不同树龄忍冬的生长与药材质量关系研究

目的 研究忍冬个体生长与药材质量的关系。方法 调查忍冬不同树龄的形态指标，分析花蕾中绿原酸的含量的变化动态。结果 金银花药材的质量与其忍冬树龄关系密切。不同树龄忍冬，萌发新枝能力与花蕾生长不同，其质量差异较大。综合产量和绿原酸含量的因素，金银花药材以忍冬树龄9～15年较好。结论 保证金银花优质、高产的关键技术是：随树龄增长，适时调整密度，在GAP基地建设中，对不同树龄植株要分类管理。本研究对人工栽培多年生药材的研究与管理具有指导意义。     

白木香枝枯病病原菌的鉴定

目的:明确白木香枝枯病的病原菌,确定其是否能够诱导白木香产生沉香.方法:通过形态特征观察、rDNA-ITS序列测定分析、柯赫氏法则验证确定病原菌及其分类地位.结果:分析结果表明,侵染白木香Aquilaria sinensis的病原菌为可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae,该菌可诱导沉香产生.结论:首次明确白木香枝枯病的病原菌为可可毛色二孢,为利用真菌诱导白木香结香研究提供理论基础.     

蚜虫危害对灰毡毛忍冬药材产量和质量的影响

目的:探讨蚜虫危害对灰毡毛忍冬药材产量和质量的影响。方法:测定同一植株上蚜虫不同危害等级的花枝鲜花和干花的产量,采用HPLC-ELSD法,分别测定蚜虫不同危害等级的花蕾中绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸、川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙6种有效成分的含量。结果:蚜虫危害显著影响灰毡毛忍冬的产量,极显著影响木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量(P0.01),显著影响绿原酸的含量(P0.05),对咖啡酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸含量无显著影响。结论:灰毡毛忍冬GAP生产中应规范蚜虫的防治。     

忍冬的生长特性与金银花药材质量的关系

通过对忍冬植株生长、开花习性与金银花药材质量关系的研究,结果表明:金银花药材质量与忍冬植株的生长节律密切相关.金银花的最佳采收期为花蕾发育的大白期,不同株龄、不同采收期金银花产量与质量差异较大.第1、2茬花产量高、质量好,可为金银花的质量标准化研究提供理论依据.     

水分胁迫对忍冬生长及金银花质量的影响

目的:研究水分胁迫对忍冬生长发育及金银花药材质量的影响。方法:用盆栽法于当年第一茬花开之前进行不同程度的水分胁迫处理,考察忍冬的生长发育和生理指标的情况。结果:水分胁迫引起枝条生长缓慢,叶片比重增加,金银花产量降低,叶内叶绿素含量显著增加;叶片可溶性糖含量有增加趋势,轻度胁迫处理的叶片可溶性蛋白含量显著高于对照与重度处理,叶片中的脯氨酸含量因干旱而升高,随干旱增强花蕾的绿原酸含量显著低于对照。结论:水分条件是影响忍冬枝、叶、花蕾生长发育及金银花产量、质量的重要因子,栽培要适时灌溉,引种时要具备灌溉条件。     

不同类型叶面肥对忍冬生长发育及金银花质量的影响

目的：研究不同类型叶面肥对忍冬生长发育及金银花质量的影响。方法：采用紫外分光度法测定绿原酸含量。结果：在新稍旺长期喷施全营养叶面肥（含N、P、K等大量元素和Zn、Mn、Fe、B、Cu、Mo等微量元素）可提高忍冬花枝比例，促进花枝伸长，增加叶面积，提高产量和金银花内绿原酸含量，其中高N型肥料效果最为显著；尿素和磷酸二氢钾的效果小于全营养叶面肥。结论：高N型叶面肥可促进忍冬生长发育，提高金银花产量和质量，较适合用于金银花生产。     

不同采收方法对灰毡毛忍冬药材质量的影响

目的研究不同采收方法对灰毡毛忍冬药材质量的影响。方法采用药材形态、采收期、开花率三种方法分别采样,观察药材形态并用RP-HPLC法测定其中绿原酸含量。结果以药材形态为采集方法所得到的样品中绿原酸含量最高,且各形态间有显著性差异。结论认为以药材形态做为采集方法最优。     

不同灌水量对忍冬生长发育及金银花质量的影响

目的:研究不同灌水量对忍冬生长发育及金银花药材质量的影响。方法:在盆栽忍冬第一茬花开之前,进行土壤相对含水量100%,80%,50%,30%的灌水量处理,考察忍冬枝条、叶片的生长及金银花的产量及质量情况。结果:随着灌水量的减少,枝条的伸长及节位的增加均受到抑制,金银花产量降低,灌水量为土壤相对含水量的80%处理对花蕾中绿原酸含量影响不大,其他处理均降低;30%处理的叶片含水量比对照显著降低,但其比叶重(SLW)比对照显著增加;30%和50%处理的叶片的叶绿素含量均升高;各处理的叶绿素a/b均显著降低。80%和50%处理的叶片可溶性糖含量显著升高;30%处理比50%处理的叶片可溶性蛋白含量升高;30%处理的脯氨酸含量极显著升高。结论:适当减少灌水量(土壤相对含水量保持为80%)不会导致金银花内在质量的下降,但会减少干重的积累,因此在金银花的生产实践中,要加强水分管理。     

贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬药材质量的影响

研究不同贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬质量的影响。采用不同贮藏包装：塑料袋抽真空包装、塑料包装、编织袋包装、编织袋具内膜密封包装、纸袋包装、麻袋包装;不同贮藏方法：常温、5 ℃冰箱、低温-20 ℃冰箱 、常温干燥器等进行组合共24批样品。于不同时间测定其中有效成分的变化。实验结果表明各贮藏组药材中成分含量变化与贮藏时间、贮藏条件（贮藏环境、包装方式）有关。在相同的贮藏时间下,贮藏环境（温度、湿度）对药材质量稳定性影响其关系依次为：低温-20 ℃左右冰箱>5 ℃左右冰箱>常温干燥器组>常温组;包装方式对药材质量稳定性影响其关系依次为：塑料袋抽真空包装>编织袋具内膜密封包装>塑料袋包装>编织袋包装>麻袋包装>纸袋包装。在相同的贮藏条件下,随着贮藏时间的延长,各贮藏条件组药材的成分除咖啡酸含量会逐渐增高外,其余5个有效成分的含量逐渐减少。贮藏时间对山银花的内在质量（化学成分含量）和外观色泽（生霉 、生虫、变黄、变黑等 ）均有显著影响。从药材有效成分稳定性、药材外观色泽变化、节约贮藏成本及提高药材等级和售价等方面综合考虑,灰毡毛忍冬药材以低温（5 ℃）、避光（具黑色内膜）、密封贮藏不超过24个月为宜。     

不同产地金银花药材的UPLC指纹图谱分析

目的： 建立不同产地金银花药材的超高效液相特征性指纹图谱,为有效控制和科学评价金银花药材整体质量提供依据。 方法： 采用Agilent C₁₈ 色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）,流动相乙腈-0.2%磷酸水,以0.4 mL·min^-1的流速进行梯度洗脱,检测波长238 nm,柱温30 ℃。 结果： 在21 min内得到金银花药材的指纹图谱,对其中5个色谱峰进行了初步归属,并对14批药材样品进行了分析,其相似度为0.915~0.987。 结论： UPLC指纹图谱方法较HPLC大大缩短了分析时间,可用于金银花药材的质量评价。     

忍冬原生质体分离条件研究

目的:探讨忍冬原生质体分离的最佳条件,为忍冬原生质体培养、细胞融合以及遗传转化提供大量优质的原生质体.方法:分别对忍冬原生质体分离过程中的若干影响因子如:酶液组成、酶解方式、酶解时间、酶解温度、渗透压进行比较分析,以确定最佳的分离条件.结果:确定了最优化的忍冬原生质体分离条件,即以生长旺盛的疏松的忍冬愈伤组织作为分离原生质体所需材料,以1.5％纤维素酶+0.25％果胶酶作为分离原生质体所用酶液,以含有0.7 mol·L-1甘露醇作为渗透保护剂的细胞-原生质体清洗液(CPW)溶液进行酶液的配制,于25℃静置条件下酶解12 h.结论:利用该实验所确定的忍冬原生质体最佳分离条件可获得大量优质的原生质体,为后续忍冬细胞融合以及遗传转化等实验奠定良好的实验基础.     

金银花组蛋白甲基转移酶基因生物信息学及表达分析

该研究从金银花转录组数据库中获得23个组蛋白甲基转移酶基因,分别对其核苷酸特性、蛋白理化性质、亚细胞定位、二级结构及保守域、系统进化和基因表达情况进行分析。其中系统进化分析结果表明,23个金银花组蛋白甲基转移酶可以分为2类:赖氨酸甲基转移酶和精氨酸甲基转移酶。基因表达分析结果表明金银花组蛋白甲基转移酶基因具有明显的种间表达偏好性和器官表达偏好性,即23个组蛋白甲基转移酶基因在金银花花蕾中表达量均高于红金银花,但在金银花叶中表达量均低于红金银花,并获得8个花蕾特异性表达基因,为进一步了解金银花类药用植物中组蛋白甲基转移酶的功能以及活性成分表观调控提供依据。     

忍冬叶中咖啡酰奎宁酸类化学成分

目的:研究忍冬Lonicera japanonica叶的化学成分.方法:采用反复硅胶柱色谱法、sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,并通过理化常数测定和波谱分析鉴定其化学结构.结果:从忍冬叶中分离得到了5个咖啡酰基奎宁酸类化合物,分别鉴定为3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(1),5-O-咖啡酰基奎宁酸甲酯(2),3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸(3),1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸(4),绿原酸(5).结论:化合物2,4为首次从该属植物中分离得到,化合物1,3为首次从该植物中分离得到.     

