结核分枝杆菌H37Ra感染对小鼠T细胞及Th1/Th2反应的影响北大核心CSCD

目的探讨结核分枝杆菌H37Ra菌株(H37Ra)感染对BALB/c小鼠T细胞及Th1/Th2反应的影响。方法建立H37Ra菌株BALB/c小鼠感染模型,设生理盐水(NS)处理小鼠作为对照组。在感染早期(4周)和晚期(8周)分别取小鼠脾脏细胞及淋巴结细胞,或培养后的细胞,经荧光抗体染色后采用流式细胞术对不同感染时期小鼠的T细胞表型进行检测分析。结果实验组小鼠感染H37Ra 4周时与对照组比较,脾脏总T细胞(CD3^+)、CD4^+T细胞百分率(CD3^+CD4^+CD8^-)降低((43.03±5.57)%,t=5.804,P=0.000;(47.76±6.22)%,t=2.327,P=0.042),CD8^+T细胞百分率(CD3^+CD4^-CD8^+)增高((47.72±4.39)%,t=-3.698,P=0.004);与感染4周时比较,感染8周时脾脏总T细胞、CD4^+T细胞百分率增高((68.23±4.38)%,t=-8.712,P=0.000;(57.89±4.93)%,t=-3.125,P=0.011),CD8^+T细胞百分率降低((39.23±3.80)%,t=3.585,P=0.005),且晚期时恢复至正常。H37Ra感染4周和8周时与对照组比较,H37Ra感染对小鼠淋巴结总T细胞(CD90.2^+)及T细胞亚群(CD4^+T细胞及CD8^+T细胞)分布无显著影响(P>0.05)。H37Ra感染晚期,与对照组比较,IFN-γ表达升高(加培养液而无TB-PPD组:(7.50±1.60)%,t=-4.173,P=0.002;加入PPD组:(6.80±1.36)%,t=-5.014,P=0.001)。结论 H37Ra感染可影响T淋巴细胞及亚群的分布,并出现Th1反应而未见明显Th2反应,促进了机体的抗结核感染作用。     

猪链球菌BALB/c小鼠感染模型的初步建立

目的观察猪链球菌（Streptococcus suis）感染小鼠后的临床、病理变化,为将小鼠作为实验室研究猪链球菌的实验动物提供依据。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照,观察其临床症状,剖解病死小鼠,制作病理切片观察病理变化。并对病死小鼠做病原分离,通过培养特性鉴定、生化试验以及PCR鉴定确定其为猪链球菌。结果小鼠确由感染猪链球菌而致死,体内各组织、器官均产生典型的败血症病变。结论小鼠对猪链球菌易感,能够作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。     

幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的研究

目的　建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型 ,用于Hp致病、免疫和防治的研究。 方法　选用临床分离株 ,应用外科手术法向小鼠胃内直接接种Hp菌液 0 2ml(10 9CFU/ml) ;接种后不同时间取小鼠胃粘膜组织进行细菌学和病理学检查。结果　接种后 2～ 8周 ,小鼠胃内均可分离到Hp ,Hp分离阳性率为 95 %。病理学检查显示鼠胃粘膜明显炎症。感染鼠用阿莫西林治疗后 ,鼠胃组织Hp培养均转阴性。结论　使用Hp鼠胃接种法 ,能建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型     

猪链球菌2型BALB/c小鼠动物感染模型的建立

目的研究猪链球菌2型(SS2)中国高致病株05ZYH33株对BALB/c小鼠的致病性,探讨其作为SS2动物感染模型的可行性。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照。通过LD50测定、临床症状观察、病理剖检、病原分离鉴定、菌株在各脏器内定植分布检测、细胞因子测定,观察和分析小鼠感染SS2后机体的一系列改变。结果 BALB/c小鼠对05ZYH33株易感,其LD50为4×107 CFU/ml,并可区分强毒株和无毒株毒力差异;病原分离鉴定证实各脏器感染菌株均为SS2;涂板计数表明野生株05ZYH33在小鼠各脏器定植量显著高于无毒株Δcps2B;病死鼠的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成;野生株及无毒株均可引起炎症因子IL-6及趋化因子MCP-1的释放,但无毒株△cps2B诱导细胞因子水平显著低于野生株(P0.05)。结论 BALB/c小鼠可被SS2感染并引发炎症反应。适龄SPF BALB/c小鼠是中国SS2强致病株良好的动物感染模型。     

