg^-1,温热方5.33 g·kg^-1,苦寒方3.67 g·kg^-1,收敛方2.67 g·kg^-1,补益方1.67 g·kg^-1水煎剂灌胃,空白组、模型组均给予生理盐水10 mL·kg^-1。采用热板法和扭体法,观察乌梅丸及其拆方对小鼠的镇痛作用,三硝基苯磺酸/乙醇复制溃疡性结肠炎动物模型,酶联免疫法检测结肠黏膜前列腺素E₂(PGE₂)含量。 结果: 与对照组比较,乌梅丸全方组、寒热并用组和温热组药物能有效延长小鼠痛阈,降低小鼠扭体次数,降低溃疡性结肠炎大鼠结肠组织PGE₂含量(P<0.05),且3组间无差异;补益组药物也表现出部分抑制疼痛的作用,但效果要弱于全方组(P<0.05)。 结论: 乌梅丸方有明显的镇痛作用,温热组药物为其镇痛的主要药物,补益组药物有部分镇痛作用。     

芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4表达的影响

目的:通过观察芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠心肌、下丘脑瞬时感受器电位香草酸受体3(TRPV3)和瞬时感受器电位香草酸受体4(TRPV4)表达的影响,探讨芍药甘草汤及其拆方抗高温的机制。方法:SPF级SD雄性大鼠75只,适应饲养1周后,按体质量随机分为5组,分别为常温正常组,高温正常组,芍药甘草汤组(2. 16 g·kg~(-1)),单味白芍组(1. 08 g·kg~(-1))和单味甘草组(1. 08 g·kg~(-1)),除常温正常组外,均饲养于人工气候箱,各给药组按相应剂量连续给药13 d,常温正常组和高温正常组均给予同体积的纯净水;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)测定各组心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4蛋白和m RNA的表达情况。结果:与常温正常组比较,高温正常组大鼠心肌TRPV3蛋白表达显著上升(P 0. 01);心肌TRPV4 m RNA表达明显下降(P 0. 05);下丘脑TRPV3蛋白表达显著上升(P 0. 01);下丘脑TRPV3 m RNA表达明显下降(P 0. 05)。与高温正常组比较,单味白芍组大鼠心肌TRPV3,TRPV4蛋白表达显著下降(P 0. 01);芍药甘草汤组与单味甘草组大鼠心肌TRPV4蛋白表达明显下降(P 0. 05);单味白芍组大鼠心肌TRPV4m RNA表达明显上升(P 0. 05)。结论:大鼠心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4通道在高温环境下被激活,芍药甘草汤及其拆方抗高温机制与调节大鼠心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4通道蛋白及m RNA表达有关。     

养正散结汤对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡及ERK通路的影响

目的:探讨养正散结汤对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的影响。方法:将养正散结汤组(0. 5,1,1. 5,2,2. 5,3,3. 5 g·L~(-1))作用于胃癌MKN-45细胞,设置空白组,分别孵育24,48,72 h后采用细胞增殖活性检测方法(CCK-8)检测细胞增殖情况;用养正散结汤组(0. 4,0. 8 g·L~(-1))处理细胞,运用平板克隆形成实验观察细胞的克隆形成能力;用4,8 g·L~(-1)养正散结汤干预细胞,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;用2,4,8 g·L~(-1)养正散结汤处理细胞,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ERK表达及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,养正散结汤组能明显抑制MKN-45细胞的增殖,处理24,48 h后,养正散结汤从2 g·L~(-1)开始,处理72 h后,从1. 5 g·L~(-1)开始,细胞存活率逐渐降低,呈明显浓度依赖性(P 0. 05,P 0. 01)。经不同质量浓度的养正散结汤干预48 h后,养正散结汤组细胞克隆形成率显著低于空白组(P 0. 01),呈一定的量效关系,0. 8 g·L~(-1)养正散结汤干预后,MKN-45细胞集落基本无法形成;养正散结汤组细胞凋亡率明显高于空白组(P 0. 05,P 0. 01);干预12 h后,与空白组比较,养正散结汤从4 g·L~(-1)开始下调MKN-45细胞中ERK蛋白的磷酸化水平(P 0. 01)。结论:养正散结汤能抑制人胃癌细胞MKN-45的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK的磷酸化有关。     

