补肾健脾活血方对去卵巢大鼠松质骨超微结构的影响

目的：观察补肾健脾活血方对去卵巢大鼠股骨下段松质骨超微结构的影响。方法：84只雌性大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组。采用卵巢切除的方法进行动物造模，灌胃治疗90天后取股骨下段松质骨进行电镜观察。结果：补肾健脾活血方能明显改善骨胶原的排列，减少断裂的骨胶原，且大剂量组的作用明显优越于中药对照组、西药对照组和小剂量组。结论：补肾健脾活血方能减少骨吸收促进骨形成，改善松质骨的超微结构，从而具有增加骨强度的作用。     

补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症的防治作用

目的研究补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症的防治作用。方法 72只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾健脾活血方组(2.979 g/kg)、阿仑膦酸钠维D_3片(Ⅱ)组(1.02 mg/kg),双侧卵巢切除法进行造模。药物干预12周后,双能X射线法检测大鼠腰椎骨密度,骨生物力学检测腰椎最大载荷和刚度,实时荧光定量PCR法检测wnt2、wnt3a、lrp5、lrp6、β-catenin、OPN、Runx2、osterix mRNA表达,Western blot法检测wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,补肾健脾活血方组腰椎骨密度、最大载荷及刚度均明显增高(P<0.05),能显著降低OPN mRNA表达(P<0.05),显著增高wnt3a、lrp5、β-catenin、Runx2、osterix mRNA表达及wnt3a、β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症有一定的防治作用,其机制可能与调控wnt/β-catenin信号通路和OPN的表达有关。     

温肾益髓生血方对RA大鼠肝脏BMP/Smad信号通路的影响

目的:探讨温肾益髓生血方对RA大鼠贫血的改善作用及其骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)/Smad信号通路的影响。方法:42只雄性SPF级Wister大鼠,根据体质量分层随机分组2次,即正常组、假手术组、模型组、尿毒清(2.33 g·kg-1)组、温肾益髓生血(3.5 g·kg-1)组。模型组和治疗组上午180 mg·kg-1·d-1腺嘌呤灌胃,下午治疗组给予相应的治疗药物,正常组、假手术组和模型组给予等体积的去离子水灌胃,每周称量大鼠体质量,治疗12周后,各组大鼠麻醉后取血,分离血清,检测肌酐(SCr),尿素氮(BUN),尿酸(UA);全血测红细胞(RBC),血红蛋白(HGB);取材固定肾组织、肝脏组织,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏病理,免疫组化及原位杂交技术检测大鼠肝脏BMP6,Smad4,Smad1/5/8,p-Smad1/5/8,铁调素(hepcidin)mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组及假手术组比较,模型组体质量明显降低(P0.01),血清BUN,SCr水平明显升高(P0.01),肾脏病理损害明显;与模型组比较,温肾益髓生血组大鼠一般状态明显改善,血RBC,HGB水平升高(P0.01),与正常组和假手术组比较,模型组大鼠肝脏高表达BMP6,Smad4,Smad1/5/8,hepcidin(P0.01);与模型组比较,温肾益髓生血组BMP6,Smad4,Smad1/5/8,p-Smad1/5/8,hepcidin蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:温肾益髓生血方对RA大鼠贫血具有一定的改善作用,可能是通过干预肝脏BMP/Smad信号通路实现的。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠血清白细胞介素-6的影响

目的：观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法：将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组。采用卵巢切除的方法建造绝经后骨质疏松症动物模型，灌药90天后用酶联免疫吸附法检测大鼠血清IL-6含量。结果：补肾健脾活血方能明显降低血清IL-6含量，其作用强于单纯补肾中药和西药治疗，并且与剂量至正相关。结论：补肾健脾活血方通过影响细胞因子IL-6的含量来抑制破骨细胞的骨吸收功能，从而发挥治疗骨质疏松症的作用。     