幽门螺杆菌感染BALB/c无菌小鼠的免疫应答

目的 探讨幽门螺杆菌感染步鼠的免疫就应答状况。方法 建立ＨＰ经口感染无菌小鼠的动物模型,设立感染免疫组、感染对照组与免疫对照组３组,分别进行试验。结果 感染免疫组抗ＨＰ的特异性ＩｇＧ有显著增高,且该组小鼠胃中的ＨＰ菌数大量减少。结论此种免疫应答以体液免疫为主,细胞免疫所占比例很少,不能彻底清除小鼠胃中的ＨＰ。     

华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型的建立

目的建立华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,分别以50个、100个和150个囊蚴采用胃饲感染,同时设胃饲生理盐水组为对照。感染后20 d开始采用加藤卡茨法检测小鼠粪便;感染后8周,取小鼠肝脏右外叶组织进行HE和Masson染色,取小鼠肝脏左叶组织进行总蛋白提取,分析肝脏α-SMA的表达情况。结果感染后31 d小鼠粪便开始检测到华支睾吸虫卵,39 d所有感染组小组均检测到感染。HE及Masson结果显示,与对照组相比,感染组小鼠汇管区出现明显的纤维化改变,且随着胃饲囊蚴数量的增加纤维化越明显,差异具有统计学意义(F=86,P<0.01)。蛋白质免疫印迹试验发现感染小鼠肝脏α-SMA蛋白表达明显高于对照组,且随着胃饲囊蚴数量增加而递增,差异有统计学意义(F=86.5,P<0.05)。结论成功建立了华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型,为后续研究华支睾吸虫致肝胆管纤维化机制奠定了基础。     

BALB/c裸小鼠繁育的实验观察

在自制的隔离器内观察温度、昼夜明暗时间和相对湿度的变化对BALB／c裸小鼠繁育的影响,经过14个月的实验观察得出如下结论：在隔离器内,温度为25－27℃、昼夜明暗交替时间为10：14h、相对湿度为40％－45％时,BALB／c裸小鼠的妊娠率为95％、仔鼠离乳率其中纯合子（nu/nu)为98％,杂合子（nu/ )为100％、成年鼠死亡率为0、出生仔鼠中纯合子与杂合子比率分别为56％和44％;在实验变化范围内,温度、昼夜明暗交替时间和相对湿度的变化对成年鼠（雄性纯合子、雌性杂合子）的死亡率和出生的仔鼠中纯合子与杂合子比率无影响。     

老年BALB/c小鼠多脏器非酶糖基化水平的变化

目的　检测老年和幼年BALB/c小鼠脑、肺、肝、肾组织糖基化蛋白质含量及蛋白质相、脂相荧光物质含量。方法　采用亲和层析法测定糖基化蛋白质的相对含量 ;采用荧光分光光度法测定各组织脂相和蛋白质相的荧光值。结果　老年BALB/c小鼠脑、肺、肝、肾组织糖基化蛋白质含量较幼年鼠显著升高 (P <0 0 1 ) ,脂相和蛋白质相的荧光值亦较幼年鼠显著升高 (P <0 0 1 )。结论　老年BALB/c小鼠上述各组织中非酶促糖基化的水平升高 ,这可能是引起小鼠衰老的原因之一     

