秦艽不同配伍药对对风寒湿痹型类风湿关节炎大鼠踝关节核因子κB、血管内皮生长因子表达及病理学改变的影响

目的基于免疫组织化学技术观察秦艽不同配伍对风寒湿痹类风湿关节炎(RA)大鼠踝关节核因子κB(NF-κB)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响并观察大鼠踝关节病理学改变。方法 80只实验大鼠随机分为空白组、Ⅱ型胶原模型组、风寒湿病证模型组(Ⅱ型胶原+风寒湿刺激)、阳性药组、单味秦艽组、秦威组(秦艽-威灵仙)、秦桑组(秦艽-桑寄生)、秦防组(秦艽-防己),每组10只。采用注射Ⅱ型胶原乳剂诱导并给予风寒湿刺激制备风寒湿RA大鼠模型。模型建立完成后各给药组给予相应药液灌胃,其余组给予生理盐水。采用免疫组织化学技术检测踝关节NF-κB、VEGF的表达;苏木精(Hatmatoxylin)-伊红(Eosin)染色(HE染色)观察踝关节病理学改变。结果与空白组比较,Ⅱ型胶原组及病证模型组踝关节NF-κB、VEGF蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与风寒湿病证模型组比较,各给药组踝关节NF-κB、VEGF表达水平均降低,中药组中以秦威组降低最明显(P 0. 01)。HE染色结果显示,造模后Ⅱ型胶原组软骨组织结构严重破坏,软骨细胞排列疏松,少量软骨细胞核固缩凋亡,大量炎细胞浸润,大量新生血管生成,关节面严重破损;病证模型组在Ⅱ型胶原组病理改变基础上关节腔内存在大量纤维物渗出,滑膜细胞增生,部分滑膜细胞呈绒毛状增生突入关节腔内,关节表面粗糙;经治疗后,各治疗组大鼠踝关节软骨组织结构破坏减少,少量炎细胞浸润,新生血管生成减少,关节面破损有不同程度恢复。结论平温相配的秦威组对于风寒湿痹型类风湿关节炎治疗效果优于平平相配的秦桑组、平寒相配的秦防组及单味秦艽组,实验结果与中医"寒者热之"的治疗原则基本相符。该配伍治疗类风湿关节炎的机制可能与其可以降低NF-κB、VEGF的表达,减轻关节破坏,减少新生血管有关。     

秦艽不同配伍对风寒湿痹模型大鼠MMP-3及TIMP-1的影响

目的:观察秦艽寒热不同配伍药对对风寒湿痹型类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠踝关节基质金属蛋白酶-3 (matrix metalloproteinase-3,MMP-3),基质金属蛋白酶组织抑制物-1 (matrix metalloproteinase tissue inhibitor-1,TIMP-1)的影响。方法:选取80只SD大鼠并随机分为正常组,Ⅱ型胶原组,风寒湿病证模型组,雷公藤多苷片组(6 mg·kg~(-1)),单味秦艽组(25 g·kg~(-1)),秦艽配伍威灵仙(秦威组,25 g·kg~(-1)),秦艽配伍桑寄生(秦桑组,25 g·kg~(-1))、秦艽配伍防己(秦防组,25 g·kg~(-1)),共8组,每组10只。采用注射Ⅱ型胶原乳剂诱导并给予风寒湿刺激制备风寒湿RA大鼠模型。模型建立完成后正常组,Ⅱ型胶原组及风寒湿病证模型组大鼠给予生理盐水,各给药组给予相应药液灌胃。实验过程中,每3 d测量1次大鼠左后足跖厚度,计算足跖肿胀度;实验第38天对各组大鼠进行关节炎指数(AI)评分;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清类风湿因子(RF)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测踝关节MMP-3,TIMP-1的表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测踝关节MMP-3,TIMP-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,Ⅱ型胶原组及风寒湿病证模型组足跖肿胀度,AI评分,血清RF含量,踝关节MMP-3蛋白表达水平,MMP-3 mRNA明显升高(P 0. 05,P 0. 01),踝关节TIMP-1蛋白表达水平,TIMP-1 mRNA显著降低(P 0. 01);与风寒湿病证模型组比较,各给药组足跖肿胀度,AI评分及血清RF含量均有不同程度降低,其中秦威组降低最显著(P 0. 01); Western blot及Real-time PCR结果显示,与风寒湿病证模型组比较,各给药组踝关节MMP-3蛋白表达水平及MMP-3 mRNA表达水平均显著降低(P 0. 01),以秦威组降低最明显,雷公藤多苷片组、秦威组及秦桑组大鼠踝关节TIMP-1蛋白表达水平及TIMP-1 mRNA表达水平均有所升高,以秦威组升高最显著(P 0. 01)。结论:对于风寒湿痹型类风湿关节炎,平温相配的秦威组疗效优于平平相配的秦桑组、平寒相配的秦防组及单味秦艽组,实验结果与中医"寒者热之"的原则基本相符。该配伍治疗风寒湿痹型类风湿关节炎的机制可能与其可以减少MMP-3,升高TIMP-1的表达,减轻关节软骨破坏有关。     