右归丸调控BMP-2/Smad信号通路促进绝经后骨质疏松症大鼠骨形成

目的 观察右归丸对去卵巢骨质疏松大鼠的骨代谢及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/Smad信号通路的影响，研究右归丸防治骨质疏松症的作用机制。方法 采用双侧卵巢摘除法，制备绝经后骨质疏松症大鼠模型，将40只SD雌性大鼠随机分为5组，分别为假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组（0.1 mg·kg^-1）、右归丸高、低剂量组（5.36、2.68 g·kg^-1）。造模7 d后给药，连续12周，每日1次。给药结束后，采用微计算机断层扫描技术（micro-CT）观察大鼠股骨组织结构变化，包括骨密度（BMD）、骨体积/总体积（BV/TV）、骨小梁数（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨表面/骨体积（BS/BV）和骨小梁分离度（Tb.Sp）。番红-固绿染色观察成骨情况。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中骨代谢标志物水平，包括骨碱性磷酸酶（BALP）、骨钙素（BGP）、Ⅰ型前胶原氨基端原肽（PINP）和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRACP-5b）。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠股骨中Runt相关转录因子2（Runx2）、BMP-2和Smad1 mRNA及蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠骨小梁变稀疏，BMD、BV/TV、Tb.N及Tb.Th下降（P<0.05，P<0.01），BS/BV（P<0.05）及Tb.Sp上升；血清中BGP、BALP、PINP和TRACP-5b含量显著升高（P<0.01）；大鼠股骨中Runx2、BMP-2和Smad1的mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，右归丸高剂量组与右归丸低剂量组骨小梁数目增加，骨微结构得到改善，BMD、BV/TV、Tb.N及Tb.Th均明显增加（P<0.05，P<0.01），BS/BV及Tb.Sp有上升趋势；骨代谢标志物含量下降（P<0.05，P<0.01），骨组织中Runx2、BMP-2和Smad1 mRNA和蛋白水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 右归丸对绝经后骨质疏松症具有一定的防治作用，其作用机制可能与调控BMP-2/Smad信号通路促进骨形成有关。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2(BMP-2)、Smad5表达的影响方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只.制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细...     

补肾健脾活血方对卵巢大鼠血清IGF-1的影响

目的：观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清胰岛素生长因子1（IGF-1）的影响。方法：将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组,采用卵巢切除的方法建造绝经骨质疏松症动物模型,灌药90天后用放射免疫法检则大鼠血清IGF-1含量。结果：补肾健脾活血方能明显增加血清IGF-1含量,其作用强于单纯补肾中药和西药,且与剂量呈正相关。结论：补肾健脾活血方通过影响细胞因子IGF-1的含量来促进成骨细胞增殖分化和骨形成的功能,从而发挥治疗骨质疏松症的作用。     

补肾活血方对老龄去卵巢大鼠骨质疏松症模型骨密度和骨代谢的影响

目的：探讨补肾活血方治疗原发性骨质疏松症的疗效。方法：10月龄SD雌性鼠去卵巢建立绝经后骨质疏松模型。予以补肾活血方、尼尔雌醇水溶液灌胃治疗8周，观察有关指标的改变。结果：大鼠去卵巢后，含密度明显下降，模型复制成功。补肾活血方明显改善去卵巢大鼠的一般形态，显著提高去卵巢大鼠腰椎含密度，抑制卵巢大鼠尿羟脯氨酸／肌酐、尿钙／肌酐、血清骨钙素水平，而对血清尼尔雌醇水平未见明显影响。结论：补肾活血方可延缓实验性骨质疏松大鼠的含量丢失，改善其含代谢；此作用不是通过升高雌激素水平实现的。     

补骨脂水提取物对去卵巢骨质疏松大鼠肾脏组织中TGF-β1/Smad4信号通路转导的影响

目的:探讨补骨脂水提取物(PCE)对绝经后骨质疏松症的作用及分子机制。方法:采用双侧卵巢切除法建立绝经后骨质疏松(OVX)大鼠模型,评估OVX大鼠的体质量变化,采用双能X线吸收测量仪测量全身骨密度值,采用ELISA法检测血清碱性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)及雌激素E2分泌水平,采用苏木精-伊红(HE)染色检测股骨病理变化,采用RT-PCR和Western Blot法检测肾脏TGF-β1/Smad4信号分子mRNA和蛋白的表达水平。结果:补骨脂水提取物对绝经后骨质疏松症具有潜在的保护作用,能够显著减小术后大鼠体质量的增加(P>0.05),且增加OVX大鼠的全身骨密度值(P<0.05);同时其呈剂量依赖性下调ALP和ACP水平及上调E2水平(P<0.05),显著减小骨髓腔面积(P<0.05);除此之外,其呈剂量依赖性下调OVX大鼠肾脏组织中TGF-β1及Smad4的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论:补骨脂水提取物对绝经后骨质疏松症具有潜在的保护作用,且与TGF-β1/Smad4信号通路介导骨代谢紊乱有关。     