人参多糖注射液对肝细胞癌的增殖抑制作用及机制探讨

目的:观察人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2增殖抑制作用,并探讨其机制。方法:将不同浓度的人参多糖注射液与人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2作用,采用cell counting kit-8(CCK8)检测细胞的增殖抑制,通过倒置显微镜观察用药前后细胞形态、数量变化,透射电镜观察细胞坏死、凋亡等形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)蛋白表达情况。结果:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显抑制作用(P0.05),并且与浓度和时间呈正相关。60,80,100 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72h后,可显著抑制其增殖(P0.01),40 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72 h后可明显抑制其增殖(P0.05)。人参多糖注射液作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 48 h后,细胞出现细胞核边集、凋亡小体等凋亡形态变化,72 h后部分细胞出现空泡样变等形态学变化。与空白组比较,40,60,80 g·L-1人参多糖注射液组作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2后,TNFR1蛋白相对表达量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显的抑制作用;诱导细胞凋亡可能是抑制作用的机制。     

何首乌醇提物对人正常肝细胞L02的毒性作用及其机制

目的:探究何首乌醇提物(PME)对人正常肝细胞L02的毒性损伤和作用机制,为何首乌合理安全用药提供依据。方法:以PME(5,10,20 g·L^-1)作用于L02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色法观察细胞核形态;Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;相关试剂盒检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9前体(pro Caspase-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3前体(pro Caspase-3)的表达水平。结果:与空白组比较,L02细胞在PME作用下存活率下降,呈时间浓度依赖性;Hoechst 33342染色后荧光下可见细胞核皱缩,碎裂,染色质凝集;Annexin V-FITC/PI双染法结果表明PME20 g·L^-1组凋亡率上升;PME 20 g·L^-1组LDH释放率显著增加(P<0.01),细胞内ROS水平显著上升(P<0.01),SOD活力显著下降(P<0.01),PME 5,10,20 g·L^-1组MMP明显降低(P<0.05)。与空白组比较,随着PME给药组浓度增加,PME 10,20 g·L^-1组pro Caspase-3,pro Caspase-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),PME 5,10,20 g·L^-1组Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),PME 20 g·L^-1组Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:PME对L02细胞存在毒性损伤作用,可一定程度破坏肝细胞的结构,促进ROS水平升高,诱导氧化应激,激活线粒体途径,活化凋亡通路相关蛋白引起肝细胞损伤,提示ROS介导的线粒体通路参与了PME诱导肝细胞凋亡的过程。     

小半夏汤对豚鼠离体肠管运动的影响

目的: 观察小半夏汤对豚鼠离体肠管收缩的影响,初步探讨其止吐的作用机制。 方法: 利用离体浴槽,观察小半夏汤[(生药,下同) 0, 0.1, 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 20, 40 g·L^-1]对豚鼠离体肠管自主收缩平均张力、振幅和频率的影响;以呕吐相关受体激动剂乙酰胆碱(Ach)、组胺(His)、五羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)为工具药,观察小半夏汤0, 2, 5, 10 g·L^-1对各工具药致豚鼠离体肠管收缩平均张力、振幅、频率和最大张力的影响。 结果: 小半夏汤能剂量依赖性地抑制豚鼠离体肠管自主收缩,降低其收缩平均张力、振幅和频率(与空白对照组相比,P<0.05或P<0.01);先加Ach,His,5-HT再加小半夏汤2,5,10 g·L^-1或小半夏汤2,5,10 g·L^-1预处理均能明显抑制3种工具药所致肠管收缩,减少肠管收缩平均张力、振幅、频率和最大张力(分别与给小半夏汤前和不给小半夏汤相比,P<0.05或P<0.01);小半夏汤能够增大DA致肠管收缩平均张力、振幅和频率(分别与给小半夏汤前和不给小半夏汤相比,P<0.05或P<0.01),但对肠管收缩最小张力无明显影响。 结论: 小半夏汤能够抑制豚鼠离体肠管自主收缩,其作用机制可能是通过阻断M受体、H₁受体、5-HT受体和D₂受体等呕吐相关受体而介导,或直接作用于肠平滑肌而起作用,其止呕机制有待进一步研究。     

