归芪聪志汤及其拆方对VD模型大鼠海马神经元HIF-1α,VEGF和HO-1表达的影响

目的:研究归芪聪志汤及其拆方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马组织缺氧诱导因子~(-1)α(HIF-1α),血管内皮生长因子(VEGF),及血红素加氧酶~(-1)(HO~(-1))表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:Wistar大鼠称体质量后,按随机原则选出10只作为假手术组,将其余90只大鼠采用改良后的双侧颈动脉永久性结扎法制备VD大鼠模型,造模后,筛选成功模型大鼠54只随机分为6组,分别为模型组,阳性药组(吡拉西坦,3.6 g·kg~(-1)),归芪聪志汤组(9.9 g·kg~(-1)),活血通络组(拆方1组,9.9 g·kg~(-1)),化痰解毒组(拆方2组,9.9 g·kg~(-1)),补气养血组(拆方2组,9.9 g·kg~(-1)),每组9只。连续灌胃28 d后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测大鼠海马HIF-1α,VEGF及HO~(-1) mRNA和蛋白的表达。结果:治疗4周后,与假手术组比较,VD模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少(P0.05),大鼠海马的HIF-1α,VEGF,HO~(-1) mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),HE染色显示VD模型大鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,归芪聪志汤组与吡拉西坦组大鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P0.05),大鼠海马的HIF-1α,VEGF,HO~(-1) mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05),HE染色显示归芪聪志汤与吡拉西坦组大鼠海马神经细胞损伤减轻。结论:归芪聪志汤组改善VD模型大鼠的学习记忆能力优于各拆方组,其作用机制可能与上调HIF-1α,VEGF及HO~(-1)因子的表达,减轻氧化应激损伤,激发脑内的损伤修复有关。     

强心康颗粒对慢性心衰大鼠心肌细胞病理形态学腺苷酸转位酶，PGC-1α mRNA表达的影响

目的:通过观察强心康颗粒对心衰大鼠心肌细胞病理形态学及心肌线粒体腺苷酸转位酶(ANT),过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)mRNA表达的影响来探讨其治疗心衰的机制。方法:选择健康雄性SD大鼠,应用腹腔注射阿霉素(3 mg·kg~(-1)),造成心衰大鼠模型,然后分为正常组,模型组,芪苈强心组(芪苈强心胶囊,0.65 g·kg~(-1)),曲美他嗪组(10.8 mg·kg~(-1))及强心康高、中、低剂量组(20,10,5 g·kg~(-1)),造模之后进行心功能的检测,验证模型是否成立,服药4周后,苏木素-伊红(HE)及电镜扫描观察心肌细胞病理形态学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观察7组大鼠心肌细胞病理形态学及心肌ANT,PGC-1αmRNA表达的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠心率明显减慢,左心室最大上升和下降速率均降低,左心室收缩压显著降低,左室终末舒张压明显增加,收缩压、舒张压、平均血压显著降低(P0.01),表明心衰模型成立;模型组大鼠心肌细胞病变较明显,模型组大鼠心肌细胞病变改善明显,ANT,PGC-1αmRNA含量显著减少(P0.01)。与模型组比较,盐酸曲美他嗪组、芪苈强心组、强心康高、中剂量组的均能显著增加ANT,PGC-1αmRNA含量(P0.01);强心康低剂量组能明显增加ANT,PGC-1αmRNA含量,与模型组比较有统计学差异(P0.05)。结论:强心康颗粒可通过改善心肌细胞结构,增加ANT,PGC-1αmRNA含量来纠正心功能。     

补阳还五汤对舒张性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及AMPK/PPARα信号通路的影响

目的:探讨补阳还五汤基于腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)信号通路对舒张性心衰(DHF)大鼠心肌线粒体能量代谢的影响及其机制研究。方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组与模型组,模型组大鼠运用腹主动脉缩窄法建立DHF大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组,补阳还五汤组(12.72 g·kg~(-1)·d~(-1)),酒石酸美托洛尔组(0.004 5 g·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃给予相应药物,假手术组、模型组给予等量的去离子水,各组均每日灌胃1次。药物连续干预8周后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠外周血中单磷酸腺苷(AMP),二磷酸腺苷(ADP),三磷酸腺苷(ATP)的含量;采用投射电镜检测心肌线粒体超微结构的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织中AMPK,PPARα,PPARγ辅助激活因子1α(PGC-1α)的蛋白表达量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠AMP,ADP含量显著升高,ATP含量显著下降(P0.05,P0.01);与模型组比较,补阳还五汤组、酒石酸美托洛尔组大鼠AMP含量明显降低(P0.01),ADP含量下降(P0.05),ATP含量升高。与假手术组比较,模型组大鼠线粒体数量减少,形态异常;与模型组比较,补阳还五汤组、酒石酸美托洛尔组大鼠线粒体数量明显增加,形态明显改善。与假手术组比较,各组大鼠AMPK蛋白表达量无统计学差异;与假手术组比较,模型组PPARα,PGC-1α蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与模型组比较,补阳还五汤组、酒石酸美托洛尔组PPARα,PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论:补阳还五汤可能是通过改善线粒体结构和功能,激活AMPK并上调AMPK/PPARα信号通路的表达,从而改善衰竭心脏的能量代谢,延缓心衰进展。     

