漏芦多糖的提取、单糖组分分析及含量测定

目的：提取漏芦多糖，分析其单糖组分并测定其质量分数，为以后漏芦多糖研究提供参考。方法：水提醇沉法提取粗多糖，Sevag法除蛋白，高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测( HPAEC-PAD )法测定其单糖组成，苯酚-硫酸法测定多糖质量分数。结果：漏芦多糖的单糖组成为葡萄糖、阿拉伯糖和果糖，其摩尔比为1∶1.61∶2.21。以单糖混合物为对照品测得漏芦多糖中总糖的质量分数为 95.78%。结论：HPAEC-PAD法具有样品不用衍生、灵敏度高、精密度好等优点，适合多糖类样品中单糖的分析；苯酚-硫酸法实验操作简便，准确可靠，可用于多糖含量测定。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法分析苦瓜多糖组分的含量

目的用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器联用技术建立苦瓜多糖组分的分析方法。方法以苦瓜为原料,用水提醇沉法提取苦瓜粗多糖,并对其工艺进行探讨。苦瓜粗多糖经超声波酸水解处理后,以12 mmol/L NaOH溶液为淋洗液,流动相流速为1.0mL/min,CarboPaC PA10(250mm×4mm i.d.)为分析柱,进样量为25μL进行分析测定。结果苦瓜多糖中主要含有阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖,各种单糖组分在一定浓度范围内线性关系良好,能很好地分离及准确测定。结论该方法操作简便,灵敏度高,重现性好。     

11种石斛植物的FTIR直接测定和主成分分析

目的:建立中药材石斛的分析方法。方法:采用直接测定法测得了样品的FTIR,并结合主成分分析法进行排序比较。结果:发现石斛的不同种类具有一定的相关性,从石斛的茎上部发现新鲜石斛与干燥品有较大区别,这可能与新鲜石斛含有较多黏液质及水分有关;茎中、下部分析结果中滇桂石斛与其他石斛有差别。结论:可以采用FTIR直接测定法并结合主成分分析法分析石斛的数据特征,本法简便、快速、准确。     

反相高效液相色谱法测定石斛属植物中7种化学成分及主成分与聚类分析

目的 建立石斛7种化学成分反相高效液相色谱-紫外光谱（RP-HPLC-UV）检测方法,探寻21种石斛属植物中的化学成分组成差异联系,为石斛质量控制和资源开发提供参考。方法 采用Agilent 1200高效液相色谱仪,XDB-C₁₈色谱柱,进样量5 μL,根据不同化学成分选择流动相,采用SPSS 20.0软件进行主成分分析和聚类分析。结果 21种石斛中7种化学成分组成及含量差异明显,有10种石斛未检测出毛兰素,其余11种石斛种质中鼓槌石斛的毛兰素量显著高于其他种;12种石斛未检测出槲皮素,11种石斛未检测出没食子酸,4种石斛未检测出香草醛,1种石斛未检测出柚皮素,21种石斛均检测出丁香酸和香豆素成分,其中以尖刀唇石斛香豆素含量显著高于其他种;通过主成分分析显示21种石斛化学成分在三维空间分布散乱,在类间距离为5左右时才能将21种石斛聚为6类,因此不同的石斛种在这7种化学成分组成及含量上存在明显区别,在使用这7种成分表征药理药效功能时不同石斛应当区别对待。结论 建立的RP-HPLC-UV法检测7种化学成分能在石斛质量控制以及不同种质资源开发策略方面提供参考。     

高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法测定人工培养蛹虫草多糖的单糖组成

目的 采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法测定人工培养蛹虫草多糖的单糖组成.方法 以人工培养蛹虫草子实体为原料,利用热水和稀碱液分别对其水溶性多糖成分进行提取.分离得到6种人工蛹虫草水溶性多糖化合物.其中水提部分主要分离得到3种精多糖P50、P70-1和P70-2,碱提部分则分离得到3种精多糖CBP-1、CBP-2和CBP-3.高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法分别对上述6种精多糖的单糖组成成分进行了测定.结果 除CBP-3为葡聚糖外,其他5个多糖均为由D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖组成的杂多糖.结论 采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法进行多糖化合物的单糖组成成分测定,无需进行衍生化,可达到简便、高效、准确地进行单糖组成分析之目的 .     