结核分枝杆菌感染小鼠模型的建立与评价

目的建立结核分枝杆菌感染的小鼠模型,分析感染小鼠重量指数、组织荷菌量、组织病理改变随感染时间的变化。方法以1.1×10^5菌落形成单位（CFU）的结核分枝杆菌标准株H37Rv经尾静脉感染50只雌性BALB/c小鼠,于感染后1、2、3、4、8周杀鼠,每个时间点剖杀10只,观察肺组织病理改变并称重,计算重量指数,同时做肺和肝菌落计数。结果感染1、2、3、4、8周小鼠的肺脏器重量指数分别为0.0112±0.0036、0.0101±0.0071、0.0112±0.0046、0.0151±0.0057和0.0198±0.0069,差异有统计学意义（F=4.24,P〈0.01）;肝脏器重量指数分别为0.0558±0.0059、0.0591±0.0094、0.0569±0.0076、0.0582±0.0030和0.0619±0.0079,差异无统计学意义（F=0.86,P〉0.05）;脾脏器重量指数分别为0.0107±0.0034、0.0146±0.0060、0.018±0.0034、0.0174±0.0026和0.0204±0.0066,差异有统计学意义（F=4.01,P〉0.05）;肺菌落数分别为（4.472±0.504）log、（5.539±0.429）log、（6.294±0.478）log、（6.250±0.315）log和（6.836±0.196）log,差异有统计学意义（F=43.90,P〈0.01）。感染后1周小鼠肺组织可见病理改变,且随着感染时间的增加病变范围逐渐扩大,病变程度逐渐严重。结论成功建立了结核分枝杆菌感染小鼠模型,该模型可用于结核疫苗和药物研究。     

经腹腔注射建立免疫抑制BALB/c小鼠系统念珠菌感染模型的研究

目的经腹腔注射建立免疫抑制BALB/c小鼠系统念珠菌感染模型。方法 BALB/c小鼠用环磷酰胺致免疫低下后,腹腔注射不同浓度白色念珠菌SC5314,观察小鼠不同时间血液常规、肾脏真菌载量和组织病理变化。结果白色念珠菌SC5314孢子浓度在2×106～5×107个/ml间的5种0.1ml菌液均造成小鼠系统感染白色念珠菌,病理表现以注射2×107个/ml孢子组小鼠最为典型,在心、肺、肾、脑、横膈、肠系膜等组织内均可见真菌孢子和菌丝。结论经腹腔注射白色念珠菌SC5314可成功建立免疫抑制BALB/c小鼠系统念珠菌感染模型,最适感染剂量为每鼠0.1ml的1×107～2×107个孢子/ml菌液。     

Reduced apoptosis in BALB/c mice infected with Heligmosomoides polygyrus

We evaluated levels of apoptosis and the immune response ex vivo in BALB/c mice infected with Heligmosomoides polygyrus. Cell proliferation, apoptosis and cytokine production were measured in mesenteric lymph nodes (MLN) without exposure to H. polygyrus antigens in culture. The inhibited apoptosis and cytokine production reported might reflect a state of cell hyporesponsiveness in the prepatent phase of infection. These changes were accompanied by changes in the percentage of CD4+ cells in MLN and popliteal lymph nodes (PLN). The prolonged reduction in apoptosis coexisted with induced cell proliferation, elevated TNF-alpha, IL-12p70, IFN-gamma, IL-6, IL-10 and TGF-beta synthesis, but lowered IL-4 and IL-2 levels. In the chronic phase of infection an increasing production of IFN-gamma, monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), IL-10 and TGF-beta with decreasing concentrations of other cytokines resulted in restored apoptosis. The cytokine response in serum showed moderate production of TNF-alpha, temporary involvement of IL-12p70, induction of IFN-gamma and IL-10 synthesis, as well as growing IL-6 and MCP-1 production. It is suggested that a synchronized synthesis of distinct cytokines is accompanied by different levels of inhibited apoptosis during the prepatent and chronic phases of H. polygyrus infection in BALB/c mice. We suggest that immunosuppression provoked by the nematode is not the outcome of parasite-induced apoptosis, but rather results from a hyporesponsiveness experienced by cells during H. polygyrus infection.     