益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达的影响

目的：观察益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达的影响。方法：高脂饲料喂养,一次性尾静脉注射STZ30mg/kg造模,益气养阴通络方治疗。放射免疫分析法检测血清FINS,免疫荧光法检测骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达。结果：益气养阴通络方可增加2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达。结论：益气养阴通络方降低血糖,改善IR的机理可能与其增加2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达有关。     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响

目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg~(-1))、转染组、空转组、葱白加转染组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P 0. 05,P 0. 01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P 0. 05); PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P 0. 05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P 0. 05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P 0. 05)。PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异。结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关。     

益肾降浊化瘀方及其拆方对肾间质纤维化大鼠TNF-α及IL-8表达的影响

目的:观察益肾降浊化瘀方及其拆方对腺嘌呤致肾间质纤维化模型大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)表达的影响,探讨益肾降浊化瘀方对肾间质纤维化的作用机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠70只分正常组,模型组,尿毒清组,全方组,拆方1组,拆方2组,拆方3组,除正常组比较,用腺嘌呤ig法制作肾间质纤维化模型。正常组,模型组予生理盐水(10 m L·kg~(-1)·d~(-1)),尿毒清组(2.5 g·kg~(-1)·d~(-1)),全方组(20.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),拆方1,2,3组(11,8.2,7.9 g·kg~(-1)·d~(-1))。给药4周后,酶联免疫吸附法(Elisa法)检测血清TNF-α,IL-8含量,免疫组织化学法检测肾组织中TNF-α,IL-8蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组TNF-α和IL-8在血清和肾组织中含量明显升高(P0.05);与模型组比较,全方组、拆方1组、拆方2组、拆方3组血清和肾组织TNF-α,IL-8含量明显降低(P0.05),其中全方组肾组织TNF-α,IL-8蛋白表达和血清TNF-α,IL-8含量明显低于各拆方组(P0.05)。结论:益肾降浊化瘀方全方组及其拆方1组、拆方2组、拆方3组均能下调TNF-α,IL-8的表达,其中以益肾降浊化瘀方全方组作用最显著。     

补肾活血通腑方对慢性脑供血不足模型大鼠SIRT1信号通路下蛋白表达的影响

目的:探讨补肾活血通腑方对慢性脑供血不足(CCCI)大鼠脑组织的保护作用。方法:雄性健康Wistar大鼠50只,随机分为五组:假手术组、模型组、尼莫地平组、补肾活血通腑方低剂量组及高剂量组,采用2-VO永久结扎剪断方法制备CCCI大鼠模型。大鼠连续给药灌胃8周之后,断头取海马,运用Western blot法进行蛋白检测。结果:与假手术组相比,模型组和其他治疗组在额叶PGC-1α及FOXO3α蛋白表达明显下降(P0.05)。与模型组相比,补肾活血通腑方低剂量组海马的PGC-1α蛋白表达明显增加(P0.05);与尼莫地平组相比,补肾活血通腑方低剂量组FOXO3α、PGC-1α蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:CCCI大鼠的脑缺血可以抑制FOXO3α、PGC-1α蛋白表达;补肾活血通腑方低剂量对FOXO3α、PGC-1α蛋白的表达有改善作用,增加脑供血,对CCCI大鼠脑组织有保护作用。     