UHPLC-Q-Orbitrap-MS/MS 法分析5 种紫金牛属植物的黄酮类成分

目的分析5 种紫金牛属药用植物（细罗伞、九管血、朱砂根、月月红和雪下红）的黄酮类成分。方法 采用超高效液相色谱（UHPLC）技术分离5 种紫金牛属植物的黄酮类成分,在高分辨质谱仪（Q-Orbitrap-MS/MS） 正、负离子模式下采集碎片离子信息,应用CD2.1 软件（Thermo Fisher）完成数据初步整理后进行数据库 （mzCloud,mzVault,ChemSpider）检索比对。结果从5 种紫金牛属植物中共鉴定出38 种黄酮类成分,细罗 伞、九管血、朱砂根、月月红和雪下红分别鉴定出37、34、29、36 和30 种黄酮类化合物,有26 种黄酮类成 分为5 种紫金牛属植物的共有成分。结论该鉴定方法精确、可靠、高效,能快速鉴定出紫金牛属植物的黄酮 类成分,为紫金牛属药用植物的药效物质基础和开发利用研究提供科学依据。     

基于主成分与聚类法的中成药东盟市场差异化策略研究

中成药是我国中药出口中高技术、高附加值且具有自主知识产权的重要类别,其海外发展是中医药获得国际认可的重要标志。随着我国"一带一路"倡议的实施以及中国-东盟经济一体化进程加快,中国与东盟双边中药贸易潜力巨大、机遇空前。东盟市场将成为我国中成药国际化的重要突破口,对我国中成药"走出去"具有战略性意义。由于东盟各成员国在经济发展、市场规模以及医疗卫生水平等方面存在差异,通过构建评价指标体系,利用主成分和聚类分析法对东盟市场进行深入细分,将东盟十国划分为成熟市场、新兴市场、潜力市场和次级市场4类,并基于实证研究结果提出了有针对性的差异化市场开拓策略,为我国中成药全面开拓东盟并进入欧美主流市场提供有效参考与借鉴。     

基于GC-IMS比较不同干燥方式对太子参挥发性成分的影响

目的：比较不同干燥方式对太子参挥发性成分的影响。方法：采用常温晾干、晒干、热风干燥(40、60、80℃)和真空冷冻干燥的方式处理太子参,通过气相色谱-离子迁移谱法(GC-IMS)分析挥发性成分的变化,样品在500 r·min^-1转速下80℃孵化15 min,进样针温度85℃,进样量200μL,载气程序为20 min内从2 mL线性上升到150 mL,IMS迁移管温度60℃,SE-54毛细管色谱柱(0.32 mm×30 m,0.25μm),柱温60℃,时间35 min。构建挥发性成分的差异谱图并进行主成分分析(PCA)。结果：在干燥后的太子参中鉴别出了37种挥发性成分,化合物的种类数量从多到少依次为酮类、醛类、醇类。不同干燥方式的太子参中挥发性成分存在一定差异,晒干、晾干和40℃热风干燥后挥发性成分相近,真空冷冻干燥与80℃热风干燥处理对太子参挥发性成分有较大的影响,且真空冷冻干燥样品中化合物种类最少。结论：建立了一种太子参挥发性成分的GC-IMS检测分析方法,具有高效无损、样品处理简单的特点,可实现不同干燥方式太子参样品的区分。40℃热风干燥可以有效保留太子参样品...     