梅花鹿鹿茸Ⅰ型胶原对大鼠成骨样细胞(ROS1728)的影响及其分子机制的研究

该文研究梅花鹿鹿茸I型胶原(SPC-I)对大鼠成骨样细胞ROS1728的影响,为SPC-I抗骨质疏松的治疗提供理论依据。采用贴壁法培养大鼠成骨样细胞ROS1728,通过CCK-8法检测SPC-I对ROS1728细胞增殖的影响,利用RT-PCR法检测成骨相关基因Runx2,osernix,ALP,Coll-I,OC的表达,利用Western-bolt法检测Runx2蛋白的表达。结果表明SPC-I质量浓度5g·L~(-1)组轻度抑制ROS1728细胞的增殖,但能够明显促进ROS1728细胞特异性转录因子Runx2,osterix m RNA的表达,Runx2蛋白的表达,以及标志基因ALP,Coll-I,OC m RNA的表达(P0.01),并且呈现出时间依赖性。SPC-I质量浓度2.5,10 g·L~(-1)组均明显抑制ROS1728细胞的增殖(P0.01),并抑制相关基因的表达。该实验证明质量浓度5 g·L~(-1)组轻度抑制ROS1728细胞的增殖,但可以明显增强ROS1728细胞的功能,通过调控Runx2基因的表达,促进ROS1728细胞的分化、成熟。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马Bcl-2,Bax,Caspase 8蛋白表达的影响

目的:探讨左归降糖解郁方(ZJJF)对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠海马B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)蛋白表达的影响。方法:采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg·kg-1)与慢性应激联合的方法复制DD模型,并随机分为3组:模型组,阳性药(二甲双胍0.18 g·kg-1+氟西汀0.0018 g·kg-1)组,ZJJF(32.82 g·kg-1)组,ig给药4周后,采用旷场实验(OFT)实验,观察各组大鼠行为学改变;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测模型大鼠海马Bcl-2,Bax,Caspase 8蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠OFT实验中活动总数明显减少(P0.01);与模型组比较,阳性药和ZJJF(32.82 g·kg-1)组大鼠自主活动次数明显增多(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠海马Bcl-2蛋白表达下降(P0.05),Bax,Caspase8蛋白表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,阳性药组海马Bcl-2蛋白表达升高(P0.05),Bax,Caspase 8蛋白表达显著降低(P0.01)。与模型组比较,ZJJF(32.82 g·kg-1)组海马Bcl-2表达升高(P0.05),Bax,Caspase 8表达降低(P0.05,P0.01)。结论:ZJJF可改善糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁行为异常,该作用可能与抑制神经细胞凋亡,保护海马有关。     

双黄调脂方及其有效成分发挥降脂作用的探讨

目的:通过体内外实验研究双黄调脂方的降脂作用,探讨其降脂机制。方法:昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(血脂康,0.6 g·kg~(-1))和双黄调脂高、低剂量组(22.5,7.5 g·kg~(-1)),观察双黄调脂方对Trtion-WR1339诱导的高血脂模型的影响。基于整体实验,体外实验观察了双黄调脂主要有效成分姜黄素、黄连素、葛根素对油酸(oleic acid,OA)诱导的HepG2细胞模型胆固醇(CHO),甘油三酯(TG),3-羟基-3-甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)还原酶,高密度脂蛋白胆固醇(HDLC),低密度脂蛋白受体(LDL-R),胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)和脂蛋白脂酶(LPL)含量的影响,探讨其可能降脂途径。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清CHO和TG含量显著升高(P0.01);与模型组比较,双黄调脂方高剂量组能显著降低模型小鼠血清的CHO,TG水平(P0.05,P0.01)。体外实验中,与空白组比较,模型组细胞CHO,TG和HMG-CoA还原酶含量显著升高(P0.05,P0.01),HDL-C,LDL-R,CYP7A1和LPL含量显著降低(P0.05);与模型组比较,姜黄素高剂量组(10 mg·L~(-1))能显著升高模型细胞HDL-C,LDL-R和LPL含量(P0.05,P0.01),降低TG和HMG-CoA含量(P0.05,P0.01);黄连素高剂量组(40 mg·L~(-1))能显著升高模型细胞CHO,HDL-C,LDL-R和CYP7A1含量(P0.05,P0.01);葛根素高剂量组(300 mg·L~(-1))能显著升高模型细胞HDL-C,LDL-R,CYP7A1和LPL含量(P0.05,P0.01),降低CHO,TG和HMG-CoA含量(P0.05,P0.01)。结论:双黄调脂方可通过抑制内源性胆固醇合成、促进胆固醇逆转运(RCT)途径和低密度脂蛋白(LDL)受体途径、促进胆固醇转化以及促进甘油三酯降解等多个途径来发挥降脂作用。