秦艽寒热不同配伍对风寒湿痹类风湿关节炎大鼠白细胞介素-6及血管内皮生长因子的影响

目的 观察秦艽不同配伍药对对风寒湿痹型类风湿关节炎(RA)模型大鼠白细胞介素-6(IL-6)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响,从中药药性及复方配伍理论的角度揭示中药药性-病证-功效的关联性。方法 80只SD大鼠随机分为空白对照组、Ⅱ型胶原组、病证模型组、阳性对照组、单味秦艽组、秦威组(秦艽配伍威灵仙)、秦桑组(秦艽配伍桑寄生)、秦防组(秦艽配伍防己),每组10只。注射Ⅱ型胶原乳剂并施加风寒湿刺激制备风寒湿型RA大鼠模型。造模完成后各给药组给予相应药液,空白对照组、Ⅱ型胶原组及病证模型组给予生理盐水。实验过程中,记录大鼠一般状况;每3 d测量1次大鼠左后足跖厚度,并计算足跖肿胀度;实验第38日大鼠进行关节炎指数(AI)评分;ELISA检测大鼠血清IL-6含量;Westernblot和RT-PCR分别检测大鼠踝关节VEGF的蛋白和m RNA表达。结果 与空白组比较,Ⅱ型胶原组和病证模型组足跖肿胀度、AI评分、血清IL-6含量、踝关节VEGF蛋白和m RNA表达明显增加(P0.01);与病证模型组比较,各中药组足跖肿胀度、AI评分、血清IL-6含量、踝关节VEGF蛋白和m RNA表达均有所减少,其中秦威组最明显(P0.01)。结论 对于风寒湿痹型RA,药性平温相配疗效优于平平相配、平寒相配及单味秦艽,实验结果与中医“疗寒以热药”的原则基本相符。     

秦艽不同配伍药对对风湿热痹类风湿性关节炎模型大鼠镇痛作用及血清TNF-α、IL-1β、PGE_2的影响

目的:研究秦艽不同配伍药对风湿热痹类风湿性关节炎(RA)模型大鼠镇痛抗炎作用的影响。方法:将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组、病证模型组、阳性药组、单味秦艽组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组和秦艽防己组,采用Ⅱ型胶原诱导加"风湿热"环境因素刺激制备风湿热痹RA大鼠模型,连续18 d。造模结束后各给药组给予制备的对应药液灌胃(15 m L/kg),连续21 d。于给药前、给药后分别测量大鼠痛阈值、冷痛耐受时间及压力耐痛值,酶联免疫法测定各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、PGE2含量。结果:与病证模型组比较,秦艽配伍组大鼠痛阈值明显延长、冷痛耐受时间明显缩短、压力耐痛值明显升高,差异均具有统计学意义(P0.01);且秦桑组痛阈值秦防组秦威组;秦防组冷痛耐受时间秦桑组秦威组;秦防组压力耐痛值明显高于秦桑组(P0.01)。与空白组比较,模型组及病证模型组血清TNF-α、IL-1β、PGE2含量明显升高(P0.01)。与病证模型组比较,秦防组TNF-α含量降低明显(P0.01),阳性药组、秦桑组、秦威组次之(P0.05);秦防组IL-1β含量降低明显(P0.01),其余给药组IL-1β含量亦降低(P0.05);秦威组、单味秦艽组秦防组PGE2含量降低明显(P0.01),秦桑组次之(P0.05)。结论:秦艽不同配伍药对风湿热痹RA大鼠均具有一定的镇痛抗炎作用,且平寒相配镇痛抗炎作用优于平温、平平相配,实验结果基本符合中医临床"疗热以寒药"的治疗原则,该配伍镇痛抗炎的作用机制与其能够减轻疼痛刺激、降低TNF-α、IL-1β、PGE2含量有关。     