泡球蚴感染BALB/c小鼠IgG亚类和细胞因子的动态观察

目的　观察小鼠感染泡球蚴后其体液免疫的动态变化。　方法　BALB/c小鼠感染泡球蚴后,分别于2、4、8、12、16、20及25wk(IgG含量达高峰)取脾脏制备淋巴细胞悬液体外培养,分别以多房棘球蚴抗原(EmAg)、伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激诱生可溶性白细胞介素2受体(IL2R)、肿瘤坏死因子α(TNFα)及白细胞介素1(IL1);以植物凝集素(PHA)刺激诱生干扰素γ(IFNγ)。检测培养上清中IL2R、TNFα、IL1及IFNγ含量。各组均设RPMI1640培养液平行对照。检测血清中一氧化氮(NO)及特异性免疫球蛋白G(IgG)亚类水平。　结果　小鼠感染泡球蚴16wk后NO水平明显升高,IgG、IgG1和IgG3水平升高,IgG2a及IgG2b呈低水平。感染后的前12wk,脾淋巴细胞以分泌IL2R和TNFα为主,12wk后以IFNγ为主、16wk后以IL1为主。　结论　小鼠感染泡球蚴后的前8wk呈Th1反应。感染后期Th2反应逐渐增强     

结核分枝杆菌Rv3621c原核表达及免疫功能研究

目的 以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)H37Rv基因组为模板,构建、纯化及鉴定原核表达质粒pPROEX-Rv3621c,通过人群、小鼠试验进行免疫原性评价。方法 构建重组质粒pPROEX-Rv3621c,并以全血干扰素释放分析技术(Whole-blood IFN-γ release assay,WBIA)检测其能否被安徽省淮南市M.tb感染者T细胞特异性识别。rRv3621c混合佐剂MTM[母牛分枝杆菌(M.vaccae),人工合成海藻糖-6'6,二分枝菌酸(TDB),单磷酰脂质A(MPLA)]免疫小鼠后,检测血清中特异性抗体分泌水平、脾细胞中抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平及肺脏细胞因子mRNA表达水平。结果 成功构建重组质粒pPROEX-Rv3621c,并使之诱导表达、纯化和鉴定。在rRv3621c蛋白诱导下,活动性结核(Active tuberculosis, ATB)患者外周血淋巴细胞释放的IFN-γ水平明显较高(t=4.813, P<0.01),且ATB患者产生的IFN-γ水平高于潜伏性结核(Latent tuberculosis infection, LTBI)人群(t=4.442, P<0.01)。BCG+Rv3621c/MTM组小鼠产生的特异性抗体滴度水平明显高于Rv3621c/MTM组(P<0.01)和BCG组(P<0.01),Rv3621c/MTM组和BCG+Rv3621c/MTM组小鼠的IgG2a/IgG1比值大于1,明显高于MTM组和BCG组。BCG+Rv3621c/MTM组小鼠均分泌高水平IFN-γ、TNF-α和IL-2。Rv3621c/MTM组小鼠肺脏组织中IFN-γ、TNF-α及iNOS表达水平较高。结论 M.tb感染者外周血T细胞可特异性识别rRv3621c蛋白,rRv3621c混合佐剂MTM可以诱导较强烈的抗原特异性Th1型免疫应答。     

血吸虫虫卵在BALB/c鼠各组织中的分布

目的研究血吸虫感染BALB/c鼠后,虫卵在其部分组织中特别是在肠壁中的分布状况。方法 10只BALB/c鼠腹部贴片感染血吸虫尾蚴(40±1条/只),感染42d后剖杀,分别取鼠的肝脏、脾脏、肠道(小肠上段、中段、下段、盲结肠、直肠)进行成虫计数、虫卵计数、毛蚴孵化、组织切片观察,并将得到的结果进行统计学分析。结果血吸虫虫卵在BALB/c鼠各组织的分布为:肝脏(59.64%)、脾脏(0.81%)、小肠上段(6.27%)、小肠中段(5.24%)、小肠下段(5.14%)、盲结肠(17.48%)、直肠(5.41%),肝脏的沉积虫卵数和孵化数与其他组织相比差异显著,肠组织中大肠段比小肠段的沉积虫卵数和孵化数多且差异显著。在孵化率的比较中肝脏的孵化率最高(1.09%)。病理切片观察,肝脏产生大量肉芽肿结节,肠壁出现不同程度的炎症坏死。结论 BALB/c鼠定量人工感染血吸虫后,肝脏中的沉积虫卵最多,其次是盲结肠,最少的是脾脏;且不同组织的沉积虫卵数目与病理损伤程度有关。     