HPLC法同时检测16种五加属植物中14种苯丙素类成分

目的建立以HPLC法同时检测16种33批五加属植物中紫丁香苷、绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸、ethylsyringin、ethylconiferin、(+)-梣皮树脂醇、(±)-松脂素、(±)-丁香脂素、taiwanin C、savinin、helioxanthin、(-)-sesamin 14种苯丙素类成分的含量。方法采用Promosil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1mL/min;柱温30℃;检测波长280 nm。结果在优化的色谱条件下,14种成分在测定的质量浓度范围内线性关系良好,r均大于0.999 1,方法的精密度、稳定性、重复性以及回收率良好。结论建立的HPLC法可用于同时检测五加属植物中14种苯丙素类化学成分的含量,该方法快速、准确,有较好的重现性和稳定性,可为该属植物的进一步研究提供参考。     

大叶千斤拔与蔓性千斤拔的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究

目的 鉴别大叶千斤拔、蔓性千斤拔.方法 采用HPLC法,Krosmasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-水梯度洗脱,检测波长为274 nm,流速为1 ml/min,柱温为30 ℃.结果 在选定色谱条件下,建立了稳定可控的高效液相色谱图;应用主成分分析法、系统聚类分析法将药材分成两类,并计算相似度.结论 应用高效液相色谱法鉴别大叶千斤拔、蔓性千斤拔是可行的.     

主成分分析确定头花蓼最佳采收时间及初加工方法

目的: 确定头花蓼GAP种植基地药材的最佳采收时间及初加工方法,以指导头花蓼药材的采收加工。 方法: 采用高效液相色谱法、水溶性浸出物测定法对不同采收期、不同初加工方法GAP种植基地的头花蓼药材中槲皮素、槲皮苷、没食子酸、水溶性浸出物含量进行测定,并运用主成分分析对测定结果进行综合质量评价对比研究。 结果: 8月下旬采集的药材综合评分值为2.093 0,阴干的药材综合评分值为1.723 1,包含了头花蓼药材中槲皮素、槲皮苷等4种指标成分的最佳综合信息,可确定头花蓼GAP种植基地药材最佳采收时间应在8月下旬,最佳初加工方法应为阴干。 结论: 不同生长发育期采集的头花蓼中指标成分积累具有一定的规律,初加工方法对头花蓼药材质量影响较大。     

HPLC测定烈香杜鹃中6种黄酮成分的含量及主成分分析

目的: 建立HPLC测定烈香杜鹃中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素6种黄酮成分的方法,同时应用主成分分析评价其质量。方法: 样品经75%甲醇超声,采用C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-0.2%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长365 nm。结果: 芦丁,金丝桃苷,槲皮苷,槲皮素,山柰酚,异鼠李素在0.009 7～0.194 9,0.007 1～0.141 6,0.188 0～3.752,0.027 1～0.434 0,0.010 8～0.216 0,0.005 8～0.116 6 μg线性范围良好,加样回收率均在100%～105%,RSD都 < 3%。结论: HPLC操作简便、重复性好、结果准确。根据不同化学指标,采用主成分分析可以进行烈香杜鹃质量评价。     

中国石斛产业发展现状分析与考量

石斛作为我国“九大仙草”之首,发展势头迅猛,种植面积居草本中药材第21名,已成为我国的大宗药材。发布我国石斛产业最新数据,对目前我国石斛种质资源进行系统梳理,概括分析石斛产业发展脉络和历程,梳理与石斛产业发展息息相关的药食同源、新资源食品等政策,为后期石斛产业的发展和产品开发提供参考。我国共有石斛野生资源92种,石斛产业种植总面积达45.4万亩（1亩≈666.67 m2）,综合产值逾500亿元。石斛种植面积较大的省份有云南、贵州、浙江等,石斛主产区为云南德宏、保山,浙江乐清,安徽霍山,贵州赤水、安龙、锦屏等。药用石斛种类主要为铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛、紫皮石斛等。     