秦艽不同配伍药对对风湿热痹型RA大鼠踝关节VEGF表达及病理学的影响

目的探讨秦艽不同配伍药对对风湿热痹型类风湿关节炎(RA)大鼠踝关节血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达及病理学的影响。方法 SD大鼠80只,随机分为正常对照组、Ⅱ型胶原组、病证模型组、阳性药组(雷公藤多苷片组,6 mg·kg~(-1))、单味秦艽组、秦艽威灵仙组(平-温相配)、秦艽桑寄生组(平-平相配)和秦艽防己组(平-寒相配),每组10只;采用天然牛Ⅱ型胶原(CⅡ)+人工气候箱模拟人类痹证成因,连续造模18 d建立风湿热痹型RA模型大鼠;造模结束后,各中药组按25.05 g·kg~(-1)连续灌胃给药21 d。实验第38天对各组大鼠进行关节炎指数(AI)评分;HE染色观察踝关节组织病理切片;分别用免疫组织化学法及Western Blot法检测踝关节VEGF的表达。结果与正常对照组比较,Ⅱ型胶原组和病证模型组踝关节滑膜组织血管增生,结缔组织破坏,炎性细胞浸润,血管翳形成,软骨破坏,且病证模型组关节面完全破坏,其破坏程度明显高于Ⅱ型胶原组;Ⅱ型胶原组和病证模型组AI评分、VEGF表达量均显著增加(P0.01),且病证模型组高于Ⅱ型胶原组。与病证模型组比较,各给药组炎性细胞明显减少,毛细血管减少,绒毛变少,肉芽组织老化,纤维增多成为瘢痕,并且软骨破坏减轻;各给药组的AI评分、VEGF表达量均有不同程度的降低,其中秦艽防己组最为显著(P0.01)。结论秦艽各配伍药对可能通过调节风湿热痹型RA模型大鼠的VEGF表达,进而抑制新生血管的增生,发挥对RA的治疗作用,且平-寒相配效果优于平-温、平-平相配。     

秦艽寒热不同配伍药对对风湿热痹类风湿关节炎大鼠MMP-3、TIMP-1表达及踝关节病理学改变的影响

目的研究秦艽寒热不同配伍药对对风湿热痹类风湿关节炎(RA)大鼠基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,并观察其踝关节病理学改变,探讨药性-病证-疗效之间的关系及中药治疗RA的机制。方法将80只健康SD大鼠随机分为对照组、Ⅱ型胶原(CⅡ)组、病证模型组、雷公藤多苷组、秦艽组、秦艽-威灵仙(秦-威)组、秦艽-桑寄生(秦-桑)组和秦艽-防己(秦-防)组8组,采用CⅡ诱导加风湿热环境因素刺激制备风湿热痹RA大鼠模型,各给药组ig给予制备的对应药液。实验中每3天测1次足跖厚度,计算足跖肿胀度;实验前期、中期、后期各进行1次关节炎指数(AI)评分。免疫组化法检测大鼠踝关节MMP-3和TIMP-1的表达,HE染色观察踝关节组织的病理学改变。结果与对照组比较,CⅡ组和病证模型组的足跖肿胀度、AI评分及MMP-3表达量均明显升高,TIMP-1表达量明显降低,CⅡ组和病证模型组大鼠关节面毛糙、破损,关节软骨破坏严重,大量肉芽组织增生,伴有大量的炎性细胞浸润和新生血管。经药物治疗后,与病证模型组比较,各给药组足跖肿胀度、AI和MMP-3表达量均有不同程度的降低,其中秦-防组降低最为显著;TIMP-1表达量均有不同程度的升高,其中秦-防组升高最为显著。HE染色结果显示,各给药组关节软骨破坏面积及破坏程度均有所减轻,炎性细胞及新生血管减少,修复纤维增多,瘢痕组织增多。结论对于风湿热痹RA,平寒相配效果优于平温、平平相配,实验结果与中医临床"疗热以寒药"的治疗原则是一致的,该配伍治疗风湿热痹RA的作用机制可能与其能够降低MMP-3表达、升高TIMP-1表达、减轻关节软骨破坏以及减少炎性细胞浸润和血管增生有关。     

电针对类风湿性关节炎大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB信号通路的影响

目的:观察电针对类风湿性关节炎(RA)大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB(TACE/NF-κB)的影响,探讨电针抗RA的可能机制。方法 :SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和非穴位组,每组10只,采用皮内注射牛Ⅱ型胶原诱发RA模型。电针组电针"足三里""悬钟"和"肾俞"穴,1次/d,共19d。非穴位组取穴位外侧旁开5mm进行针刺,方法与电针组相同。Westergren法检测血浆红细胞沉降率(ESR),速率散射比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)和类风湿因子(RF),免疫印迹法检测膝关节滑膜组织TACE及NF-κB蛋白含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠血浆ESR、血清CRP和RF显著升高,膝关节滑膜组织中TACE及NF-κB蛋白表达增加(P0.01);与模型组相比,电针组大鼠ESR、CRP和RF显著降低,膝关节滑膜组织中TACE及NF-κB蛋白表达均降低(P0.05);非穴位组与模型组比较,各项指标的差异无统计学意义(P0.05)。结论:电针能有效调节RA大鼠关节炎性损伤状况,降低RA大鼠膝关节滑膜组织中的TACE及NF-κB蛋白表达,这可能是电针通过调节TACE/NF-κB改善RA的信号调节机制之一。     