忍冬叶化学成分研究

目的:研究忍冬叶的化学成分.方法:采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构.结果:从忍冬叶中分离鉴定了7个化合物,分别为香叶木素(1),槲皮素(2),苜蓿素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4),芦丁(5),忍冬苦苷A(6),忍冬苦苷B(7).结论:所有化合物均首次从忍冬叶中分离得到.     

烘干与硫熏金银花药材HPLC指纹图谱对比

目的:建立不同产地烘干与硫熏金银花药材的指纹图谱,对比分析硫熏对金银花内在成分的影响.方法:采用高效液相色谱法,色谱条件:AichromBond-AQ C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％磷酸水,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-,柱温30℃,检测波长238 nm.结果:在选定的色谱条件下确定了20个共有峰构成10批烘干金银花药材的指纹特征指纹图谱,各批样品的相似度均＞0.96;16个共有峰构成10批硫熏金银花药材的指纹特征指纹图谱,各批样品的相似度均＞0.90.结论:该法精密度高、重复性好,可为烘干和硫熏金银花药材的指纹图谱评价提供依据.     

金银花颜色与有效成分含量的相关性分析

目的:通过测定金银花的颜色及其有效成分绿原酸和木犀草苷的含量,将代表颜色的指标值与代表质量的指标值相联系,探索颜色与有效成分之间的相关性.方法:采用高效液相色谱法测定18批不同产地、采收期、加工方法的金银花样品中绿原酸、木犀草苷的含量,利用电子感观分析方法(色度仪)测量金银花的颜色.结果:绿原酸的含量与色度测量值L*值呈负相关,木犀草苷的含量与颜色值之间不存在显著相关关系.结论:通过该方法对颜色的测量,快速地判断或预测绿原酸的含量,其具体机制有待进一步研究.     

金银花中抗补体活性酚酸类成分的研究

目的: 研究金银花Lonicera japonica中的抗补体活性酚酸类成分. 方法: 通过溶血试验方法进行抗补体活性成分的导向分离,对所得化合物进行抗补体活性测定,采用现代波谱技术ESI-MS,¹H-NMR,¹³C-NMR进行结构鉴定. 结果: 从金银花乙酸乙酯部位分离得到了14个化合物,其中有8个酚酸类、3个环烯醚萜类和3个黄酮类成分,包括新绿原酸(1)、绿原酸(2)、隐绿原酸 (3)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸(4)、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸(5)、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸(6)、咖啡酸(7)、咖啡酸甲酯(8)、裂环马钱苷(9)、獐芽菜苷(10)、断氧化马钱子苷(11)、木犀草素(12)、槲皮素(13)、山柰酚(14).抗补体实验表明化合物 1~9, 11~14 对经典的补体激活具有不同程度的抑制作用,以3,5-O-二咖啡酰奎宁酸活性最强. 结论:化合物 14 首次从金银花中分离得到,酚酸类化合物是金银花中的主要抗补体活性成分,3,5-O-二咖啡酰奎宁酸活性最强,值得深入研究.     

栽培金银花非腺毛性状特征研究

采集17个地区22个金银花栽培居群,通过扫描电子显微镜观察和测量花蕾非腺毛的性状特征,利用长度和密度的数据对22个栽培居群进行PCA主成分分析和相关性分析,找出不同产地金银花非腺毛的差异和相关性。结果表明,花蕾非腺毛长度与密度具显著负相关关系,非腺毛密度可将鸡爪花系与毛花系分开,而花蕾非腺毛长度和密度与产地的经纬度没有显著相关性,其中的3个离群居群产生了明显的变异分化可能与气候和土壤的差异有关,暗示栽培金银花花蕾非腺毛的性状特征受环境和遗传共同影响。以上结果为金银花栽培种质和产地鉴别提供了依据。     

忍冬VIGS基因沉默体系构建

目的 以忍冬Lonicera japonica八氢番茄红素脱氢酶（phytoene desaturase,PDS）基因为标记基因,利用ZMBJ-CMV载体建立基于病毒诱导的忍冬基因沉默体系。方法 以忍冬为材料,通过选取同源性较高的片段设计PDS基因的特异性引物,克隆出片段长度为135 bp的序列作为目的基因片段,经双酶切后与黄瓜花叶病毒载体连接构建VIGS重组载体,转化根癌农杆菌后,侵染忍冬幼苗。此外,还对农杆菌吸光度（A）值和侵染方法对PDS基因沉默效率的影响进行了比较。结果 被侵染植株叶片PDS基因表达水平显著降低,叶绿素和类胡萝卜素含量显著下降,叶片出现白化表型。结论 建立了以ZMBJ-CMV载体诱导的忍冬基因沉默体系,农杆菌A值为0.8、注射后再进行真空浸润,能够提高忍冬目标基因的沉默效率,为开展忍冬关键基因的功能研究提供了技术支撑。