铁皮石斛DoSRK2E基因的克隆与表达分析

目的克隆铁皮石斛蔗糖非酵解1型相关蛋白激酶2(Sn RK2)家族基因,并进行生物信息学和表达分析。方法通过RT-PCR、RACE克隆铁皮石斛Sn RK2(DoSRK2E)基因c DNA全长,利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的相对分子质量、等电点、结构域、跨膜结构、信号肽及亚细胞定位等;利用DNASTAR和MEGA进行多序列比对和系统发育关系重建分析;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测基因组织表达模式。结果获得铁皮石斛DoSRK2E基因(GenBank登录号API65110),cDNA全长1 795 bp,包含1个1 086 bp的完整开放阅读框,编码蛋白相对分子质量40 850,等电点4.80,无信号肽和跨膜域,包含1个蛋白激酶结构域、1个ATP结合位点和1个Ser/Thr蛋白激酶活化位点,预测定位在内质网膜上;DoSRK2E蛋白与植物SnRK2蛋白序列高度一致,系统发育位置位于SnRK2亚家族的分支III,与拟南芥At SnRK2.6的亲缘关系最近;DoSRK2E基因在铁皮石斛根中表达量最高,茎中次之,叶中最低。结论首次从珍稀濒危药用植物铁皮石斛中克隆得到SnRK2家族基因DoSRK2E,对其分子特性与组织表达模式进行了分析研究,为进一步揭示该基因在铁皮石斛逆境胁迫中的作用机制提供基础。     

5种石斛对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

该文旨在研究比较霍山石斛、铁皮石斛(霍山)、铁皮石斛(云南)、铜皮石斛和河南石斛等5种石斛对四氯化碳急性肝损伤的保护作用。实验将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、5种石斛高(7.5 g·kg~(-1))和低(1.25 g·kg~(-1))2个剂量组。各组连续给药2周,末次给药2 h后,除对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组腹腔注射0.5%CCl4橄榄油溶液。16 h后,采集小鼠血清及肝组织,测定小鼠血清中ALT,AST的活性;并检测肝组织中SOD和MDA的水平;计算肝脏指数并观察肝组织病理学变化,荧光定量PCR技术检测肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的mRNA的表达水平。结果显示,与模型组相比,各石斛组均能降低小鼠血清指标ALT和AST水平,使肝组织中MDA含量下降,SOD活性升高,减轻CCl4对肝脏的病理损伤。此外,霍山石斛肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的mRNA表达水平显著下调。结果表明,5种石斛对四氯化碳急性肝损伤具有保护作用。但不同产地石斛和不同种石斛的保肝效果有所不同,其中霍山石斛效果最为显著,其他几种石斛保肝效果依次为铁皮石斛(云南)、铁皮石斛(霍山)、河南石斛和铜皮石斛,这可能与不同基源品种石斛化学成分不同有关。     

大苞鞘石斛化学成分及细胞毒活性研究

目的研究大苞鞘石斛Dendrobiumwardianum的主要化学成分及部分化合物的肿瘤细胞毒活性。方法应用多种色谱分离技术,结合半制备液相色谱对化合物进行分离纯化,通过核磁共振谱、质谱、薄层色谱对照等鉴定化合物结构;MTS法检测部分化合物的肿瘤细胞毒活性。结果从大苞鞘石斛中分离得到16个化合物,分别鉴定为愉悦石斛素(1)、钩状石斛素(2)、反式-阿魏酸二十烷基酯(3)、反式-阿魏酸二十二烷基酯(4)、对香豆素酸二十四烷基酯(5)、4-羟基-3-甲氧基肉桂醛(6)、二氢松柏醇(7)、3,7-二甲氧基-5-羟基-1,4-菲醌(8)、3-乙氧基-5-羟基-7-甲氧基-1,4-菲醌(9)、4-甲氧基-9,10-二氢菲-2,7-二醇(10)、5,7,4′-三羟基二氢黄酮(11)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基二氢黄酮(12)、苜蓿素(13)、3,5,4′-三甲氧基-4-羟基联苄(14)、3,5,3′-三甲氧基-4′-羟基联苄(15)和3,3′-二甲氧基-4,5′-二羟基联苄(16)。对所得化合物3、6、8、9、11、14、15进行了肿瘤细胞毒活性筛选,其中化合物6、8有一定的体外肿瘤生长抑制活性。结论化合物3、5、6为首次从石斛属植物中分离得到,化合物10、11、14、15为首次从大苞鞘石斛中分离得到;大苞鞘石斛活性成分有待挖掘。     