秦艽不同配伍对风湿热痹型RA大鼠踝关节VEGF表达及病理学的影响

摘要： 目的 研究秦艽不同配伍对风湿热痹的类风湿性关节炎（RA）大鼠踝关节血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达及病理学的影响,探讨药性-疾病-疗效之间的关系及其治疗机制。方法 通过建立风湿热痹RA大鼠模型,将80只SD大鼠,随机分为空白组、Ⅱ型胶原组、病证模型组、阳性药组、单味秦艽组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组和秦艽防己组,共8组,每组10只。实验第39天时进行关节炎指数评分,并进行踝关节取材,采用HE染色技术观察踝关节组织的破坏程度,采用免疫组织化学法对踝关节VEGF的蛋白表达进行定位分析,再采用Western blotting法对VEGF的表达进行半定量分析。结果 HE染色结果显示,各给药组炎性细胞明显减少,毛细血管减少,绒毛变少,肉芽组织老化,纤维增多成为瘢痕,并且软骨破坏减轻。Ⅱ型胶原组和病证模型组的关节炎指数、VEGF蛋白表达量均明显高于空白组（P<0.05）,且病症模型组高于Ⅱ型胶原组;各给药组关节炎指数、VEGF均有不同程度的降低,其中秦防组降低最为显著（P<0.05）。结论 各秦艽配伍药对可能通过调节风湿热痹型RA模型大鼠VEGF的表达,进而抑制新生血管的增生,发挥对RA治疗作用。其中平寒相配效果优于平温、平平相配。     

秦艽—威灵仙配伍对类风湿关节炎模型大鼠血清学指标及HIF-1α、VEGF表达的影响

目的 观察秦艽威灵仙配伍对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)模型大鼠血清学指标及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。方法 将48只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、阳性药组(甲氨蝶呤组)、单味秦艽组、单味威灵仙组及秦威配伍组(秦艽配伍威灵仙)6组。除空白组外，其余5组构建RA模型，建模后各给药组给予不同的药液灌胃、空白组和模型组给予相应体积生理盐水。实验过程中观察记录大鼠的一般状态和足跖肿胀度；采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中类风湿因子(Rheumatoid factor, RF)、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-cyclic peptide containing citrulline antibody, Anti-CCP-Ab)、前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE₂...     

秦艽、威灵仙组分配伍对类风湿关节炎模型大鼠血清炎症因子及踝关节NF-κB、VEGF表达的影响

目的 探讨秦艽、威灵仙组分配伍对类风湿关节炎（RA）模型大鼠的抗炎效果及作用机制。方法 选取5~6周龄SPF级SD大鼠72只,雌雄各半。除空白组外,均采用Ⅱ型胶原诱导法复制胶原诱导型关节炎大鼠模型（CIA）。将造模成功的64只大鼠按随机数字表法分为模型组、甲氨蝶呤组（0.375 mg·kg^-1）、龙胆苦苷配伍木兰花碱组（150.454 1 mg·kg^-1+5.061 8 mg·kg^-1）、龙胆苦苷配伍灵仙新苷组（150.454 1 mg·kg^-1+16.433 1 mg·kg^-1）、獐牙菜苷配伍木兰花碱组（3.455 8 mg·kg^-1+5.061 8 mg·kg^-1）、獐牙菜苷配伍灵仙新苷组（3.455 8 mg·kg^-1+16.433 1 mg·kg^-1）、獐牙菜苦苷配伍木兰花碱组（9.303 2 mg·kg^-1+5.061 8 mg·kg^-1）、獐牙菜苦苷配伍灵仙新苷组（9.303 2 mg·kg^-1+16.433 1 mg·kg^-1）,每组8只,共9组。各组分别给予相应药液或生理盐水灌胃,连续给药15 d。实验中观察并记录各组大鼠一般状态;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、前列腺素E₂（PGE₂）、抗环瓜氨酸肽抗体（anti-CCP Ab）含量;苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠踝关节组织病理学变化;免疫组化法（IHC）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠踝关节核转录因子-κB（NF-κB）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测大鼠踝关节NF-κB、VEGF的mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠一般状态较差,足跖肿胀显著;血清CRP、anti-CCP Ab、IL-1β含量显著升高（P<0.01）;踝关节组织结构破坏严重;踝关节NF-κB、VEGF蛋白及mRNA表达显著上调（P<0.01）。与模型组比较,各给药组大鼠一般状态明显改善;血清TNF-α、IL-1β、RF、CRP、PGE₂及anti-CCP Ab的含量均不同程度降低,其中龙胆苦苷配伍灵仙新苷降低TNF-α与IL-1β、龙胆苦苷配伍木兰花碱降低RF与CRP、獐牙菜苦苷配伍木兰花碱降低PGE₂、獐牙菜苷配伍灵仙新苷降低anti-CCP Ab的效果优于其他组分配伍;踝关节组织病理变化均有不同程度改善;踝关节NF-κB、VEGF蛋白及mRNA表达明显下调（P<0.05,P<0.01）,其中獐牙菜苦苷配伍灵仙新苷下调蛋白及mRNA表达作用最为显著。结论 秦艽、威灵仙组分配伍对RA模型大鼠能起到良好的治疗作用,二药组分配伍具有多途径、多靶点协同增效的作用,其中龙胆苦苷配伍木兰花碱、龙胆苦苷配伍灵仙新苷、獐牙菜苷配伍灵仙新苷、獐牙菜苦苷配伍木兰花碱及獐牙菜苦苷配伍灵仙新苷5种组分配伍模式具有潜在优势。其作用机制可能是通过降低炎性因子分泌及抑制NF-κB、VEGF蛋白和mRNA的异常表达而发挥作用。     

杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响

目的 观察杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响。方法将35只SD大鼠分为正常对照组、模型组、杜仲低剂量组（杜仲提取物200 mg/kg）、氨甲蝶呤组（氨甲蝶呤0.75 mg/kg）、杜仲高剂量组（杜仲提取物800 mg/kg），每组7只，连续给药3周。采用冷水游泳+足跖部皮内注射CFAO制备类风湿关节炎模型。记录各组大鼠关节肿胀程度及关节指数评分，ELISA检测血清免疫球蛋白水平；流式细胞仪检测T淋巴细胞水平；HE染色观察关节病变；Western blotting检测大鼠踝关节滑膜组织中Toll样受体2(TLR2)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比，模型组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α升高，CD4+、CD4+CD25+Treg水平降低（P <0.05），与模型组相比，杜仲低剂量组、氨甲蝶呤组、杜仲高剂量组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α降低，CD4+、CD4+CD25+Tre...     

风湿宁对风寒湿痹证CIA大鼠模型滑膜组织中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨风湿宁对风寒湿痹证胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型滑膜组织中Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响及相关的作用机制。方法:SPF级雌性Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,阳性药组(来氟米特片,2.33 mg·kg-1),风湿宁低、中、高剂量组(9.12,18.24,36.48 g·kg-1),每组9只。除正常组外,其余各组大鼠采用风寒湿外感致病因素刺激,结合牛Ⅱ型胶原乳化剂诱导的方法,制备风寒湿痹证CIA大鼠模型。造模成功后,各组大鼠给予相应药物灌胃干预,每日1次,连续4周。观察药物对大鼠关节肿胀度,酶联免疫吸附测定法(ELISA)血清类风湿因子(RF),环瓜氨酶肽(ACPA),白细胞介素(IL)-1β,IL-10,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)滑膜组织中TLR4,髓样分化因子88(My D88),NF-κB酶抑制蛋白α(IκBα),NF-κB mRNA和蛋白表达的情况。结果:与正常组比较,模型组CIA大鼠模型的关节肿胀度明显升高,血清RF,ACPA,IL-1β,TNF-α含量显著升高,IL-10含量显著降低,滑膜组织中TLR4,My D88,IκBα,NF-κB mRNA和蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,风湿宁低、中、高剂量组可明显降低风寒湿痹证CIA大鼠模型的关节肿胀度与血清RF,ACPA,IL-1β,TNF-α含量,升高血清IL-10水平,下调滑膜组织中TLR4,My D88,IκB-α,NF-κB mRNA与蛋白表达量(P0.05,P0.01)。结论:风湿宁可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,从而抑制IL-1β,TNF-α的产生,起到治疗RA的作用,且其疗效与药物剂量有一定相关性。     