Co-administration of rectal BCG and autoclaved Leishmania major induce protection in susceptible BALB/c mice

We examined the protective effect of autoclaved Leishmania major (ALM) vaccine in combination of either rectal or subcutaneous BCG on susceptible BALB/c mice. One month after BCG vaccination, BALB/c mice were immunized subcutaneously twice with ALM + alum at 3 weeks intervals. Three weeks after booster injection, 5 × 10(5) stationary phase L. major promastigotes were inoculated subcutaneously in one footpad. Immunological evaluation at before and post infectious challenge showed strong proliferative responses in the spleen cells of the rectal immunized group after stimulating with parasite lysate. High level of interferon gamma was induced in the spleen, and significant increase in the serum ratio of IgG2a/IgG1 was observed only in rectal immunized group. Rectal immunized mice showed comparable nitric oxide production and iNOS induction in peritoneal macrophages (P ≤ 0.05). The obtained results in rectal BCG vaccinated group showed no mortality but low parasite burden in the liver and spleen. In conclusion, the results of our study indicated that co-administration of rectal BCG and ALM induced protective type 1 immune responses against L. major infection. This safe and effective mucosal vaccine could be useful in prevention of human leishmaniasis infections.     

B细胞免疫应答与抗结核分枝杆菌感染的研究进展

已有大量的研究阐释了细胞免疫机制在抵御结核分枝杆菌方面的重要性。然而,最近的研究表明,B淋巴细胞通过与细胞免疫应答产生多种相互作用扮演了一个曾被低估的角色,形成宿主防御结核分枝杆菌的一个重要方面。因此,作者提倡在结核病免疫学中应有一种进步性的视角,即细胞免疫和体液免疫并不是相互排斥的。本文对最近支持B细胞在结核分枝杆菌感染方面的重要作用进行了综述。     

紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB／c小鼠免疫保护作用研究

目的观察紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB／c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、减卵率,并观察虫体发育情况和肝组织细胞免疫应答情况。结果免疫组的减虫率和减卵率分别为37．90％和51．16％;免疫组小鼠体内虫体发育明显滞后于正常感染对照组内虫体;免疫组小鼠肝脏虫卵肉芽肿较正常组明显减少。结论UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠能诱导较好的免疫保护力。     

HIV-1 Env-Specific Memory and Germinal Center B Cells in C57BL/6 Mice

Continued efforts to define the immunogenic properties of the HIV-1 envelope glycoproteins (Env) are needed to elicit effective antibody (Ab) responses by vaccination. HIV-1 is a highly neutralization-resistant virus due to conformational and glycan shielding of conserved Ab determinants on the virus spike. Elicitation of broadly neutralizing Abs that bind poorly accessible epitope regions on Env is therefore extremely challenging and will likely require selective targeting of specific sub-determinants. To evaluate such approaches there is a pressing need for in vivo studies in both large and small animals, including mice. Currently, most mouse immunization studies are performed in the BALB/c strain; however, the C57BL/6 strain offers improved possibilities for mechanistic studies due to the availability of numerous knock-out strains on this genetic background. Here, we compared Env immunogenicity in BALB/c and C57BL/6 mice and found that the magnitude of the antigen-specific response was somewhat lower in C57BL/6 than in BALB/c mice by ELISA but not significantly different by B cell ELISpot measurements. We then established protocols for the isolation of single Env-specific memory B cells and germinal center (GC) B cells from immunized C57BL/6 mice to facilitate future studies of the elicited response at the monoclonal Ab level. We propose that these protocols can be used to gain an improved understanding of the early recruitment of Env-specific B cells to the GC as well as the archiving of such responses in the memory B cell pool following immunization.