铁皮石斛F-box蛋白基因DoSKP2A的克隆与表达分析

目的克隆珍稀濒危兰科药用铁皮石斛F-box蛋白基因即S期激酶相关蛋白(S phase kinase-associated protein)基因DoSKP2A,并进行生物信息学和表达特征分析。方法采用RACE技术获基因全长;利用生物信息软件预测基因编码蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 7.0分别进行氨基酸多序列比对和进化树构建;借助定量PCR检测基因表达模式。结果克隆到DoSKP2A(GenBank注册号KU160472),c DNA全长1 507 bp,开放阅读框(ORF)长1 101 bp,编码蛋白含366个氨基酸,相对分子质量39 590,等电点7.9。DoSKP2A蛋白不含跨膜域和信号肽,包含F-box核心结构域(26～88)、亮氨酸重复序列LRR(202～226)和多个保守基序;Do SKP2A与植物SKP2As蛋白一致性为64.6%～72.4%,所在分支隶属于SKP2As分子进化的单子叶植物分支,与小兰屿蝴蝶兰SKP2A亲缘关系近;DoSKP2A基因转录本在石斛3种器官中为组成型表达,根中相对表达量较高,为叶中的6.16倍,茎中次之,叶中表达量很低。结论获得一个全新的铁皮石斛F-box蛋白基因DoSKP2A全长、生物信息及其表达特征,为研究其在铁皮石斛生长发育、信号传导和抗逆境胁迫的分子机制提供基础。     

铁皮石斛WRKY5基因的克隆与表达分析

目的克隆铁皮石斛Do WRKY5基因,并对生物信息学和表达模式进行分析。方法通过转录组测序和RT-PCR方法相结合首次从铁皮石斛中克隆到一个WRKY基因,利用生物信息学工具对其进行分析,并利用荧光定量PCR分析其在铁皮石斛中的组织表达模式及在低温胁迫、脱落酸(ABA)胁迫和蔗糖渗透胁迫下的表达模式。结果获得长1 336 bp的Do WRKY5基因转录因子c DNA全长序列,开放阅读框为834 bp,编码277个氨基酸残基,含有一个WRKY基因保守结构域和一个C2H2锌指结构域,属于WRKY基因家族的第II类成员。q RT-PCR分析表明,Do WRKY5基因在铁皮石斛根、茎、叶中均有表达,但在叶中的表达量最高。在不同低温和4℃不同时间诱导处理后,该基因表达量均显著升高,并且该基因在ABA胁迫和蔗糖渗透胁迫下均可被诱导表达。结论 Do WRKY5基因在铁皮石斛应答低温胁迫等多种非生物胁迫中可能起重要的调控作用,为进一步研究铁皮石斛的抗寒机制和抗寒性品种的选育提供基础。     

基于ITS和ITS2序列的药用石斛DNA条形码鉴定研究

目的 探讨内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）和内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)片段作为DNA条形码鉴别我国41种药用石斛种类的可行性。方法 通过PCR扩增测序结合GenBank公共序列筛选分别获得我国41种药用石斛的核基因ITS和ITS2序列433条和410条,以Kimura-2-parameter(K2P)模型计算种间和种内遗传距离,以邻接法（neighbor-joining,NJ）构建系统发育树,并对ITS2二级结构进行预测分析。结果 基于遗传距离和NJ树分析结果均显示,ITS和ITS2作为DNA条形码可分别有效区分待测的30和31种药用石斛,物种鉴定效率分别为73.2%和75.6%。联合系统发育树和ITS2序列二级结构分析,药用石斛种类的鉴定效率可提升至87.8%。结论 ITS2作为DNA条形码对药用石斛的物种分辨率优于ITS,物种取样数量可显著影响DNA条形码对药用石斛的物种鉴定效率。结果丰富了我国石斛属植物的DNA条形码数据库,为保障药用石斛种质资源和药用安全提供了科学基础和技术...