藏族药五味甘露药浴散加减方对佐剂关节炎大鼠药效及血清NF-κB,TNF-α,IL-1,EGF的影响

目的:观察藏族药五味甘露药浴散加减方对佐剂关节炎大鼠的药效及其对大鼠血清核因子-κB(NF-κB),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL~(-1)),表皮生长因子(EGF)水平的影响。方法:SD健康大鼠60只,随机选取10只作为正常组,除正常组外,采用弗氏完全佐剂关节炎(AA)大鼠模型,随机分为模型组,地塞米松组(0.150 mg·kg~(-1),ig),五味甘露药浴散加减方高、中、低剂量组(104.00,52.00,26.00 g·L~(-1)),药浴组每天40℃药浴30 min,模型组和正常组每天40℃温水浴30 min,给药4周,用致炎后足跖肿胀度,苏木素-伊红(HE)染色法观察致炎侧足踝关节滑膜病理改变评价藏族药五味甘露药浴散加减方对AA大鼠的治疗效果,测定大鼠胸腺、脾脏脏器系数,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定血清NF-κB,TNF-α,IL~(-1),EGF水平。结果:与正常组比较,模型组AA大鼠致炎侧足跖肿胀度明显增大,滑膜细胞增厚、巨噬细胞增生和炎细胞浸润,血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1),EGF水平明显升高,脾脏系数、胸腺系数明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,地塞米松组和五味甘露药浴散加减方高剂量组能明显减小AA大鼠致炎侧足跖肿胀度,能改善滑膜细胞增厚、巨噬细胞增生和炎细胞浸润,血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1)水平明显降低(P0.05,P0.01),五味甘露药浴散加减方中剂量组NF-κB水平也明显降低(P0.05,P0.01),五味甘露药浴散加减方各剂量组大鼠血清中EGF水平无明显变化,脾脏系数明显增大(P0.05),高、中剂量组胸腺系数明显增大(P0.05)。结论:藏族药五味甘露药浴散加减方能有效的减小佐剂性关节炎大鼠致炎侧足跖肿胀度,改善AA大鼠踝关节滑膜炎病变,高剂量效果最好,其机制可能与降低血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1)的水平、调节脾脏和胸腺的功能有关。     

基于主成分分析和聚类分析的秦艽不同配伍药对对风湿热痹类风湿关节炎大鼠的作用研究

目的运用主成分分析(PCA)法和聚类分析法,研究秦艽不同配伍药对对风湿热痹类风湿关节炎(RA)大鼠的影响,探讨病证-药性-疗效之间的关系。方法 80只SD大鼠随机分为对照组、模型(CII)组、病证模型组、雷公藤多苷组、单味秦艽组、秦艽+威灵仙(秦-威)组、秦艽+桑寄生(秦-桑)组和秦艽+防己(秦-防)组,采用天然牛II型胶原(CII)诱导加风湿热环境因素刺激制备风湿热痹RA大鼠模型,造模结束后各给药组分别ig给予制备的对应药液(25 mg/kg)。实验中测量大鼠体质量、足跖肿胀度、关节炎指数评分、痛阈值、冷痛耐受值及压力耐痛值,酶联免疫法测定各组大鼠血清中类风湿因子(RF)、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)水平。运用SPSS 21.0软件对数据进行PCA和聚类分析,设定主成分特征值大于1,聚类分析采用系统聚类法。结果 PCA筛选出2个主成分,二者携带原变量信息的89.6%,第1主成分反映除体质量之外其他变量的信息,第2主成分主要反映体质量这一变量的信息;以主成分因子得分与其权重(方差贡献)乘积之和相加,得出各组的总因子得分(F值,F值越大,病情越严重),病证模型组F值最大,对照组F值最小,给药组中秦-防组F值明显小于秦-威组、秦-桑组。聚类分析将8个组按对照组、模型组、给药组聚为3类,与理论实际相符合;给药组中秦-防组单独聚为一类,其余给药组聚为一类。结论对于风湿热痹型RA,平寒相配疗效优于平温、平平相配,实验结果符合中医临床"疗热以寒药"的治疗原则;PCA法和聚类分析法操作简单、结果可靠,可以用于评价动物模型及药物疗效。     

小柴胡汤对CFA大鼠滑膜组织NF-κB信号通路作用的探讨

目的:观察小柴胡汤治疗后弗氏完全佐剂(CFA)大鼠滑膜组织核转录因子(NF)-κB信号通路中肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TARDD),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),IκB激酶-α(IKKα),NF-κB p65蛋白的表达。方法:将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤低、中、高剂量组、雷公藤多苷组。各组于造模后7 d开始灌胃给药,正常组及模型组均予注射用水,小柴胡汤低、中、高剂量组(5. 94,11. 88,23. 76 g·kg~(-1)),雷公藤多苷片(0. 006 3 g·kg~(-1)),分别2 mL/次,每天3次灌胃,连续给药28 d后观察实验大鼠踝关节组织病理学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠右后踝关节组织病理评分显著增加(P 0. 01),NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达显著增高(P 0. 01)。与模型组比较,随着小柴胡汤剂量的增加,实验大鼠右后踝关节组织病理评分显著减少(P 0. 01),在大鼠踝关节组织标本NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65关键蛋白的表达上,小柴胡汤低剂量组蛋白表达明显减低(P 0. 05),而小柴胡汤中剂量组、小柴胡汤高剂量组、雷公藤多苷组蛋白表达显著减低(P 0. 01)。结论:研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以有效地改善滑膜炎症,抑制NF-κB炎症信号通路中关键蛋白的表达,从而阻止炎症而抑制骨侵蚀。     