黄金胶囊改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗与PI-3K,GLUT4蛋白的表达

目的:研究黄金胶囊对糖尿病(DM)大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K),葡萄糖转运因子4(GLUT4)在肝脏及骨骼肌组织中的蛋白表达,并探讨其改善大鼠血糖的可能机制。方法:SPF级雄性Wistar大鼠65只,血糖在4.77~7.77 mmol·L~(-1)的大鼠入选,入选大鼠60只,正常组12只外,其余大鼠采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素ip的方法,建立DM大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为黄金胶囊组(2.025 g·kg~(-1)),罗格列酮组(0.36 mg·kg~(-1)),模型组,继续高脂饲料喂养,并予以相应药物ig治疗10周,其中模型组与正常组均予以生理盐水ig,观察大鼠一般状态,体重及摄食量,干预10周后,予10%水合氯醛麻醉大鼠,检测大鼠空腹血糖(FBG),空腹胰岛素(FINS)及胰岛素敏感指数(ISI)。采用苏木素-伊红(HE)检测各组大鼠肝脏、骨骼肌组织的病理改变及免疫组化检测PI-3K和GLUT4蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组DM大鼠FBG,FINS水平明显升高,ISI水平明显降低,肝脏及骨骼肌组织中PI-3K,GLUT4蛋白表达明显降低(P0.05),病理学检测发现大鼠肝脏、骨骼肌组织的病变较为明显;与模型组比较,药物干预后,黄金胶囊组与罗格列酮组均可降低DM大鼠的FBG,FINS水平,提高ISI水平,明显升高肝脏及骨骼肌组织中PI-3K,GLUT4蛋白表达(P0.05),大鼠肝脏、骨骼肌组织的病变明显改善。结论:黄金胶囊提高胰岛素敏感性的作用,与激活肝脏及骨骼肌组织胰岛素信号传导通路中PI-3K和GLUT4的蛋白表达有关。     

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠黏附分子及NeuN表达的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠黏附分子及神经元核抗原(Neu N)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠ig给药(14.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,评价神经功能积分(NS),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测血管细胞间黏附分子~(-1)(VCAM~(-1))和整合素α4mRNA表达,免疫组化法测Neu N表达。结果:MCAO模型大鼠NS及Neu N表达较假手术组显著降低(P0.01),VCAM~(-1)及整合素α4mRNA表达显著增高(P0.01);与模型组比较,扎方1,3,14 d移植3,7,14 d及联合各组NS增加(P0.01,P0.05),扎方、移植及联合各组Neu N增加(P0.01),VCAM~(-1)及整合素α4mRNA降低(P0.01);与移植组比较,扎方7 d组NS减小(P0.05),联合1,3,14 d组NS增加(P0.01),扎方1,3 d组VCAM~(-1)mRNA减少(P0.01),扎方1,7,14 d组整合素α4mRNA减少(P0.01),联合各组VCAM~(-1)及整合素α4mRNA均降低(P0.01),扎方及联合各组Neu N增高(P0.01);扎方与联合组比较,联合各组NS及Neu N表达增加(P0.01),VCAM~(-1)和整合素α4mRNA表达降低(P0.01);同组间比较,各组NS,Neu N及VCAM~(-1) mRNA均以7 d组变化显著,14 d有明显改善(P0.01),整合素α4mRNA以3 d组变化显著,14 d可改善(P0.01)。结论:脑缺血后神经功能及神经元均出现不同程度损伤;扎方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能及脑组织神经元状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预VCAM~(-1)及整合素α4动态表达有关。     

糖耐康对自发性2型糖尿病小鼠NE，α1-AT蛋白表达的影响

目的:观察中药糖耐康(Tangnaikang,TNK)对2型糖尿病(T2DM)的ob/ob小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE),α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)蛋白表达的调节作用。方法:将32只雄性SPF级ob/ob小鼠按体质量随机分为模型组(生理盐水),TNK高剂量组(TNK溶液16.04 g·kg~(-1)),TNK中剂量组(TNK溶液8.02 g·kg~(-1))和TNK低剂量组(TNK溶液4.01 g·kg~(-1))。另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组(生理盐水)。灌胃4周。每周记录小鼠一般状态和体质量和空腹血糖(FBG),第25天进行口服葡萄糖耐量(OGTT)实验,第27天进行胰岛素耐量(ITT)实验,灌胃结束后,取血清检测空腹胰岛素(Fins),NE,α_1-AT,取脂肪组织检测NE,α_1-AT,p-IRS1,葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组ob/ob小鼠体质量显著增大,糖脂代谢指标均呈糖尿病表现,血清和脂肪组织NE显著增加(P0.01),α_1-AT显著减少(P0.01)。与模型组比较,TNK高剂量组体质量,甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL)指标均显著减少(P0.01),高密度脂蛋白(HDL)显著增加(P0.01),FBG,Fins,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),曲线下面积(AUC)_(ogtt),AUC_(ITT)均显著减少(P0.01),血清和脂肪组织NE显著减少(P0.01),α_1-AT显著增加(P0.01),脂肪组织p-IRS1和GLUT4明显增加(P0.05)。结论:TNK能够降低ob/ob小鼠体质量,改善糖脂代谢,升高α_1-AT水平,降低NE水平,调节IRS1/GLUT4信号的关键位点,可能是其改善中性粒细胞介导的脂肪组织IR的作用机制之一。