左归丸对去卵巢致绝经后骨质疏松症大鼠骨组织中BMP2、Smad1表达的影响

目的:通过研究去卵巢骨质疏松症大鼠股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达,探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究左归丸的作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用左归丸对实验大鼠治疗12周,以福善美片作为阳性对照组,正常组、假手术组作为标准对照组,模型组作为空白对照。用ELISA法检测骨质疏松症大鼠股骨BMP2和Smad1的蛋白表达。结果:正常大鼠股骨中存在BMP2和Smad1的蛋白表达。模型组大鼠股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达水平有明显的下降。左归丸组、福善美组用药12周后,与模型组相比较,左归丸组和福善美组可显著上调股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达水平。结论:1股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达下降可能是导致骨质疏松症发生的机理之一;2左归丸能够上调BMP2和Smad1的蛋白表达,表明左归丸对骨质疏松症有一定的防治作用。     

复方补肾活血颗粒对人骨髓间充质干细胞增殖及Wnt/PI3K-AKT信号通路相关蛋白表达的影响

目的 观察复方补肾活血颗粒药物血清对人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)增殖的影响,探讨其干预骨质疏松症(OP)的作用机制.方法 从OP患者骨髓中分离培养HBMSCs,流式细胞仪检测HBMSCs表型和细胞周期;将HBMSCs分为正常组、2％空白血清组、2％药物血清组、5％空白血清组、5％药物血清组、8％空白血清组和8％药...     

基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制＊

目的 基于Ang/Tie-2信号通路，探讨补肾活血方孕前导法给药调控肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制。方法 阴道涂片HE染色法观察，选取动情周期规律的健康未交配雌性SD大鼠60只，随机分为5组：空白组、模型组、阿司匹林组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组，动情前期时入组，分组给药并合笼，于妊娠第5天处死，腹主动脉采血后，迅速剖取子宫并制片，采用光镜观察各组大鼠子宫内膜组织形态，采用免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫组织中VEGF、FLK-1表达水平及螺旋动脉数量，采用Western-Blot检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达水平，采用Real-Time PCR检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA表达水平。结果 给药组能明显改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，并接近空白组水平；模型组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、螺旋动脉数量、VEGF、FLK-1及子宫组织Tie-2蛋白表达、Ang-1mRNA、Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达等均较空白组降低（P < 0.05）；补肾活血方高剂量组大鼠妊娠第5天子宫组织VEGF、FLK-1、螺旋动脉数量、Ang-1蛋白、Tie-2蛋白及Ang-1mRNA、Tie-2mRNA表达量较模型组明显增加（P< 0.01）。结论 补肾活血方孕前导法给药，改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，促进子宫组织血管生成，改善组织血瘀状态，促进胚胎着床，可能与其提高大鼠子宫组织VEGF、FLK-1、Ang-1、Tie-2表达水平，并维持Ang-2正常表达有关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的影响

目的:以氧化应激损伤为切入点探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为模型组,假手术组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),益气活血方高、中、低剂量组(2. 916,1. 458,0. 729 g·kg~(-1)),连续灌胃14 d后,采用结扎双侧颈总动脉法建立急性脑缺血损伤模型,透射电镜观察突触超微结构,生化法检测脑匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠缺血区脑皮层血红素氧化酶-1(HO-1),核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白和m RNA表达。结果:透射电镜观察结果显示益气活血方对脑缺血损伤程度有明显改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠脑匀浆MDA水平显著上升,T-SOD,GSH-Px水平显著降低(P 0. 01),LDH,Na+-K~+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶及ATP酶的活性均明显降低(P 0. 05,P 0. 01),脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量以及HO-1,Nrf2 m RNA表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,益气活血方中、高剂量组可明显降低脑组织中MDA含量,升高T-SOD,GSH-Px的水平(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方高剂量组可显著增加LDH,Na+-K+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和总ATP酶活性(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方中、高剂量组大鼠脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方高剂量组HO-1,Nrf2 m RNA表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血方可能通过Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激水平实现对脑缺血损伤的保护作用。     

硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的:探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-c AMP-PKA-AQP3信号通路的影响。方法:SD雄性大鼠150只,随机分为5组,分别为正常组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组(380,190,95 g·kg-1),每组30只,除正常组外采用复方地芬诺酯ig法建立SD大鼠功能性便秘模型,给予不同剂量硝菔通结方ig,共给药4周。检测大鼠首粒黑边排出时间及粪便含水率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测治疗1,2,3周不同时间点大鼠结肠组织中血管活性肠肽(VIP),环磷酸腺苷(c AMP),蛋白激酶A(PKA),水通道蛋白3(AQP3)mRNA及蛋白质的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著延长,粪便含水率显著降低(P0.01),结肠组织中VIP,c AMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,硝菔通结方各剂量组大鼠首粒黑便排出时间显著缩短,粪便含水率明显增加(P0.05,P0.01),结肠组织中VIP,c AMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平均有升高趋势,且高、中剂量组较低剂量组升高更显著,给药后第2,3周较第1周的指标变化更显著(P0.05,P0.01)。结论:硝菔通结方能够调节胃肠动力和改善肠道水液代谢治疗功能性便秘,其机制可能是通过干预VIP-c AMP-PKAAQP3通路来实现,并且具有一定的时间和剂量依赖性。     

益气活血方对糖尿病大鼠p38MAPK通路的影响

目的:观察益气活血方对糖尿病大鼠基于p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对血管内皮功能受损的综合调节作用机制。方法:采用高脂高糖饮食和应用链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型,将大鼠随机分成7组,分别为正常组,模型组,丹蛭降糖胶囊高、中、低剂量组(1.08,0.72,0.54 g·kg-1·d-1),盐酸吡格列酮胶囊组(10 mg·kg-1·d-1),丹蛭降糖胶囊+盐酸吡格列酮胶囊结合组(1.08 g·kg-1·d-1+10 mg·kg-1·d-1)。大鼠造模成功后分别按相应剂量药物ig给予,每日1次,连续8周,后腹主动脉采集血液样本和腹主动脉进行相关检测,蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定p38MAPK,上游MAPK激酶3/6(mitogen activated protein kinase kinasse3/6,MKK3/6),下游核转录因子c AMP反应元件结合蛋白1(c AMP response element-bingding protein,CREB1)以及其丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)信号蛋白在内皮细胞的蛋白表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)方法测定单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),血管内皮细胞抵抗素在血管内皮中的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组p38MAPK,MKK3/6,CREB1蛋白及MCP-1,血管内皮细胞抵抗素mRNA表达水平明显升高(P0.01),MKP-1蛋白表达水平明显降低(P0.01);各给药组p38MAPK,MKK3/6,CREB1蛋白及MCP-1,血管内皮细胞抵抗素mRNA表达水平均明显降低,MKP-1蛋白表达水平均明显升高,与模型组大鼠比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:益气活血方通过调节糖尿病大鼠血管p38MAPK信号通路蛋白表达水平,从而达到降低血管内皮功能损伤的作用。     

基于Ras/Raf-1/ERK信号转导通路调控VEGF的表达探讨活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜的影响

目的：观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管形态的影响并探讨其可能的作用机制。方法：一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,造模后随机分为模型组和活血解毒方组。另设正常对照组。药物干预12周后,应用视网膜消化铺片法观察视网膜血管形态;应用Western blot法检测视网膜VEGF蛋白的表达,应用Real-Time PCR法检测视网膜VEGF、Ras、Raf-1与ERK mRNA的表达。结果：模型组视网膜毛细血管面积密度及内皮细胞/周细胞比例与较正常组升高(P<0.001),VEGF蛋白及VEGF、Ras、ERKmRNA表达升高(P<0.05),Raf-1mRNA表达升高(P>0.05)。与模型组比较,活血解毒方组视网膜毛细血管面积密度和内皮细胞/周细胞比例降低(P<0.01和P<0.001),VEGF蛋白与VEGF、Ras、Raf-1、ERK mRNA表达下降(P<0.05)。结论：活血解毒方能明显抑制视网膜毛细血管和内皮细胞的增生,其机制可能是通过干预Ras/Raf-1/ERK信号转导通路,下调VEGF在视网膜中的表达,抑制血管新生,从而改善DR。