赤雹根总皂苷对类风湿性关节大鼠NF-κB p65和IL-6表达的影响

目的:研究赤雹根总皂苷(TSTR)对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)活性的影响,探讨赤雹根总皂苷治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余大鼠用完全弗氏佐剂诱导佐剂性关节炎。将造模成功的大鼠随机分为赤雹根总皂苷40,80,160 mg/kg,雷公藤多苷12 mg/kg,模型对照组,每组10只。各给药组均灌胃给予相应药物,连续21天。计算大鼠足肿胀度和关节炎指数;ELISA法检测各组大鼠血清IL-6的含量;免疫组化法测定大鼠足跖组织NF-κB p65蛋白及足跖组织和脾脏IL-6蛋白表达水平;Western blot法检测大鼠足跖组织中NF-κB p65蛋白表达水平;RT-PCR法测定大鼠足跖部NF-κB p65mRNA、IL-6 mRNA的表达水平。结果:赤雹根总皂苷各剂量组大鼠组肿胀度和关节炎指数均显著低于模型对照组;血清中IL-6含量和IL-6蛋白表达水平及IL-6 mRNA的表达水平均低于模型对照组;足跖组织中NF-κB p65蛋白表达水平和IL-6 mRNA的表达水平均低于模型对照组。结论:抑制NF-κB和IL-6的表达是赤雹根总皂苷治疗类风湿性关节炎的作用机制之一。     

赤雹根总皂苷对RA大鼠足跖组织中核转录因子、白介素6和白介素10mRNA表达水平的影响

目的:研究赤雹根总皂苷(STDR)对类风湿性关节炎(RA)大鼠足跖组织中核转录因子(NF-κB) p65 mRNA、白介素6(IL-6) mRNA、白介素10(IL-10) mRNA相对表达水平的影响.方法:雄性SD大鼠80只,随机取10只大鼠作为正常对照,其余大鼠采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎,将造摸成功的50只大鼠随机分为模型组,赤雹根总皂苷160,80,40 mg· kg-1·d-1组和雷公藤多苷12 mg· kg-1·d-1组,各组分别给予相应药物,模型组ig蒸馏水,连续21d.RT-PCR法检测足跖组织中NFκB p65 mRNA,IL-6 mRNA,IL-10 mRNA表达水平.结果:与对照组比较,模型组NF-κB p65和IL-6的表达显著增高(P＜0.01),IL-10的表达明显降低(P＜0.01);STDR 40,80,160 mg·kg-1剂量组大鼠足跖组织中NF-κB p65 mRNA,IL-6 mRNA相对表达水平均显著低于模型对照组(P ＜0.01);STDR各剂量组大鼠足跖组织中IL-10 mRNA相对表达水平均显著高于模型对照组(P＜0.01).结论:调节NF-κB p65 mRNA,IL-6 mRNA和IL-10 mRNA表达水平是STDR治疗RA的作用机制之一.     

秦艽不同配伍对风湿痹证模型大鼠血清炎症因子水平的影响

目的 观察秦艽不同配伍药对对风寒湿痹和风湿热痹模型大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1(IL-1β)水平的影响,并探讨其治疗痹证的作用机制. 方法 将128只Wistar大鼠随机分为风寒湿痹和风湿热痹两大组,每组再分为空白组、模型组、雷公藤组、单味秦艽组、秦艽桑寄生组、秦艽防己组、秦艽威灵仙组、秦艽羌活组,每组8只.采用佐剂诱导加外界施以“风寒湿”和“风湿热”致病因素制备风寒湿痹与风湿热痹大鼠模型,并自造模第1天起各给药组给予制备的相应药液10 ml/kg灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水,每日1次,连续25天.测定各组大鼠血清TNF-α和IL-1β水平.结果 风寒湿痹和风湿热痹模型组大鼠TNF-α、IL-1β水平均高于空白组(P＜0.01).风寒湿痹和风湿热痹中各给药组大鼠血清TNF-α、IL-1β较模型组均有不同程度降低(P＜0.05或P＜0.01).风寒湿痹模型中,秦艽羌活组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组大鼠的TNF-α、IL-1β水平下降更明显(P＜0.01);秦艽羌活组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组大鼠的TNF-α水平低于秦艽防己组(P＜0.05或P＜0.01).风湿热痹模型中,秦艽防己组、秦艽桑寄生组、秦艽羌活组大鼠的TNF-α、IL-1β水平下降更明显(P＜0.01);秦艽防己组大鼠的IL-1β水平低于秦艽威灵仙组(P＜0.05). 结论 秦艽配伍羌活、威灵仙、桑寄生降低风寒湿痹模型大鼠TNF-α、IL-1β水平效果明显,秦艽配伍防己降低风湿热痹模型大鼠TNF-α、IL-1β水平效果明显.     

双氢青蒿素对两种类风湿关节炎模型的影响及机制

目的:研究双氢青蒿素(DHA)对佐剂性关节炎(AIA)和胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的保护作用,探讨DHA抗炎机制。方法:将Wistar大鼠随机分为8组,分别为AIA正常组,AIA模型组,AIA DHA组,AIA甲氨蝶呤组; CIA正常组,CIA模型组,CIA DHA组,CIA甲氨蝶呤组。佐剂性关节炎(AIA)的建立:除正常组外,各组大鼠右后足趾皮内注射0. 1 m L弗式完全佐剂;胶原诱导性关节炎(CIA)的大鼠模型的建立:除正常组外,各组大鼠尾根部注射1 g·L~(-1)二型胶原乳化剂0. 2 m L,并在7 d后,在大鼠相同部位注射相同体积的胶原乳化剂加强免疫。造模成功后,并分别给予DHA(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗后,并考察DHA抗AIA/CIA大鼠关节炎作用,包括关节炎指数(AI),足趾肿胀度,以及DHA对AIA/CIA大鼠免疫器官指数,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)水平和AIA/CIA大鼠踝关节病理切片的影响。体外培养RAW264. 7巨噬细胞系,分别以0. 5,1,2,4,8μmol·L~(-1)DHA处理24 h,设立正常,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测DHA对RAW264. 7细胞活力的影响;设立正常组,脂多糖(LPS)组,LPS+DHA(0. 5,1,2μmol·L~(-1))组,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清IL-6含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞核内核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠足肿胀度,AI,脾脏指数,IL-6水平显著增高(P 0. 05,P 0. 01),DHA可明显减轻AIA/CIA大鼠的足肿胀度(P 0. 05),降低关节炎评分指数(P 0. 05),降低AIA大鼠脾脏指数(P 0. 01)和胸腺指数(P 0. 05)以及AIA大鼠血清中IL-6水平(P 0. 05);但是对CIA大鼠脾脏指数并没有降低作用,而对胸腺指数和IL-6水平虽有降低作用但不具有统计学意义。此外DHA能够明显改善AIA/CIA大鼠踝关节病变情况,并能降低病理评分(P 0. 01)。与正常组比较,DHA 4,8,16μmol·L~(-1)组对RAW264. 7细胞活力明显抑制作用(P 0. 05,P 0. 01),DHA体外安全用药范围≤2μmol·L~(-1)。与正常组比较,LPS模型组IL-6含量明显高于正常组(P 0. 01),与LPS模型组比较,DHA能够抑制IL-6的产生(P 0. 05),Western blot结果显示,LPS能够上调RAW264. 7细胞核内NF-κB p65水平,而DHA能够抑制p65的入核。结论:DHA能够改善类风湿关节炎大鼠踝关节病变情况,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

艾灸对类风湿关节炎大鼠踝关节肿瘤坏死因子-α和核转录因子kappa B的影响（英文）

目的:通过观察艾灸对类风湿关节炎(RA)大鼠踝关节组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核转录因子kappa B(NF-κB)蛋白表达的影响,探讨艾灸治疗类风湿关节炎的抗炎机制。方法:以佐剂性关节炎(AA)作为类风湿关节炎大鼠模型,复制RA大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组和盐水组。正常组和模型组不做治疗;艾灸组造模后予以艾灸足三里、肾俞治疗;盐水组予左后足趾底部注入生理盐水0.15 m L,不做其他处理。应用苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察大鼠踝关节组织病理学变化;采用免疫组化法观察大鼠踝关节组织TNF-α和NF-κB蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠踝关节组织结构破坏,关节表面有缺损,TNF-α和NF-κB平均光密度(MOD)明显增高(均P0.05);艾灸组大鼠经艾灸治疗后,踝关节组织修复,关节表面光滑未见缺损,TNF-α和NF-κB的MOD较模型组降低(均P0.05);盐水组大鼠踝关节组织正常无损害,TNF-α和NF-κB与模型组比较有显著性差异(P0.05)。结论:艾灸能够下调RA大鼠踝关节组织NF-κB和TNF-α蛋白表达,以发挥抗炎作用,促进组织修复。